پیشرفت در درماتولوژی با استفاده از DNA آپتامر "Aptamin C" نوآوری: پیشگیری از استرس اکسیداتیو و اثر به حداکثر رساندن ویتامین C از طریق آنتی اکسیدان

joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

سوهو چوی PhD1|دکتر جئونگمین هان نامزد2|جی هیون کیم کاندیدای ام اس 1|A-Ru Kim Ph.D. کاندید3|دکترای سانگ هیون کیم کاندید3|دکتر وونتا لی، استاد2|Moon-Young Yoon Ph.D., profesor3|Gyuyoup Kim PhD1|دکترای یون سونگ کیم، استاد 1

خلاصه

زمینه:ویتامین سی(همچنین به عنوان اسید L-آسکوربیک شناخته می شود) با محافظت از سلول ها در برابر استرس اکسیداتیو، نقش مهمی در کاهش گونه های فعال اکسیژن (ROS) و بازسازی سلول ایفا می کند. اگرچه ویتامین C به طور گسترده در بازارهای لوازم آرایشی و بهداشتی استفاده می شود، شواهد قابل توجهی وجود دارد که ویتامین C به راحتی تحت تأثیر قرار می گیرد.اکسیداسیونتوسط هوا، pH، دما و نور UV پس از ذخیره سازی. این کمبود ویتامین C باعث کاهش قدرت آن به عنوان یک آنتی اکسیدان و کاهش ماندگاری محصولات حاوی ویتامین C به عنوان ماده تشکیل دهنده آن می شود. برای غلبه بر کمبود ویتامین C، آپتامین C، آپتامر DNA نوآورانه ای را توسعه داده ایم که با اتصال به شکل کاهش یافته ویتامین C و به تاخیر انداختن آن، اثر آنتی اکسیدانی ویتامین C را به حداکثر می رساند.اکسیداسیون.

مواد و روش ها:اتصال آپتامین C با ویتامین C با استفاده از تجزیه و تحلیل ITC تعیین شد. آزمایش ITC با {0}.2 mmol/L انجام شدویتامین سیکه 25 بار در مقادیر 2 میکرولیتری به سلول نمونه 1.8 میلی لیتری حاوی آپتامین C با غلظت 0 تزریق شد.02 میلی مول در لیتر. داده ها با استفاده از برنامه با مبدا برای ITC v.5.0 به ایزوترم اتصال یک سایتی برازش شدند.

نتایج:برای بررسی اثر اپتامین C وویتامین سیکمپلکس در پوست انسان، هم آزمایش‌های آزمایشگاهی و هم آزمایش‌های بالینی انجام شد. ما مشاهده کردیم که مجموعه آپتامین C و ویتامین C به طور قابل توجهی در بهبود چین و چروک، اثر سفید کنندگی و افزایش آبرسانی موثر است. در آزمایش بالینی، افراد تحت درمان با کمپلکس بهبود چشمگیری در تحریک و خارش پوست نشان دادند. هیچ واکنش نامطلوبی توسط اپتامین C کمپلکس در آزمایش ارائه نشد.

نتیجه:روی هم رفته، این نتایج نشان داد که اپتامین C، یک ترکیب جدید ابتکاری، باید به طور بالقوه به عنوان یک عنصر کلیدی آرایشی برای طیف وسیعی از بیماری‌های پوستی استفاده شود.

کلید واژه هاآنتی اکسیداسیون، آپتامین C (آپتامر اتصال دهنده به ویتامین C)،اکسیداسیون، استرس اکسیداتیو،ویتامین سی(ال اسکوربیک اسید)

