اثر سودمند/ نامطلوب کوئرستین بر روی غشای سلول های نوروبلاستوما SK-N-SH قسمت 2

لطفا کلیک کنیدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

2.2.2. فعالیت آنتی اکسیدانی کوئرستین

برای آزمایش اثربخشی کورستین در محافظت از غشاها در برابر استرس اکسیداتیو، آزمایش‌هایی انجام شد که در آن مدل‌های لیپیدی غشاء در غیاب (شکل 4a) و حضور کورستین در غلظت 6.25 میکرومولار در معرض ازن قرار گرفتند (شکل 4b).

تحت تأثیر ازن، سیر هر دو وابستگی، یعنی π{{0}}f(A) و Cs-1=f(rn) تغییر می‌کند. ایزوترم های به دست آمده برای پخش تک لایه در زیر فاز حاوی ازن با شیب کوچکتر و تغییر به سمت مقادیر A پایین تر مشخص شدند. علاوه بر این، مقادیر Cs{3}} تحت تأثیر ازن کاهش یافت. این تغییرات در غلظت ازن در حدود 0.4 ppm بیشتر بود.سینتانچافزایش بیشتر در غلظت ازن، تغییرات در ویژگی های تک لایه را افزایش نداد (شکل 4a).

شکل 4. ایزوترم های فشار سطحی و مدول تراکم پذیری متناظر (داخل) مدل لیپیدی لایه های نوروبلاستوما پخش شده در زیر فاز حاوی غلظت های مشخص شده ازن محلول در بافر است. ایزوترم: (الف) در غیاب آنتی اکسیدان؛ (ب) در حضور کوئرستین (6.25 میکرومولار) به بافر حاوی ازن اضافه شده است.

هنگامی که کورستین در غلظت 6.25 میکرومولار به زیر فاز معرفی شد، ازن به طور قابل توجهی بر روند همدما r (A) تأثیر نمی گذارد. با این حال، مقادیر مدول فشرده سازی در حضور ازن به طور مشابه در مورد عدم وجود کوئرستین تغییر کرد (شکل 4b ورودی).

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا کلیک کنید

مقادیر عددی پارامترهای مشخص کننده تک لایه های تعیین شده بر اساس ایزوترم های بدست آمده در جدول 3 ارائه شده است.

جدول 3. پارامترهای سطحی تک‌لایه‌های Alim و Cs-I محاسبه‌شده برای تک‌لایه‌های مدل پخش غشای نوروبلاستوما در زیر فاز حاوی غلظت‌های مشخص شده ازن محلول در بافر در غیاب و در حضور کورستین (6.25 میکرومولار) است. داده ها نشان دهنده میانگین سه آزمایش ± SD است. حروف مختلف تفاوت معنی داری را نشان می دهد (p کمتر یا مساوی 0.05).

در حضور ازن، کاهش جزئی در سطح هر مولکول (Alim) در تک لایه فشرده مشاهده می شود. حداکثر کاهش این پارامتر نسبت به شاهد (تک لایه روی بافر خالص) 3.2 درصد است. پارامتر Cs-I نیز کاهش می‌یابد و در غلظت‌های اوزون بالای 0.6 ppm O به مقادیر فلات می‌رسد. حداکثر کاهش این پارامتر نسبت به شاهد به 24 درصد می‌رسد.

هنگامی که کورستین با غلظت 6.25 میکرومولار در فاز فرعی وجود دارد، مقادیر Alim ({2}} درصد) اندکی کاهش می‌یابد، در حالی که کاهش در مقدار Cs-1 حدود ۲۷ درصد است.

ماهیت تغییرات علیم در حضور ازن و ازن در ترکیب با کورستین سیرهای متفاوتی دارد. در غلظت ازن حدود 0.3 پی پی ام، در غیاب کوئرستین، Aim به طور ناگهانی به حدود 88.3 A2 کاهش می یابد. سپس به حداقل مقدار فلات می رسد که وابستگی به شکل S مشخصه را نشان می دهد (شکل 5a، نقاط قرمز). در حضور کوئرستین، کاهش یکنواخت ملایم الیم وجود دارد که به غلظت ازن بالاتر در فلات حدود 93.5 A2 می رسد (شکل 5a، نقاط سبز).

