اثرات آنتی اکسیدانی و سفید کننده پوست قسمت هوایی Euphorbia Supina Raf. استخراج کردن

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

سا-هنگ کانگ1، یونگ-دئوک جئون2، جی-یون چا1، سونگ-وو هوانگ1، هون-یون لی1، مین پارک1، بو-ری لی1، مین-کیونگ شین2، سو-جونگ کیم3، سانگ-مین شین3، دائ- Ki Kim4، Jong-Sik Jin2* و Young-Mi Lee1

خلاصه

زمینه: Euphorbia Supina(ES) به دلیل خواص ضد باکتریایی، هموستاتیک و ضد التهابی آن به طور گسترده در طب عامیانه استفاده شده است. هدف از این مطالعه بررسی اثرات آنتی اکسیدانی و سفید کننده پوست عصاره اتانولی 70 درصد ES بود.

مواد و روش ها:قسمت های هوایی ازESگیاه با اتانول 70 درصد استخراج شد. زنده ماندن سلول های B16F10 با استفاده از روش MTT برای تعیین دوزهای غیر سمی برای آزمایش های بیشتر مورد ارزیابی قرار گرفت. راتیروزینازو فعالیت تیروزیناز سلولی با استفاده از روش آنزیم سوبسترا اندازه گیری شد. علاوه بر این، بیان پروتئین های مرتبط با سفید کننده با استفاده از وسترن بلات اندازه گیری شد.

نتایج:فعالیت آنتی اکسیدانی نمونه های ES به روشی وابسته به دوز افزایش یافته است، همانطور که توسط فعالیت های مهار رادیکال آنها در 2،2-دی فنیل-1-1-پیکریل هیدرازیل و 2،2-آزینو-بیس-( سنجش 3-اتیل بنزتیازولین-6-سولفونیکاسید. راESعصاره به طور قابل توجهی کاهش می یابدتیروزینازفعالیت و محتوای ملانین به صورت وابسته به دوز. علاوه بر این، بیان پروتئین تیروزیناز ناشی از هورمون محرک ملانوسیت (MSH) و فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا (MITF) را کاهش داد.

نتیجه گیری:نتایج ما نشان می دهد کهESعصاره ضعیف شده-MSHسنتز ملانین را با تعدیل تحریک می کندتیروزینازو بیان MITF. بنابراین، عصاره ES می تواند یک عامل درمانی امیدوارکننده برای درمان پرپیگمانتاسیون و به عنوان یک عنصر برای لوازم آرایشی سفید کننده پوست باشد.

کلید واژه ها: Euphorbia Supina(ES)، DPPH، ملانوژنز،تیروزینازMITF،-MSH

سیستانچ یک مهارکننده طبیعی تیروزیناز است

زمینه

ملانین یک رنگدانه اصلی است که رنگ پوست و مو را کنترل می کند. این یک ترکیب با وزن مولکولی بالا است که به طور گسترده در حیوانات و گیاهان توزیع شده است [1]. ملانین از پوست در برابر اشعه ماوراء بنفش محافظت می کند. با این حال، هنگامی که بیش از حد تولید می شود، رنگدانه در پوست جمع می شود و لکه ها و کک و مک ایجاد می کند و این ضایعات ممکن است باعث سرطان پوست شوند [2]. بنابراین، برای جلوگیری از افزایش بیش از حد رنگدانه پوست، باید از تولید ملانین جلوگیری کرد [3]. ملانوسیت ها در لایه پایه اپیدرم قرار دارند و توسط آن کنترل می شوندتیروزیناز، ملانین را از طریق ملانوژنز تولید می کند و حاوی آنزیم هایی مانند پروتئین مربوط به تیروزیناز-1 (TRP-1) و دوپاکرومتائوتومراز (DCT) است [4]. تیروزیناز 3،{5}}دی هیدروکسی فنیل آلانین (DOPA) تشکیل کینون را از DOPA، و تشکیل ملانین از کینون DOPA را از طریق اکسیداسیون و واکنش های آنزیمی کاتالیز می کند [5]. بنابراین، تولید ملانین با بیان تیروزیناز و فعال شدن TRP مرتبط است. بنابراین، ما بررسی کردیم که آیاEuphorbia Supina(ES) می تواند بر رابطه بین تیروزیناز و ملانین تأثیر بگذارد.

