استراتژی ضد تحریک کننده علیه رتینول بر اساس تجزیه و تحلیل ژنتیکی جمعیت کره: یک رویکرد ژنتیکی هدایت شده از بالا به پایین Ⅱ

3.3. اثر ضد تحریک فرمول. آزمایشات انسانی

بر اساسمواد ضد تحریکتایید شده از آزمایش آزمایشگاهی با هدایت آنالیز ژنتیکی، ما AF را آماده کردیم (فرمول ضد تحریک) در برابر تحریک ناشی از رتینول، که شامل گلوکزامین 0.1 درصد، ترهالوز 2 درصد، اکتوئین 2 درصد، سوکرالفات 0.1 درصد، امگا-9 1 درصد، و {{8 }}t-butyl cyclohexanol 0.7 درصد با رتینول. (به عنوان یک غلظت فعال استاندارد شده است) ابتدا، ما یک مطالعه آزمایشی با هفت نفر انجام دادیم تا اثربخشی AF را به صورت کمی تأیید کنیم. هنگامی که امتیاز تحریک هر نوع تحریک برای فرد در طول دوره آزمایش جمع شد، نشان داده شد که در مقایسه با کرم رتینول کنترل، AF به طور موثر تحریک ناشی از رتینول، به ویژه پوسته پوسته شدن (66.67 درصد کاهش)، سوزش (68.42 درصد) را کاهش داد. ) و گزگز (68.97 درصد) و این بهبود علائم از نظر آماری معنی دار بود (شکل4آ). جالب توجه است که افراد مورد آزمایش ادعا کردند که در طول دوره آزمایش خشکی را تجربه نکرده‌اند، اگرچه بعد از 10 روز، حتی بیش از 2 هفته، پوسته پوسته شدن و خشکی قابل‌توجهی را تجربه کرده‌اند. این مشاهدات با مطالعه قبلی که ادعا می‌کرد رتینوئیک اسید پس از 9 روز درمان باعث خشکی پوست می‌شود و تا 18 روز باقی می‌ماند، مطابقت دارد با نشان دادن نرخ چرخش لایه شاخی بدن (15.8 روز) در مقایسه با دارونما (18 روز).56]

شکل 4. شماتیک و نمودارهایی که اثر تحریک کننده AF را نشان می دهد. پانل (ad) نتایج مطالعه آزمایشی کوچک (n=7) را نشان می دهد. یک نمودار شماتیک سمت چپ، برنامه آزمایش و روش و نتایج ناحیه آزمایش (نقطه قرمز) صورت را نشان می دهد که برای اندازه گیری TEWL و قرمزی پوست ارزیابی شده است. (الف) میانگین نمرات تحریکی که آزمودنی در طول دوره آزمون تجربه کرده است. (ب) امتیاز کلی تحریک در هر نقطه زمانی. امتیاز تحریک بیش از حد" به مجموع نمرات انواع تحریکات تجربه شده توسط افراد اشاره دارد. (ج) نمره کل تحریک افراد. مجموع نمرات برای هر نوع تحریک تجربه شده توسط فرد در طول دوره آزمون به طور میانگین محاسبه شد. نمرات کلی "در هر نقطه زمانی خلاصه شد. (د) قرمزی پوست و از دست دادن آب ترانس اپیدرمی (IEWL) اندازه گیری شده با کرومومتر و توامته. نسبت های افزایش یافته (درصد) برای افراد به طور متوسط ​​محاسبه شد، (ه) میزان وقوع تحریک ناشی از رتینول. از افراد مورد آزمایش بر اساس پنج معیار موضوع خود، یک سوال دوگانه پرسیده شد، اینکه آیا کرم مبتنی بر رتینول تحریک‌کننده است یا خیر. برای بررسی معنی داری آماری آزمون کای دو انجام شد. (p-value: 2.17906E-10): * p-value < 0.05** p-value< 0.001, AF,فرمول ضد تحریک در برابر تحریکات ناشی از رتینول; نوارهای خطا نشان داده شده است.

