MiR{0}}a-3خاموش کردن رسوب اگزالات کلسیم را در کلیه موش با فعال کردن محور UMOD/TRPV5 بهبود می‌بخشد.

2.10. تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک و سنجش لوسیفراز.

UMOD-هدف قرار دادن miRNA، miR{0}}a-3p، به طور قابل پیش بینی توسطوب سایت TargetScan(http://www.targetscan.org/vert_71/)و سپس از طریق سنجش لوسیفراز تایید شد. کنترل pGL{0}}وکتورهای (E1741) از Promega (ایالات متحده آمریکا) خریداری شدنوع وحشی UMOD را بسازید (UMOD-WT, 5′-AGCCUGUGUCUUUAAAUGCUGCU-3′) و نوع جهش یافتهاز UMOD (UMOD-MUT، 5′-AGCCUGUGUCUUUAAAUGAUCCU-3′). سلول های NRK{0}E با هم ترانسفکت شدندmiR-103a-3p mimic و UMOD-WT یا miR-103a-3pتقلید و UMOD-MUT با کمک لیپوفکتامین2000. روش مشابه در تقلید انجام شدکنترل (بردارهای pRL-TK، VT1568، YouBio، چین). بعد ازکه، ما فعالیت لوسیفراز در سلول ها با استفاده ازکیت سنجش گزارشگر دوگانه لوسیفراز (E1910، Promega، ایالات متحده).2.11. استقرار مدل Hyperoxaluria In Vivo.برایin vivoمطالعه، ما مدل موش هیپراکسالوریا را ایجاد کردیمبا افزودن اتیلن گلیکول 1% (EG) (324558, Sigma-Aldrich,ایالات متحده) به آب آشامیدنی. آزمایش حیوانی بودتایید شده توسط کمیته حیوانات آزمایشگاهی Theسوم الفffiبیمارستان وابسته به دانشگاه پزشکی شین شیانگ(IHRM20200510). در مجموع 40 مرد Sprague Dawley (SD)موش ها (8 هفته، 180–210 گرم) از رودخانه چارلز خریداری شده استآزمایشگاه ها (پکن، چین) درin vivoمطالعه کنید همهموش ها به 4 گروه کنترل EG، EG + آنتاگو تقسیم شدندmir، و EG + آنتاگومیر-NC، با ده موش در هر گروه.در زمان اسکان، در گروه کنترل، موش‌ها فقط ارائه شدندبا آب لوله کشی؛ در گروه EG، موش ها تحت درمان قرار گرفتندبا 1٪ EG; در گروه EG + آنتاگومیر، موش ها بودندتحت درمان با EG 1٪ و تزریق داخل وریدی با miR-103a-3p antagomir; و در گروه EG + antagomir-NC،موش‌ها با EG 1% تحت درمان قرار گرفتند و به صورت داخل وریدی تزریق شدندبا miR-103a-3p antagomir-NC. بعد از 4 هفته، همه موش هاقربانی بودندفیبا دررفتگی دهانه رحم تحت بیهوشی ایجاد می شود(پنتوباربیتال سدیم، 40 میلی گرم بر کیلوگرم، P{1}}، مرک، ایالات متحده آمریکا) وبافت کلیه برای مطالعه بافت شناسی جمع آوری شد. راmiR{0}}a-3 آنتاگومیرهای مورد استفاده در این آزمایش بودندبه دست آمده از Ribobio (گوانگژو، چین).

فرمولاسیون گیاهی جدید برایبافت های کلیه

2.12. رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین (HE).

بافت کلیه ثابت شده با فرمالین در پارافین برای ارزیابی رسوب CaOx تعبیه شد. نمونه‌های برش‌شده قبل از رنگ‌آمیزی HE، موم‌زدایی و هیدراته شدند. سپس، کیت رنگ‌آمیزی HE (C0105S، Beyotime، چین) برای درمان نمونه‌ها با هدایت دستورالعمل‌های عملیاتی استفاده شد. پس از مهر و موم کردن بافت ها، ناحیه رسوب کریستال در زیر میکروسکوپ پلاریزه (Axio Scope.A1، ابزار دقیق، چین) با بزرگنمایی 100× مشاهده شد و با استفاده از ImageJ (Vision 1.8.0، مؤسسه ملی بهداشت، ایالات متحده آمریکا) اندازه گیری شد.

