Acteoside، جزء Stachys Sieboldii MIQ، ممکن است یک عامل ضد نفریتی امیدوارکننده باشد: اثر اکتئوزید بر نفریت ضد GBM نوع هلالی در موش صحرایی

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

کازومی هایاشی، تاداشی ناگاماتسو، میکیو ایتو، توموهیسا هاتوری و یوشیو سوزوکی

گروه فارماکولوژی، دانشکده داروسازی، دانشگاه Meijo، 150 Yagotoyama، Tenpaku-Ku، Nagoya 468، ژاپن

چکیده

تاثیراتاکتئوزید(ACT) در ضد GBM از نوع هلالینفریتدر موش ها مورد بررسی قرار گرفت. زمانی که موش ها تحت درمان قرار گرفتنداکتئوزیداز روز اول پس از تزریق داخل وریدی سرم ضد GBM،اکتئوزیدافزایش دفع پروتئین در ادرار را مهار می کند. دراکتئوزیدموش‌های تحت درمان، محتوای کلسترول و کراتینین و تولید آنتی‌بادی علیه r-گلوبولین خرگوش در پلاسما کمتر از موش‌های کنترل نفریتی بود. مشاهدات بافت شناسی نشان داد که این عامل باعث سرکوب هیپرسلولی و بروز هلال، چسبندگی دیواره مویرگی به کپسول بومن و نکروز فیبرینوئید در گلومرول ها می شود. علاوه بر این، رسوبات IgG و C3 موش در GBM به طور قابل توجهی کمتر بوداکتئوزیدگروه تحت درمان نسبت به گروه شاهد نفریت. هنگامی که درمان از روز بیستم پس از تزریق داخل وریدی سرم ضد GBM که بیماری بوسیله آن ایجاد شده بود آغاز شد.اکتئوزیدمنجر به اثر مشابهی بر روینفریتیموش ها همانطور که در بالا ذکر شد. این نتایج نشان می دهد که Acteoside ممکن است یک داروی مفید در برابر گلومرولونفریت سریع پیشرونده باشد که با ضایعات گلومرولی شدید با هلال های منتشر مشخص می شود.

کلمات کلیدی: ضد GBM از نوع هلالینفریت,اکتئوزید, Rat-IgG,Rat-C3

برای استفاده از سیستانچ با Acteoside کلیک کنید

Chyorogi Stachys sieboldii MIQ (Labiatae) برای بسیاری از بیماری ها تجویز می شود و چینی ها، روسی ها و ژاپنی ها از این غده به عنوان غذا استفاده می کنند. تحقیقات اخیر نشان داده است که chyrogi دارای اثر ضد آنکسی (1)، اثر مهاری بر روی فعالیت هیالورونیداز (2) و اثر سرکوب کننده سیستم ایمنی (3) است.

از سوی دیگر، اشاره شده است که پاسخ ایمنی در ایجاد نفریت نقش دارد. به بیان دقیق تر، آسیب گلومرولی با رسوب کمپلکس ایمنی در گلومرول ها و به دنبال آن واکنش التهابی ایمنی، از جمله فعال شدن کمپلمان و انتشار سایر واسطه های التهابی، ایجاد می شود. در مطالعات اخیر، توجه زیادی به نقش پاسخ ایمنی سلولی در ایجاد گلومرولونفریت شده است (4، 5). علاوه بر این، نیلد و همکاران. (6) گزارش کرد که سرکوب عملکرد سلول T توسط سیکلوسپورین A (CyA) مانع از توسعه بعدی ضایعات گلومرولی در نفریت بیماری حاد می شود. ما گزارش دادیم که میزوریبین (7)، آزاتیوپرین (7)، CyA (8)، متیل پردنیزولون (9)، و برخی از اجزای گیاهی (10) دارای اثر سرکوب کننده سیستم ایمنی هستند، اثر مفیدی بر نفریت ضد GBM نشان دادند. اگرچه این عوامل سرکوب کننده سیستم ایمنی اثر ضد نفریتی دارند، استفاده از آنها در کارآزمایی های بالینی به دلیل عوارض جانبی آنها دشوار است (11). بنابراین، انتظار می رود که یک عامل سرکوب کننده سیستم ایمنی جدید برای درمان نفریت در مرحله بالینی ساخته شود.

هدف از پژوهش حاضر تبییناثر ضد نفریتی اکتئوزیدیک جزء کیوروگی، بر نفریت ضد GBM نوع هلالی در موش صحرایی.