یک ماده ضد تحریک دریافت کنیدمواد آرایشی Cistanche

سپس، امتیاز کلی تحریک در طول زمان مورد بررسی قرار گرفت (شکل 4b). همانطور که انتظار می رود، سوزش در عرض چند دقیقه پس از استفاده از کرم رتینول مشاهده شد و پس از چند ساعت کاهش یافت. ما متوجه شدیم که AF ما به طور موثری تحریک را کاهش می دهد، به خصوص پس از استفاده سوم از کرم. در حالی که سطح تحریک حتی پس از توقف استفاده از کرم رتینول افزایش یافت، اثر ضد تحریک AF باقی ماند و تحریک ناشی از رتینول را پس از عمل کاهش داد. در مجموع، AF نمره کل تحریک افراد را در طول دوره آزمایش تا 58.3 درصد کاهش داد (شکل 4c).

در روز هفتم، TEWL و قرمزی را اندازه گیری کردیم (شکل 4d). AF هم افزایش TEWL و هم قرمزی ناشی از رتینول را کاهش داد. میانگین افزایش قرمزی (a*) برای AF 8.31 درصد و برای کنترل 8.31 درصد بود. قرمزی پوست، یکی از ویژگی های بالینی اتساع عروق پوستی، نشانگر التهاب است [57]. مطالعات قبلی نشان داده‌اند که رتینوئیدها باعث ایجاد التهاب پوستی می‌شوند که با انتشار MCP{7}} و IL-8 از فیبروبلاست‌ها انجام می‌شود. قابل توجه است که همانطور که در بخش قبل نشان داده شد، رتینول ماکروفاژها را فعال می کند (بیان بیش از حد IL{9}}R) که محرک اصلی اتساع عروق پوستی است [9].

در تجزیه و تحلیل TEWL، کرم رتینول مبتنی بر AF TEWL را 19.07 درصد برای افراد مورد آزمایش به صورت جداگانه افزایش داد، در حالی که کرم رتینول کنترل TEWL را 42.54 درصد افزایش داد. این مشاهدات بالینی مشابه گزارش قبلی است که نشان می دهد رتینوئیدها به طور موقت باعث افزایش TEWL در داخل بدن در موش و انسان می شوند [42،58]. اگرچه اهمیت آماری پایین بود، اما اثر کاهشی AF بر افزایش TEWL و قرمزی ممکن است مورد انتظار باشد.

ما همچنین آستانه فشار-درد را با استفاده از یک الگومتر با نوک با شعاع 1 میلی متر اندازه گیری کردیم (شکل S2، به مواد تکمیلی مراجعه کنید). پوست حساس بیماران پسوریازیس در مقایسه با افراد عادی، آستانه فشار-درد کاهش یافته را نشان می‌دهد [59]. تفاوت در مقادیر آستانه افراد قبل و بعد از درمان با کرم رتینول به طور میانگین محاسبه شد. مشاهده شد که رتینول آستانه فشار-درد (PPT) را کاهش داد، و AF کاهش PPT را به طور قابل توجهی در مقایسه با شاهد افزایش داد. به نظر می رسد که با واسطه اثرات ضد التهابی و آنتاگونیستی AF بر TRPV1 باشد. مطالعات قبلی نشان داده اند که التهاب نوروژنیک ارتباط زیادی با حساسیت مکانیکی گیرنده های درد پوستی دارد [60]، و موش هایی که فاقد TRPV1 عملکردی هستند، پردردی مکانیکی را نسبت به محرک های مکانیکی مضر تضعیف می کنند [61]. یک مطالعه بالینی انسانی همچنین نشان داد که یک آنتاگونیست TRPV1 (V116517) به طور قابل توجهی PPT پوست را تحت شرایط مختلف افزایش می دهد [62].

برای تأیید اثر ضد تحریکی AF در گروه مستقل، ما تمام افراد انسانی را که شامل 44 مرد و 47 زن با سنین بین 27 تا 50 سال بودند، با هم گروه بندی کردیم. از آزمودنی‌های آزمایش بر اساس معیارهای ذهنی خود، یک سؤال دوگانه پرسیده شد، اینکه آیا کرم مبتنی بر رتینول تحریک‌کننده است یا خیر. این نسبت پاسخ با اولین ارزیابی بالینی در مقیاس بزرگ از 173 فردی که از کرم رتینول معمولی برای بدست آوردن اثر ضد تحریک کننده AF استفاده کرده بودند، مقایسه شد. میزان وقوع تحریک ناشی از رتینول محاسبه و مقایسه شد (شکل 4e).