شکل 5: ادامه دارد.

شکل 5: خاموش کردن miR-103a-3 محور UMOD/TRPV5 را فعال کرد تا سلول های NRK{4}} را از آسیب ناشی از اگزالات تضعیف کند. (الف) اثر مهارکننده miR{6}}a{7}} بر زنده‌مانی سلول‌ها در سلول‌های NRK{8}E تیمار شده با اگزالات، پلاسمید بیانگر بیش از حد TRPV و siUMOD تعیین شد. توسط سنجش MTT (ب) از سنجش چسبندگی سلول کریستالی برای تعیین کمیت رسوب CaOx در سلول‌های مشخص شده استفاده شد (×2{14}}0 بزرگ‌نمایی، نوار مقیاس=200 میکرومتر). (ج) کیت Fluo{12}} AM اندازه‌گیری محتوای Ca2+ را در گروه‌های مختلف تجزیه و تحلیل کرد. ∗∗∗p < 0:001 در مقابل اگزالات; ###p < 0:001 در مقابل اگزالات + TRPV{19}} siNC + IC; ∧∧p <0:01 و ∧∧∧p <0:001 در مقابل اگزالات + TRPV{26}} siUMOD + IC. TRPV5: کانال کاتیونی بالقوه گیرنده گذرا زیرخانواده V عضو 5. UMOD: uromodulin; MTT: متیل تیازولیل دی فنیل-تترازولیوم برومید. NC: کنترل منفی؛ siUMOD: RNA مداخله گر کوچک در برابر UMOD. I: بازدارنده؛ IC: کنترل بازدارنده.

2.13. ایمونوهیستوشیمی (IHC).

برای مطالعه توزیع TRPV5 در بافت‌های کلیوی، ما از کیت ایمونوهیستوشیمی با حساسیت بالا و سریع Super Plus™ (E-IR R221، Elabscience، چین) برای انجام IHC استفاده کردیم. به طور خلاصه، مقاطع کلیه (4 میکرومتر) با بافر موم زدایی/بازیابی آنتی ژن به مدت 30 دقیقه تحت حرارت قرار گرفتند و متعاقباً با بافر مسدود کننده SP Reagent B Peroxidase در دمای اتاق به مدت 15 دقیقه انکوبه شدند. پس از شستشوی PBS، مقاطع با آنتی بادی ضد TRPV5 (ab137028, 1/100, Abcam, UK) در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 2 ساعت واکنش دادند و سپس آنتی بادی ثانویه انکوباسیون شد. پس از آن، مقاطع برای توسعه رنگ در محلول کار DAB و رنگ آمیزی در بافر هماتوکسیلین مورد نیاز بود. پس از آبیاری مجدد، تصاویر رنگ آمیزی با استفاده از میکروسکوپ (CX23، Olympus، ژاپن) با بزرگنمایی 100× گرفته شد.

2.14. تجزیه و تحلیل آماری.

همه آزمایش‌ها سه بار به صورت جداگانه تکرار شدند و داده‌های اندازه‌گیری به عنوان میانگین ± انحراف استاندارد توصیف شد. تفاوت‌های مقایسه شده بین گروه‌های چندگانه با استفاده از تحلیل واریانس یک‌طرفه مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. برای تجزیه و تحلیل داده‌ها از GraphPad Prism 8.0 (نرم‌افزار GraphPad، ایالات متحده آمریکا) استفاده شد و p-value <{4}}.05 تفاوت آماری معنی‌داری را نشان داد.