مواد و روش ها

حیوانات

موش های صحرایی نر نژاد Sprague-Dawley با وزن تقریبی. 160 گرم (Nihon SLC، Hamamatsu)، برای همه آزمایش ها استفاده شد. این حیوانات در طول دوره آزمایشی در اتاقی با تهویه مطبوع در دمای 1 ± 23 درجه سانتیگراد قرار گرفتند.

مواد مخدر

ساختار شیمیایی اکتئوزید (ACT) (Tsumura Co., Ltd., Tokyo) در شکل 1 نشان داده شده است. این جزء از قسمت هوایی کیوروگی (Stachys sieboldii MIQ) استخراج شده است. خلوص ACT توسط HPLC تأیید شد (ستون: TSK gel ODS{1}}TM (4.{3}} id x 250 mm)؛ فاز متحرک: 20 درصد CH3CN/H2O، حاوی 10 AcOH؛ سرعت جریان: 0.7 میلی لیتر در دقیقه؛ دما: دمای اتاق؛ تشخیص: UV 254 نانومتر) در شرکت Tsumura، Ltd. ACT به کار رفته در این آزمایش ها دارای خلوص بیش از 9970 بود. ACT در آب مقطر حل شد. Dipyridamole (Dip) (Boehringer Ingelheim، آلمان) و azathioprine (Aza) (Sigma، سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) نیز استفاده شد. این داروها در 1070 صمغ عربی معلق شدند.

القای نفریت ضد GBM از نوع هلالی

نفریت ضد GBM نوع هلالی با ایمن سازی موش هایی که دوز نفریتوژنیک سرم GBM ضد موش خرگوش (ضد GBM) را با r-گلوبولین خرگوش (rG) دریافت کرده بودند، بر اساس اصلاح جزئی روش گزارش شده قبلی، القا شد. 12). در این آزمایش موش‌ها تقریباً وزن داشتند. 16 0 گرم 0.6 میلی لیتر / حیوان سرم ضد GBM در ورید دم داده شد.

اثر داروهای آزمایشی با تجویز آنها از روز اول پس از تزریق سرم ضد GBM (فاز هترولوگ) یا روز بیستم پس از تزریق سرم ضد GBM (فازهای اتولوگ) برآورد شد. در آزمایش‌ها، نمونه‌های ادرار 24- ساعت جمع‌آوری شد و موش‌ها به 5 یا 6 گروه 8 تایی تقسیم شدند به طوری که میانگین محتوای پروتئین در 24- ساعت ادرار در هر گروه یک سطح مشابه

ارزیابی اثر ضد نفریتی داروهای مورد آزمایش

در آزمایش درمان دارویی از فاز هترولوگ، به چهار گروه به ترتیب 3، 10 یا 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم در روز ACT یا mg/kg/day 100 دیپ خوراکی در حجم 1 میلی‌لیتر در 100 گرم داده شد. وزن بدن، روزانه از روز اول یا روز بعد از تزریق داخل وریدی سرم ضد GBM تا روز 40. در آزمایش‌های درمان دارویی از فاز اتولوگ، به سه یا چهار گروه به صورت خوراکی 3، 10 یا 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم ACT (A) یا 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم در روز ACT، 100 میلی‌گرم بر کیلوگرم در روز از ACT داده شد. از روز بیستم پس از تزریق داخل وریدی سرم ضد GBM تا روز 40 (A) یا 45 به ترتیب روزانه 50 میلی گرم بر کیلوگرم Aza (B) در حجم 1 میلی لیتر به ازای هر 100 گرم وزن بدن. (ب) روز. به گروه باقی‌مانده به‌جای داروهای آزمایشی، وسیله نقلیه (آب مقطر) داده شد و به‌عنوان کنترل نفریت استفاده شد. علاوه بر این، یک گروه بدون درمان (طبیعی) برای مقایسه با گروه های نفریت استفاده شد.

جمع آوری ادرار و خون

نمونه‌های ادرار {{0}} ساعت با نگهداری هر حیوان در یک قفس متابولیک جداگانه به مدت 24 ساعت به دست آمد. در ابتدای جمع آوری ادرار، هر حیوان 8 میلی لیتر آب مقطر را به صورت خوراکی بدون تغذیه دریافت کرد. سپس ادرار با سرعت 3، {4}} دور در دقیقه به مدت 15 دقیقه در دمای 41 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شد و از مایع رویی برای تعیین پروتئین استفاده شد. در روز پایانی آزمایش، 2.{9}} میلی‌لیتر خون از سیاهرگ کلیوی هر موش بیهوش با سرنگ یکبار مصرف گرفته شد و در لوله‌ای حاوی 125/0 میلی‌لیتر هپارین قرار داده شد. خون در 5،{12}} دور در دقیقه سانتریفیوژ شد تا پلاسما برای تعیین برخی پارامترها به دست آید.

