روشی موثر برای درمان فیبروز کلیه

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

بخش Ⅰ: پروتئین شبکه آندوپلاسمی TXNDC5 با اعمال سیگنالینگ TGF در فیبروبلاست های کلیه، فیبروز کلیه را تقویت می کند.

ین تینگ چن، پی یو جائو و همکاران.

مقدمه

فیبروز کلیهبا توبولو بینابینی مشخص می شودفیبروزو اسکلروز گلومرولی، یک تظاهرات پاتولوژیک شایع اکثر، اگر نه همه، انواع استمزمنکلیهبیماری ها(CKD) (1). پیشرفت ازکلیهفیبروزدر بیماران مبتلا به CKD منجر به از دست دادن تدریجیکلیهعملکرد، که در نهایت می تواند منجر به بیماری کلیوی مرحله نهایی (ESRD) شود که نیاز به دیالیز یاکلیهپیوند (2). در حالی که تعیین‌کننده‌ها و مسیرهای مولکولی متعدد نشان داده شده‌اند که به فرآیند کمک می‌کنندفیبروز کلیهفاکتور رشد بتا (TGF-) به طور کلی به عنوان تنظیم کننده اصلی فیبروژنز کلیه در نظر گرفته می شود (3). به دنبال آسیب دیدگیکلیهسلول های اپیتلیال لوله ای آسیب دیده (TECs) در فاز G2/M متوقف می شوند و مقادیر زیادی TGF- ترشح می کنند و باعث فعال شدن و تبدیل فیبروبلاست های مجاور کلیه به میوفیبروبلاست می شوند (4-6). میوفیبروبلاست‌های فعال شده که با بیان اکتین ماهیچه‌ای صاف (SMA) مشخص می‌شوند، بسیار تکثیر شونده هستند و پروتئین‌های ماتریس خارج سلولی (ECM) مانند کلاژن فیبریلار، الاستین، فیبرونکتین و CCN2 (که معمولاً به عنوان عامل رشد بافت همبند شناخته می‌شوند، تولید می‌کنند. CTGF) (7،8). در مراحل اولیه آسیب کلیه،فیبروزبه عنوان یک پاسخ فیزیولوژیکی تطبیقی ​​و خود محدود شده آغاز شد که به ترمیم بافت و حفظ یکپارچگی ساختاری کمک می کند (9). با این حال، به دنبال آسیب مزمن و مکرر کلیوی، فعال شدن و تکثیر میوفیبروبلاست‌ها ادامه می‌یابد و منجر به تولید و تجمع بیش از حد ECM می‌شود که منجر به از بین رفتن پارانشیم عملکردی کلیه و در نهایت نارسایی کلیه می‌شود (1O,11).

برای بیماری کلیوی روی Cistanche para que sirve کلیک کنید

علیرغم پیشرفت‌های پزشکی مدرن، درمان‌های بالینی معدودی در برابر آن مؤثر هستندفیبروز کلیه. برای مثال، مهارکننده‌های آنزیم مبدل آنژیوتانسین (ACEIs) و مسدودکننده‌های گیرنده آنژیوتانسین (ARBs)، نشان داده شده است که پروتئینوری را کاهش داده و بهبود می‌بخشند.کلیهفیبروز، و سرعت پیشرفت CKD را کند می کند (12،13). از سوی دیگر نشان داده شده است که پنتوکسی فیلین، یک مهارکننده غیر اختصاصی فسفودی استراز، بیان ECM و CCN2 ناشی از TGF را مهار می کند و منجر به ضعیف شدن توبولو بینابینی می شود.فیبروز(14). با این حال، استفاده از ACEI و ARB به دلیل اثرات کاهش فشار خون و عوارض جانبی احتمالی مانند هیپرکالمی محدود است. علاوه بر این، نه ACEs/ARBs و نه درمان پنتوکسی فیلین نمی توانند پیشرفت بیماری را متوقف کنند.کلیهفیبروزو CKD (15،16). بنابراین، شناسایی واسطه‌ها یا مسیرهای جدیدی که برای پاتوژنز حیاتی هستند، ضروری است.کلیهفیبروزبرای ایجاد درمان موثر در برابر CKD (بیماری های مزمن کلیه).