فرمولاسیون گیاهی جدید برایبافت های کلیه

3. نتایج

3.1. تنظیم مثبت TRPV5

سلول‌های NRK{0}E محافظت شده ازآسیب ناشی از اگزالات. بر اساس نقش محوری TRPV5 در تنظیم انتقال کلسیم به داخلسلول های لوله ای کلیه، ما ابتدا بیان بیش از حد TRPV5 را در سلول های NRK{1}}E انجام دادیم. همانطور که در شکل 1(a) نشان داده شده است، افزایش قابل توجهی در سطح mRNA TRPV5 توسط qRT-PCR شناسایی شد (p < 0:001). وسترن بلات همچنین سطح بالای پروتئین TRPV5 را در سلول های ترانسفکت شده اندازه گیری کرده است (شکل 1(b)، p < 0:001). پس از تیمار اگزالات در سلول‌های NRK{11}}، متوجه شدیم که بیان TRPV5 در مقایسه با گروه کنترل کاهش یافته است، که با ترانسفکت کردن پلاسمید بیان بیش از حد TRPV معکوس شد (شکل 1(c)، p <0:001). علاوه بر این، تشخیص وسترن بلات نتایج مشابهی را ارائه کرد (شکل 1(d)، p <0:001). سنجش MTT زیر نشان داد که اگزالات حضور دارد و زنده ماندن سلولی، که تا حدی پس از واژگونیبیان بیش از حد TRPV5(شکل 1(e)، p < 0:05). تشخیص چسبندگی کریستال نشان داد کهبیان بیش از حد TRPV5به طرز چشمگیری از چسبندگی CaOx ناشی از اگزالات در سلول های NRK{0}} جلوگیری کرد (شکل 1(f)).

.

شکل 6: خاموش کردن miR{1}}a-3 رسوب CaOx ناشی از EG را در بافت های کلیه در داخل بدن با فعال کردن محور UMOD/TRPV5 کاهش داد. (الف، ب) رسوب CaOx با رنگ‌آمیزی H&E در بافت کلیه موش‌های تحت درمان با EG یا EG و miR{5}}a-3 آنتاگومیر (×1{16}}{18}} اندازه‌گیری شد. بزرگنمایی، نوار مقیاس=200 میکرومتر). (ج) وسترن بلات برای اندازه‌گیری سطح پروتئین UMOD و TRPV5 در بافت‌های کلیه موش‌های تحت درمان با EG یا EG و miR{1{20}}}}a{11}} آنتاگومیر استفاده شد. اکتین به عنوان کنترل داخلی عمل می کرد. (د) تجزیه و تحلیل IHC بیان TRPV5 در بافت های گروه های مختلف انجام شد (بزرگنمایی × 100، نوار مقیاس=200 میکرومتر). ∗∗∗p <0:001 در مقابل کنترل. #p <0:05، ###p <0:001 در مقابل EG + آنتاگومیر-NC. HE: هماتوکسیلین و ائوزین EG، اتیلن گلیکول. TRPV5: کانال کاتیونی بالقوه گیرنده گذرا زیرخانواده V عضو 5. UMOD: uromodulin; NC: کنترل منفی؛ IHC: ایمونوهیستوشیمی

3.2. القای اگزالات

کاهش بیان UMOD که به طور مثبت با غنی سازی TRPV5 در سطح سلول مرتبط بود. بیان mRNA UMOD در سلول‌های NRK{2}}E القا شده با اگزالات کاهش می‌یابد (شکل 2(a)، p < 0:001)، بنابراین به عنوان سطح پروتئین آن (شکل 2(b)، p < 0:01). نتایج CoIP تأیید کرد که UMOD به طور قابل‌توجهی توسط TRPV5 دارای برچسب ضد پرچم همزمان رسوب داده می‌شود، و برعکس، TRPV5 توسط ضد UMOD رسوب می‌کند (شکل 2(c)). سپس، بیان UMOD را در سلول‌های NRK{15}} تنظیم کردیم که با qRT-PCR و وسترن بلات تأیید شد. افزایش قابل توجه بیان UMOD تعیین شده در mRNA (شکل 2(d)، p <0:001) و سطوح پروتئین (شکل 2(e)، p <0:001) نشان دهنده ترانسفکشن موفق بود. علاوه بر این، نتایج سنجش بیوتینیلاسیون سطح سلولی نشان داد که TRPV5 در سطح سلول‌های NRK{25}E که با بیان بیش از حد UMOD و TRPV5 هم ترانسفکت شده‌اند، در مقایسه با کنترل منفی آن به وفور بسیار بود (شکل 3(a)).