شکل 5. وابستگی سطح هر مولکول به غلظت ازن (a) و وابستگی مدول فشرده سازی به غلظت ازن (b) برای غشای نوروبلاستوما در فاز فرعی: بدون نقاط قرمز کوئرستین. با نقاط سبز کوئرستین خطوط هیچ مدل فیزیکی را ارائه نمی دهند، از نظر ریاضی برازش شده اند و برای راحتی ردیابی تغییرات پارامتر ترسیم شده اند. مقادیر حداکثر مدول فشرده سازی لایه به طور مشابه با غلظت ازن برای هر دو تغییر می کند: در غیاب و حضور کوئرستین (شکل 5b).

3. بحث

مکانیسم اثر کوئرستین برای سال‌ها به شدت مورد مطالعه قرار گرفته است، اما نتایج آزمایش‌ها اغلب متناقض است و نشان می‌دهد که در برخی شرایط، این ترکیب برای سلول‌ها مفید و در برخی موارد نامطلوب است. تجزیه و تحلیل مطالعات موجود نشان می دهد که اثر این ترکیب بر روی سلول ها به دو جنبه، یعنی برهمکنش آن با غشاها و فعالیت آنتی اکسیدانی مربوط می شود. با این حال، در سلول ها، تشخیص این دو حالت از عمل کورستین و ارزیابی مناسب بودن این ترکیب به عنوان یک ماده بالقوه، به عنوان مثال، داشتن فعالیت ضد توموری ممکن نیست. به همین دلیل، آزمایش‌ها به گونه‌ای برنامه‌ریزی شده‌اند که تأثیر این ترکیب بر خواص مکانیکی غشاها و همچنین فعالیت آنتی‌اکسیدانی آن در سیستم مدل را به‌صورت کمی و کیفی ارزیابی کنند که اثرات فعالیت سایر مسیرهای متابولیک

بر اساس آزمایش‌های انجام‌شده، تأیید شد که کورستین حتی در کمترین غلظت‌ها (25/6 میکرومولار)، تک‌لایه‌های مدل را تغییر می‌دهد (همانطور که با افزایش Alimvalue مشخص می‌شود) و با تقلید از قسمت لیپیدی غشای سلول‌های نوروبلاستوما. این به احتمال تعامل کورستین با غشای این سلول ها هنگام رسیدن به مغز حتی در غلظت های پایین اشاره می کند. این امر برای سلول های عصبی که غشای آنها حاوی مقادیر نسبتاً زیادی لیپید است از اهمیت ویژه ای برخوردار است.

سیستانچ می تواند ایمنی را بهبود بخشد

نسبت تقریبی لیپید به پروتئین برای سلول های عصبی 80:20 درصد است و برای مثال، برای غشای گلبول قرمز، این نسبت 50:50 درصد است [29]. چنین سطحی از لیپیدها در غشای سلول های عصبی با نقش این سلول ها در انتقال سیگنال های الکتریکی مرتبط است. در عین حال، حتی تغییرات جزئی در خواص فیزیکوشیمیایی، مانند انعطاف پذیری و سفتی غشای سلولی، می تواند به طور قابل توجهی این عملکرد را مختل کند.

پتانسیل عمل به لطف کار کانال های یونی در امتداد غشای سلول عصبی منتقل می شود و سپس به لطف عملکرد پمپ های یونی، پتانسیل استراحت احیا می شود. عملکرد مناسب این پروتئین ها (به ویژه، که با شکل آنها تعیین می شود) به شدت به محیط لیپیدی بستگی دارد. علاوه بر این، تغییرات در خواص مکانیکی غشا ممکن است عملکرد کانال‌هایی را که مکانیسم دروازه‌بندی آنها دقیقاً به خواص مکانیکی غشا بستگی دارد، مختل کند.

این تزها با مطالعاتی تأیید می‌شوند که نشان می‌دهند اثر کورستین بر غشای سلولی، از جمله، به انتقال یون‌های Ca2 به علاوه و/یا متابولیسم Ca2 به علاوه مرتبط است [30،31]. بنابراین، ورود مولکول های کورستین به محیط غشاء (به ویژه سلول های عصبی) ممکن است عواقب قابل توجهی بر عملکرد آنها داشته باشد.