اخیراً، ما دامنه تیوردوکسین حاوی 5 (TXNDC5)، یک پروتئین غنی شده با فیبروبلاست مقیم ER با فعالیت آنزیمی پروتئین دی سولفید ایزومراز (PDI) را به عنوان یک واسطه حیاتی قلب شناسایی کردیم.فیبروز(17). ما نشان دادیم که TXNDC5 بیش از حد باعث پیشرفت قلب می شودفیبروزاز طریق فعال سازی فیبروبلاست قلبی وابسته به ردوکس و تولید ECM. حذف ژنتیکی Txndc5 قلب را بهبود می بخشدفیبروزو اختلال انقباضی ناشی از آگونیست در موش (17). بر اساس نقش اساسی مشاهده شده TXNDC5 در فیبروژنز میوکارد، ما فرض کردیم که TXNDC5 همچنین می تواند نقش مهمی در توسعه بافت داشته باشد.فیبروزبه ویژه در اندام های غیر قلبیفیبروز کلیه.

در مطالعه حاضر، ما نشان دادیم که TXNDC5 در کلیه‌های فیبروتیک انسان و موش، به‌ویژه در فیبروبلاست‌های کلیوی ترشح‌کننده کلاژن، به شدت تنظیم می‌شود. حذف سراسری Txndc5 به طور قابل توجهی وسعت آن را کاهش دادکلیهفیبروزدر چندین مدل موش آسیب کلیوی از نظر مکانیکی، ما نشان دادیم که TXNDC5 بیش از حد، ناشی از TGF- 1 از طریق مسیر استرس وابسته به ATF6-، افزایش می‌یابد.کلیهفیبروزبا تقویت فعال/تکثیر فیبروبلاست کلیه و تولید ECM از طریق تثبیت و تنظیم مثبت گیرنده TGF نوع I (TGFBR1). نکته مهم، ما نشان دادیم که القای حذف اختصاصی فیبروبلاست Txndc5 به طور موثر توسعه و پیشرفت بیماری را بهبود می بخشد.فیبروز کلیهناشی از انواع مختلف صدمات در موش، نشان می دهد که هدف قرار دادن TXNDC5 می تواند یک رویکرد جدید و قدرتمند برای درمان باشد.کلیهفیبروزو حفظ کنیدکلیهعملکرد.

شکل 1. TXNDC5 به طور قابل توجهی در کلیه های فیبروتیک موش و نمونه های کلیه بیماران مبتلا به CKD تنظیم مثبت شد.( بیماری های مزمن کلیه).

(الف) رنگ‌آمیزی IHC (n=3) و (B) بلات‌های ایمنی (n=6) نشان داد که بیان پروتئین TXNDC5 در کلیه‌های فیبروتیک موش ناشی از UUO یا uIRI در مقایسه با کلیه‌های طرف مقابل (CL) تنظیم مثبت شد. . نوار مقیاس: 50 میکرومتر.

(C) RT-PCR کمی نشان داد رونوشت Txndc5 در کلیه های فیبروتیک موش ناشی از UUO و uIRI تنظیم مثبت شد (n=4-7).

(D) تجزیه و تحلیل مجدد داده‌های ریزآرایه بر روی نمونه‌های کلیه انسان از بیماران مبتلا به CKD (GSE66494) نشان داد که TXNDC5، COL3A1 و FN1 به طور قابل‌توجهی در بافت‌های کلیه بیماران CKD تنظیم مثبت شدند (کنترل سالم n=8، CKD n {{{{ 6}}). برای A-C، داده ها نماینده 3 یا بیشتر تکرار تجربی مستقل هستند.

برای همه پانل ها، داده ها به صورت میانگین ± SEM ارائه می شوند. *P < {{0}}.05،="" **p=""><0.01، ***p=""><0.001 توسط="" 2-آزمون="" t="" طرفه="" (a–c)="" یا="" mann-="" تست="" ویتنی="">