3.3. UMOD

نقش محافظتی TRPV5 در سلول های القا شده با اگزالات را تنظیم کرد. (شکل 3 (الف)). برای کشف اثر متقابل UMOD و TRPV5 در سلول‌های NRK{5}}E ناشی از اگزالات، ترانسفکشن siUMOD را انجام دادیم. QRT PCR مشخص کرد که mRNA UMOD در سلول‌های ترانسفکت‌شده با siUMOD در سطح پایینی بیان می‌شود (شکل 3(b)، p < 0:001)، و نتیجه مشابهی در سطح پروتئین آن با وسترن بلات اندازه گیری شد (شکل 3(c)، p < 0:001). متعاقبا، سنجش چسبندگی MTT و کریستال نشان داد که siUMOD به طور قابل توجهی اثر ارتقاء دهنده TRPV5 را بر روی زنده ماندن سلولی جبران می کند (شکل 3(d)، p <0:01) و اثر بازدارندگی TRPV5 بر چسبندگی CaOx (شکل 3(e)) در سلول های NRK{19}} القا شده توسط اگزالات. علاوه بر این، ما محتوای Ca{20}} را پس از ترانسفکشن‌های واگرا اندازه‌گیری کردیم. همانطور که نتایج در شکل 3 (f) توضیح داده شد، TRPV5 به طور قابل توجهی کاهش ناشی از اگزالات را در غلظت کلسیم داخل سلولی سلول‌های NRK{25}} مهار کرد، که تا حدی با افزودن سیمون بازسازی شد (p <0: 001).

3.4. miR-103a-3ص

UMOD هدفمند است و در تنظیم محور UMOD/TRPV5 در سلول های القا شده با اگزالات واسطه است. با کمک وب‌سایت TargetScan، نتیجه پیش‌بینی ژن نشان داد که miR-103a-3p ممکن است دارای محل‌های اتصال برای UMOD باشد (شکل 4(a)). سپس، سنجش لوسیفراز فعالیت لوسیفراز سرکوب‌شده را در سلول‌های همترانسفکت شده با miR-103a-3p mimic و UMOD WT شناسایی کرد (شکل 4(b)، p < 0:{21 }}01). برای درک تأثیر تنظیم‌کننده miR{{10}}a-3p در UMOD، مهار miR- 103a{13}}p را در NRK{14} اجرا کردیم. }سلول‌های E، با تشخیص qRT-PCR که تأیید می‌کند که بیان miR{16}}a{17}}p به شدت پس از ترانسفکشن مهارکننده miR{18}}a{19}}p به شدت کاهش یافته است. شکل 4(c)، p < 0:001). جالب توجه است که بیان mRNA UMOD پس از مهار miR{23}a-3p افزایش یافته است، که به وضوح با افزودن خاموش کردن UMOD واژگون شد (شکل 4(d)، p <0:01 ). با تشخیص وسترن بلات، تغییر بیان پروتئین UMOD مشابه تغییراتی است که در بیان mRNA UMOD رخ می دهد (شکل 4(e)، p <0:01). علاوه بر این، ما آزمایش‌های نجاتی را در مورد عملکرد سلول انجام دادیم. همانطور که نشان داده شد، نقش تنظیم کننده محور UMOD/TRPV5 در زنده ماندن سلول (شکل 5(a)، p <0:001)، چسبندگی CaOx (شکل 5(b))، و غلظت کلسیم داخل سلولی (شکل) 5(c)، p <0:01) به طرز چشمگیری توسط مهارکننده miR{40}}a-3p معکوس شد.

