نقشی برای BATF3 در تمایز Tu9 و آسیب شناسی های L MuCOsal مبتنی بر سلول T (قسمت 1)

برای کسب اطلاعات بیشتر لطفا تماس بگیریدdavid.wan@wecistanche.com

سلول های T helper 9 (T,9) برای ایجاد بیماری های التهابی و آلرژیک مهم هستند. شبکه رونویسی TH9 سیگنال‌های سیتوکین‌ها و ارائه آنتی‌ژن را همگرا می‌کند، اما به طور کامل درک نشده است. در اینجا، ما TL1A، عضوی از ابرخانواده TNF را به عنوان یک القاء کننده قوی تمایز TH9 موش و انسان شناسایی کردیم.به صورت مکانیکی، TL1A بیان فاکتورهای رونویسی BATF و BATF3 را القا کرد و اتصال آنها به پروموتر //9 را تسهیل کرد که منجر به افزایش ترشح I-9، کمبودهای BATF و BATF3-در IL{6} مختل شد. } ترشح تحت شرایط قطبش Tμ9 و Ty9-TL1A. در داخل بدن، با استفاده از یک مدل انتقال سلول T، نشان دادیم که TL1A التهاب روده و ریه ناشی از سلول‌های T،{13}را وابسته به IL را ترویج می‌کند. آنتی بادی های خنثی کننده IL{16}} التهاب مخاطی ناشی از TL1A را تضعیف کردند. سلول‌های Batf{19}}T{20}}TL1A التهاب را کاهش دادند وبیان سیتوکیندر داخل بدن در مقایسه با سلول های WT. نتایج ما نشان می‌دهد که TL1A تمایز و عملکرد سلول‌های T{1}} را ارتقا می‌دهد و نقش BATF3 را در التهاب مخاطی ناشی از سلول‌های T تعریف می‌کند.

برای اطلاعات بیشتر در مورد Cistanche اینجا را کلیک کنید

مقدمه

زیرمجموعه های تخصصی سلول های T helper (T-) نقش مهمی در حفظ هموستاز بافتی و در طول توسعه بیماری های التهابی در سطوح مخاطی ایفا می کنند. سلول‌های TH9 اخیراً به‌عنوان یک زیر مجموعه سلول T مستقل شناسایی شده‌اند که عمدتاً IL-9 بلکه IL-10 و IL-21 را نیز تولید می‌کنند. ۱۲ سلول Tμ9 در چندین بیماری، از جمله آلرژی ریه نقش دارند. التهاب، خود ایمنی تجربیآنسفالومیلیت(EAE)، کولیت، 3- اخیراً، سلول‌های TH9 عفونت‌های کرم انگلی و سرطان داشته‌اند. گزارش شده است که در بیماری های التهابی روده (IBD) نقش دارد. بیماران مبتلا به کولیت اولسراتیو (UC) تعداد IL{3}} مخاطی به اضافه سلول های T و گیرنده IL{4}} (IL) دارند. -9R) روی اپیتلیوم روده تنظیم می شود. کمبود IL{6}} توسعه حاد و مزمن را سرکوب می کندکولیت ناشی از اگزازولون، مدلی که UC را تقلید می کند. در بیماران مبتلا به بیماری کرون (CD)، سطوح بالای{0}} IL-9 سرم با بیماری شدید مرتبط است.

شکل 1 TL1A تمایز سلول های TH9 موش و انسان را افزایش می دهد. سلول‌های CD4 به علاوه T موش ساده تحت شرایط قطبش Ty0-یا T{5}با یا بدون TL1A به مدت 3 روز، و تجزیه و تحلیل ELJSA ]L-9، IL{{9} تمایز یافتند. } و ترشح IL{10}}. b سلول‌های CD4 T انسان ساده‌لوح (CD4'CD45RACD45ROCD25) از سلول‌های بنیادی سلولی اهدایی سالم جدا شد و تحت شرایط پلاریزه TH{16} با یا بدون TL1A به مدت 3 روز تمایز یافت. تجزیه و تحلیل ELISA ترشح IL انسان در 48 و 72 ساعت. نمودار جعبه-سبیل که غلظت IL-9 در سوپرناتانت های کشت را برای سلول های تیمار شده با TH9 و TH9-TL1A نشان می دهد. جعبه ها نشان دهنده میانه و صدک 25 و 75 هستند و سبیل ها حداقل و حداکثر مقادیر توزیع را نشان می دهند. ن{30}}. داده ها نشان دهنده میانگین ± انحراف معیار یک آزمایش مستقل از چهار آزمایش است (آزمایش مستقل. *ص< 0.05,***p=""><0.005 determined="" by="" student's="">