تیروزینازفعالیت در مطالعات سفیدکننده پوست مهم است [6]. از مواد شیمیایی و عصاره‌های گیاهی مختلف مانند اسکوژیک اسید، آربوتین، ویتامین C و هیدروکینون در لوازم آرایشی سفیدکننده پوست استفاده می‌شود. با این حال، استفاده از آنها به دلیل عوارض جانبی آنها مانند تغییر رنگ، بو و سمیت سلولی محدود شده است [7]. بنابراین، مطالعات اخیر بر توسعه مواد سفید کننده پوست از محصولات طبیعی ایمن برای پوست متمرکز شده است.

در این مطالعه،ESبرای ایجاد یک ترکیب ایمن با اثرات آنتی اکسیدانی و سفید کننده پوست استفاده شد. ES یک گیاه علفی یکساله است و به طور گسترده در فرمولاسیون های گیاهی سنتی استفاده می شود. به طور گسترده در مناطق معتدل و گرمسیری مانند کره، چین و ژاپن توزیع می شود. در طب عامیانه در برابر انواع اختلالات التهابی استفاده می شود [8، 9]. مطالعات متمرکز بر اجزای ES مانند تانن ها [10، 11]، مواد فنلی و فلاونوئیدها [12، 13] و ترپنوئیدها [14، 15] گزارش شده است. علاوه بر این، اثر ضد سرطانی in vitro در متاستاز سرطان سینه [16]، و فعالیت آنتی اکسیدانی مخلوط های فنلی ES گزارش شده است [17]. سنجش }}پیکریل هیدرازیل (DPPH) و 2,2'-azino-bis-3-اتیل بنزتیازولین-6-سولفونیک اسید (ABTS) و اثرات سفیدکننده پوست عصاره‌های ES بر روی ملانومسل‌ها شناخته نشده است. بنابراین، هدف از این مطالعه تعیین اثرات آنتی اکسیدانی و سفیدکننده پوست ES در شرایط آزمایشگاهی و تایید کارایی آن به عنوان یک عامل جدید سفید کننده پوست بود.

مواد و روش ها

تهیه عصاره ES

ESتوسط شرکت داروسازی Wonkwang (Iksan، Jeonbuk، کره) ارائه شد. اندام هوایی (ساقه و برگ) ES (250 گرم) با اتانول 70 درصد در دمای 70 درجه به مدت 2 ساعت جوشانده شد. پس از فیلتراسیون، باقیمانده مجدداً مانند آنچه در بالا توضیح داده شد، دو بار جوشانده شد. فیلترهای ترکیبی در دمای 45 درجه تبخیر و لیوفیلیز شدند تا عصاره خام با بازده 60 گرم (24 درصد) بدست آید. عصاره قبل از آزمایش 4 درجه نگهداری شد. یک نمونه کوپن (JUHES-1660) ​​در بخش منابع پزشکی شرقی، دانشگاه ملی Chonbuk (ایکسان، کره) سپرده شده است.

عصاره سیستانچ

کشت سلولی

سلول های ملانوم موشی B16F10 (CRL-6475) از مجموعه فرهنگ نوع آمریکایی (ATCC؛ Manassas، VA، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. سلول ها در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM) حاوی 2 میلی مولار گلوتامین، مکمل با 10 درصد سرم جنین گاو (FBS)، 100 واحد در میلی لیتر پنی سیلین و 100 میکروگرم در میلی لیتر استرپتومایسین در فلاسک های کشت با داخل یک CO2 کشت داده شدند. اتمسفر مرطوب 5 درصد CO2 در هوای 37 درجه. تمام آزمایش ها در سه تکرار انجام شد و سه بار تکرار شد تا از تکرارپذیری اطمینان حاصل شود.