3.5. miR-103a-3ص

خاموش کردن رسوب CaOx ناشی از EG در بافت های کلیه در داخل بدن با فعال کردن محور UMOD/TRPV5. برای تقویت بیشتر یافته های خود در شرایط آزمایشگاهی، مدل موش هیپراکسالوریا را برای مطالعه in vivo ساختیم. همانطور که در شکل های 6(a) و 6(b) نشان داده شده است، رسوب قابل توجهی از کریستال های CaOx در بافت های کلیه گروه EG در مقایسه با گروه کنترل مشاهده شد و این روند با miR{4}}a{{{{ 5}}p سانتیاگومیر (p < 0:001). سپس، نتایج وسترن بلات نشان داد که EG به شدت سطوح پروتئین UMOD و TRPV5 را کاهش داد، که به طور قابل توجهی توسط miR{9}}a{10}} آنتاگومیر بازیابی شد (شکل 6(c)، p <0:05 ). توسط IHC، ما متوجه شدیم که بیان TRPV5 در گروه EG در مقایسه با گروه کنترل کاهش یافت و در گروه EG + آنتاگومیر در مقایسه با گروه EG + آنتاگومیر-NC تنظیم مثبت شد (شکل 6 (d)).

4. بحث

در زمینه درمان‌های جراحی متنوع و فزاینده بر علیه سنگ‌های کلیه، آنچه باید مورد تأکید قرار گیرد، در روش‌های برجسته برای جلوگیری از بروز و عود آنها نهفته است [27]. رایج ترین جزء تشکیل دهنده سنگ کلیه، کریستال های CaOx هستند. عوامل زیادی بر ایجاد سنگ‌های کلیه حاوی کلسیم تأثیر می‌گذارند که هیپرکلیکولیوری تا حد زیادی عامل خطر اصلی شناخته شده است [28]. تسوروکا و همکاران نشان داد که از طریق لوله های کلیوی، کاهش بازجذب کلسیم در القای هیپرکلسیوری مؤثر است و بازجذب فعال کلسیم را می توان با عوامل مختلفی تنظیم کرد [29]. بعدها، ورستر و همکاران. پیشنهاد کرد که سطوح کلسیم ادرار پس از غذا در بیماران مبتلا به هیپرکلسیوری در مقایسه با گروه شاهد به شدت بالاتر بود، حتی زمانی که ترشح هورمون پاراتیروئید خون و بار کلیوی در یک سطح بودند [30]. در مجموع، ذکر شده است که اختلال در بازجذب توبولار کلیوی ممکن است مهمترین دلیل هیپرکلسیوری باشد. بنابراین، این مطالعه مکانیسم مولکولی زیربنایی را که سطوح کلسیم ادراری را از منظر جذب مجدد کلسیم تنظیم می‌کند، بررسی کرد تا کانال‌های مهمی را برای پیشگیری و درمان سنگ‌های کلیه ارائه دهد.