سلول‌های TH9 در حضور TGF- 1 و IL{3}} از سلول‌های CD4 به علاوه T ساده‌لوح متمایز می‌شوند. چندین فاکتور رونویسی در پایین دست گیرنده های گیرنده سلول T (TCR)، TGF{5}} و IL{6}} برای تمایز سلول های TH9 از جمله IRF4، STAT6، GATA3، PU.1، NF- مورد نیاز است. کیلوبایت و فاکتور رونویسی زیپ پایه لوسین ATF-مانند (BATF.{14}} با این حال، برنامه رونویسی و محرک‌های التهابی که تمایز سلول‌های Tμ9 را هدایت می‌کنند هنوز به خوبی درک نشده‌اند و یک عامل تعیین‌کننده اصل و نسب مرتبط با lL{{{ 17}} عبارت شناسایی نشده است.

خانواده فاکتورهای رونویسی BATF شاملBATF، BATF2، وBATF3و متعلق به خانواده فاکتورهای رونویسی AP-1 است که شامل JUN و FOS می‌شود. فاکتورهای رونویسی در خانواده BATF از یک دامنه متصل به DNA و موتیف زیپ لوسین تشکیل شده‌اند، اما فاقد دامنه فعال‌سازی هستند و در ابتدا به عنوان تنظیم‌کننده‌های منفی فعالیت AP-1 توصیف شدند." با این حال، مطالعات اخیر نشان داده‌اند که اعضای خانواده BATF با فاکتورهای رونویسی IRF از جمله IRF4 و IRF8 تعامل دارد و به توالی های عناصر ترکیبی AP{5}}IRF متصل می شود تا ژن های هدف خود را در سلول های T و سلول های دندریتیک تنظیم کند. نشان داده شده است که BATF برای توسعه سلول های Ty9 نیز مورد نیاز است. به عنوان سلول های TH2، TA17، و Try. 15،19BATF3 برای کنترل رشد سلول های دندریتیک CD8a plus و CD103 به علاوه توصیف شده است. نشان داده شده. علاوه بر این، محرک‌های خارج سلولی که می‌توانند مسیر BATF3 را در سلول‌های CD4 به علاوه Tu فعال کنند، باید روشن شوند.

شکل 2 TL1A بیان BATF و BATF3 را در طول تمایز T,9 تنظیم می کند. پروفایل رونویسی سلول های TH9 و TH9-TL1A با توالی یابی RNA. نقشه حرارتی که داده های توالی RNA را با استفاده از 100 ژن برتر با بزرگترین IQR (محدوده بین چارکی) نمایش می دهد. دندروگرام‌های سمت چپ و بالای نقشه حرارتی نشان‌دهنده خوشه‌بندی ژن‌ها (ردیف‌ها) و نمونه‌ها (ستون‌ها) هستند. b سلول های CD4 به علاوه T ساده به مدت 3 روز به زیر مجموعه های مختلف TH و Tregs تمایز داده شدند. بیان نسبی mRNA ژن BATF توسط PCR مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت، سلول‌های CD4 ساده به علاوه T تحت شرایط TH{12}} یا TH{13}}با یا بدون TL1A برای دوره‌های زمانی مشخص شده تمایز یافتند. تجزیه و تحلیل PCR بیان mRNA نسبی BATF، رنگ آمیزی همزمان BATF و IRF4 (بالا). تجزیه و تحلیل کمی درصد سلول های BATFIRF4 (پایین). رنگ آمیزی همزمان BATF و IL{19}}. fg

TL1A. رنگ آمیزی داخل سلولی نمایانگر IL-9 و BATF در 48 ساعت گرم فرکانسBATFfIL-9 به علاوه سلول های Tتحت شرایط Ty9 و T{1}}TL1A متمایز می شود. وسایل نشان داده شده است. هر نماد نشان دهنده یک اهداکننده فردی است. ن=4. h بیان mRNA نسبی Batf3 در زیر مجموعه‌های مختلف Th موش و Tregs توسط qPCR.I بیان mRNA نسبی Batf3 در زمان‌های مشخص شده مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. j رنگ آمیزی مشترک BATF3 و IL-9. k فرکانس ازBATF3IL-9 به علاوه سلول های Tتحت شرایط Ty9 و TH9-TL1A متمایز می شود. وسایل نشان داده شده است. هر نماد نشان دهنده یک آزمایش فردی است. ن=3. سلول‌های CD4 به علاوه T انسان ساده‌لوح تحت شرایط T،{6}}قطبی با یا بدون TL1A تمایز یافتند. I رنگ آمیزی داخل سلولی IL{8}} و BATF3 در 48 ساعت. m فراوانی سلول‌های BATF3L{12}} به‌علاوه T تحت شرایط TH9 و TH{14}}TL1A تمایز یافته است. وسایل نشان داده شده است. هر نماد نشان دهنده یک اهداکننده فردی است. ن{16}}. داده ها نشان دهنده میانگین±SD یک آزمایش مستقل از دو (a) یا حداقل سه (bd. i. k) آزمایش مستقل است.*n<0.05. n=""><0.01.***n <="" 0.005="" as="" determined="" by="" student's="">

