[6] - جینجرول ترشح CXCL8 و تولید ROS را در نوتروفیل های اولیه انسانی با هدف قرار دادن کانال TRPV1 قسمت 1 تسهیل می کند.

1. معرفی

شناسایی ترکیبات غذایی با خواص تعدیل کننده سیستم ایمنی همراه با اهداف مولکولی مربوطه آنها در سال های اخیر توجه بیشتری را به خود جلب کرده است. با توجه به تنوع لیگاندی بالای آنها، ابرخانواده بالقوه گیرنده گذرا کانال های یونی (کانال های TRP) یک کلاس بسیار جالب از ساختارهای هدف بالقوه را نشان می دهد.

هدف مولکولی مولکول خاصی است که دارو در بدن بر روی آن اثر می کند. مصونیت به قدرت توانایی بدن برای مقاومت در برابر بیماری اشاره دارد.

یک رابطه نزدیک بین اهداف مولکولی و ایمنی وجود دارد. اثرات داروها اغلب بر ایمنی بدن تأثیر می گذارد. به عنوان مثال، برخی داروها ممکن است با تداخل در عملکرد سیستم ایمنی بدن، بیماری های مزمن خاصی را درمان کنند. علاوه بر این، درمان تومور اغلب از درمان هدفمند استفاده می کند، یعنی هدف قرار دادن اهداف مولکولی خاص برای حمله به سلول های سرطانی، در نتیجه توانایی ایمنی برای مبارزه با سلول های سرطانی را بهبود می بخشد.

علاوه بر این، قدرت ایمنی نیز بر اثر داروها تأثیر می گذارد. افرادی که سیستم ایمنی ضعیفی دارند ممکن است در هنگام استفاده دچار عوارض جانبی یا داروهای کمتر موثری شوند زیرا سیستم ایمنی داروها را به خوبی جذب نمی کند و در نتیجه درمان کمتر موثری دارد. بنابراین، حفظ یک سیستم ایمنی سالم برای درمان دارویی بسیار مهم است.

در نتیجه، ارتباط نزدیکی بین اهداف مولکولی و ایمنی وجود دارد و درک کامل این رابطه برای استفاده منطقی از داروها اهمیت زیادی دارد. ما باید به طور فعال ایمنی خود را بهبود بخشیم، داروها را طبق توصیه پزشک به درستی استفاده کنیم، و ایمنی را از طریق درمان هدفمند برای محافظت بهتر از سلامت خود بهبود دهیم. از این منظر، ما باید ایمنی خود را تقویت کنیم. سیستانچ می تواند به طور قابل توجهی ایمنی را بهبود بخشد زیرا سیستانچ همچنین دارای اثرات ضد ویروسی و ضد سرطانی است که می تواند توانایی سیستم ایمنی را برای مبارزه و بهبود ایمنی بدن تقویت کند.

روی فواید سلامتی سیستانچ کلیک کنید

ابرخانواده کانال TRP پستانداران شامل شش خانواده پروتئینی مرتبط است، یعنی خانواده آنکیرین (TRPA)، متعارف (TRPC)، ملاستاتین (TRPM)، موکولیپین (TRPML)، پلی سیستین (TRPP) و خانواده وانیلوئید (TRPV). همه آنها به طور معمول شش بخش گذرنده را به اشتراک می گذارند که به عنوان تترامر جمع می شوند تا منافذ قابل نفوذ به کاتیون را با گزینش پذیری کاتیون های متفاوت تشکیل دهند.[1] کانال TRPV1 ممکن است، تا حد زیادی، به شدت مورد بررسی قرار گرفته از ابرخانواده TRP باشد. TRPV1 در ابتدا به عنوان گیرنده کپسایسین، جزء تند فلفل قرمز شناخته شد.[2] بعدها، همچنین مواد تند زنجبیل، جینجرول‌ها، نشان داده شد که TRPV1 را فعال می‌کنند.[3]

نقش بیولوژیکی TRPV1 در انواع سلول های غیر عصبی هنوز تحت بررسی گسترده است، اما نتایج موجود حاکی از عملکردهای بسیار فراتر از ادراک حسی و حرارتی است. به عنوان مثال، یک مداخله 12-هفته‌ای با دوز روزانه 15/0 میلی‌گرم 0 آگونیست TRPV1، آنالوگ ساختاری کپسایسین، از افزایش توده چربی بدن ناشی از رژیم غذایی و افزایش سروتونین پلاسما جلوگیری کرد. سطوح در افراد دارای اضافه وزن سالم.[4]