TRPV5 به عنوان یک کانال کلسیم اپیتلیال لوله‌ای کلیوی عمل می‌کند که واسطه انتقال و بازجذب کلسیم در کلیه است [31]. جانگ و همکاران اشاره کرد که بیان پروتئین TRPV5 آشکارا در بافت‌های کلیوی موش‌های اوری هیپرکلسمی کاهش یافت، اما با تجویز هیدروکلروتیازید بازسازی شد، که نشان می‌دهد مکانیسم درمان هیدروکلروتیازید برای هیپرکلسیوری ممکن است از طریق افزایش بیان پروتئین TRPV5 در بافت‌های کلیوی به دست آید [32]. مطالعات تایید کرده‌اند که اگزالوری بالا باعث تولید گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) می‌شود، به سلول‌های اپیتلیال لوله‌های کلیوی آسیب می‌رساند و ساختار فسفاتیدیل سرین در غشای سلولی را تغییر می‌دهد و منجر به چسبندگی CaOx به سطح سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای کلیوی می‌شود [33]. در تحقیق قبلی، ما کشف کردیم که TRPV5 کاهش قابل توجهی پس از القای آسیب سلول NRK-52E توسط اگزالات ظاهر شد، که روند آن پس از ترانسفکشن بیان بیش از حد TRPV5 معکوس شد. علاوه بر این، تنظیم مثبت TRPV5 زنده‌مانی سلولی را افزایش داد و چسبندگی CaOx را در سلول‌های NRK{12}E القا شده توسط اگزا با تاخیر، مهار کرد، که نشان می‌دهد TRPV5 یک اثر پیشگیرانه حیاتی بر تشکیل سنگ CaOx ناشی از اگزالات در کلیه ایجاد می‌کند.

سیستانچ برای بهبود اگزالات کلسیم

به عنوان یک کانال اولیه برای بازجذب کلسیم، فعالیت و بیان TRPV5 می تواند توسط عوامل متعددی تنظیم شود [34]. به عنوان مثال، یک مطالعه اخیر تأیید کرد که UMOD با تحریک بازجذب Ca{3}} از طریق TRPV5 از تشکیل سنگ‌های کلیه جلوگیری می‌کند [35]. علاوه بر این، مشخص شد که 87.5 درصد از موش‌های با ناک اوت UMOD در 15 ماهگی سنگ‌های اگزالات کلسیم و فسفات کلسیم را در CNT، مدولای کلیه و پاپیلا تشکیل دادند. همه این یافته‌ها نشان می‌دهند که UMOD می‌تواند با TRPV5 در تشکیل سنگ‌های کلیه تعامل داشته باشد، که هنوز مشخص نشده است. با این حال، مطالعه ما برای اولین بار وجود تعاملی را شناسایی کرد که UMOD به طور مثبت عملکرد بیان TRPV5 را در سلول‌های NRK{11}E آسیب‌دیده با تقویت زنده‌مانی سلولی، کاهش چسبندگی CaOx، و افزایش بازجذب کلسیم تنظیم می‌کند{12} }.

miRNA ها از طریق تنظیم هدفمند mRNA ها در توسعه و پیشرفت بیماری های کلیوی نقش دارند. مشخص شد که miR{0}} با تنظیم مثبت PPARA به آسیب سلول های لوله کلیوی ناشی از اگزالات کمک می کند [36]. علاوه بر این، جیانگ و همکاران. گزارش داد که مهار miR{3}}p برای تنظیم مثبت بیان MGP می‌تواند به طور مشهودی آسیب استرس اکسیداتیو ناشی از اگزالات را در کلیه کاهش دهد [37]. با این حال، مطالعات کمی به تعیین مکانیسم تنظیم miRNA بر روی UMOD بر تشکیل سنگ کلیه اختصاص داده شده است. برای به دست آوردن بینش بیشتر در مورد پاتوژنز این بیماری، این مطالعه از تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک و سنجش لوسیفراز برای یافتن miRNA، miR{6}}a-3 که بالقوه UMOD را تنظیم می‌کند، استفاده کرد. در تحقیقات بیماری کلیوی، تایید شده است که چرخه miR{8}}a-3p تأثیر عمیقی بر التهاب و فیبروز کلیه دارد [38]. پیترز و همکاران همچنین پیشنهاد کرد که miR{11}}a{12}}p می تواند به عنوان یک نشانگر زیستی بالقوه در بیماری مزمن کلیوی در نظر گرفته شود [39]. در مطالعه خود، به طور جالبی، ما مکانیسم مولکولی miR{14}}a-3p را در سنگ کلیه تأیید کردیم که خاموش کردن miR{16}}a{17}} می‌تواند آسیب ناشی از اگزالات را در سنگ کلیه کاهش دهد. سلول های NRK{19}}با فعال کردن محور UMOD/TRPV5. علاوه بر این، ما این مکانیسم نظارتی را با شدت بیشتری از طریق آزمایش‌های in vivo در مدل‌های موش القا شده با EG ثابت کردیم. با این حال، در این مطالعه عدم توجه وجود دارد زیرا شامل یک نوع سلول و تعداد نسبتاً کمی از متغیرهای مطالعه در آزمایش‌های آزمایشگاهی است.