اخیراً نشان داده‌ایم که TL1A، یکی از اعضای ابرخانواده TNF که نقش مهمی در بیماری‌های ناشی از سیستم ایمنی از جمله IBD ایفا می‌کند، 25 باعث ترشح IL-9 در سلول‌های Tu17 می‌شود. علاوه بر این، یک انتشار اخیر نشان داد که TL1A، از طریق گیرنده DR3 خود، تمایز TA9 را از طریق ترویج می کند.IL-2-وآمار5-وابسته اما PU.1- و STAT6-مکانیسم‌های مستقل در التهاب آلرژیک ریه. 2' با این حال، برنامه‌های رونویسی ناشی از TL1A و بیماری‌زایی سلول‌های TH9 ناشی از TL1A در التهاب روده و IBD همچنان باقی مانده است. روشن شد.

در اینجا، ما نشان می‌دهیم که TL1A تمایز سلول‌های TH9 انسان و موش را از طریق یک مسیر سیگنال‌دهی جدید ترویج می‌کند. ما BATF3 را به عنوان یک تنظیم کننده رونویسی جدید برای تمایز سلول های Tp9 تعریف می کنیم. TL1A منجر به بازسازی کروماتین در جایگاه lI9 و به کارگیری فاکتورهای رونویسی پیشگام IRF4 و BATF می شود که اجزای مهمی برای فعال سازی رونویسی IL{7}} و BATF3 به مناطق حفاظت شده در 9 پروموتور هستند. علاوه بر این، TL1A بیان BATF و BATF3 را به شیوه‌ای وابسته به STAT تنظیم می‌کند. ) سلول ها در تولید IL-9 خود دچار اختلال می شوند.TH9-TL1Aسلول‌ها در داخل بدن بسیار پیش‌التهابی هستند که به‌طور اقتباسی به موش‌های Ragi-7- منتقل می‌شوند، همانطور که با التهاب مخاطی شدید در روده‌ها و ریه‌ها مشهود است، که با درمان با آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده IL{2}} ضعیف شد. انتقال اختیاری سلول‌های Batf3-/TH9-TL1A به موش‌های Rag منجر به کاهش قابل توجه التهاب مخاطی و تولید سیتوکین در مقایسه با سلول‌های WT TH9-TL1A می‌شود. داده‌های ما نقش جدیدی را برای TL1A و BATF3 در توسعه سلول‌های عامل بیماری‌زای T،9 نشان می‌دهند و این مسیر سیگنالینگ را به عنوان یک هدف درمانی بالقوه در آسیب‌شناسی‌های ناشی از T، از جمله IBD و بیماری آلرژیک ریوی شناسایی می‌کنند.