تعیین پروتئین ادرار و کلسترول پلاسما و محتوای کراتینین

دفع پروتئین ادراری با روش Kingsbury و همکاران تعیین شد. (13) و به صورت mg/24hr ادرار بیان می شود. محتوای کلسترول با یک کیت سنجش تجاری (Determine TC-5; Kyouwa Medix Co., Ltd, Tokyo) (14) تعیین شد و به صورت mg/dl پلاسما بیان شد. محتوای کراتینین با استفاده از کیت تعیین کراتینین (CRE-EN؛ Kainos, Inc., Tokyo) تعیین شد و به صورت mg/dl پلاسما/100 گرم وزن بدن بیان شد.

اندازه گیری تیتر آنتی بادی پلاسما در برابر -G

تیتر آنتی بادی پلاسما علیه rG با هماگلوتیناسیون غیرمستقیم با استفاده از گلبول های قرمز حساس شده گوسفند تعیین شد (15).

اندازه گیری سطح CH50 مکمل پلاسما

سطح CH50 مکمل پلاسما با روش مایر تعیین شد (16).

ارزیابی پارامترهای هیستوپاتولوژیک

برای مطالعه میکروسکوپی نوری، کلیه‌ها از موش‌هایی که با پنتوباربیتال بی‌هوش شده بودند، جدا شد، سپس آب‌گیری شد و بافت‌ها به صورت مرحله‌به‌گام در سنت‌های مختلف نگرانی از الکل اتیلیک از کم به بالا غوطه‌ور شدند. سپس بافت ها در پارافین جاسازی شده و به 2 تا 3 برش ضخیم تقسیم شدند. در مطالعات نفریت ضد GBM نوع هلالی، برش ها با هماتوکسیلین و ائوزین و تری کروم ماسون رنگ آمیزی شدند. تعداد هسته ها (هیپرسلولاریت)، تشکیل هلال، چسبندگی کپسول بومن به دیواره مویرگ (چسبندگی) و نکروز فیبرینوئید در گلومرول ها در زیر میکروسکوپ نوری مشاهده شد. برای ارزیابی این پارامترها، یک مقطع استوایی به روش نمونه گیری تصادفی انتخاب شد. پنجاه گلومرول/مقطع مشاهده شد، و نرخ ظهور هلال، چسبندگی و نکروز فیبرینوئیدی به عنوان درصد گلومرول‌ها (بروز) دارای این تغییرات مورفولوژیکی همانطور که قبلاً توضیح داده شد بیان شد (17). ارزیابی توسط فرد دیگری انجام شد که هویت هر نمونه را نمی دانست. برای ارزیابی هایپرسلولی بودن، یک مقطع استوایی به روش نمونه گیری تصادفی انتخاب شد. تعداد هسته ها (شامل هسته سلول های گلومرولی و لکوسیت های اگزوداتیو) شمارش شد و به عنوان میانگین تعداد در هر مقطع گلومرولی در 10 گلومرول در برش بیان شد.

ایمونوهیستوشیمی

در بافت‌ها برای رنگ‌آمیزی ایمونوآنزیمی موش-IgG، بخش‌های پارافینی همانطور که در بالا توضیح داده شد برش داده شد و برش‌ها با 0.1 درصد پروتئاز در 0 تیمار شدند.05 M Tris- بافر HCl به مدت 7 دقیقه و سپس در 0.01 مولار سالین بافر فسفات سرد (PBS)، pH 7.4 شسته شد. سپس بخش ها با آنتی بادی مونوکلونال موش IgG ضد موش (mAb) (Cappel، West Clester، PA، USA) در رقت 1:100 به مدت 90 دقیقه انکوبه شدند. بخش‌ها مجدداً با PBS شسته شدند، با پراکسید هیدروژن 0.3 درصد در متانول به مدت 20 دقیقه تحت درمان قرار گرفتند تا پراکسیداز درون‌زا مسدود شود، و با IgG ضد میل ترکیبی خالص شده بیوتینیله شده و پراکسیداز ترب کوهی آویدین با 3،3'-دی‌آمینو بنزیدین (DAB) انکوبه شدند. (Vecta stain ABC Kit؛ Vector Institution, Burlingame, CA, USA). تمام مراحل در دمای اتاق انجام شد.