سنجش بقای سلولی

برای ارزیابی ایمنیESعصاره، یک روش MTT برای تعیین زنده ماندن سلول ها پس از درمان با عصاره انجام شد. این روش بر اساس احیای 3-(4,5-دی متیل تیازول-2-ایل)-2،5-دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT) به آنزیم‌های میتوکندری فرمازان بود. اکسیدوردوکتاز سلولی وابسته به NAD(P)H) در سلول های زنده [18]. به طور خلاصه، سلول‌های B16F10 (1 × 104 سلول در چاهک) با غلظت‌های مختلف عصاره ES (8، 40، 200 میکروگرم در میلی‌لیتر) در یک میکروپلیت 96-چاهی به مدت 24 ساعت انکوبه شدند. سپس محلول MTT (500 ug/mL) به هر چاهک اضافه شد و پلیت به مدت 8 ساعت در دمای 37 درجه انکوبه شد. بلورهای فورمازان تولید شده توسط سلول های زنده در 600 میکرولیتر DMSO حل شدند. جذب هر چاه در طول موج 540 نانومتر بر روی دستگاه ریز صفحه خوان Versa Max (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA) اندازه گیری شد.

فعالیت های آنتی اکسیدانی

فعالیت مهار رادیکال DPPH با توجه به روشی که در [19] توضیح داده شده با تغییرات جزئی ارزیابی شد. غلظت های مختلف (8، 40، 200 میکروگرم در میلی لیتر) ازESعصاره یا 2{3}} میکروگرم در میلی‌لیتر اسید اسکوربیک (کنترل غیرفعال استفاده شده) در 500 میکرولیتر به 1 میلی‌لیتر محلول 0.1 میلی‌مولار DPPH اضافه شد. واکنش به مدت 30 دقیقه در تاریکی در دمای اتاق (RT) پس از گرداب قرار داده شد. میزان جذب در 517 نانومتر بر روی میکروپلیت ریدر VersaMax اندازه گیری شد. ما آزمایشی را برای تأیید میزان کاهش رادیکال‌ها توسط اثر اهدای الکترون با توجه به فعالیت مهار رادیکال ABTS انجام دادیم[20]. پس از تشکیل رادیکال، محلولی از 7.4 mMABTS و 2.6 میلی مولار پرسولفات پتاسیم اضافه شد و مخلوط حاصل به مدت 12 ساعت atRT اجازه واکنش نشان داد. محلول ABTS اندازه گیری شد و جذب 0.03 ± 0.70 (میانگین ± SD) را نشان داد که با استفاده از دستگاه آمیکروپلیت خوان اندازه گیری شد. عصاره ES (100 میکرولیتر) به 900 میکرولیتر محلول ABTS اضافه شد و به مدت 10 دقیقه در RT اجازه واکنش نشان داد. جذب مخلوط محلول 200 میکرولیتری در 732 نانومتر با استفاده از میکروپلیت خوان اندازه گیری شد.

اندازه گیری محتوای ملانین

محتوای ملانین پس از افزودن تغییرات جزئی به پروتکل توصیف شده قبلی اندازه گیری شد [21]. سلول‌های ملانوما B16F10 در 105×1 سلول در چاهک 3 میلی‌لیتر محیط کشت در 6-صفحه‌های کشت چاهک کاشته شدند و یک شبه انکوبه شدند تا سلول‌ها بتوانند بچسبند. سلول ها در معرض غلظت های مختلف (8، 40، 200 میکروگرم بر میلی لیتر) ازESعصاره یا 10 میلی مولار آربوتین به مدت 72 ساعت در حضور یا عدم حضور 100 نانومولار هورمون محرک ملانوسیت (-MSH؛ Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). در پایان درمان، سلول ها با PBS شسته شدند. (pH 7.2) و با 300 میکرولیتر NaOH 1 مولار حاوی 10 درصد DMSO به مدت 2 ساعت در دمای 80 درجه لیز شد. جذب مخلوط 200 میکرولیتری در طول موج 400 نانومتر با استفاده از دستگاه amicroplate reader اندازه گیری شد.