نتایج

TL1A تمایز سلول‌های Tμ9 موش و انسان را در شرایط آزمایشگاهی افزایش می‌دهد برای تعیین اثر TL1A بر تمایز TH9، سلول‌های CD4 T ساده را تحت شرایط TH9 با یا بدون TL1A تحریک کردیم. TL1A به طور قابل توجهی ترشح IL{8}} و بیان mRNA I/9 را افزایش داد (شکل 1a، شکل تکمیلی 1a). TL1A به تنهایی ترشح IL-9 را القا نمی‌کند، و نشان می‌دهد که TL1A با TGF- 1 و IL-4 برای ترویج تولید IL{17}} هم افزایی عمل می‌کند. ترشح و بیان mRNA T{18}}سیتوکین های L-10 و IL{20}} مرتبط با TL1A نیز افزایش یافت (شکل 1a، شکل تکمیلی 1a، b). مطابق با گزارش‌های قبلی، آزمایش‌های دوره زمانی رنگ‌آمیزی IL{25}} داخل سلولی بیان گذرا IL-9 را با حداکثر القاء تحت شرایط T{27}} در روز 3 و کاهش بازگشت به حالت اولیه در روز نشان داد. 5 (شکل تکمیلی 1b). 28،2TL1A درصد قابل توجهی از سلول‌های تولیدکننده IL{34}}در طول دوره آزمایش‌ها با تغییر سینتیک به سمت القای IL{35} زودتر و قوی‌تر القا می‌کند که حتی در یک نقطه زمانی اولیه از حداکثر تولید IL{36}} القا شده تحت شرایط TH9 فراتر رفت (شکل تکمیلی 1b). ما همچنین افزایش سلول‌های IL-9 به اضافه IL-10 را در حضور TL1A مشاهده کردیم (شکل تکمیلی 1b). ما هیچ تغییری به سمت دیگر زیر مجموعه های Tu مشاهده نکردیم (شکل تکمیلی 1c). افزایش تمایز TH9 توسط TL1A کاملاً به گیرنده DR3 آن وابسته بود (شکل تکمیلی 1d). در مجموع، این داده‌ها نشان می‌دهند که TL1A با TGF- 1 و IL-4 در تمایز TA9 و تولید IL{52}} هم افزایی دارد.

TL1A همچنین به طور قابل توجهی تمایز TH9 را در یک محیط خاص آنتی ژن با استفاده از سلول های OT-ll اختصاصی OVA افزایش داد (شکل تکمیلی 1e، f). TL1A بر تکثیر سلولی در طول تمایز TH9 تأثیری نداشت (شکل تکمیلی 1g)، همانطور که برای سلول های CD4 حافظه به علاوه T نشان داده شده است. این داده‌ها نشان می‌دهند که TL1A تمایز TH9 را بدون تأثیر بر تکثیر افزایش می‌دهد. علاوه بر این، ما تولید IL{12}} را در سلول‌هایی که تحت شرایط Ty9 و TH{14}}TL1A به مدت 3 روز تمایز یافته بودند و با ضد CD3s/ دوباره تحریک شدند، بررسی کردیم. CD28. ما افزایش تولید IL{20}} را در سلول‌های TH9-TL1A در مقایسه با سلول‌های TH9 بعد از تحریک ثانویه مشاهده کردیم که در حضور TL1A بیشتر افزایش یافت (شکل تکمیلی 1h, i). این داده‌ها نشان می‌دهند که TL1A همچنین تولید IL{27}} را از سلول‌های TH9 تمایز یافته افزایش داد. سپس، تأثیر TL1A را بر تمایز سلول‌های Tu9 انسانی تعیین کردیم. سلول‌های CD4 به علاوه T ساده از PBMC از اهداکنندگان سالم جدا شده و تحت شرایط Tu9 در حضور تحریک شدند. مطابق با داده های ما از سلول های TH9 موش، افزودن TL1A به طور قابل توجهی ترشح IL{36}} را از کشت های سلولی TH9 انسانی افزایش داد (شکل 1b).

TL1A بیان فاکتورهای رونویسی BATF و BATF3 را القا می‌کند برای روشن کردن مسیرهای سیگنال‌دهی ناشی از TL1A، از توالی‌یابی RNA برای ارزیابی پروفایل رونویسی در سلول‌های TH9 و TH{4}TL1A استفاده کردیم. TL1A به طور قابل توجهی مشخصات رونویسی TH9 را تغییر نداد که نشان می‌دهد TL1A تمایز TH9 را بطور کلی تغییر نداده است (داده‌ها نشان داده نشده است). با این حال، 219 ژن به طور متفاوت در سلول‌های TH{11}}TL1A بیان شدند (شکل 2a، جداول تکمیلی 1 و 2). تجزیه و تحلیل غنی‌سازی مسیر تغییرات قابل‌توجهی را در ژن‌های دخیل در گیرنده سیتوکین-سیتوکین و مسیرهای سیگنالینگ JAK-STAT در شرایط T،{18}}TL1A شناسایی کرد (جدول تکمیلی 1 و 2، داده‌ها نشان داده نشده است). BATF3 و چندین ژن تنظیم‌شده با BATF به طور قابل‌توجهی تحت شرایط T،9-TL1A تنظیم مثبت شدند (جدول تکمیلی 3) که نشان می‌دهد فاکتورهای رونویسی BATF3 و BATF ممکن است در تمایز سلول‌های TH9-TL1A دخیل باشند. توصیف شده است که BATF برای تعیین تکوین سلول‌های Tp17 و TA9 ضروری است.15،31-34 -اینکه آیا TL1A اعضای خانواده BATF را فعال می‌کند، ابتدا سطح بیان BATF را در زیر مجموعه‌های Tu مختلف ارزیابی کردیم و بیان قوی mRNA BATF را در سلول های TH9 و TH2 (شکل 2b). TL1A بیان BATF را در شرایط Tu9 بیشتر افزایش داد، به ویژه در روز 1 که شرایط TH9 به تنهایی برای القای mRNA BATF کافی نیست (شکل 2c). TL1A به تنهایی mRNA ژن BATF را به درجه ای مشابه شرایط Tp9 القا می کند (شکل 2c). رنگ‌آمیزی داخل سلولی برای BATF تأیید کرد که تحریک Ty{46}}TL1A به طور قابل‌توجهی درصد سلول‌های BATF پلاس را افزایش می‌دهد (شکل 2d). علاوه بر این، TL1A به تنهایی درصد سلول های BATF پلاس و مهمتر از آن درصد سلول های BATF*IRF4 پلاس را در مقایسه با شرایط TH9 افزایش داد که نشان می دهد TL1A ممکن است تشکیل مجتمع های تعاونی IRF{53}}BATF را افزایش دهد (شکل 2d). تحریک TH{55}}TL1A همچنین درصد سلول‌های BATF به اضافه IL{57}} را افزایش داد (شکل 2e).