بافت‌ها برای رنگ‌آمیزی ایمونوآنزیمی آنتی‌ژن هسته‌ای سلولی در حال تکثیر (PCNA)، که نشانگر تکثیر سلولی است، در فرمالین 10 درصد در PBS تثبیت شد و بافت‌های تعبیه‌شده در پارافین با همان روشی که برای IgG موش صحرایی وجود داشت رنگ‌آمیزی شدند. استفاده از mAb (19A2؛ Coulter Immunology, Hialeah, FL, USA) برای PCNA.

کمی سازی موش-IgG، C3، و PCNA در مقاطع بافتی

مساحت کل IgG و C3 موش صحرایی ایمونوراکتیو در گلومرول در 30 گلومرول در هر بخش با استفاده از یک آنالایزر تصویر (Toyobo Image Analyser V1; Toyobo Co., Ltd., Tokyo) اندازه گیری شد و به صورت mm2/مقطع گلومرولی (GCS) ارائه شد. ). سلول های مثبت PCNA در گلومرول با تجزیه و تحلیل تصویر شمارش شدند و نتایج به عنوان تعداد سلول/GCS بیان شد.

تجزیه و تحلیل های آماری

داده‌ها میانگین ± انحراف معیار را نشان می‌دهند و نتایج با استفاده از ANOVA مورد ارزیابی آماری قرار گرفتند. هنگامی که این نتایج پارامتریک بودند، این نتایج به‌صورت آماری با آزمون دانکن ارزیابی شدند. هنگامی که نتایج ناپارامتریک بودند، با آزمون کروسکال والیس مورد ارزیابی آماری قرار گرفتند. درصد بازدارندگی به صورت زیر محاسبه شد:

درصد مهاری ( درصد )=(داروی کنترل -آزمایش) x 100 / (کنترل - نرمال)

نتایج

تأثیر اکتئوزید در نفریت ضد GBM نوع هلالی

دفع پروتئین ادراری (شکل 2 و 3): هنگامی که درمان با ACT از روز بعد از تزریق سرم ضد GBM (فاز هترولوگ) شروع شد، اولین سرکوب قابل توجه پروتئین ادرار در روز پنجم با 30 میلی گرم مشاهده شد. / کیلوگرم، po; در روز بیستم 3 و 10 میلی گرم بر کیلوگرم، po; و در روز چهلم با دیپ 100 میلی گرم بر کیلوگرم، po

هنگامی که ACT از روز بیستم پس از تزریق سرم antiGBM (فاز اتولوگ) داده شد، ACT در دوزهای 10 و 30 میلی گرم در روز از افزایش دفع پروتئین در ادرار در روز 30 جلوگیری کرد. از سوی دیگر، آزا در دوز 50 میلی‌گرم بر کیلوگرم، ضعیف‌تر از ACT در 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم بود، هرچند معنی‌دار نبود و دیپ تأثیری نداشت.

محتوای کلسترول و کراتینین پلاسما (جدول 1): میزان کلسترول و کراتینین پلاسما در روز 40 یا 45 تعیین شد. محتوای کلسترول پلاسما در موش های کنترل نفریتی به طور قابل توجهی بالا بود. در مقابل، افزایش محتوای کلسترول با ACT (30 میلی‌گرم بر کیلوگرم) از فاز هترولوگ به میزان 60 درصد از سطح شاهد و با ACT (30 میلی‌گرم بر کیلوگرم) از فاز اتولوگ به میزان 62 دقیقه از کنترل کاهش یافت. مرحله. محتوای کراتینین پلاسما در موش های نفریتی نیز بالا بود. از سوی دیگر، در ACT (30 میلی‌گرم بر کیلوگرم) از هر دو موش‌های تحت درمان با فاز، محتوای کراتینین پلاسما مشابه موش‌های معمولی بود.

تیتر آنتی بادی پلاسما در برابر rG: موش های نفریتی تولید آنتی بادی را به طور قابل توجهی تسریع کرده بودند. تولید تسریع شده آنتی بادی با تیمار ACT (10 و 30 میلی گرم بر کیلوگرم) از فاز هترولوگ (جدول 2)، ACT (30 میلی گرم بر کیلوگرم) از فاز اتولوگ و آزا به 72 درصد از سطح کنترل سرکوب شد. به ترتیب 70 و 51 درصد از سطح کنترل (داده ها نشان داده نشده است) و تحت تأثیر Dip قرار نگرفت.