تعیین فعالیت تیروزیناز سلولی

سلولیتیروزینازفعالیت طبق روشی که قبلا توسط لی و همکارانش توضیح داده شده بود اندازه گیری شد. [22] با برخی تغییرات. صفحات شش چاهی حاوی 2 میلی لیتر DMEM با سلول های ملانوما B16F10 در تراکم 105 × 1 سلول در چاه کاشته شدند. هر چاه به 6 گروه مختلف به شرح زیر جدا شد. وسیله نقلیه: بدون درمان، کنترل: 100 نانومتر از -MSH، ESEE 8: -MSH و عصاره ES (8 میکروگرم در میلی لیتر)، ESEE 40: -MSH و عصاره ES (40 میکروگرم در میلی لیتر)، ESEE200: -MSH و ES عصاره (200 میکروگرم در میلی لیتر)، آربوتین:-MSHو آربوتین (10 میلی مولار). پلیت ها به مدت یک شب در انکوباتور مرطوب شده در دمای 37 درجه با اتمسفر 5 درصد CO2 انکوبه شدند تا سلول ها بتوانند بچسبند. سپس سلول ها به مدت 48 ساعت در معرض 100 نانومولار -MSH قرار گرفتند و سپس با دوزهای افزایش یافته درمان شدند.ESعصاره یا آربوتین به مدت 24 ساعت. سلول ها با PBS (pH 6.8) شسته و مجدداً در بافر لیز معلق شدند. سپس سلول‌ها با انجماد و ذوب پاره شدند و لیزات با سانتریفیوژ در 16،{5}} گرم به مدت 2{12}} دقیقه شفاف شد. محتوای پروتئین lysate با استفاده از BCA Protein AssayKit (Thermo Scientific، Vantaa، فنلاند) تعیین شد. پس از کمی سازی سطح پروتئین، غلظت ها به گونه ای تنظیم شد که تمام نمونه ها حاوی مقدار یکسان پروتئین (20 میکروگرم) باشند. سپس این لیزات ها به چاهک های یک صفحه چاه حاوی 2.5 میلی مولار L-DOPA در بافر فسفات 0.1 مولار (PH 6.8) اضافه شدند. پس از انکوباسیون در دمای 37 درجه به مدت 1 ساعت، جذب لیزهای مختلف با استفاده از اسپکتروفتومتر 475 نانومتر اندازه‌گیری شد.تیروزینازفعالیت پروتئین با فرمول زیر محاسبه شد:

فعالیت تیروزیناز (درصد)=（ODs−ODb）/ کنترل * 100

ODs: مقدار جذب نمونه

ODb: مقدار جذب خودرو

فعالیت تیروزیناز قارچ

L-DOPA به عنوان بستر برای اندازه گیری قارچ استفاده شدتیروزینازفعالیت. بافر واکنش (مجموعاً 3 میلی‌لیتر) مورد استفاده در آزمایش حاوی 2.8 میلی‌لیتر{3}}.5 میلی‌مولار L-DOPA در بافر 50 میلی‌مولار Na2HPO{8}}NaH2PO4 (pH 6.8) و 100 میکرولیتر از غلظت‌های مختلفESمحلول آبی تیروزیناز قارچ (100 میکرولیتر) به بافر مخلوط اضافه شد. محلول (200 میکرولیتر) بلافاصله برای افزایش خطی جذب نوری در 475 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان ارزیابی شد.