سیستانچدارای قابلیت آنتی اکسیدانی قوی

1|مقدمه

گونه‌های اکسیژن فعال (ROS) گونه‌های شیمیایی واکنش‌پذیر حاوی اکسیژن هستند که نقش مهمی در سیگنال‌دهی سلولی و هموستاز دارند.{0}} اینها نه تنها شامل اثرات مثبتی مانند القای ژن‌های دفاعی میزبان و بسیج سیستم‌های انتقال یون می‌شوند، بلکه شامل می‌شوند. همچنین در آپوپتوز (مرگ برنامه ریزی شده سلولی) نقش دارد. سطوح 4,5ROS را می توان با استرس محیطی افزایش داد که منجر به آسیب به ساختارهای سلولی می شود. این پدیده "استرس اکسیداتیو" نامیده می شود. استرس اکسیداتیو یکی از علل اصلی بیماری‌های مختلف از جمله بیماری‌های عصبی، بیماری لو گریگ، اوتیسم، مولتیپل اسکلروزیس، و بیماری‌های پوستی است. پروتئین ها، لیپیدها و DNA به طور حساسی به استرس اکسیداتیو ناشی از ROS واکنش نشان می دهند. آنتی اکسیدان ها در محافظت از پوست بسیار مؤثر هستند زیرا مستقیماً به ROS واکنش نشان می دهند و از رسیدن آنها به مولکول های هدف بیولوژیکی جلوگیری می کنند. آنتی اکسیدان ها مانندویتامین سیویتامین E، کوآنزیم Q10 و ترکیبات پلی فنلی از پوست در برابر آسیب های ناشی از ROS محافظت می کنند. آنتی اکسیدان ها در نتیجه به پیشگیری و درمان بیماری های پوستی مختلف کمک می کنند و روند پیری پوست را کند می کنند.ویتامین سیتوانایی خنثی کردن رادیکال‌های آزاد اکسیژن، از طریق فرآیندی به نام مهار رادیکال.اکسیداسیون. برای حل این مشکل، آپتامین C را توسعه دادیم، آپتامر DNA که به طور خاص به ویتامین C متصل می شود و اکسیداسیون ویتامین C را مهار می کند. آپتامرها اولیگونوکلئوتیدهای تک رشته ای مبتنی بر DNA یا RNA هستند که قادر به اتصال انتخابی طیف وسیعی از مولکول ها هستند. آپتامرها معمولاً با یک روش انتخاب آزمایشگاهی به نام تکامل سیستماتیک لیگاندها توسط غنی‌سازی نمایی یا «SELEX» شناسایی می‌شوند. ما تشخیص دادیم که اپتامین C باعث مهار آن می شوداکسیداسیونویتامین C از چندین عامل اکسید کننده و حفظ فعالیت آنتی اکسیدانی در طول ذخیره سازی طولانی مدت. برای تایید ارزیابی ایمنی اپتامین C، آزمایش‌هایی در سطح سلولی انجام شد و مستقیماً روی انسان اعمال شد و هیچ سمیتی مشاهده نشد. بیماری های پوستی مانند درماتیت آتوپیک، پسوریازیس و آکنه با پاسخ ایمنی و ROS مرتبط هستند.ویتامین سیتوانایی حذف ROS را دارد و اثر ضد التهابی دارد. 24 آپتامین C ازاکسیداسیوناز ویتامین C برخوردار است و با آزادسازی آهسته اثر آن را به حداکثر می رساند. بنابراین، انتظار داریم که کمپلکس آپتامین C-ویتامین C اثر هم افزایی را نشان دهد.