سیستانچ برای بهبود اگزالات کلسیم

5. نتیجه گیری

به طور کلی، مطالعه فعلی ما آشکار کرد که خاموش کردن miR{0}}a-3 رسوب CaOx را در کلیه موش صحرایی با فعال کردن محور UMOD/TRPV5 بهبود می‌بخشد، که یک پایه نظری جدید برای راهبردهای پیشگیری، تشخیص و درمان ایجاد می‌کند. نسبت به سنگ کلیه از منظر بازجذب Ca{3}}.

در دسترس بودن داده ها مجموعه داده های تجزیه و تحلیل شده تولید شده در طول مطالعه بر اساس درخواست معقول از نویسنده مربوطه در دسترس است.

تضاد منافع نویسندگان اعلام می کنند که در مورد انتشار این مقاله تضاد منافع وجود ندارد.

مراجع

[1] RE Hautmann و M. Straub, "Urinary calculi. Metabolism and Discovery," Urologe A, vol. 45، شماره 4، صفحات 181-184، 2006. [2] Z. Kirkali, R. Rasooly, RA Star, and GP Rodgers, "Urinary stone disease: progress, status, and need," Urology, vol. 86، خیر. 4، صفحات 651-653، 2015.

[3] AL Rodgers، "نژاد، قومیت و سنگ کلیه: بررسی انتقادی"، Urolithiasis، جلد. 41، شماره 2، صص 99-103، 2013.

[4] K. Sakhaee, "Recent advances in the pathophysiology of nephrolithiasis," Kidney International, vol. 75، شماره 6، صص 585-595، 2009.

[5] T. Knoll, AB Schubert, D. Fahlenkamp, ​​DB Leusmann, G. Wendt-Nordahl, and G. Schubert, "Uurolithiasis در طول اعصار: داده های بیش از 200،{3}} تجزیه و تحلیل سنگ ادراری،" مجله اورولوژی، جلد. 185، شماره 4، صفحات 1304-1311، 2011. [6] T. Mitchell, P. Kumar, T. Reddy, et al., "Dietary oxalate and stone stone," American Journal of Physiology. فیزیولوژی کلیه، ج. 316، شماره 3، صفحات F409–f413، 2019. [7] SR Khan، MS Pearle، WG Robertson، و همکاران، "سنگ کلیه"، بررسی های طبیعت. Disease Primers, vol. 2، نه 1، ص. 16008، 2016.

[8] CY Pak، HJ Heller، MS Pearle، CV Odvina، JR Poindexter، و RD Peterson، "پیشگیری از تشکیل سنگ و از دست دادن استخوان در هیپرکلسیوری جذبی با مداخلات ترکیبی رژیم غذایی و دارویی"، مجله اورولوژی، جلد. 169، شماره 2، صفحات 465-469، 2003.

[9] GC Curhan، WC Willett، EL Knight و MJ Stampfer، "عوامل رژیمی و خطر بروز سنگ کلیه در زنان جوان: مطالعه سلامت پرستاران II"، Archives of Internal Medicine، جلد. 164، شماره 8، صفحات 885-891، 2004.

[10] MC نیرومند، م. حاجیالیانی، رحیمی، و همکاران، "گیاهان رژیمی برای پیشگیری و مدیریت سنگ کلیه: شواهد پیش بالینی و بالینی و مکانیسم‌های مولکولی"، مجله International Journal of Molecular Sciences, vol. 19، شماره 3، ص. 765، 2018.