تجزیه و تحلیل وسترن بلات

سلول های ملانوما B16F10 (1 × 106 سلول در چاه) در ظروف 60- میلی متر مربع کشت شدند. سپس سلول ها با غلظت های مختلف (8، 40، 200 میکروگرم در میلی لیتر) تیمار شدند.ESاستخراج و 1{14}} میلی مولار آربوتین به مدت 24 ساعت. سپس سلول‌ها در بافری حاوی 5{25}} میلی‌مولار Tris-HCl با pH 7.4، 2 میلی‌مولار EGTA، 1 میلی‌مولار فنیل متیل سولفونیل فلوراید، 10 میلی‌مولار - گلیسروفسفات، 10 میلی‌مولار - مرکاپتو اتانول، 1 میلی‌مولار سدیم دی‌اکسی‌لیک و اورتوکسی 1 درصد تجزیه شدند. نمک سدیم اسیدی لیزات (25 میکروگرم) با 10 درصد الکتروفورز ژل SDS-پلی آکریل آمید تجزیه و به صورت الکتروفورز به غشاهای پلی وینیلیدین فلوراید منتقل شدند و یک شبه با 5 درصد شیر بدون چربی در بافر TBST (20 میلی مولار Tris-HCl pH 7.4، 100 میلی مولار T, 100 میلی‌مولار با pH 7.4 و 100 میلی‌مولار NaC) مسدود شدند. 20) در 4 درجه. پس از شستشوی غشاها در بافر TBST، به مدت 3 ساعت با آنتی بادی اولیه انکوبه شدند.تیروزینازپس از انکوباسیون با آنتی بادی ثانویه (نسبت 1:1000) به مدت 1 ساعت در RT، کمپلکس های پروتئین-آنتی بادی با ECL Western blotting Luminol Reagent (Santa Cruz Biotech, CA) مشاهده شد. ، ایالات متحده آمریکا)، و با استفاده از تحلیلگر تصویر Fluorchem E (Cell Biosciences, CA, USA) شناسایی شد.

تجزیه و تحلیل GC-MS

نمونه عصاره اتانولی با خلاء سرعت خشک شد و با N، O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (BSTFA) مشتق شد (Sigma Aldrich, St. Louis, MO, USA). تجزیه و تحلیل GC-MS با استفاده از یک کروماتوگرافی گازی QP201{17}} همراه با یک طیف سنج جرمی (Shimadzu) در ولتاژ یونیزاسیون 70 eV انجام شد. GCanalysis در یک حالت برنامه‌ریزی دما با ستون Restek (0.25 میلی‌متر، 30 متر؛ XTI{8}}) ​​انجام شد. دمای ستون اولیه به مدت 3 دقیقه روی 70 درجه تنظیم شد و به صورت خطی در 10 درجه در دقیقه به 300 درجه افزایش یافت. و سپس به مدت 5 دقیقه نگه دارید. دمای پورت تزریق 280 درجه بود و رابط GC/MS در دمای 290 درجه نگهداری می شد. نرخ جریان گاز حامل هلیوم 1.0 میلی لیتر در دقیقه بود.

تحلیل آماری

داده های مربوط به سنتز ملانین، سمیت سلولی وتیروزینازسنجش فعالیت با استفاده از آنالیز واریانس و سپس آزمون دانت مورد ارزیابی آماری قرار گرفت. داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار ارائه می شوند. مقدار AP < 0.05="" نشان="" دهنده="" اهمیت="" آماری="">

نتایج

اثر عصاره ES بر زنده ماندن سلول B16F10

از روش MTT برای ارزیابی اثر استفاده شدES70 درصد عصاره اتانولی بر زنده ماندن سلول های ملانوما B16F10. سلول ها با غلظت های مختلف عصاره (8، 40، 200 میکروگرم در میلی لیتر) به مدت 24 ساعت تیمار شدند و سپس سنجش MTT انجام شد. نتایج به عنوان درصد زنده ماندن نسبت به شاهد بیان می شود. عصاره TheES یک اثر غیر سیتوتوکسیک بر تکثیر سلولی B16F10 داشت (شکل 1). با این حال، در غلظت 1000 میکروگرم بر میلی‌لیتر، سمیت سلولی واضح در سلول‌های B16F10 مشاهده شد (داده‌ها نشان داده نشده است).