2|مواد و روش ها

2.1|غربالگری آپتامر در برابر ویتامین C با کاهش گرافن اکسید

این روش با اصلاح روش تحقیق قبلی انجام شده است. 25 نامزدهای ssDNA که می توانند به طور خاص بهویتامین سیاز یک کتابخانه تصادفی ssDNA متشکل از حدود 1018 × 1 توالی مختلف توسعه یافتند. برای کتابخانه ssDNA، ما از یک توالی سفارشی ساخته شده با اندازه 60 متر و حاوی 30 توالی نوکلئوتیدی تولید شده به طور تصادفی و محل آغازگر برای تقویت استفاده کردیم (5'-ATGCGGATCCCGCGC-(N)30-GCGCGAAGCTTGCGC-3'). ما در مجموع پنج دور انجام دادیم در حالی که شرایط آزمایشی را تغییر دادیم تا دنباله خاصی را انتخاب کنیم. حجم کل واکنش 200 میکرولیتر بود. حدود 20 میکرولیتر از بافر اتصال 10× (10 × PBS اضافه شده 10 میلی مول در لیتر MgCl2)، 80 میکرولیتر rGO (5 میلی گرم در میلی لیتر، رقیق شده در آب) و 200 پیکومول از کتابخانه ssDNA (20 میکرولیتر از 100 میکرومول در لیتر استوک ) اضافه شد و dH2O به 200 میکرولیتر اضافه شد. واکنش به مدت 30 دقیقه ادامه یافت تا کتابخانه ssDNA به rGO متصل شود و سپس، مخلوط به مدت 20 دقیقه در 20 000 گرم سانتریفیوژ شد تا مایع رویی از بین برود. گلوله rGO 1 بار با 200 میکرولیتر بافر اتصال شسته شد که همان غلظت شرایط اتصال هدف هر دور است. برای شستشوی نامزدها، 200 نانومول ازویتامین سیرقیق شده در 2{11}}0 میکرولیتر بافر اتصال به گلوله rGO اضافه شد و مرحله شستشو به مدت 1 ساعت انجام شد. ssDNA شسته شده با سانتریفیوژ تقسیم شد و در 20 000 گرم به مدت 20 دقیقه انجام شد و تکثیر شد. ما رسوب EtOH را برای از بین بردن ناخالصی ها به جز ssDNA قبل از تقویت انجام دادیم. ما PCR نامتقارن را برای به دست آوردن ssDNA تقویت شده انجام دادیم. نسبت پرایمر فورواردینگ به پرایمر معکوس PCR نامتقارن 10:1 بود. بر روی ژل آگارز 2.5 درصد الکتروفورز انجام دادیم تا محصول PCR با چند میکرولیتر از آن تایید شود. PCR نامتقارن نمی تواند تنها ssDNA تولید کند. بنابراین، ما روش خرد کردن و خیس کردن را برای جداسازی نامزدهای ssDNA انجام دادیم. برای این روش، الکتروفورز را روی ژل بومی پلی آکریل آمید 12 درصد انجام دادیم و ژل را با اتیدیوم بروماید (EtBr) رنگ آمیزی کردیم. برای جداسازی DNA دو رشته‌ای (dsDNA) و ssDNA، بخشی از ژل رنگ‌آمیزی شده توسط ssDNA بریده شد، پودر شد و ssDNA با خرد کردن و خیساندن بافر (500 mmol/L NH4OAc، 0.1 درصد SDS، 0.1 mmol/L EDTA) استخراج شد. یک شبه ژل پودر شده با سانتریفیوژ جدا شد. مایع رویی حاوی ssDNA با انجام رسوب EtOH تغلیظ و خالص می شود. ssDNA خشک شده با dH2O استریل شده جمع آوری شد و برای دور بعدی به عنوان یک کتابخانه استفاده شد.

مواد تشکیل دهنده طبیعیسیستانچ آمازون

2.2|آزمایش کالریمتری تیتراسیون همدما (ITC).

آزمایش کالریمتری تیتراسیون ایزوترمال با استفاده از سیستم VP-ITC (MicroCal Inc Northampton) در دمای 25 درجه در یک بافر فسفات سالین متشکل از 1 میلی مول در لیتر کلرید منیزیم (PH 7.4) انجام شد. قبل از هر آزمایش تیتراسیون، آپتامین C 2 میلی لیتر وویتامین سی600 نمونه میکرولیتری به مدت 30 دقیقه در خلاء، بدون هم زدن، در دمای چند درجه کمتر از دمای آزمایش، گاز زدایی شدند. ما 0.2 میلی مول در لیتر ویتامین C تهیه کردیم که 25 بار در مقادیر 2 میکرولیتری به سلول نمونه 1.8 میلی لیتری حاوی آپتامین C با غلظت 0.02 میلی مول در لیتر تزریق شد. داده ها با استفاده از برنامه با مبدا برای ITC v.5.0 (MicroCal Inc) به یک ایزوترم اتصال یک سایتی برازش شدند.