نتایج

TXNDC5 به طور قابل توجهی در کلیه های فیبروتیک انسان و موش تنظیم مثبت شد. برای بررسی نقش بالقوه TXNDC5 در پاتوژنزفیبروز کلیهما ابتدا سطح بیان پروتئین آن را در بافت کلیه فیبروتیک موش ناشی از انسداد یک طرفه حالب (UUO)، آسیب ایسکمی خونرسانی مجدد یک طرفه (uIRI)، یا با تجویز اسید فولیک (FA) تعیین کردیم. مطالعات ایمونوهیستوشیمی افزایش قابل توجهی در شدت رنگ‌آمیزی TXNDC5 در بخش‌های کلیه از هر 3 مدل موش نشان داد.کلیهفیبروز(شکل 1A و شکل تکمیلی 1A؛ مطالب تکمیلی در دسترس آنلاین با این مقاله؛ https://doi.org/10.1172/JCI143645DS1). ایمونوبلات و رونویسی معکوس کمی PCR (RT-PCR) همچنین افزایش قابل توجهی در سطح بیان پروتئین (شکل 1B) و رونوشت (شکل 1C و شکل تکمیلی 1B) TXNDC5 در کلیه های فیبروتیک موش نشان داد. مطابق با این نتایج، تجزیه و تحلیل مجدد داده های ریزآرایه به دست آمده از نمونه های بیوپسی کلیه بیماران مبتلا به CKD (GSE66494) (18) نشان داد که سطح بیان TXNDC5 (2.24 برابر، P<0.001), as="" well="" as="" of="" markers="" for="">فیبروز کلیهمانند COL3A1 و FN نیز در نمونه های کلیه بیماران مبتلا به CKD در مقایسه با افراد کنترل سالم به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 1D و شکل تکمیلی 1C). روی هم رفته، دخیل مشاهده شده بیان TXNDC5/Txndc5 در کلیه های فیبروتیک انسان/موش و همبستگی مثبت آن با ژن های پروتئین فیبروژنیک ECM نشان دهنده نقش بالقوه TXNDC5 در پاتوژنز است.فیبروز کلیه.

شکل 2. TXNDC5 در فیبروبلاست های کلیوی به شدت تنظیم شد، اما نه در TECs، سلول های اندوتلیال، یا پادوسیت های کلیه های فیبروتیک.

(A و C) IF رنگ آمیزی TXNDC5 (قرمز) بر روی بخش هایی از کلیه های فیبروتیک ناشی از UUO در موش های Col1a{2}}GFPTg نشان داد که TXNDC5 عمدتاً در فیبروبلاست های کلیه ترشح کننده کلاژن (سبز) هم در قشر کلیه و هم در مدولا بیان می شود. (n=6). هسته های سلولی با DAPI (آبی) رنگ آمیزی شدند. نوار مقیاس: 100 میکرومتر

(ب) رنگ‌آمیزی IF TXNDC5 (سبز) روی بخش کلیه‌های فیبروتیک ناشی از UUO در موش‌های Cdh16-Cre، NPHS2-Cre و Tie2-Cre/ERT2 tdTomato. هسته های سلولی با DAPI (آبی) رنگ آمیزی شدند. نوار مقیاس: 100 میکرومتر

(د) نمودار دایره ای برای نشان دادن نسبت سلول های TXNDC5 به علاوه در انواع مختلف سلول های کلیه در کلیه های فیبروتیک ناشی از UUO.

داده ها نماینده 3 یا بیشتر تکرار تجربی مستقل هستند. داده ها در C به صورت میانگین ± SEM ارائه می شوند.

TXNDC5 در فیبروبلاست های کلیه ترشح کننده کلاژن در کلیه های فیبروتیک بسیار غنی شده بود. انواع مختلفی از سلول های کلیه در فرآیند فیبروژنز کلیه نقش دارند. به دنبال آسیب های کلیوی، فیبروبلاست های مقیم (19) و اطراف عروقی (20) کلیه نشان داده شد که به میوفیبروبلاست های فعال تمایز می یابند و منجر به تجمع ECM می شوند. TECs و سلول‌های اندوتلیال نیز به توسعه آن کمک می‌کنندفیبروز کلیهاز طریق انتقال اپیتلیال و اندوتلیال به مزانشیمی، به ترتیب (10،21). برای تعیین انواع سلولی که در آن TXNDC5 در طی فرآیند کلیوی بیان شد.فیبروزچندین خط موش گزارشگر که امکان برچسب‌گذاری فلورسانس فیبروبلاست‌های کلیوی را فراهم می‌کند (Colla1-GFP'، GFP هدایت‌شده توسط تقویت‌کننده/موش‌گر Collal، مرجع ۲۲)، TECs (Cdh16-Cre ROSA26- tdTomato)، سلول‌های اندوتلیال (Tie2-Cre/ERT2 ROSA26-tdTomato)، و سلول‌های پادوسیت (NPHS2-Cre ROSA26-tdTomato) در معرض UUO، uIRI یا درمان FA برای القافیبروز کلیه. رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس (IF) مقاطع کلیه از این حیوانات نشان داد که TXNDC5 به طور قابل توجهی تنظیم شده و به شدت با فیبروبلاست های کلیوی تولید کننده کلاژن GFP مثبت در کلیه های فیبروتیک موش القا شده توسط UUO (81 درصد) و C به شدت افزایش یافته است (شکل 2، A) , uIRI (76.8%) و FA (73.4%) (Supplemental Figure2, A and B). در کلیه های فیبروتیک ناشی از UUO، TXNDC5 فقط به صورت پراکنده در TECs(5.94%)، پودوسیت ها({14}}.63) بیان شد. درصد) و سلول‌های اندوتلیال (2.05 درصد) (شکل 2، B و D). آنالیز فلوسیتومتری فیبروبلاست‌های جدا شده از کلیه‌های موش تحت تأثیر UUO، گسترش قابل‌توجهی در فیبروبلاست‌های کلیه TXNDC5* و همچنین تنظیم مثبت TXNDC5 در این سلول‌ها را نشان داد. در مقایسه با کلیه های کنترل طرف مقابل (شکل تکمیلی 2C). غنی سازی قوی مشاهده شده TXNDC5 در فیبروبلاست های کلیه در فیبروتیک نشان می دهد که TXNDC5 می تواند بهفیبروز کلیهبا تنظیم فعالیت/رفتار این سلول‌های فیبروژنیک کلاژن‌ساز.