علاوه بر این، سلول‌های TH9 انسانی دارای درصد بالاتری از سلول‌های تولیدکننده IL وقتی با TL1A تحریک شدند (شکل 2f، g). قابل‌توجه است که اکثر سلول‌های تولیدکننده IL{4}}BATF را بیان می‌کنند. رنگ‌آمیزی مشترک BATF و IRF4 نشان داد که افزودن TL1A درصد سلول‌های BATF*IRF4 پلاس را در طول تمایز T انسانی افزایش داد (داده‌ها نشان داده نشده است)، که نشان می‌دهد افزایش تولید IL{11}} از طریق مسیر سیگنالینگ BATF توسط TL1A بین سلول های TH9 موش و انسان حفظ می شود. در مقابل BATF، نقش BATF3 در تمایز سلول‌های TH کمتر تعریف شده است. برای تأیید داده‌های RNA-seq، سطح بیان Batf3 را در سلول‌های T{17}} و سایر زیر مجموعه‌های TH تعیین کردیم و دریافتیم که بیان mRNA Batf3 در T{19}}، T،1 و TH2 بالاترین است. سلول ها (شکل 2h). TL1A بیان Batf3 را تحت شرایط T{25}} افزایش داد (شکل 2i). رنگ‌آمیزی داخل سلولی برای BATF3 تأیید کرد که تحریک T،{28}}TL1A به طور قابل‌توجهی درصد سلول‌های BATF3 به اضافه IL{31}} را افزایش می‌دهد (شکل 2j، k). در سلول‌های T9 انسانی، TL1A به طور قابل‌توجهی بیان BATF3 را افزایش داد. plus IL{36}} pluscells(Fig.2l, m). مشابه BATF، اکثر سلول‌های تولیدکننده IL{38}BATF3 را با هم بیان می‌کنند.

شکل 3 TL1A اتصال BATE IRF4 و BATF3 را به پروموتر //9 در طول تمایز Ty9 افزایش می‌دهد، سلول‌های CD4 موش ساده، a، b و T تحت شرایط پلاریزه‌کننده TH0- یا Tμ9-متمایز شدند. یا بدون TL1A برای 2 (BATF، IRF4، و AcH3) یا 3 (BATF3) روز. سنجش ChP برای اتصال BATF، IRF4، BATF3، یا AcH3 به توالی‌های غیرکدکننده حفاظت‌شده (CNS) 1 (a) و CNS{19}} (b) از //9 انجام شد. داده ها نشان دهنده میانگین ± انحراف معیار یک آزمایش مستقل از دو آزمایش مستقل است.*ص<><>< 0.005="" as="" determined="" by="" student's="">

BATF و BATF3 فاکتورهای رونویسی حیاتی در تمایز T{3}} ناشی از TL1A هستند.