2.3|سنجش میکروپلیت مبتنی بر فلورسانس برای اکسیداسیون ویتامین C

اکسیداسیونازویتامین سیبا تشخیص دهیدروآسکوربات محصول اکسید شده (DHA) با استفاده از نسخه اصلاح شده روش توصیف شده توسط Vislisel و همکاران اندازه گیری شد. دی هیدروکسی اتیل) فورو[3،4-b] کینوکسالین-1-ون. سنجش به شرح زیر در صفحات سیاه 384 چاهی (گرینر بیو وان) انجام شد. آپتامرها ابتدا در سالین بافر فسفات، pH 7.2، حاوی 1 میلی مولار MgCl2، با غلظت 200 میکرومول بر لیتر حل شدند، سپس با حرارت دادن تا 95 درجه تا شد و به مدت 15 دقیقه به آرامی در دمای اتاق خنک شد. سپس آپتامرهای تا شده 1:1 (v:v) در محلول تازه تهیه شده 5 میلی مول در لیتر رقیق شدند.ویتامین سیدر بافر سنجش [5{2}} mmol/L استات سدیم، 1 درصد (وزنی/حجمی) BSA، 0.05 درصد (v/v) Tween 20، 1 میلی مولار MgCl2 (سیگما، همه اجزاء) با pH 5.5 تنظیم شده است. مخلوط به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شد تا آپتامرها قبل از افزودن اکسید کننده به هم متصل شوند. سپس اکسید کننده ها به محلول های ویتامین C/آپتامر در غلظت (EM) H2O2 (سیگما) اضافه شدند. اکسیدکننده‌ها به غلظت‌های کاری خود در بافر سنجش از قبل رقیق شدند. سپس نمونه ها در دمای اتاق به مدت 10 دقیقه قبل از افزودن OPDA (سیگما) با غلظت 5.5 میلی مول در لیتر در بافر سنجش انکوبه شدند. بلافاصله پس از افزودن OPDA، فلورسانس نمونه‌ها در 425 نانومتر با استفاده از صفحه‌خوان SpectraMax® i3X (دستگاه‌های مولکولی) با تحریک در 345 نانومتر، در یک دوره زمانی 45 دقیقه‌ای با اندازه‌گیری‌ها هر 60 ثانیه تعیین شد. تمام نمونه ها و ظروف حاوی معرف در فویل پیچیده شدند تا از آنها در برابر نور در طول تمام انکوباسیون های انجام شده برای سنجش فلورسانس محافظت شود.

2.4|اندازه گیری کاهش ویتامین C با استفاده از DCPIP (2،6-Dichlorophenolindophenol)

برای تعیین کاهشویتامین سی، ما آزمایش ها را با استفاده از واکنش DCPIP انجام دادیم. ویتامین C با DCPIP واکنش داده و رنگ را از آبی به بی رنگ تغییر می دهد. ویتامین C تهیه شده با 5 درصد آپتامین CTM تیمار شد و ویتامین C تیمار نشده به مدت 8 هفته در دمای اتاق انکوبه شد. نمونه پس از 2، 4 و 8 هفته اندازه گیری شد. حدود 2 میلی لیتر DCPIP با استفاده از یک پیپت به فلاسک مخروطی اضافه شد و اولین ویتامین C تیمار نشده اضافه شد تا محلول بی رنگ شود. مقدارویتامین سیاضافه شده اندازه گیری و با نمونه های دیگر تکرار شد. درجه کاهش هر نمونه با توجه به این داده ها محاسبه شد.

2.5|مطالعه آزمایشگاهی اثر ضد چروک در فیبروبلاست های پوستی انسان

برای ارزیابی زنده ماندن سلولی در فیبروبلاست های پوستی انسان، سلول ها با غلظت های نهایی مختلف آپتامین C تحت درمان قرار گرفتند.ویتامین سی(آپتامین C ug به اضافه ویتامین C ug/mL) {{0}}.01 به علاوه 0.5 ug/mL, 0.1 به علاوه 5 ug/mL, 0.5 plus 25 ug /mL، 1 به علاوه 50 ug/mL، و 2 به علاوه 100 ug/mL. و سپس، سلول ها در غلظت های آپتامین C با ویتامین C برای شناسایی کلاژن داخل سلولی، کلاژناز داخل سلولی (MMP-1) و فعالیت الاستاز تیمار شدند.

فیبروبلاست های پوستی انسانی (HDFs) بر اساس «راهنمای ارزیابی اثربخشی لوازم آرایشی کاربردی (ΙI)» MFDS انتخاب شدند. HDFها در مخلوط DMEM/F{0}}:1 با گلوکز بالا همراه با 10 درصد FBS و 1 درصد آنتی‌بیوتیک-آنتی‌میکوتیک در اتمسفر 5 درصد CO2 مرطوب در دمای 37 درجه سانتی‌گراد کشت داده شدند.

HDFs (5 × 104 سلول در چاه) در صفحات 24 چاهی کاشته شدند و به مدت 24 ساعت انکوبه شدند و با غلظت‌های مختلف آپتامین C تیمار شدند.ویتامین سیو به مدت 24 ساعت انکوبه شد. پس از 24 ساعت، مایع رویی جمع آوری شد و مقدار پروکلاژن آزاد شده در محیط در طول موج 450 نانومتر با استفاده از کیت الایزا پروکلاژن نوع IC-Peptide (PIP) اندازه گیری شد. درجه تولید کلاژن با محتوای پروتئین کل کالیبره شد و با TGF-1 به عنوان یک کنترل مثبت مقایسه شد. محیط های بدون مواد آزمون به عنوان کنترل حلال استفاده شد.