در سلول‌های چربی 3T{1}L1، فعال‌سازی TRPV1 توسط nonivamide باعث کاهش تجمع لیپید در طول تمایز و بلوغ با سرکوب بیان PPAR𝛾 شد.[5] در ماکروفاژها، کپسایسین و nonivamide باعث کاهش انتشار سیتوکین‌های پیش‌التهابی ناشی از LPS مانند IL6، CXCL8 و TNF-alpha به روشی وابسته به TRPV شدند.[6] با این حال، عملکرد خاص TRPV1 در لکوسیت های خون انسان مبهم باقی می ماند. در سلول‌های NK انسانی، کپسایسین 10 و 50 میکرومولار باعث افزایش غلظت‌های Ca2 داخل سلولی شد که نشان‌دهنده یک کانال TRPV1 عملکردی است.[7]

با این حال، عملکردهای تأثیرگذار سلول NK از قبیل گرانولاسیون سیتوتوکسیک و ترشح سیتوکین، ناشی از پیش تیمار سلول ها با کپسایسین به مدت 1 ساعت در محدوده غلظت 10-100 میکرومولار، تا حد زیادی مستقل از TRPV1 بودند.[7] ] در سلول‌های T، TRPV1 در فرآیندهای سیگنال‌دهی گیرنده سلول T، تکثیر و تمایز سلول‌های T و همچنین تولید سیتوکین نقش دارد.[8] کار قبلی گروه ما نیز بیان عملکردی TRPV1 را در سلول‌های T اولیه انسانی نشان داد.[9] علاوه بر این، تجزیه و تحلیل دوز-پاسخ در غلظت های مختلف از 0.03 تا 300 میکرومول L-1 نشان داد که [6]-gingerol ترشح سیتوکین توسط لکوسیت های اولیه انسانی با مقدار IC50 82.2 میکرومول L-1 را مهار می کند.

با این حال، کمی کردن [6]-gingerol در نمونه‌های پلاسمایی افراد سالم، میانگین حداکثر غلظت پلاسمایی را تنها 42 نشان داد. از آنجایی که این غلظت‌های [6] جینجرول تأثیر قابل‌توجهی بر ترشح سیتوکین در مطالعات قبلی نداشتند، [9] مشخص نیست که آیا غلظت مرتبط با رژیم غذایی 50 نانومول L-1 در پلاسمای خون پس از مصرف 1 لیتر زنجبیل به دست می‌آید یا خیر. چای، برای تعدیل پاسخ های ایمنی سلولی در سایر لکوسیت های اولیه انسان کافی است.

برای نوتروفیل های انسانی، دانش در مورد نقش عملکردی TRPV1 محدود است. در حالی که Köse و Nazıroglu˘ [10] در پاسخ به 10 میکرومولار کپسایسین که توسط کپسازپین آنتاگونیست TRPV1 کاهش می یابد، جریان های Ca2 به علاوه در نوتروفیل ها نشان دادند، نتایج دیگر نشان نداد کپسایسین برای القای هجوم Ca2 به علاوه در محدوده غلظت 1 مورد آزمایش قرار گرفت. -100 میکرومولار، علیرغم بیان RNA TRPV1 قابل تشخیص.[11]

نوتروفیل ها فراوان ترین لکوسیت ها در خون انسان هستند که 60 تا 70 درصد از کل گلبول های سفید در گردش را تشکیل می دهند. آنها اولین سلول های ایمنی هستند که به محل عفونت جذب می شوند. بنابراین آنها اغلب به عنوان اولین خط دفاعی نامیده می شوند.[12] جذب نوتروفیل‌ها توسط پپتید N-Formylmethionine-leucyl-phenylalanine (fMLF) یا کموکاین‌هایی مانند CXCL8 (IL{8}}) ​​از باکتری یا میتوکندری مشتق شده است.[13]

مکانیسم‌های دفاعی نوتروفیل‌ها عبارتند از فاگوسیتوز، [14] آزادسازی آنزیم ضد میکروبی از طریق دگرانولاسیون، [15] تولید گونه‌های فعال اکسیژن (ROS)، [16] و تشکیل تله‌های خارج سلولی نوتروفیل.[17] علاوه بر این مکانیسم‌های دفاعی مستقیم، نوتروفیل‌ها بیشتر به پاسخ‌های ایمنی بعدی از طریق آزادسازی سیتوکین‌ها و کموکاین‌ها کمک می‌کنند.[18] همچنین، نوتروفیل‌ها می‌توانند تحت یک فرآیند پرایمینگ قرار گیرند که آنها را قادر می‌سازد تا با شدت بیشتری به فعال‌سازی کامل بعدی پاسخ دهند.[16b]