برای بررسی اینکه آیا عملکرد کورستین تعیین‌شده در سیستم‌های مدل نقش مفید یا نامطلوب در سلول‌ها ایفا می‌کند، نتایج به‌دست‌آمده برای غشاهای مدل با تأثیر این ترکیب بر سلول‌های نوروبلاستوما کامل مقایسه شد. برای سلول های SK-N-SH، آزمایش MTT انجام شد،عصاره سیستانچ ضد آلزایمرارائه اطلاعات در مورد زنده ماندن سلولی سلول ها که به نوبه خود مستقیماً با آنزیم های دهیدروژناز میتوکندریایی متناسب است.

نتایج به‌دست‌آمده نشان داد که حضور کورستین در غلظت‌های 100 و 200 میکرومولار باعث افزایش تعداد سلول‌های زنده می‌شود. نتایج مشابهی توسط Bao و همکاران به دست آمد. [32]، بررسی اثر کوئرستین بر روی سلول‌های PC{3}}. نشت LDH به محیط خارج سلولی، که اطلاعاتی در مورد اختلال غشای سلولی می دهد، نیز در همان سطوح کوئرستین مورد بررسی قرار گرفت. نتایج به‌دست‌آمده نشان داد که غشاهای سلول‌های مورد آزمایش در چنین شرایطی آسیبی ندیده‌اند. چکمه و همکاران [2]، با مطالعه اثرات کورستین بر سلول های اپیتلیال ریه، نتایج مشابهی را مشاهده کرد. بنابراین می‌توان نتیجه گرفت که در این غلظت‌ها، کورستین تأثیر مثبتی بر سلول‌ها دارد و باعث افزایش زنده‌مانی آنها می‌شود.

دومین جنبه مهم مکانیسم اثر کوئرستین مربوط به خواص آنتی اکسیدانی آن است. برای ارزیابی اثر مرتبط پلی فنل مورد مطالعه، آزمایش‌هایی انجام شد که در آن بررسی شد که آیا کورستین نقش محافظتی در سلول‌های در معرض استرس اکسیداتیو بازی می‌کند یا خیر. استرس اکسیداتیو با وارد کردن H، O2 به محیط سلول ایجاد شد.سیستانچ برای بهبود حافظههمانطور که در این مطالعه نشان داده شد، پراکسید هیدروژن باعث مرگ و میر قابل توجه سلولی می شود که به عنوان آسیب به میتوکندری بیان می شود.

هنگامی که سلول‌های SK-N-SH به مدت 3 ساعت در محیطی حاوی 3 و 5 میلی‌مولار H2O2 کشت داده شدند، زنده‌مانی سلولی تقریباً به 44 درصد از سلول‌های تیمار نشده کاهش یافت (آزمون MTT). مطالعات نشان داد که 24 ساعت پیش تیمار سلول ها با کوئرستین باعث افزایش تعداد سلول های زنده نسبت به سلول های تیمار شده با H2O2 می شود. سوئماتسو و همکاران [13] اثرات مشابهی را گزارش کردند.

ما همچنین سطح MDA را که یک نشانگر زیستی استرس اکسیداتیو به عنوان محصول نهایی پراکسیداسیون لیپیدی است، اندازه‌گیری کردیم[33]. پیش تیمار سلولی با غلظت‌های بالای کوئرستین، و به دنبال آن افزودن پراکسید هیدروژن، منجر به افزایش جزئی محتوای MDA در مقایسه با سلول‌هایی شد که به تنهایی در معرض HO قرار داشتند. این ممکن است به این دلیل باشد که کورستین (در غلظت‌های بالاتر) همچنین می‌تواند تحت فعال‌سازی احیاکننده اکسید قرار گیرد و موضوع چرخه ردوکس باشد و گونه‌های اکسیژن فعال درون سلولی تولید کند [34].

هیچ تغییر قابل توجهی در تخریب غشاء (همانطور که با سطح LDH بدون تغییر نشان داد) سلول های تیمار شده با کوئرستین و H2O2 در مقایسه با موردی که سلول ها فقط در معرض استرس اکسیداتیو قرار گرفتند، وجود نداشت. بنابراین، می توان نتیجه گرفت که علیرغم افزایش پراکسیداسیون لیپیدی (در غلظت های بالای کورستین)، این به اندازه کافی برای تخریب غشاها و اختلال در تداوم آنها قابل توجه نبود.