HDFs (5 × 104 سلول در چاه) در صفحات 24 چاهی کاشته شدند و به مدت 24 ساعت انکوبه شدند و با غلظت‌های مختلف آپتامین C تیمار شدند.ویتامین سیو به مدت 48 ساعت انکوبه شد. پس از 48 ساعت، فعالیت کلاژناز با استفاده از کیت الایزا انسانی MMP-1 در طول موج 450 نانومتر اندازه‌گیری شد. فعالیت MMP-1 با محتوای پروتئین کل ارزیابی شد و با TGF-1 به عنوان یک کنترل مثبت مقایسه شد. محیط های بدون مواد آزمون به عنوان کنترل حلال استفاده شد.

همه داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار بیان شد و از 3 آزمایش مستقل بدست آمد. تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از آزمون t-test نمونه‌های مستقل با استفاده از نرم‌افزار SPSS® (IBM) در سطح معنی‌داری 0.05 P انجام شد.

2.6|اندازه گیری چین و چروک پوست با سیستم تجزیه و تحلیل تصویر سه بعدی

بیست و دو زن (میانگین سنی: 2.94 ± 50.05 سال) در این مطالعه شرکت کردند. چین و چروک پوست پای کلاغ توسط یک سیستم تجزیه و تحلیل تصویر سه بعدی در ابتدا، هفته های 4 و 8 مورد ارزیابی قرار گرفت. هیدراتاسیون پوست با روش خازنی و TEWL با روش انتشار آب سطحی پوست و خاصیت ارتجاعی پوست با روش ساکشن در ابتدا، 2، 4 و 8 هفته پس از درمان ارزیابی شد. همچنین پرسشنامه‌های خودکارآمدی در هفته‌های 2 و 4 و 8 توسط آزمودنی‌ها و پرسشنامه قابلیت استفاده در 8 هفته پس از درمان توسط آزمودنی‌ها تکمیل شد. تمامی داده های به دست آمده با استفاده از نرم افزار SPSS مورد تجزیه و تحلیل آماری قرار گرفت. پارامترهای چین و چروک پای کلاغ با استفاده از PRIMOS® Premium (GFMesstechnik GmbH) ارزیابی شد. این سیستم امکان تجزیه و تحلیل کمی زبری، عمق، مساحت و حجم برآمدگی روی چین و چروک پوست را فراهم می‌کرد. تصویر در همان ناحیه از نظر پارامترهای چین و چروک پوست مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت (1، میانگین عمق چین و چروک؛ 2، میانگین عمق بزرگترین چین و چروک؛ 3، حداکثر عمق بزرگترین چین و چروک؛ 4، سطح چین و چروک، 5، حجم کل چین و چروک، 6 چروک های فاکتور فرم کل؛ 7، طول کل چین و چروک ها؛ 8، Ra؛ 9، Ry؛ و 10، Rz) در ابتدا، 4 و 8 هفته پس از درمان با Primos 5.8 E ver. نرم افزار.

3|نتایج

3.1|برای انجام موفقیت آمیز rGO-SELEX با یک هدف ناپایدار، یک رویکرد دقیق برای آماده سازی بافر مورد نیاز بود

کتابخانه ssDNA که از طریق فعل و انفعالات انباشتگی π-π بین حلقه‌های معطر سطح گرافن و پایگاه‌های DNA 26،27 و ssDNA غیرپیوندی روی rGO به rGO متصل شده بود، با سانتریفیوژ جدا و حذف شد. ssDNA که روی سطح rGO جذب شده بود از طریق تیمار با ترکیب هدف شسته شد. بر اساس گزارش های متون، ترکیب آپتامر پس از اتصال به هدف و با تضعیف برهمکنش های انباشته π-π با rGO تغییر می کند.{3}} این فرآیند برای پنج دور تکرار شد. هر دور بعدی با شرایط بافر سخت‌تر و زمان‌های شستشو کوتاه‌تر انجام می‌شد. این عملکرد به ما اجازه داد تا ssDNA را با ویژگی بهتر برای ترکیبات هدف حفظ کنیم.