مشاهدات بافت‌شناسی (جدول 3، شکل‌های 4 و 5): بررسی میکروسکوپی نوری گلومرول‌های نفریتی ضایعاتی را نشان داد که با تشکیل هلال شدید، چسبندگی، نکروز فیبرینوئید و تکثیر سلول‌های مزانژیال مشخص می‌شوند. مشاهدات بافت شناسی نشان داد که ACT (از هر دو فاز هترولوگ و اتولوگ) از هیپرسلولی بودن و بروز هلال، چسبندگی و نکروز فیبرینوئید در گلومرول ها تا روز 40 یا 45 جلوگیری می کند. ضایعات موش‌های نفریتی تحت درمان با دیپ و آزا نیز کمتر از موش‌های گروه شاهد نفریت بود. با این حال، هنگامی که موش‌های نفریتی با Dip از فاز اتولوگ تحت درمان قرار گرفتند، تغییرات بافت‌شناسی کمی تحت‌تاثیر Dip قرار گرفتند (داده‌ها نشان داده نشده است).

تکثیر سلول های گلومرولی، یعنی افزایش سلول های PCNA مثبت در گلومرول ها، درموش های نفریتی در مقابل، در روز 30، 52 درصد کاهش یافتدر تکثیر سلولی مشاهده شد، و این مرتبط بود wکاهش قابل توجهی در سلول گلومرولی استلولاریته در مقایسه با کنترل (جدول 3).

رسوب واکنش دهنده ایمنی (جدول 2 و شکل 6): مشاهده رسوبات IgG و C3 موش بر روی GBM در موش های کنترل نفریتی امکان پذیر بود. با این حال، آنها در موش های معمولی یافت نشد. ACT (30 میلی گرم بر کیلوگرم) از فاز هترولوگ رسوب IgG موش را در GBM تا 72 درصد از سطح شاهد کاهش داد. علاوه بر این، ACT (3، 10 و 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم) از فاز هترولوگ رسوب C3 موش را در GBM 60 تا 69 درصد تا روز 40 کاهش داد. حتی زمانی که ACT از فاز اتولوگ داده شد، مهار رسوب IgG و C3 موش مشابه نتایج فوق بود. شیب بود موش IgG و رسوب C3 تاثیر نمی گذارد. با این حال، آزا رسوب IgG و C3 موش را در GBM به ترتیب 67 و 68 درصد کاهش داد (داده‌ها نشان داده نشده است).

اثر ACT بر فعالیت کمپلمان و رسوبات C3 بر روی GBM در نفریت ضد GBM نوع اصلی (شکل 7)

نفریت ضد GBM نوع اصلی در موش‌ها با تزریق 0}.6 میلی‌لیتر سرم ضد GBM در رگ‌های دم آنها، همانطور که قبلاً توضیح داده شد، القا شد (18). موش‌های نفریتی با ACT با دوز 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم، پو و فاکتور زهر کبری (CVF) (سیگما) در 10 انجیر در موش، داخل صفاقی، سه بار، هر 8 ساعت قبل و بعد تحت درمان قرار گرفتند. درمان‌های ACT و CVF باعث کاهش دفع پروتئین ادراری با درصد مهاری تقریباً می‌شود. به ترتیب 35 درجه و 71 درصد. CH50 در موش های کنترل نفریت به طور قابل توجهی کمتر از موش های سالم 24 ساعت پس از القای نفریت بود. ACT کاهش CH50 و افزایش رسوب C3 در GBM را در موش های کنترل نفریت مهار کرد. CVF رسوب CH50 و C3 را لغو کرد. علاوه بر این، در آزمایش آزمایشگاهی، ACT تا 37 درصد از فعال شدن کمپلمان جلوگیری کرد. هنگامی که ACT به موش‌های معمولی تجویز شد، ACT فعال‌سازی مکمل را در آزمایش ازمایشگاهی کاهش داد (داده‌ها نشان داده نشده است).