در گروهی که از کرم رتینول معمولی استفاده کرده بودند، میزان بروز 64.43 درصد مشاهده شد، در حالی که در گروهی که از کرم AF-retinol استفاده کرده بودند، نرخ بروز تنها 21.35 درصد مشاهده شد که نشان دهنده کاهش 65.80 درصدی بود.

3.4. مدل پیش‌بینی خطر چند ژنی برای تحریک ناشی از رتینول

از آنجایی که ضد محرک‌ها در AF از ژن‌های مرتبط غربال‌گری شدند، ما یک مدل پیش‌بینی خطر چند ژنی برای ارزیابی اثر ژنتیکی تجمعی تحریک ناشی از رتینول در مکان‌های متعدد ایجاد کردیم. یک مدل پیش‌بینی خطر چند ژنی با استفاده از 26 SNP مهم که پس از تجزیه و تحلیل LD بر اساس |D'| انتخاب شدند، ساخته شد. و مقادیر r2 (ضرایب برای درجه ای که یک آلل یک SNP به ارث می رسد یا با آلل SNP دیگر همبستگی دارد) بین SNP ها.

Then, the risk scores of all 159 samples were visualized. The test subjects of the second large-scale clinical test were arbitrarily categorized into three groups: high (>75، 31 نفر)، متوسط ​​(65-75، 33 نفر) و امتیاز کم خطر (<65, 27 individuals) (Figure S3, see Supplementary Materials). As characteristics of retinol-induced irritation in each group, the high-risk score group exhibited dryness and desquamation after the last third treatment of retinol compared to the other groups (Figure S4, see Supplementary Materials). This result supports our hypothesis that skin barrier disruption with increased TEWL plays an important role in retinoid-induced irritation, as SLS exhibited similar clinical features and anatomical changes [63].

همانطور که در شکل 5 الف نشان داده شده است، گروهی که دارای امتیاز پرخطر بودند، شامل بیشترین شرکت کنندگان با تجربه تحریک در بین سایر گروه ها بود. "خارش" غالب ترین نوع تحریک برای گروه امتیاز پرخطر در مقایسه با سایر گروه ها بود. شرکت‌کنندگان در گروه امتیاز پرخطر اغلب در روز اول درمان با رتینول خارش را تجربه کردند و درجه خارش به تدریج در طول زمان کاهش یافت. به نظر می‌رسید که گروه امتیاز پرخطر علائمی شبیه آلرژی مربوط به هیستامین و سیستم‌های واسطه سلول ماست را تجربه می‌کردند (شکل S4، به مواد تکمیلی مراجعه کنید).

Figure 5. Bar plots illustrating polygenic risk score model and validation. 3300 IU retinol cream with AF to 91 individuals lest subjects were categorized into three groups: high-risk score (>75، 31 نفر)، امتیاز خطر متوسط ​​(65-75، 33 نفر) و امتیاز کم خطر (<65,27 individuals) (a) irritation score of each type of irritation for three risk score groups. The scores for types of irritation of individuals during the test period were summed and averaged by risk score groups. (b) The total score during the test period. (c) Comparison of the occurrence rate of irritation in each risk-score group. The dichotomous question of whether retinol cream is irritant: Y/N was asked to test subjects. In the first clinical evaluation, retinol without AF was given. Retinol with AF was given in the second clinical evaluation.

مجموع نمره در طول دوره آزمون برای گروه های با خطر کم، متوسط ​​و پرخطر به ترتیب 6.370 و 10.161 محاسبه شد (شکل 5b). اثربخشی AF با توجه به مدل امتیاز ریسک چند ژنی مورد بررسی قرار گرفت.