TXNDC5 برای القای فعال‌سازی، تکثیر و تولید ECM فیبروبلاست‌های کلیه ضروری و کافی بود. در مرحله بعد، نقش عملکردی TXNDC5 در فیبروبلاست های کلیه را تعیین کردیم. فیبروبلاست های اولیه کلیه انسان (HKFs) تحریک شده با TGF- 1(10 نانوگرم در میلی لیتر) در سطح بیان پروتئین (شکل 3A) و رونوشت (شکل 3B) و همچنین نشانگر فعال سازی فیبروبلاست پریوستین، دگرگونی قوی نشان دادند. و پروتئین های ECM (COL1Al، فیبرونکتین و CCN2). از بین رفتن TXNDC5 با shRNA به طور قابل‌توجهی باعث تضعیف TGF{10}پریوستین و پروتئین‌های چندگانه ECM در پروتئین‌های HKF شد (شکل 3، A و B). علاوه بر این، تیمار TGF1 فعالیت تکثیری HKFs را افزایش داد، که به طور کامل توسط ناک داون TXNDC5 لغو شد (شکل 3D). این نتایج نشان می‌دهد که TXNDC5 برای فعال‌سازی، تکثیر و تولید ECM ناشی از TGF ضروری است. از سوی دیگر، بیان بیش از حد TXNDC5 منجر به تنظیم مثبت پریوستین، COL1A1، و فیبرونکتین (شکل 3C)، و همچنین افزایش فعالیت تکثیری (شکل 3E) در HKFها شد. در مجموع، این نتایج نشان می‌دهد که TXNDC5، پایین دست TGF{23}}، برای ترویج فعال‌سازی، تکثیر و تولید ECM فیبروبلاست‌های کلیه ضروری و کافی است.

شکل 3. نابودی TXNDC5 ضعیف‌شده TGF- 1-فعال‌سازی HKF و تولید ECM ناشی از آن. بیان بیش از حد TXNDC5 برای فعال سازی HKF و تولید ECM کافی بود.

(الف) سطوح بیان پروتئین و (B) رونوشت نشانگر فعال‌سازی فیبروبلاست (پریوستین) و پروتئین‌های ECM (COL1A1، فیبرونکتین و CCN2) در HKFs کنترل (Scramble) به دنبال TGF- 1 (10 نانوگرم در میلی‌لیتر) افزایش یافت. رفتار. نابودی TXNDC5 دخیل بودن این نشانگرهای فیبروژنیک ناشی از TGF{6}} در HKFs (n=5-10) را کاهش داد.

(C) بیان بیش از حد TXNDC5 برای القای دخول نشانگر فعال سازی فیبروبلاست (Periostin) و پروتئین های ECM (COL1A1، فیبرونکتین) در HKFs (n=3-10) کافی بود.

(د) درمان TGF- 1 (10 نانوگرم در میلی‌لیتر) فعالیت تکثیر سلولی HKFs را افزایش داد که با ناک‌داون TXNDC5 لغو شد.