بحث

گلومرولونفریت سریع پیشرونده و بیماری های کلیوی در سندرم گودپاسچر بیماری های بدخیمی هستند که 2 یا 3 ماه پس از ایجاد بیماری به نارسایی کلیوی تبدیل می شوند (19). ویژگی های این نفریت شامل هیپرسلولی بودن، نفوذ مشخص نوتروفیل ها و مونوسیت ها و تشکیل هلال در گلومرول ها است. کوکتل درمانی با عوامل سرکوب کننده سیستم ایمنی، داروهای ضد پلاکت و استروئیدها عمدتاً برای این بیماری اعمال شده است. از سوی دیگر، اگرچه CyA یک سرکوب‌کننده ایمنی برتر است که تأثیر مفیدی بر نفریت تجربی دارد (6، 8)، گزارش شده است که CyA باعث اختلال عملکرد کلیه و ایجاد تغییرات بافت‌شناسی برگشت‌ناپذیر در گلومرول‌ها می‌شود (11). متیل پردنیزولون عوارض جانبی زیادی دارد. علاوه بر این، پدیده بازگشت و سندرم ترک پس از درمان طولانی با این دارو دو مشکل است. بنابراین، باید یک عامل سرکوب کننده سیستم ایمنی جدید برای درمان نفریت ایجاد شود که عوارض جانبی کمتری داشته باشد.

نفریت ضد GBM نوع هلالی یک مدل تجربی است که تغییرات بافتی و پاتولوژیک مشابه تغییرات گلومرولونفریت سریع پیشرونده و بیماری کلیوی سندرم گودپاسچر را نشان می دهد (20). توسعه و پیشرفت این نفریت شامل 2 مرحله است که با واسطه پاسخ های ایمنی ایجاد می شود. واکنش اولیه، به اصطلاح فاز هترولوگ، به دلیل رسوب آنتی بادی ضد GBM و به دنبال آن تجمع وابسته به مکمل گرانولوسیت های پلی مورفونوکلئر است (21، 22). فاز آخر (فاز اتولوگ) با اتصال آنتی بادی‌های اتولوگ رسوب‌شده در امتداد GBM و هجوم مونوسیت‌ها/ماکروفاژها به گلومرول‌ها به دنبال این واکنش ایجاد می‌شود (22، 23). این نفریت با پروتئین ادراری دوفازی و هیپرسلولی بودن مشخص می شود که شامل تشکیل هلال و نکروز فیبرینوئید می شود. تصور می شود که تشکیل هلال توسط ماکروفاژهای مهاجرت شده و سلول های اپیتلیال تکثیر شده واسطه می شود (22، 24).

ما قبلاً گزارش دادیم که میزوریبین و آزا، یک عامل سرکوب کننده سیستم ایمنی (7)، از افزایش آنتی بادی پلاسما در برابر IgG خرگوش و Pachyman، جزء اصلی Poria cocos (18) جلوگیری می کنند، درجه رسوب C3 را در GBM کاهش می دهند، و هر دو به طور قابل توجهی در برابر نفریت ضد GBM موثر است.

درمان‌های ACT رشد گلومرولونفریت ضد GBM را که با کاهش پروتئینوری و کلسترول پلاسما، پیشگیری از اختلال عملکرد کلیوی، و پیشگیری از تغییرات بافت‌شناسی پیشرونده از جمله ایجاد هلال‌های گلومرولی و هیپرسلولیتی ارزیابی می‌شد، سرکوب کردند. در روز 40، ACT با 30 میلی گرم بر کیلوگرم به تنهایی به طور قابل توجهی میزان رسوب IgG موش را بر روی GBM با واسطه سرکوب تولید آنتی بادی در این مدل نفریتی کاهش داد. از سوی دیگر، میزان رسوبات C3 در GBM توسط ACT در 3، 10 یا 30 میلی گرم بر کیلوگرم کاهش یافت. علاوه بر این، ACT به طور قابل‌توجهی فعال‌سازی مکمل را در آزمایش‌های in vitro و ex vivo مهار کرد. کاهش CH50 در موش های کنترل نفریتی توسط ACT مهار شد. داده‌های بالا نشان می‌دهند که ACT با سرکوب فعال‌سازی کمپلمان، آسیب کلیوی را مهار می‌کند، زیرا کمپلکس حمله غشای مکمل (MAC) در پاتوژنز آسیب گلومرولی نقش دارد (25)، و MAC سابلیتیک دارای واسطه‌های التهابی بالقوه است که می‌تواند با آسیب گلومرولی همراه باشد. تکثیر سلول های مزانژیال و انتشار ماتریکس خارج سلولی، مانند گونه های فعال اکسیژن (26)، پروتئاز (27)، پروستاگلاندین ها (28) و اینترلوکین{14}} مانند سیتوکین ها (29)، و همچنین کلاژن (30).