برای تعریف بیشتر نقش BATF و BATF3، ما سنجش‌های ایمونوپسیت کروماتین (ChIP) را برای تعیین اتصال در دو توالی غیرکدکننده حفظ‌شده Il9 (Il9 CNS1، CNSO) انجام دادیم. 5 TL1A به تنهایی باعث اتصال قابل‌توجهی بیشتر BATF به شرایط II9 CNS1 در مقایسه با TH شد. و TH{9}}TL1A اتصال BATF را بیشتر تقویت کرد (شکل 3a). در بالادست I/9 CNS{13}}، TL1A همچنین اتصال BATF را تحت شرایط T,9 افزایش داد در حالی که TL1A به تنهایی هیچ تأثیری نداشت (شکل 3b). TL1A اتصال IRF4 را تحت شرایط Ty9 در CNS1 و CNS{22}} افزایش داد (شکل 3a، b). جالب توجه است، اتصال هیستون استیله 3 (AcH3) در CNS1 و CNSO که قبلا برای تسهیل بازسازی کروماتین در مکان Il9 در طول تمایز TH9 توصیف شده بود، تحت شرایط Ty{29}}TL1A نیز افزایش یافت (شکل 3a،b). اتصال BATF3 به CNS1 در سلول‌های TH9 تنظیم مثبت شد و اتصال تحت شرایط TH{35}}TL1A بیشتر شد در حالی که BATF3 به CNS{38}} متصل نشد (شکل 3a، داده‌ها نشان داده نشده است). این داده ها نشان می دهد که TL1A اتصال BATF، BATF3 و IFR4 به پروموتر //9 را تحت شرایط TH9 برای القای بیان ll9 افزایش می دهد. برای تأیید نقش BATF و BATF3 در سلول‌های T وابسته به TL1A و Batf{49}}. تمایز IL{50}}، IL-Ty9، ما از Batf{53}} a 10 استفاده کردیم و تولید IL-13 به شدت در سلول‌های BATF-/- تحت شرایط Tμ9 مختل شد (شکل. 4a-d) با این حال، تحریک TL1A حداقل تا حدی بر نیاز برای BATF برای تولید IL{{-9}}}}}}»»}}} «IL-13 در طول تمایز Ty9 غلبه کرد (شکل 4a، b، d). در غیاب BATF3، القای IL{67}} به طور قابل توجهی کاهش یافت، به ویژه در شرایط Tμ9-TL1A (شکل 4e,f، شکل تکمیلی 2a). برخلاف BATF، BATF3 مورد نیاز نبود. برای بیان{73}} یا IL-13 (شکل 4g, h, شکل تکمیلی 2b, c). برای تعریف مسیرهای سیگنالینگ که منجر به تنظیم دگرگونی BATF و BATF3 در حضور TL1A می‌شوند، از Stat استفاده کردیم. {79}}و p50-/سلول‌ها. سلول‌های p{81}}/TH9 درصد کاهش سلول‌های BATF به اضافه IRF4t را داشتند و افزایش درصد سلول‌های BATF به علاوه IRF4 پلاس تحت تحریک TL1A تقریباً به طور کامل لغو شد (شکل تکمیلی 3a, b). دگرگونی mRNA ژن BATF و Batf3 تحت شرایط T.9 مستقل از p{89}} بود، در حالی که افزایش بیان BATF و Batf3 تحت شرایط TH{91}}TL1A کاملاً وابسته به p50- بود (شکل تکمیلی 3c ، د). سلول‌های Stat6-/T9 درصد سلول‌های BATFIRF4 پلاس را کاهش دادند و افزایش آنها تحت تحریک Tμ9-TL1A به طور کامل لغو شد (شکل تکمیلی 4a، b). به طور مشابه، تنظیم مثبت mRNA ژن BATF و Batf3 تحت شرایط TH9 و TH{104}}TL1A کاملاً به STAT6 وابسته بود (شکل تکمیلی 4c, d). ما هیچ اثر قابل توجهی از کمبود BATF یا BATF3 بر بیان Batf3 و BATF مشاهده نکردیم که نشان می‌دهد هیچ جبرانی بین دو عامل رونویسی وجود ندارد (شکل تکمیلی 5). این داده‌ها با هم نشان می‌دهند که BATF و BATF3 نقش‌های مهم و متمایزی را در طول تمایز T{111}} در حضور TL1A ایفا می‌کنند و افزایش بیان BATF و BATF3 تحت تحریک TL1A به STAT6 و مسیر متعارف NF-KB بستگی دارد. سپس، توالی‌یابی RNA را روی سلول‌های WT و Batf{117}}/-Tμ9-TL1A انجام دادیم. در مجموع، 139 ژن به طور متفاوت در سلول‌های WT در مقابل سلول‌های Batf{122}}Ty9-TL1A بیان شدند (شکل 4i، جدول تکمیلی 4). تجزیه و تحلیل غنی سازی مسیر هستی شناسی ژن، تغییرات قابل توجهی را در ژن های دخیل در تنظیم رونویسی، تکثیر سلولی و انتقال سیگنال درون سلولی شناسایی کرد (جدول تکمیلی 5 و 6). این نتایج نقش BATF3 را در تمایز سلول‌های Ty9-TL1A نشان می‌دهد. سلول‌های T{132}}TL1A در داخل بدن بسیار بیماری‌زا هستند. برای تعیین پتانسیل بیماری‌زایی سلول‌های TH{134}}TL1A در داخل بدن، CD45.1 تمایز یافته با خارج از بدن به‌علاوه Tμ9 یا TA{140}}TL1A را منتقل کردیم. سلول‌ها در Rag1-'-mice. موش هایی که سلول های Ty9 دریافت کردند کاهش وزن قابل توجهی نداشتند (شکل 5a). با این حال، موش‌هایی که سلول‌های TH{146}}TL1A دریافت کردند وزن خود را کاهش دادند و التهاب روده‌ای شدیدتر، به‌ویژه در روده کوچک ایجاد کردند (شکل 5a-c). ما همچنین التهاب شدید ریوی را مشاهده کردیم که با ارتشاح سلولی اطراف برونشی و اطراف عروقی سلول‌های التهابی در گیرندگان TA{150}}TL1A مشخص می‌شود. رنگ‌آمیزی با اسید پریودیک آلسین بلو (AB-PAS) تکثیر بیش از حد سلول‌های تولیدکننده موسین در اپیتلیوم راه هوایی گیرندگان Ty{155}}TL1A را نشان داد (شکل تکمیلی 6a, b). ما سلولیت بالاتری را در طحال و سلول‌های تک هسته‌ای لامینا پروپریا (LPMC) و درصد و تعداد مطلق سلول‌های CD4 پلاسنیک، MLN و LPMC در طحال، MLN و LPMC در گیرندگان TH{159}}TL1A (شکل 5d، e) مشاهده کردیم که نشان می‌دهد Ty 9-سلول‌های TL1A پتانسیل تکثیر بالاتری در داخل بدن دارند. رنگ‌آمیزی Ki67 تأیید کرد که سلول‌های MLN، طحال و LPMC از گیرندگان TH{165}}TL1A حتی 6 هفته پس از انتقال سلول‌های T تکثیر بیشتری دارند (شکل 5f). ترشح بیشتر IL{170}} و IL{171}} در سلول‌های ضد CD3/anti-CD{175}تحریک‌شده MLN از گیرندگان TH{176}}TL1A مشاهده شد (شکل 5g)، و ترشح بیشتر IL-9 و IL{180}} در anti-CD3/anti-CD{184}}تحریک مجدد LPMC از گیرندگان Ty9-TL1A (شکل 5h). ما تعداد مطلق بالاتری از سلول‌های طحال و MLN IL-9 پلاس، IL{189}} پلاس، و IL{190}} پلاس و تعداد مطلق MLN، طحال، و LPMC CCR6 پلاس و سلول‌های CD103 به علاوه T در گیرنده‌های TH{193}}TL1A مطابق با نقش این سلول‌ها در سطوح مخاطی هستند (شکل 5i،j). IL{196}} برای التهاب in vivo که توسط سلول‌های T#9-TL1A ایجاد می‌شود مورد نیاز است تا بررسی شود که آیا افزایش تولید IL-9 توسط سلول‌های TH9-TL1A در التهاب روده و ریه نقش دارد یا خیر. ما موش‌هایی را که سلول‌های TH{202}}TL1A دریافت می‌کردند با IL خنثی‌کننده-9 یا آنتی‌بادی‌های کنترل برای مدت زمان آزمایش انتقال سلول T درمان کردیم. تجزیه و تحلیل هیستوپاتولوژیک نشان داد که التهاب روده به طور قابل توجهی در موش‌های تحت درمان با ضد lL در مقایسه با گروه شاهد ایزوتیپ کاهش یافته است (شکل 6a, b). ما همچنین التهاب ریه را با کاهش ارتشاح پری برونش و کاهش سلول‌های تولیدکننده مخاط در موش‌های تحت درمان با anti-lL مشاهده کردیم (شکل تکمیلی 6c). تعداد کل سلول ها و مجموع سلول های CD4tCD45.1 به علاوه T در MLN در موش های تحت درمان با ضد IL در مقایسه با کنترل های ایزوتیپ کاهش یافت (شکل 6c). درمان ضد IL{220}} همچنین تولید IL-13 و IL-17 را در MLN و طحال کاهش داد، در حالی که تولید IFN-y بدون تغییر بود (شکل 6d، داده‌ها نشان داده نشده است). با هم، این داده‌ها نشان می‌دهند که سلول‌های T{225}}TL1A سلول‌های مؤثر قوی هستند و منجر به التهاب روده و ریه در داخل بدن می‌شوند و اثر بیماری‌زایی وابسته به IL-9-است.