(E) بیان بیش از حد TXNDC5 فعالیت تکثیر سلولی HKFs را افزایش داد. در D و E، n=10. داده ها نماینده 3 یا بیشتر تکرار تجربی مستقل هستند.

برای همه پانل ها، داده ها به صورت میانگین ± SEM ارائه می شوند. معنی‌داری آماری تفاوت‌ها برای 2 گروه با استفاده از آزمون t-sided و در بین 3 گروه یا بیشتر با استفاده از روش ANOVA و سپس آزمون تعقیبی سیداک تعیین شد. *P < 0.05،="" **p="">< 0.01،="" ***p=""><>

حذف جهانی Txndc5 محافظت شده در برابر کلیه ب. برای تعیین نیاز TXNDC5 در توسعهفیبروز کلیهin vivo، WT و Tndc5-/موش‌ها تحت درمان UUO، uIRI و FA قرار گرفتند. رنگ آمیزی Picrosirius Red و Trichrom's Masson بر روی برش های کلیه گسترده بود.کلیهفیبروزدر موش‌های WT به دنبال UUO (شکل 4A)، uIRI (شکل 5A)، و تجویز FA (شکل تکمیلی 3A). حذف سراسری Txndc5 به طور قابل توجهی باعث کاهش وسعت آن شدکلیهفیبروزدر هر 3 مدل آسیب کلیه (شکل 4A، شکل 5A، و شکل تکمیلی 3A).

شکل 4. حذف فیبروز کلیه ضعیف شده Txndc5 ناشی از UUO.

(الف) رنگ‌آمیزی قرمز Picrosirius (2 پانل بالا) و رنگ‌آمیزی تری کروم ماسون (2 پانل پایین) مقاطع کلیه از موش‌های WT و Txndc5-7 10 روز پس از UUO. نمودارهای میله‌ای از نتایج کمی ناحیه رنگ‌آمیزی Picrosirius red و trichrome Masson در سمت راست نشان داده شده است (n{4}}). نوار مقیاس∶ 100 میکرومتر.

(B) تصاویر SHG از بخش های کلیه از WT و Txndc5-/موش 10 روز پس از UUO. نتایج کمی مناطق SHG مثبت افزایش تجمع کلاژن فیبریلار (سبز) را در WT اما در کلیه موش Txndc5 به دنبال آسیب نشان داد.

برای هر یک از بخش‌های کلیه تصویربرداری‌شده برای SHG، تصویربرداری TPEF برای نشان دادن مشخصات بافت اسکن‌شده (رنگ قرمز در پانل‌های پایین) (n=3) به‌دست آمد. نوار مقیاس: 50 um. (C) ایمونوبلات سطوح بیان پروتئین نشانگر فعال سازی فیبروبلاست (Periostin) و ECM (COL1A1) را در عصاره کل کلیه از WT و Txndc5-/موش 10 روز پس از UUO (n= 3-6) نشان داد. داده ها نماینده 3 یا بیشتر تکرار آزمایشی مستقل هستند.

برای همه پانل ها، داده ها به صورت میانگین ± SEM ارائه می شوند. اهمیت آماری تفاوت‌ها بین 3 یا چند گروه با استفاده از روش ANOVA و سپس آزمون تعقیبی سیداک تعیین شد.**P<><>

برای تعیین کمیت کلاژن فیبریلار بیماری زا (نوع I و II) به طور خاص و برای جلوگیری از تخمین بیش از حد نواحی فیبروتیک با روش‌های رنگ‌آمیزی سنتی، میکروسکوپ نسل دوم هارمونیک (SHG)، یک سیستم تصویربرداری بافت نوری جدید که امکان تجسم فیبریلار را فراهم می‌کند، اما نه غیر فیبریلار، کلاژن در اندام های فیبروتیک (23،24)، برای ارزیابی میزان استفاده شدفیبروزدر WT و Tndc5 به علاوه کلیه موش به دنبال آسیب. مطابق با نتایج فوق، میکروسکوپ SHG افزایش قابل توجهی را در رسوب کلاژن فیبریلار در WT کلیه به دنبال درمان UUO (شکل 4B)، uIRI (شکل 5B) و FA (شکل تکمیلی 3B) نشان داد که میزان آن در Txndc به طور قابل توجهی کاهش یافت 4}}/ موش (شکل 4B، شکل 5B، و شکل تکمیلی 3B).