مشاهدات به‌دست‌آمده برای سیستم بومی با مشاهدات دریافت‌شده برای یک سیستم مدل مواجه شد که در آن می‌توان دقیقاً هم غلظت کوئرستین و هم سطح استرس را کنترل کرد. بررسی شد که چگونه قسمت لیپیدی غشای نوروبلاستوما در برابر استرس اکسیداتیو مقاوم است. شرایط استرس با وارد کردن ازن به بافر ایجاد شد که در آن ازن محیط آبی تحت واکنش‌های تجزیه قرار می‌گیرد و رادیکال‌های اکسیداتیو، از جمله رادیکال‌های هیدروکسیل و رادیکال‌های آنیون سوپراکسید را تشکیل می‌دهد [35]. مخلوط به‌دست‌آمده از گونه‌های اکسیژن فعال مطابق با آنهایی است که به طور طبیعی در سلول‌ها وجود دارند، به دلیل عدم تعادل اختلال وضعیت ردوکس [36-38].

تحت تأثیر تنش، شکل ایزوترم‌ها تغییر کرد که نشان‌دهنده کاهش قابل‌توجه در مساحت هر مولکول در تک‌لایه متراکم است. چنین تغییراتی به دلیل اکسیداسیون پیوندهای غیراشباع در زنجیره اسیدهای چرب اتفاق افتاد. این اثر با افزایش غلظت ازن به حدود 3.3 ppm {{0}} افزایش یافت و سپس این پارامتر ایزوترم با وجود افزایش ROS در همان سطح باقی ماند. این به این معنی است که در غلظت ازن حدود 0.3 ppm، تمام اسیدهای چرب غیراشباع موجود در تک لایه اکسید شدند (در مدل نوروبلاستوما، مقدار کل اسیدهای چرب غیراشباع 52 درصد بود).

تک لایه های اکسید شده دارای سفتی قابل توجهی هستند،سیستانچ در چینیهمانطور که با مقدار Cs{0}} نشان داده می شود (هر چه مقدار این پارامتر بیشتر باشد، سفتی لایه بزرگتر است). در حضور کورستین، حتی در غلظت کم (6.25 میکرومولار)، تغییرات غشای در معرض ازن، همانطور که با تغییرات در مقدار Alim مشاهده می‌شود، به طور قابل‌توجهی کاهش یافت (شکل 5a)، که فعالیت آنتی‌اکسیدانی این ترکیب را ثابت می‌کند. . البته شایان ذکر است که اگرچه کورستین رادیکال‌ها را از بین می‌برد، اما از اسیدهای چرب غیراشباع در برابر اکسیداسیون محافظت می‌کند، اما تغییرات سفتی غشاء را معکوس نمی‌کند (شکل 5b).

بنابراین، نشان داده شده است که کورستین یک اثر آنتی اکسیدانی از خود نشان می دهد، اما حضور صرف آن بین مولکول های لیپیدی بر پارامترهای لیور تأثیر می گذارد (تعیین می کند)، یعنی با وجود محافظت از زنجیره های اسید چرب در برابر اکسیداسیون، سفتی غشاء به طور قابل توجهی کاهش می یابد (Cs- ارزش من حدود 25 درصد کمتر از کنترل است).

این نتایج نشان می دهد که این تغییر غشاء است که عامل اصلی در اثرات سلولی ناشی از حضور کوئرستین است. با این حال، پیامدهای این تغییر (اصلاح سیگنال، انتقال) بسته به تعداد مولکول های پلی فنل، ترکیب اولیه غشاء و عملکرد سلول متفاوت است. این توضیح می دهد که چرا در شرایط مختلف و در مطالعات مختلف، کورستین اثر محافظتی از خود نشان می دهد، در حالی که در دیگران کاملاً برعکس است.

در شرایط استرس اکسیداتیو بالا، اثر آنتی اکسیدانی با محافظت از اجزای آن در برابر آسیب به سلول کمک می کند. با این حال، اگر غشاها با قرار دادن این ترکیب در محیط خود به طور قابل توجهی اصلاح شوند که منجر به توزیع سیگنال یا مسیرهای انتقال با تغییر سفتی غشا می شود، این ممکن است منجر به اثرات نامطلوب شود. همچنین باید به خاطر داشت که بسیاری از فرآیندها در یک سلول به طور همزمان انجام می شود، چه آنهایی که مربوط به غشاها و چه آنهایی که استرس اکسیداتیو ایجاد می کنند. اثری که با تعیین سطح شاخص های خاص قابل مشاهده و اندازه گیری است، همیشه کل است. از این رو، موقعیت هایی وجود دارد که در آن اثر کورستین به عنوان مطلوب و نامطلوب تلقی می شود.