شکل 4 اثرات کمبودهای BATF و BATF3 بر تمایز TH9. سلول‌های CD4 T ساده از موش‌های Batf7or WT تحت شرایط قطبش TH0- یا TH9-با یا بدون TL1A به مدت 3 روز تمایز یافتند. رنگ‌آمیزی داخل سلولی IL{10}} و IL-10.b تجزیه و تحلیل ELISA تولید IL-9.c تجزیه و تحلیل ELISA تولید IL{13}}. } تولید. سلول‌های CD4 به علاوه T ساده‌لوح از موش‌های Batf{17}}یا WT تحت شرایط قطبش T،{18}با یا بدون TL1A به مدت 3 روز تمایز داده شدند. رنگ آمیزی داخل سلولی IL-9 و IL-10.f تجزیه و تحلیل ELISA تولید IL-9. تجزیه و تحلیل ELSA تولید IL-10. آنالیز ELISA تولید IL{25}}. I پروفایل رونویسی سلول های WT و Batf3'TH9-TL1A با توالی یابی RNA. نقشه حرارتی داده‌های توالی‌یابی RNA ژن‌ها را نشان می‌دهد که به طور متفاوت با p بیان می‌شوند<0.01. the="" dendrograms="" to="" the="" left="" and="" above="" the="" heat="" map="" represent="" the="" clustering="" of="" genes="" (rows)="" and="" samples="" (columns).="" data="" represent="" means±="" sd="" of="" one="" independent="" experiment="" out="" of="" two="" (i)="" or="" three="" (a-h)="" independent=""><0.05,**p <="" 0.01,="" ***p=""><0.005 determined="" by="" student's="">