ظرفیت آنتی اکسیدانی عصاره ES

برای اندازه گیری فعالیت آنتی اکسیدانی عصاره ES از سنجش DPPH و ABTS استفاده شد. برای اندازه گیری فعالیت مهار رادیکال DPPH عصاره ES، از غلظت های مختلف عصاره ES (8، 40، 200 میکروگرم بر میلی لیتر) استفاده شد. فعالیت مهار رادیکال DPPH ازESعصاره به صورت وابسته به دوز افزایش یافت. اسید اسکوربیک به عنوان یک کنترل مثبت استفاده شد و بیش از 50 درصد فعالیت مهار رادیکال DPPH را نشان داد (شکل 2a). TheABTS به علاوه فعالیت مهار رادیکال 8 و 40 میکروگرم بر میلی لیتر عصاره ES نیز به طور قابل توجهی بالا بود و نتایجی مشابه با گروه کنترل مثبت ارائه کرد. عصاره ES 0.6 ± 93.05 درصد فعالیت را در 200 ug/mL نشان داد که تقریباً مشابه اسید اسکوربیک بود (شکل 2b).

اثر عصاره ES بر فعالیت تیروزیناز قارچ، محتوای ملانین B16F10 و فعالیت تیروزیناز داخل سلولی

برای اندازه گیری اثر مهاریESعصاره بر روی فعالیت تیروزیناز قارچ، سنجش مهار تیروزیناز انجام شد. نتایج نشان داد که فعالیت تیروزیناز قارچ توسط عصاره ES در غلظت‌های بالا مهار می‌شود.تیروزینازفعالیت 1.28 ± 88.35 درصد، 2.52 ± 7{{{0}}}. 7{{{0}}.81 ± 2.52 درصد و 45.43 ± 0.48 درصد پس درمانی با 8، 40 و 200 گرم بود. / میلی لیتر از عصاره ES، به ترتیب (شکل 3a). برای بررسی خاصیت ضد ملانوژنیک عصاره ES، اثر مهاری عصاره ES بر ملانین در سلول های B16F10 مورد بررسی قرار گرفت. سلول های B16F10 با عصاره ES در غلظت های 8، 40 و 200 میکروگرم بر میلی لیتر یا با آربوتین در 10 میلی متر تیمار شدند و با -MSH (10 نانومولار) به مدت 48 ساعت تحریک شدند. عصاره ES اثر مهاری قابل توجهی وابسته به دوز بر روی سنتز ملانین نشان داد. محتوای ملانین به عنوان درصدی از وسیله نقلیه نشان داده شد. محتوای ملانین به ترتیب 0.07 ± 146.17 درصد، 0.1 ± 110 درصد و 0.39 ± 76.95 درصد بود (شکل 3b). هنگامی که سلول های B16F10 با آربوتین کنترل مثبت (10 میلی مولار) تیمار شدند، محتوای ملانین داخل سلولی 28/1 ± 82/84 درصد بود. برای تعیین مکانیسم زیربنایی اثر مهاری عصاره ES بر ملانوژنز، ما فعالیت داخل سلولی تیروزیناز را در سلول‌های ملانوما B16F10 ارزیابی کردیم. بنابراین، گروه دیگری از سلول‌های B16F10 با غلظت‌های مختلف عصاره ES (8، 40، 200 میکروگرم در میلی‌لیتر) یا آربوتین (10 میلی‌مولار) تیمار شدند و با تحریک شدند.-MSH(10 نانومتر) به مدت 48 ساعت. عصاره ES به طور قابل توجهی مهار -MSH ناشی ازتیروزینازفعالیت به صورت وابسته به دوز (شکل 3c).