داده های NGS کتابخانه غنی شده تولید شده توسط فرآیند rGO-SELEX 404071 توالی را به دست آورد. ما 119 توالی را از این داده‌ها انتخاب کردیم، آنها را بر اساس شباهت ساختاری به 11 گروه دسته‌بندی کردیم و توالی‌های نماینده را برای کاندیدهای آپتامر انتخاب کردیم (شکل 1A).

3.2|انتخاب آپتامین C

ساختارهای ثانویه کاندیداهای آپتامین C با استفاده از نرم افزار رایگان M-Fold پیش بینی شدند. 32،33 نامزدها بر اساس موقعیت، طول، شکل، و تعداد ساقه و حلقه دارای بالاترین ساختار پتانسیل گروه بندی شدند (شکل 1B). DHA، اکسید ازویتامین سیبا واکنش آن با o-phenylenediamine (OPDA) که نقش یک شاخص را بازی می کند، شناسایی می شود.اکسیداسیونبه ویتامین C و جلوگیری از اکسیداسیون آن، سیگنال فلورسانس از 3-(دی هیدروکسی اتیل)-فورو-[3،4-b] کینوکسالین-1-ون، محصول تراکم ویتامین C و OPDA، کمتر از سیگنال فلورسانس خواهد بود. کنترل بدون آپتامر نمودار هر آپتامر کاندید مخلوط با ویتامین C و اکسید کننده، با کنترل مثبت،ویتامین سیبه علاوه توالی های اکسید کننده و اسکرامبل مخلوط با ویتامین C و اکسید کننده (شکل 1C). پنج آپتامر، آپتامین Cb، Cc، Cf، Cg و Ck، دارای اثرات آنتی اکسیدانی هستند.

3.3|مهار اکسیداسیون ویتامین C توسط آپتامین C

اپتامین C میل ترکیبی بالایی داردویتامین سی. اتصال آپتامین C با ویتامین C با استفاده از تجزیه و تحلیل ITC تعیین شد. از ایزوترم اتصال، آنتالپی (ΔH)، آنتروپی (ΔS) و استوکیومتری (n) واکنش اتصال را می توان به دست آورد. اتصال گرمازا Cb آپتامین از اندازه گیری ITC تشخیص داده شد و آنتالپی (ΔH) 3{8}} 3.788 ± 2.5، آنتروپی (ΔS) 18.9، استوکیومتری (n) 56.7 ± {{21} محاسبه شد. }}.426، و ثابت تفکیک (Kd) به عنوان 2.13uM برای ویتامین C محاسبه شد. اتصال گرمازا Cf Aptamin از اندازه گیری ITC تشخیص داده شد، و آنتالپی (ΔH) به عنوان 2.992 ± 279.2 محاسبه شد، آنتروپی (ΔS) محاسبه شد. به عنوان 18.4، استوکیومتری (n) به عنوان 1.15 ± 167 محاسبه شد، و ثابت تفکیک (Kd) به عنوان 0.89uM برای ویتامین C محاسبه شد. اتصال گرمازای آپتامین Ck از اندازه گیری ITC تشخیص داده شد، و آنتالپی (ΔH) ) به صورت 742/3 ± 4/250، ​​آنتروپی (ΔS) برابر با 8/19، استوکیومتری (n) 732/0 ± 2/82 و ثابت های تفکیک (Kd) 90/0 میکرومول در لیتر محاسبه شد. ویتامین C (شکل 2A). اندازه‌گیری‌های ITC نشان می‌دهد که تغییر در آنتروپی پس از ارتباط با اپتامین C یک نیروی محرکه اصلی برایویتامین سی. برای جلوگیری ازاکسیداسیوناز ویتامین C در حالت مایع، همه محلول‌ها با آب دیونیزه تیمار شده با نیتروژن تهیه شدند. هنگامی که OPDA (او فنیلن دیامین) به DHA تولید شده توسط OPDA متصل شد، فلورسانس بیان شد و به صورت کمی آنالیز شد.اکسیداسیونمیزان اکسیداسیون ویتامین C با توجه به غلظت آپتامین C (125، 250، 500 و 1000 نانومول بر لیتر) با روش OPDA مقایسه و تایید شد. نتایج نشان داد کهویتامین سیهنگامی که غلظت آپتامین C بیشتر بود، تبدیل به دهیدروآسکوربیک اسید کندتر بود. (شکل 2B). این داده ها ثابت می کند که آپتامین C یک مهارکننده وابسته به دوز اکسیداسیون ویتامین C است.