مطابق با تضعیف پاسخ فیبروتیک پس از آسیب در کلیه های موش Txndc5 مشاهده شده توسط مطالعات تصویربرداری، حذف Tendc5 همچنین تنظیم مثبت ژن های پروتئین ECM، از جمله Collar، Eln، Fnl، و Ccn2 در کلیه های موش به دنبال آسیب را کاهش داد (شکل تکمیلی 3، CE). بلات‌های ایمونوبلات لیزات بافت کل کلیه نیز کاهش سطح پروتئین ECM(COLIA1) و نشانگر فعال‌سازی فیبروبلاست (پریوستین) را در Txndc5-/موش در مقایسه با موش‌های WT به دنبال UUO و uIRI نشان دادند (شکل 4C و شکل 5C).

شکل 5. حذف فیبروز کلیه بهبود یافته Txndc5 ناشی از ulRI.

(الف) رنگ‌آمیزی قرمز Picrosirius (2 پانل بالا) و رنگ‌آمیزی تری کروم ماسون (2 پانل پایین) مقاطع کلیه از موش‌های WT و Txndc5-7 28 روز پس از ulRI. نمودارهای نواری نتایج کمی Picrosirius red و trichrome Masson مناطق رنگ آمیزی در سمت راست نشان داده شده است (n=6). نوار مقیاس∶ 100 میکرومتر.

(ب) تصاویر SHG از بخش‌های کلیه از موش‌های WT و Txndc{0}28 روز پس از ulRI. نتایج کمی مناطق SHG مثبت افزایش تجمع کلاژن فیبریلار (سبز) را در WT اما در کلیه موش Txndc5 به دنبال آسیب نشان داد. برای هر یک از بخش‌های کلیه که برای SHG تصویربرداری شده‌اند، تصویربرداری TPEF برای نشان دادن مشخصات بافت اسکن شده (رنگ قرمز در پانل‌های پایین) به‌دست آمد. نوار مقیاس∶50 میکرومتر.

(C) ایمونوبلات سطوح بیان پروتئین نشانگر فعال سازی فیبروبلاست (Periostin) و ECM (COL1A1) را در عصاره کل کلیه از WT و Txndc5/موش 28 روز پس از ulRI نشان داد (n=5-9). داده ها نماینده 3 یا بیشتر تکرار تجربی مستقل هستند.

برای همه پانل ها، داده ها به صورت میانگین ± SEM ارائه می شوند. معنی‌داری آماری تفاوت‌ها بین 3 یا بیشتر گروه‌ها با استفاده از روش ANOVA و سپس آزمون تعقیبی سیداک تعیین شد.*P<><><>

برای کنار گذاشتن این احتمال که TXNDC5 در سایر انواع سلول های کلیوی مانند TECs، پودوسیت ها و سلول های اندوتلیال بیان می شود، ممکن است همچنان در توسعهکلیهفیبروزما موش‌های حذفی مشروط Txndc5 مخصوص TEC‌ها (Cdh16-cre*Txcndc5i یا Txndc5Epeko)، سلول‌های پادوسیت (NPHS{4}}cre*Txndc5/n یا Tendc5Podxko) و سلول‌های اندوتلیال (Tie{{{) تولید کردیم. 7}}cre/ERT2*Tendc5/، یا Txndc5Endo.eko). در آزمایش‌هایی با استفاده از موش‌های Txndc5Pieko و Txndc5 Poio-cko، Txndc5Wmicewe به عنوان کنترل استفاده شد. در آزمایش‌ها روی موش‌های Txndc5EMio-eko، حذف Txndc5 با استفاده از تاموکسیفن همانطور که در شکل 9A توضیح داده شد، القا شد، که در آن موش‌های Tie{20}}Cre/ERT2 تحت درمان با تاموکسیفن به‌عنوان کنترل استفاده شدند. با این حال، حذف هدفمند Txndc5 در TECs، سلول‌های پادوسیت، یا سلول‌های اندوتلیال تأثیری بر میزانفیبروز کلیهناشی از UUO یا FA (شکل تکمیلی 6، BE). این نتایج نشان می‌دهد که TXNDC5 بیان شده در TECs، سلول‌های پادوسیت و سلول‌های اندوتلیال نقش کمی در پاتوژنز بیماری دارد.کلیهفیبروز.