اثر مهاری عصاره ES بر پروتئین های مرتبط با توملانوژنز در سلول های B16F10

برای بررسی اینکه آیاESمی تواند بر بیان پروتئین ملانوژن تأثیر بگذارد، وسترن بلات با استفاده از لیز سلول های ملانوما B16F10 تیمار شده با ES و تحریک شده با -MSH (10 میلی مولار) انجام شد. سطح بیان Tyrosinase و MITF توسط westernblot ارزیابی شد (شکل 4). ما آن را تایید کردیمتیروزینازو MITFexpression به طور قابل توجهی افزایش یافته است زمانی که سلول ها با تحریک شدند-MSH. عصاره ES قادر به سرکوب بیان استیروزیناز و MITF تحریک شده توسط -MSHin به روشی وابسته به دوز بود.

ترکیب شیمیایی ES

ترکیب شیمیایی ازESعصاره توسط GC-MS آنالیز شد (شکل 5). زمان ماند اسیدهای پروتوکاتکوئیک گالیکند، دو جزء اصلی عصاره ES، به ترتیب 810/19 و 290/18 دقیقه بود. این دو ترکیب با موفقیت در عصاره ES شناسایی شدند.

عصاره سیستانچ: برای پوست مفید است

بحث

در این مطالعه، ارزیابی کردیم که آیاESعصاره با سرکوب تولید ملانین در سلول های ملانوما B16F10 اثر سفید کنندگی پوست را نشان داد. عصاره ES فعالیت آنزیم تیروزیناز را مهار کرد، محتوای ملانین را کاهش داد و اثر آنتی اکسیدانی را نشان داد. تولید ملانین ممکن است توسط UV تحریک شود یا-MSH-MSH به MC1R متصل می شود و پروتئین آدنیلات سیکلاز سیگنالینگ را فعال می کند تا تولید AMP (cAMP) حلقوی را افزایش دهد [23]. پروتئین متصل شونده به عنصر (CREB) پاسخگو به cAMP به طور مداوم توسط پروتئین کیناز A (PKA) فعال می شود، و فعال سازی توسط CREB بیان پروتئین MITF را افزایش می دهد و بیان را تقویت می کند.تیروزیناز[24]. پس از تحریک سلول های B16F10 با -MSH برای القای ملانوژنز، اثر سفید کنندگی ES با اندازه گیری ملانین تایید شد. مشخص شد که محتوای ملانین به شیوه‌ای وابسته به دوز سرکوب می‌شود و در بالاترین غلظت (200 میکروگرم در میلی‌لیتر) مورد استفاده در آزمایش، بیش از 50 درصد سرکوب محتوای ملانین در مقایسه با گروه درمان فقط -MSH مشاهده شد.