ما آزمایش‌هایی انجام دادیم تا مشخص کنیم که آیا اپتامین C می‌تواند از این بیماری جلوگیری کند یا خیراکسیداسیونویتامین C در مدت زمان طولانی اپتامین C با درمان مشترکویتامین سیو ویتامین C تیمار نشده در معرض نور قرار گرفتند و به مدت 8 هفته در دمای اتاق قرار گرفتند. در نتیجه، وقتی ویتامین C درمان نشده به حال خود رها شد، میزان کاهش در 2 هفته به کمتر از نصف کاهش یافت و تقریباً همه آنها پس از 4 هفته اکسید شدند. در حضور آپتامین C، ویتامین C به حدود 8 هفته به نصف کاهش یافت (شکل 2C). این نشان می دهد که اپتامین C از اکسیداسیون ویتامین C در مدت زمان طولانی جلوگیری می کند.

بدنسازی سیستانچ

3.4|تجزیه و تحلیل فعالیت کلاژناز داخل سلولی (MMP-1) و کلاژن

در تجزیه و تحلیل فعالیت کلاژناز، تولید ماتریکس متالوپروتئیناز-1 (MMP-1) به صورت وابسته به دوز به طور قابل توجهی کاهش یافت، با 7.{8}}6 درصد، 9.29 درصد و 31.81 درصد در غلظت های {{1{ {12}}}}.01 به علاوه 0.5 ug/mL، 0.1 به علاوه 5 ug/mL، و 0.5 به علاوه 25 ug/ میلی لیتر، به ترتیب (شکل 3A). در تجزیه و تحلیل سنتز کلاژن، پپتید کربوکسی پایانه پروکلاژن نوع I (PIP) به طور قابل توجهی به صورت وابسته به دوز افزایش یافت، با 25 درصد افزایش در 0.01 به اضافه 0.5 ug/mL. 41.99 درصد در 0.1 به علاوه 5 ug/mL، و 71.18 درصد در 0.5 به علاوه 25 ug/mL (شکل 3B).

3.5|مطالعه بالینی اثرات بهبود چین و چروک پوست بر روی پوست انسان

تجزیه و تحلیل آماری پارامترهای چین و چروک توسط یک سیستم آنالیز تصویر سه بعدی برای ارزیابی اثرات بهبود چین و چروک پوست محصول آزمایشی بر روی پوست انسان انجام شد. پارامتر میانگین عمق چین و چروک در 4 هفتگی 4.77 درصد و در 8 هفته 4.25 درصد، پارامتر میانگین عمق بزرگترین چین و چروک در 4 هفته 3.37 درصد و در هفته 8 4.53 درصد کاهش یافت. پارامتر حداکثر عمق بزرگترین چین و چروک در 4 هفته 4.36 درصد و در 8 هفته 7.19 درصد، پارامتر «طول کل چین و چروک ها» 1.61 درصد در 4 هفته و 2.67 درصد در هفته 8، پارامتر «Ra» 4.22 درصد کاهش یافت. در 4 هفته و 3.90 درصد در 8 هفته، پارامتر "Ry" در 4 هفته 2.66 درصد و در 8 هفته 7.11 درصد، پارامتر "Rz" در 4 هفته 3.69 درصد و در هفته 8 6.22 درصد کاهش یافت، این کاهش 3.69 بود. درصد -7.11 درصد (شکل 4).

4|نتیجه

ویتامین سییک مولکول تجاری مهم و در عین حال ناپایدار است، بنابراین بهبود پایداری آن مورد توجه بخش‌های مختلف بازار است. کار ما نشان می‌دهد که آپتامین C، آپتامرهای DNA، به طور بالقوه ماندگاری را افزایش می‌دهد و با به تاخیر انداختن، قدرت این محصولات را افزایش می‌دهد.ویتامین سی اکسیداسیوندر یک محلول ما اثربخشی بالینی کمپلکس آپتامین C را در بهبود چین و چروک و آبرسانی پوست به نمایش گذاشتیم. کمپلکس اپتامین C همچنین می تواند به تسکین پوست در حالت خشن کمک کند.

بهبود سفیدی پوست