حذف Txndc5 در فیبروبلاست های کلیه از آپوپتوز TEC در پاسخ به آسیب کلیه محافظت می کند. در روندکلیهفیبروزTEC های آسیب دیده عملکرد میتوکندری و قطبیت آپیکوبازال را از دست می دهند و به دنبال آن آپوپتوز و مرگ سلولی رخ می دهد (30). برای بررسی اینکه آیا حذف Txndc5 بر آپوپتوز TEC ها در پاسخ به آسیب تأثیر می گذارد، ما رنگ آمیزی TUNEL را روی WT و Txndc{2}}کلیه موش انجام دادیم. بخش ها 10 روز پس از UUO. تعداد TEC های آپوپتوز به طور قابل توجهی در کلیه های فیبروتیک ناشی از UUO موش های WT افزایش یافت، در حالی که حذف Txndc5 میزان TECapoptosis را کاهش داد. گزارش شده است که فیبروبلاست های فعال کلیه می توانند آپوپتوز TEC را از طریق اثرات پاراکرین القا کنند (31). از آنجایی که Tendc5 به سختی در TEC بیان می شود، این احتمال وجود دارد که کاهش آپوپتوز TEC مشاهده شده در موش های Txndc به دنبال UUO یک اثر خودگردان سلولی نبود، بلکه ثانویه به کاهش بینابینی بود.فیبروزو از این رو سیگنال های پرواپوپتوز کمی از فیبروبلاست های کلیه اطراف آن وجود دارد. مطابق با این فرضیه، حذف خاص فیبروبلاست Txndc5 (Tendc5kO) آپوپتوز TEC را تا حدی مشابه آنچه در Txndc5-/موش مشاهده شد 10 روز پس از UUO (تکمیلی) کاهش داد. برخلاف کاهش مشاهده شده در TECapoptosis، تعداد F4/80-ماکروفاژهای مثبت و سلول‌های اندوتلیال CD{8} مثبت در کلیه‌های موش WT و Txndc، با یا بدون UUO قابل مقایسه بود، که نشان می‌دهد حذف Txndc5 بر انفیلتراسیون ماکروفاژی یا تراکم مویرگی دور لوله ای در کلیه های موش روی هم رفته، این داده‌ها نشان می‌دهند که اثرات محافظتی مجدد حذف Txndc5 ناشی از کاهش بینابینی لوله‌ای است.فیبروزو آپوپتوز TEC، بدون تأثیر بر تراکم مویرگی کلیوی یا ماکروفاژها.

حذف القایی Tendc5 در فیبروبلاست های کلیوی، پیشرفت ایجاد شده را کاهش دادفیبروز کلیه. برای تعیین اینکه آیا هدف قرار دادن Txndc5 در کلیه می تواند مفید باشدکلیهفیبروزحذف Txndc5 در فیبروبلاست های کلیوی در موش های Txndc5eko 10 روز پس از UUO القا شد، یک نقطه زمانی که گسترده بود.کلیهفیبروزقابل مشاهده است. در این آزمایش‌ها، موش‌های کولا{1}}درمان‌شده با تاموکسیفن به‌عنوان کنترل مورد استفاده قرار گرفتند. همانطور که نشان داده شده است، موش های Colla2-Cre و Tcndc5eko میزان مشابهی داشتندکلیهفیبروز10 روز پس از UUO قبل از درمان تاموکسیفن. با این حال، یازده روز پس از تزریق تاموکسیفن، میزان فیبروز کلیه در موش‌های کنترل به پیشرفت خود ادامه داد (ناحیه فیبروتیک از 5.1 درصد به 10.6 درصد افزایش یافت)، در حالی که پیشرفت بیماریکلیهفیبروزتقریباً متوقف شد (ناحیه فیبروتیک از 5.3 درصد به 6.9 درصد تغییر کرد) در موش Txndc5eko. ایمونوبلات همچنین در موش‌های Txndc5eko در مقایسه با موش‌های کنترل بین D10 و D21 پس از UUO، تنظیم مثبت CCN2، پریوستین، و TGFBR1 را به‌طور قابل‌توجهی کاهش داد. این نتایج نشان می دهد که حذف مداخله ای Txndc5 در فیبروبلاست های کلیوی به طور قابل توجهی پیشرفت بیماری را کاهش می دهد.فیبروز کلیه، نشان می دهد که هدف گیری in vivo TXNDC5 می تواند یک رویکرد درمانی جدید و قدرتمند برای بهبود باشد.کلیهفیبروزو برای کند کردن پیشرفت CKD.

برای قسمت Ⅱ اینجا را کلیک کنید