ES در فرمولاسیون های گیاهی سنتی مورد استفاده قرار می گیرد. به خانواده Euphorbiaceae تعلق دارد و به طور سنتی در آسیای شرقی برای اهداف دارویی استفاده می شود. ES حاوی مواد فعال بیولوژیکی متعددی از جمله تانن ها، ترپنوئیدها و پلی فنول ها است [25]. DPPH یک رادیکال آزاد نسبتاً پایدار است. سنجش DPPH به طور گسترده ای برای اندازه گیری فعالیت آنتی اکسیدانی گیاهان استفاده می شود که با کاهش رنگ بنفش تیره محلول توسط عوامل کاهنده مانند اسید اسکوربیک، توکوفرول، ترکیبات آروماتیک پلی هیدروکسی و آمین های آروماتیک مشخص می شود [26]. علاوه بر این، فعالیت مهار رادیکال ABTS با توجه به اندازه گیری آنتی اکسیدان های اهداکننده هیدروژن، آنتی اکسیدان های شکستن زنجیره و توانایی آنتی اکسیدانی مواد آب دوست و آبگریز مفیدتر از فعالیت مهار رادیکال DPPH است [27]. مطالعات فعالیت آنتی اکسیدانی ES را گزارش کرده اند. با این حال، اثر سفید کننده پوست آن تا کنون ارزیابی نشده است. بنابراین در این مطالعه اثر سفید کنندگی پوست را تایید کردیمES(شکل 2). ما تأثیر آن را تأیید کردیمتیروزینازفعالیت، که سرعت اولیه ملانوژنز را تعیین می کند (شکل 3). به عنوان آنزیمی که تولید ملانین را ترویج می کند، تیروزینازها به طور گسترده به عنوان یک ترکیب هدف برای شناسایی بازدارنده های جدید که می توانند تشکیل ملانین را سرکوب کنند استفاده می شود [28]. برای بررسی مکانیسمی که توسط آن ES مانع از ملانوژنز می شود، تعیین کردیم که آیا عصاره ES می تواند فعالیت تیروزیناز را مستقیماً مهار کند [29] . برای این سنجش از آربوتین به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. ما یک اثر سفید کننده پوست را مشاهده کردیم که به طور قابل ملاحظه ای بیشتر از آربوتین (10 میلی مولار) بود. عصاره ES پس از 24 ساعت درمان به طور قابل توجهی فعالیت تیروزیناز قارچ را کاهش داد و فعالیت سلول تیروزیناز را مهار کرد. بنابراین، ما تایید کردیم که عصاره ES دارای یک اثر آنتی اکسیدانی عالی و همچنین فعالیت سفید کننده پوست است.

تیروزینازآنزیم اصلی درگیر در ملانوژنز است [30]. فاکتورهای رونویسی MITF تنظیم کننده های مهمی در توسعه و تمایز ملانوسیت ها هستند [31]. سرکوب تیروزیناز و بیان MITF توسط عصاره ES به صورت وابسته به دوز افزایش یافت. این نتایج نشان می دهد کهESفاکتور رونویسی MITF را سرکوب می کند و در نتیجه بیان تیروزیناز را مهار می کند.

علاقه به محصولات طبیعی مختلف با اثرات سفید کننده و بهبود چین و چروک به عنوان مواد پایه برای مواد غذایی و آرایشی افزایش یافته است. استفاده از محصولات حاوی موادی با خواص مختلف محافظ پوست مانند ضد چروک، مرطوب کننده، سفید کننده و ضد التهاب در بازار زیبایی جهانی افزایش یافته است [32]. در این مطالعه، ما دریافتیم که عصاره ES دارای اثرات آنتی اکسیدانی قوی، مهار تیروزیناز و تنظیم بیان پروتئین مرتبط با سفید کننده است. این فعالیت‌ها ممکن است به گالی‌سی‌اسید و پروتوکاتچوئیک اسید شناسایی‌شده در عصاره ES نسبت داده شود [33، 34]. بنابراین، به نظر می‌رسد که ES پتانسیل آن را دارد که برای توسعه لوازم آرایشی طبیعی برای سفید کردن پوست برای کاهش مؤثر یا جلوگیری از رنگدانه‌های بیش از حد ملانین در پوست استفاده شود.

اثرات cistanche: مهارتیروزینازفعالیت برای سفید کردن پوست

نتیجه گیری

در نتیجه،ESعصاره تنظیم شدهتیروزینازفعالیت ها و بیان پروتئین MITF در سلول های B16F10 عصاره ES فعالیت آنتی اکسیدانی را در سنجش DPPH و ABTS نشان داد. این مطالعه شواهد تجربی ارائه می دهد که ES می تواند یک عامل درمانی مفید برای درمان بیماری های پوستی باشد.

سیستانچ فعالیت تیروزیناز را مهار می کند