نتایج نشان داد که AF تحریک ناشی از رتینول را کاهش می‌دهد و اثربخشی را می‌توان با استفاده از مدل امتیاز ریسک چند ژنی پیش‌بینی کرد (شکل 5c).

در نتیجه، این نتایج تجربی و مشاهدات نه تنها اثر ضد تحریکی AF را نشان می‌دهند، بلکه نشان می‌دهند که پیشنهاد دوز مناسب از رتینول با تخمین حساسیت به تحریک ناشی از رتینول بر اساس اطلاعات ژنتیکی فردی قابل اجرا است، که در نهایت می‌تواند از نظر ژنتیکی پیشنهاد دهد. بهینه ترین پروتکل استفاده برای بیمارانی که انطباق بالاتری دارند.

3.5. بررسی بیشتر؛ تحریک حاد در مقابل مزمن؟

همانطور که قبلا ذکر شد، واکنش های آلرژیک مانند، که شامل سوزش و سوزش سریع، خارش و ادم و بثورات منتشر سریع در افراد حساس به رتینول است، مشاهده شد. این واکنش‌ها، که در عرض چند دقیقه، گاهی اوقات حتی چند ثانیه رخ داده‌اند، نمی‌توانند با مطالعات مکانیکی رتینوئید قبلی که عمدتاً بر تولید سیتوکین توسط کراتینوسیت‌ها یا فیبروبلاست‌ها متمرکز شده‌اند، یا سیستم ایمنی که در آن سلول‌های T، متمرکز شده‌اند، به وضوح توضیح دهند. سلول های B یا فعال سازی مکمل عمدتاً درگیر هستند. اگرچه غیرقابل انکار است که اختلال در سد پوستی علت اصلی تحریک است، اما به طور کامل تحریک حاد را که به سرعت رخ می دهد توضیح نمی دهد.

در اولین ارزیابی بالینی مشاهده شد که حدود 5 درصد از آزمودنی ها واکنش های خشن و شدید فوق الذکر را تجربه کرده و از آزمون حذف شدند. با این حال، تحقیقات دقیقی در مورد عدم تحمل رتینوئیدها بسته به نژاد، جنس یا سن انجام نشده است و گزارش شده است که جمعیت آسیایی بیشتر مستعد این واکنش ها هستند، که ضرورت در نظر گرفتن تحریک سریع تحریک شده را ضروری می کند. توسعه بیشتر محصولات مبتنی بر رتینوئید نتایج آزمایش انسانی ما نشان می‌دهد که التهاب نوروژنیک یا یک مکانیسم سریع مشابه نیز در تحریک ناشی از رتینول دخیل است. احساس سوزش و گزگز به طور غالب در هر درمان با رتینول در عرض چند دقیقه در هر سه گروه مشاهده شد و به مرور زمان سرکوب شد.

در اینجا، اینها برخی از نکاتی است که جای تأمل دارد.

1. همانطور که قبلاً گزارش شد، رتینول ممکن است به رتینالدئید (رتینال) و اسید رتینوئیک تبدیل شود تا فراهمی زیستی داشته باشد که در آن اتصال RAR یا RXR درگیر است.

2. با این حال، هموستاز رتینوئیدها در پوست به شدت کنترل می شود [64]، و به طور متناقضی، به طور تجربی ثابت نشده است که رتینول در شرایط آزمایشگاهی و خارج از بدن به رتینوئیک اسید تبدیل می شود [65،66].

3. تحت درمان با رتینول، فیبروبلاست ها یا کراتینوسیت ها با تولید IL-1 یا IL-6 از طریق تعامل بین RAR و رتینوئیک اسید، سیستم ایمنی پوستی اطراف را به سرعت در عرض چند دقیقه فعال می کنند. باید تبدیل شود.

بر اساس این ملاحظات، منطقی تر به نظر می رسد که تحریک حاد در عرض چند دقیقه ممکن است توسط سیستم هیستامین-مست سل یا التهاب نوروژنیک به سرعت ایجاد شود، که متعاقباً باعث التهاب گسترده و فراگیر می شود و منجر به تحریک طولانی مدت می شود.

4. نتیجه گیری