4. مواد و روش ها

4.1. مواد

ترکیب مدل بخش لیپیدی غشای سلول‌های نوروبلاستوما بر اساس کار نویسندگان [39-41] ایجاد شد. فسفولیپیدها: 1-oleoyl-2-palmitoyl-sn-glycerol-3-phosphocholine;1-hexacosanoyl-d{8}}hydroxy-sn-glycerol-3-phosphocholine. 1،{13}}دیولئویل-sn-گلیسرول-3-فسفوکولین؛ L{17}}فسفاتیدیل اتانولامین (مغز)؛ اسفنگومیلین (مغز) - (Avanti Polar Lipids Inc., Alabaster, AL, USA). کلسترول خریداری شد (سیگما آلدریچ، دارمشتات، آلمان). نسبت فسفولیپید به کلسترول 79 درصد به 21 درصد بود. نسبت اسیدهای چرب اشباع به غیراشباع 48 درصد به 52 درصد بود.

حلالها (کلروفرم، اتانول) با خلوص شیمیایی - Poch (گلیویس، لهستان). آب تازه دیونیزه تولید شده توسط HLP 5 Hydrolab (Straszyn، لهستان). محیط کشت، سرم و آنتی بیوتیک ها از CytoGen GmbH خریداری شد. معرف های شیمیایی مورد استفاده در آزمایش ها از سیگما آلدریچ به دست آمد.

4.2. کشت سلولی

رده سلولی نوروبلاستوما انسانی SK-N-SH (مجموعه اروپایی کشت های سلولی تایید شده (ECACC) در 1{3}} درصد سرم جنین گاو (FBS) در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM)، همراه با 0.01 درصد پنی سیلین کشت داده شد. - استرپتومایسین در دمای 37 درجه در اتمسفر مرطوب حاوی 5 درصد CO2.

4.3. اندازه گیری زنده ماندن سلول (آزمایش MTT)

سلول ها در یک صفحه چاهک با تراکم 1×104 سلول در هر چاهک در حجم 0.1 میلی لیتر کاشته شدند. سلول ها به مدت 24 ساعت با غلظت های مختلف کوئرستین (3.{7}} میکرومولار) تیمار شدند. پس از این مدت، 3 میلی مولار و 5 میلی مولار پراکسید هیدروژن به مدت 3 ساعت اضافه شد. به دلیل عدم تفاوت بین اثرات HO2 در غلظت های 3 و 5 میکرومولار، برای مطالعات آماری، آنها را به عنوان تیمارهای مشابه و به عنوان تیمار 3-5 uM H2O2 توصیف کردند.

پس از آن 50μL MTT（3-【4،5-دی متیل تیازول-2-yl】-2،5 محلول دی فنیل تترازولیوم بروماید) (محلول استوک استریل 5 میلی گرم بر میلی لیتر) به سلول ها اضافه شد و به مدت 2 ساعت در دمای 37 درجه در اتمسفر 5 درصد CO2 مرطوب شده انکوبه شد. سپس 0.4 میلی لیتر دی متیل سولفوکسید (DMSO) به هر چاهک اضافه شد و به مدت 10 دقیقه نگهداری شد. پس از سانتریفیوژ، چگالی نوری مایع رویی در طول موج 570 نانومتر با استفاده از صفحه خوان میکرولیتری (BioTek Instruments, VT, USA) اندازه گیری شد.

4.4. سنجش آسیب مم1 بران (آزمایش LDH)

از روش لاکتات دهیدروژناز (LDH) به عنوان نشانگر تمامیت غشای سلولی استفاده شد.

سلول‌های 1×1{{{10}}* سلول در هر چاهک در یک 96-صفحه چاهی کاشته شدند و در حضور کورستین (3.{4}} میکرومولار) انکوبه شدند. به مدت 24 ساعت؛ سپس 3 میلی‌مولار و 5 میلی‌مولار H2O به مدت 3 ساعت اضافه شد. به لوله‌های حاوی 0.5 میلی‌لیتر از 0.75 میلی‌مولار پیروات سدیم و 10 میکرومولار NADH (140 میکرومولار) (در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 10 دقیقه) حرارت داده شد، 150 میکرولیتر مایع رویی اضافه شد و به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه انکوبه شد. سپس 0.5 میلی لیتر 2،{24}}دینیتروفنیل هیدرازین به نمونه اضافه شد و پس از 1 ساعت جذب در 450 نانومتر اندازه گیری شد.