اعتقاد بر این است که فعال شدن کمپلمان ارتباط نزدیکی با نفوذ لکوسیت دارد. در مطالعات اخیر گزارش شده است که C5a چسبندگی مونوسیت و نوتروفیل را به ترتیب به سلول های مزانژیال و سلول های اندوتلیال تحریک می کند (31، 32). بنابراین در مطالعه ای بیشتر قصد داریم اثر ACT را بر تجمع لکوسیت ها در گلومرول ها بررسی کنیم.

منابع

1 Yamahara J، Kitani T، Kobayashi H و Kawahara Y: مطالعات روی Stachys sieboldii MIQ. II اثر ضد آنکسی و ترکیبات فعال. Yakugaku Zasshi 110, 932-935 (1990) (Abstrin English)

2 Takeda Y، Fujita T، Satoh T و Kakegawa H: در مورد ترکیبات گلیکوزیدی Stachys sieboldii MIQ. و اثرات آنها بر فعالیت هیالورونیداز. Yakugaku Zasshi 105, 955-959 (1985) (Abstr در انگلیسی)

3 ساساکی اچ، نیشیمورا اچ و موریتا تی: اصول سرکوب کننده سیستم ایمنی Rehmannia gluttons var. hueichingensis. Planta Med 55, 458-462 (1989)

4 Saito T و Atkins RC: سهم لکوسیت های تک هسته ای در پیشرفت اسکلروز گلومرولی کانونی تجربی. Kidney Int 37, 1076-1083 (1990)

5 Tipping PG، Neale TJ و Holdsworth SR: مشارکت لنفوسیت T در گلومرولونفریت تجربی ناشی از آنتی بادی. Kidney Int 27, 530-537 (1985)

6 Neild GH، Ivory K و Williams DG: سیکلوسپورین A بیماری سرم ساکتوس را در خرگوش مهار می کند. Clin Exp Immunol 52، 586-594 (1983)

7 Okamoto K، Ito M و Suzuki Y: مطالعات روی اثر ضد نفریتی روی میزوریبین (p-INN، Bredinin®)، یک عامل سرکوب کننده سیستم ایمنی جدید، و آزاتیوپرین (2): تأثیر بر نفریت ضد GBM نوع هلالی در موش‌ها. Jpn J Pharmacol 34، 33-41 (1984)

8 Nagamatsu T، Kojima N، Kondo N، Hattori T، Kojima R، Ito M و Suzuki Y: سرکوب نفریت ضد GBM در موش توسط سیکلوسپورین A. Jpn J Pharmacol 58, 27-36 (1992)

9 Taniguchi H، Nagamatsu T، Kojima R، Ito M و Suzuki Y: اثر ضد نفریتی مشخص و اثرات نامطلوب کمتر متیل پردنیزولون سولتانات با تجویز متناوب در موش‌ها. Jpn J Pharmacol 64، 79-88 (1994)

10 Hattori T, Furuta K, Hayashi K, Nagamatsu T, Ito N, and Suzuki Y: مطالعاتی بر روی اثرات ضد نفریتی اجزای گیاهی (6): اثرات ضد نفریتی و مکانیسم‌های درین فلوژن (OB-5) بر روی هلال نوع نفریت ضد GBM در موش صحرایی (2). Jpn J Pharmacol 60، 187-195 (1992)

11 Mason J: اثرات Sandimmune بر کلیه. Clin Res Bull 6, 47-51 (1989)

12 Ito M، Yamada H، Okamoto Y و Suzuki Y: نفریت نوع هلالی ناشی از سرم غشای پایه ضد گلومرولی (GBM) در موش‌ها. Jpn J Pharmacol 33، 1145-1154 (1983)

13 Kingsbury FB، Clark CP، Williams G و Post AL: تعیین سریع آلبومین در ادرار. J Lab Clin Med 11, 981-989 (1926)

14 Zurkowski P: روشی سریع برای تعیین کلسترول با یک معرف. Clin Chem 10, 451-453 (1964)

15 Mcleish KR، Clark CP، Williams G و Post AL: سرکوب سنتز آنتی بادی توسط پروستاگلاندین E به عنوان مکانیزمی برای جلوگیری از گلومرولونفریت کمپلکس ایمنی موش. Lab Invest 47, 147-152 (1982)