در سال‌های اخیر، شواهدی افزایش یافته است که مواد غذایی و یا گیاهان دارویی می‌توانند یک یا چند پاسخ دفاعی ذکر شده از نوتروفیل‌های انسانی را تغییر دهند. این تغییرات شامل افزایش فعالیت فاگوسیتوتیک [19] و تولید ROS، [20] افزایش کموتاکسی به سمت fMLF، [21] و تشکیل تله‌های خارج سلولی نوتروفیل است.[20] با این حال، ترکیب (های) فعال شناسایی نشدند. اجزای تشکیل دهنده Ferula akitschkensis (𝛽-پینن، سابینن، 𝛾-ترپینن، ژرانیل استون و ایزو بورنیل استات) نوتروفیل ها را نسبت به fMLF- و CXCL{7}} حساسیت زدایی کردند که Ca2 بعلاوه هجوم Ca2 را القاء کردند و هجوم ژرمواکسینیل fMLF را مهار کردند. اثرات القایی از طریق TRPV1 واسطه شد.[22]

بر اساس داده‌های موجود، ما فرض کردیم که فعال‌سازی TRPV1 توسط لیگاند توسط [6]-gingerol می‌تواند بر عملکرد کلی نوتروفیل تأثیر بگذارد، چه به‌طور مستقیم یا از طریق افزایش پاسخ‌های آن‌ها به محرک‌های فعال‌کننده. در محدوده این فرضیه، هدف ما به ویژه روشن کردن این موضوع بود که آیا یک غلظت مرتبط با تغذیه تایید شده برای تعدیل پاسخ های ایمنی سلولی در نوتروفیل های اولیه انسان به عنوان بخشی از جمعیت لکوسیت کافی است یا خیر. '

علاوه بر این، ما به دنبال مقایسه سطوح بیان RNA همه اعضای ابرخانواده TRP پستانداران در پنج نوع از برجسته‌ترین سلول‌های خون انسان برای به دست آوردن یک نمای کلی کیفی و کمی جامع از بیان کانال TRP در لکوسیت‌های انسانی بودیم.

2. نتایج

2.1. فراوانی و سطوح رونوشت نسبی کانال‌های TRP در لکوسیت‌های انسانی

برای ارزیابی بیان RNA کانال TRP در لکوسیت‌های خون، پنج نوع از برجسته‌ترین نوع سلول‌های لکوسیتی از خون اهداکنندگان سالم جدا شد و بیان RNA کانال‌های TRP از طریق RT-PCR کمی آنالیز شد (شکل 1).

رونوشت های خاصی از TRPV و همچنین خانواده TRPM با فرکانس های بالای 75-1{5}}0 درصد در همه انواع سلول های تجزیه و تحلیل شده شناسایی شد. میانگین فرکانس کلی با در نظر گرفتن همه انواع سلول 96 درصد برای خانواده TRPV و 98 درصد برای خانواده TRPM بود. رونوشت های اختصاصی TRPC بسیار کمتر بود و از 0 درصد در مونوسیت ها، سلول های NK، سلول های T و سلول های B تا 100 درصد در سلول های NK و سلول های T با میانگین کلی فرکانس تنها 53 درصد متغیر بود (شکل 1A). رونوشت اختصاصی TRPC فقط در نوتروفیل ها با فراوانی 70 درصد شناسایی شد.

همچنین، رونوشت اختصاصی TRPA به طور کلی فراوانی نسبتاً پایینی را در انواع سلولی با فراوانی 100 درصد در نوتروفیل‌ها، 25 درصد در مونوسیت‌ها، 80 درصد در سلول‌های NK، 100 درصد در سلول‌های T و 60 نشان داد. درصد در سلول های B به همین ترتیب، رونوشت اختصاصی TRPML فرکانس پایینی در نوتروفیل ها (50 درصد)، مونوسیت ها (25 درصد)، سلول های NK (40 درصد) و سلول های B (20 درصد) نشان داد، اما فرکانس 100 درصد در سلول های T رونوشت اختصاصی TRPV{12}}در همه انواع سلول شناسایی شد، که فراوانی 100 درصد در مونوسیت‌ها، سلول‌های NK و سلول‌های T، و فرکانس 90 درصد در نوتروفیل‌ها و 80 درصد در سلول‌های B را نشان می‌دهد.

با توجه به بیان نسبی RNA، در مقایسه با فرکانس‌های مربوطه، کانال‌های TRP الگوی بیان نوع سلولی بیشتری را نشان می‌دهند، همانطور که با مقایسه مقادیر Δct مربوطه در انواع سلول‌های مختلف آنالیز شده مشهود است (شکل 1B). به عنوان مثال، TRPP3 با فرکانس 100 درصد در تمام انواع سلول ها شناسایی شد، اما بالاترین سطح بیان را در مونوسیت ها نشان داد.

در مقابل، کانال TRPV2 در تمام انواع سلول‌های مورد بررسی، با سطح بیان RNA نسبتاً بالا و همچنین فرکانس بالا شناسایی شد. به همین ترتیب، سطوح رونوشت TRPV1 در تمام انواع سلول های مورد بررسی مشابه بود (شکل 1B).