4.5. تعیین پراکسیداسیون لیپیدی (غلظت MDA)

پراکسیداسیون لیپیدی غشاء توسط واکنش تیوباربیتوریک اسید (TBA) با مالون دی آلدئید (MDA) برآورد شد. سلول‌ها در {0}}صفحه‌های چاهکی حاوی کوئرستین و H, O2 (در غلظت‌ها و زمان‌هایی که در بالا توضیح داده شد) به مقدار 1×104 سلول در هر چاهک در حجم { کاشته شدند. {1{17}}}}.25 میلی لیتر. پس از درمان، نمونه‌ها جمع‌آوری و سانتریفیوژ شدند (1000×&،5 دقیقه). به گلوله‌ها، 0.5 میلی‌لیتر از 0.5 درصد TCA اضافه شد، به مدت 1 دقیقه گرداب شد، و از طریق فراصوت به مدت 5 دقیقه لیز شد. پس از سانتریفیوژ در 10000 × گرم به مدت 10 دقیقه، 0.4 میلی لیتر مایع رویی به 1.25 میلی لیتر TCA 20 درصد با 0.5 درصد TBA اضافه شد و در یک ترموبلوک خشک (100 درجه) به مدت 30 دقیقه حرارت داده شد. پس از سرد شدن، جذب با استفاده از ضریب خاموشی مولی MDA برابر با 155 M{28}} سانتی‌متر در طول موج 532 نانومتر اندازه‌گیری شد.

4.6.ممبران مدل

ازن زنی بافر بافر فسفات (0.01 M، pH 7.4) با ازن تولید شده توسط ازن ژنراتور FM 500 (Grekos، لهستان) اشباع شد. غلظت ازن در یک بافر با توجه به Bader و Hoigne [42] تعیین شد.

ایزوترم های فشار سطحیرشد آلت تناسلی سیستانچیفرورفتگی لانگمویر (KSV، فنلاند) برای ثبت ایزوترم فشار سطح در نرخ فشرده سازی ثابت مربوط به سرعت مانع 5 میلی متر در دقیقه استفاده شد. تک لایه لیپیدی با پخش مقدار مشخصی از محلول کلروفرم لیپیدی با غلظت 1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر بر روی زیر فاز متشکل از بافر فسفات آبی 0.۰۱ مولار، pH 7.4 با یا بدون کوئرستین و با یا بدون ازن تشکیل شد. کشش سطحی با صفحه Pt-Wilhelmy اندازه گیری شد. آزمایش ها در دمای 1±25 درجه انجام شد.

4.7. تحلیل آماری

سه تا شش تجزیه و تحلیل مستقل برای هر گونه آزمایش شده انجام شد و میانگین (± انحراف معیار) محاسبه شد. تفاوت معنی داری در مقایسه با گروه شاهد با بهره برداری از روش SAS ANOVA برآورد شد. تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از آزمون چند دامنه ای دانکن انجام شد<0.05. statistical="" tests="" were="" carried="" out="" using="" statistica="" 13.3(cracow,="">

مشارکت نویسنده: Conceptualization، BK، BD، and ER-S.methodology، BKBD. نرم افزار، BK، BD Validation، BK، BD، ER-S.، ABwriting - آماده سازی پیش نویس اصلی BK، BD، ER-S.، نوشتن - بررسی و ویرایش، BK، BD، ER-S.، ABvisualization، BK، BDsupervision، BK، BD، ER-S.، ABA همه نویسندگان نسخه منتشر شده نسخه خطی را خوانده و با آن موافقت کرده اند.

منابع مالی:این تحقیق هیچ بودجه خارجی دریافت نکرد.

بیانیه هیئت بررسی نهادی: قابل اجرا نیست

بیانیه رضایت آگاهانه: قابل اجرا نیست

بیانیه در دسترس بودن داده ها: داده ها در مقاله موجود است. تضاد منافع: نویسندگان هیچ گونه تضاد منافع را اعلام نمی کنند.

این مقاله از Molecules 2021, 26, 4945 استخراج شده است. https://doi.org/10.3390/molecules26164945 https://www.mdpi.com/journal/molecules