BATF3 به التهاب in vivo ناشی از سلول‌های TH9-TL1A کمک می‌کند. /-TA9-TL1A به Rag1-/-موش. موش‌هایی که سلول‌های Batf3-'- TA9-TL1A دریافت کرده‌اند به‌طور قابل‌توجهی کمتر ریوی می‌شوند (شکل 7a، b، شکل تکمیلی 6e) و گرایش به کاهش التهاب روده دارند (Histoscore: 3.6 در مقابل 1.2) ( شکل 7a). ما کاهش سلولی را در ریه‌ها و LPMC مشاهده کردیم و درصد کمتری از سلول‌های MLN و CD4 ریه به‌علاوه T را در دریافت‌کنندگان Batf37'-TL1A در مقایسه با گیرندگان WT TH9-TL1A مشاهده کردیم (شکل 7c، شکل تکمیلی 6d). به طور قابل توجهی، درصد کمتری از سلول‌های IL-13 پلاس و IL{32}} پلاس در طحال، MLN، و ریه‌ها از گیرندگان Batf3-'-Ty9-TL1A مشاهده شد (شکل. 7d). در مجموع، داده‌های ما نشان می‌دهد که BATF3 در تولید IL{39}} و توسعه T#9 در شرایط آزمایشگاهی و در التهاب مخاطی ناشی از Tp9-TL1A در داخل بدن نقش دارد.

شکل 6 IL-9 برای التهاب مخاط in vivo که توسط سلول‌های Ty9-TL1A ایجاد می‌شود، مورد نیاز است. سلول‌های T,9 یا Ty9-TL1A به موش‌های Rgg1-7تزریق شدند و موش‌ها سه بار در هفته با آنتی‌بادی ضد IL-9 یا کنترل ایزوتیپ تحت درمان قرار گرفتند. دوازدهه، نوار مقیاس؛ 200 میکرومتر. b Histology scores for the intestine.c Total MLN cell counts (سمت چپ)، فرکانس سلول های CD45.1 به علاوه （middle）, and total cell counts of CD45.1 pluscells (راست).d آنالیز ELISA IL{15} }، IL-17، و IL-13 تولید از MLN پس از تحریک مجدد ex vivo با anti-CD3 و anti-CD28. داده ها نشان دهنده میانگین ± انحراف معیار یک آزمایش مستقل از دو آزمایش مستقل است. n=4-5/group.*p<><0.01, as="" determined="" by="" student's="" t-test="" (b)="" or="" mann-whitney="" u="" test="" (c,="">