2.2. بیان سطحی TRPV1 روی نوتروفیل ها

دانش فعلی در مورد عملکرد TRPV1 در نوتروفیل های انسانی هنوز نامشخص است. برای بررسی بیشتر نقش TRPV1 در نوتروفیل های انسانی، در ادامه بررسی کردیم که آیا کانال TRPV1 بر روی سطح نوتروفیل های اولیه انسانی با استفاده از فلوسیتومتری سلول زنده بیان می شود یا خیر (شکل 2).

نوتروفیل های جدا شده برای CD15 به عنوان نشانگر سطحی برای نوتروفیل ها رنگ آمیزی شدند (شکل 2A, B) و به طور همزمان با یک آنتی بادی ایجاد شده علیه اپی توپ در اولین حلقه خارج سلولی پروتئین TRPV1 (شکل 2B) یا ایزوتیپ مربوطه رنگ آمیزی شدند. دومی به عنوان جایگزینی برای اندازه گیری اتصال غیر اختصاصی عمل می کند (شکل 2A). در جمعیت CD15 پلاس، شدت فلورسانس برای FITC مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. رنگ آمیزی نوتروفیل ها با آنتی بادی TRPV1 منجر به یک سیگنال فلورسانس قابل تشخیص در مقایسه با کنترل ایزوتیپ شد، در نتیجه بیان سطحی TRPV1 در نوتروفیل های اولیه انسانی را تایید کرد (شکل 2C). تجزیه و تحلیل نوتروفیل های چهار اهداکننده منفرد بیان سطحی قابل مقایسه TRPV1 را نشان داد (شکل 2D).

2.3. [6] افزایش ناشی از جینجرول در Ca2 پلاس داخل سلولی

از آنجایی که فعال‌سازی TRPV1 ناشی از لیگاند منجر به هجوم Ca2 پلاس می‌شود، [23] غلظت Ca2 داخل سلولی به علاوه نوتروفیل‌ها از طریق رنگ حساس به Ca2 به علاوه Fura تعیین شد. بر اساس یافته های قبلی ما، [9] غلظت 5{22}} نانومولار از لیگاند معروف TRPV1 [6]-gingerol و زمان انکوباسیون 2 ساعت انتخاب شد. تجزیه و تحلیل‌ها نشان داد که انکوباسیون نوتروفیل‌ها با 50 نانومولار [6]-جینجرول منجر به افزایش غلظت‌های Ca2 داخل سلولی به‌علاوه آن شد که به طور متوسط ​​18.4 درصد ± 1.0 درصد از حداکثر مقدار بود، همانطور که با اعمال 1 میکرومولار یونوفور یونومایسین تعیین شد. افزایش القا شده توسط DMSO 2/1 ± 7/4 درصد بود (شکل 3).

2.4. تأثیر [6] - جینجرول بر بیان TRPV1

در مرحله بعد، هدف ما تجزیه و تحلیل تاثیر تحریک TRPV1 توسط [6]-gingerol بر بیان TRPV1 در سطح رونوشت از طریق q-RTPCR و همچنین در سطح پروتئین سطحی از طریق رنگ‌آمیزی سلول‌های زنده بود. برای این منظور، نوتروفیل های انسانی با 50 نانومولار [6] - جینجرول به مدت 2 ساعت انکوبه شدند و سطح بیان مربوطه اندازه گیری شد.

این انکوباسیون 2 ساعته نه رونوشت TRPV1 و نه سطح پروتئین را تحت تأثیر قرار نداد (شکل 4)، و همچنین تغییری نکرد، به جز IL6، IL17A، IL24، C5، و GDF5، بیان RNA ژن های رایج سیتوکین و کموکاین مورد بررسی قرار گرفت (شکل S1، جدول). S2، اطلاعات پشتیبانی).

2.5. تأثیر [6] - جینجرول بر بیان نشانگرهای سطحی نوتروفیل

در این مجموعه از آزمایش‌ها، ما پرسیدیم که آیا [6]-gingerol تأثیری بر بیان نشانگرهای سطحی رایج برای نوتروفیل‌ها دارد یا خیر. ما دریافتیم که بیان نشانگرهای CD11b و CD66b پس از دوره انکوباسیون 2 ساعته با [6] - جینجرول در مقایسه با کنترل حلال افزایش یافته است، در حالی که CD62L تحت تاثیر قرار نگرفت (شکل 5). علاوه بر این، بیان سطحی گیرنده fMLF FPR1 پس از تیمار سلول‌ها با 50 نانومولار [6]-gingerol در مقایسه با شاهد حلال به طور قابل‌توجهی افزایش یافت.

For more information:1950477648nn@gmail.com