16 Mayer MM: تثبیت مکمل و مکمل. In Experimental Immunochemistry, pp 133-240, Charles C. Thomas, Springfield (1961)

17 Hattori T، Ito M، Nagamatsu T و Suzuki Y: مطالعات روی اثر ضد نفریتی TJ{1}}، یک داروی گیاهی ژاپنی جدید (3): اثرات بر نفریت ضد GBM نوع هلالی در موش‌ها. Jpn J Pharmacol 52، 131-140 (1990)

18 Hattori T، Hayashi K، Nagao T، Furuta K، Ito M، و Suzuki Y: مطالعات بر روی اثرات ضد نفریتی اجزای گیاهی (3): اثر pachyman، جزء اصلی Poria cocos Wolf بر ضد GBM نوع نال منشاء نفریت در موش صحرایی و مکانیسم های آن JpnJ Pharmacol 59، 89-96 (1992)

19 Shibata S، Miyakawa Y، Naruse T، Nagasawa T و Takuma T: گلیکوپروتئینی که آنتی بادی نفروتوکسیک را القا می کند: جداسازی و خالص سازی آن از غشای پایه گلومرولی موش صحرایی. J Immunol 102، 593 601 (1969)

20 فالک RJ: بیماری کلیوی مرتبط با ANCA. Kidney Int 38, 998-1010 (1990) 21 Mulligan MS, Johnson KJ, Todd RF III, Issekutz TB, Miyasaka M, Tamatani T, Smith CW, Anderson DC and Ward PA: Requirements for Leukocyte Adhesion Molecules in nephrotoxic nephritis. J Clin Invest 91, 577-587 (1993)

22 Nahas AME: فاکتورهای رشد و اسکلروز گلومرولی. Kidney Int 41, Supp 36, S{3}}S20 (1992)

23 Boyce NW، Holdsworth SR، Dijkstra CD، و Atkins RC: کمی سازی فاگوسیت های تک هسته ای داخل گلومرولی در گلومرولونفریت تجربی در موش با استفاده از آنتی بادی های مونوکلونال خاص. پاتولوژی 19، 290-293 (1987)

24 Becker GJ، Hancock WW، Stow JL، Glasgow EF، Atkins RC و Thomson NM: دخالت ماکروفاژها در آزمایش گلومرولونفریت کمپلکس ایمنی مزمن. Nephron 32، 227-233 (1982) 25 Perkinson DT، Baker PT، Couser WG، Johnson BJ و Adler S: رسوب پیچیده حمله غشایی در آسیب گلومرولی تجربی. Am J Pathol 120, 121-128 (1985)

26 Alder S، Baker PJ، Johnson RJ، Ochi RF، Pritzl P و Couser WG: کمپلکس حمله غشایی مکمل تولید متابولیت‌های اکسیژن فعال توسط سلول‌های مزانژیال موش‌های صحرایی را تحریک می‌کند. J Clin Invest 77, 762-767 (1986)

27 جانسون RJ، Couser WG و Alpers CE: پروتئاز نوتروفیلیستین انسانی، استراز و کاتپسین G می توانند آسیب گلومرولی را در داخل بدن واسطه کنند. J Exp Med 168، 1169-1174 (1988)

28 Cybusky AV، Lieberthal W، Quigg RJ، Rennke HG و Salant DJ: نقشی برای ترومبوکسان در آسیب گلومرولی ناشی از مکمل. Am J Pathol 128, 45-51 (1987)

29 Lovett D، Hansch G، Resch K و Gemsa D: فعال سازی سلول های مزانژیال گلومرولی توسط اجزای کمپلمان انتهایی. تحریک ترشح پروستانوئید و فاکتور شبه اینترلوکین ال. Immunobiology 168، 34-35 (1986)

30 Torbohm I، Schonermark M، Wingen AM، Berger B، Rother K و Hansch GM: C5b_8 و C5b_9 آزادسازی کلاژن سلول های اپیتلیال گلومرولی انسان را تعدیل می کنند. Kidney Int 37, 1098-1104 (1990)

31 Lo SK، Detmers PA، Levin SM و Wrigh SD: چسبندگی گذرا نوتروفیل ها به اندوتلیوم. J Exp Med 169، 1779 -1793 (1989) 32 Brady HR، Denton MD، Jimenez W، Takata S، Palliser D و Brenner BM: جذب کننده های شیمیایی چسبندگی مونوسیت را به سلول های مزانژیال انسانی و آسیب سلول های مزانژیال تحریک می کنند. Kidney Int 42, 480-487 (1992)