اثرات آنتی اکسیدانی، ضد ملانوژنیک و ضد چروک فلینوس وانینی

تماس: ali.ma@wecistanche.com

1. مقدمه

رادیکال های آزادو گونه های اکسیژن فعال (ROS) عموماً گونه های شیمیایی ناپایدار و بسیار واکنش پذیر هستند. آنها عمدتاً از مسیرهای متابولیک آنزیمی و غیر آنزیمی در سلول‌های بدن انسان از طریق سیستم انتقال الکترون میتوکندری تنفس، فاگوسیتوز، سنتز پروتاگلاندین‌ها و سیستم شبکه آندوپلاسمی مشتق می‌شوند [1]. با این حال، رادیکال های آزاد و ROS نیز از قرار گرفتن در معرض منابع برون زا، از جمله فلزات سنگین، دود تنباکو، مواد شیمیایی و آلاینده های صنعتی تولید می شوند [2]. گزارش شده است که آنها باعث بیماری های مختلفی مانند پیری، بیماری های قلبی عروقی، اختلالات تنفسی، دیابت شیرین، روماتیسم و ​​بیماری های کبدی می شوند [3].

گزانتین اکسیداز (XO) اکسیداسیون هیپوگزانتین به گزانتین را کاتالیز می کند و گزانتین را به اسید اوریک تبدیل می کند. نقرس با افزایش غلظت اسید اوریک (هیپراوریسمی) در خون مشخص می شود که منجر به رسوب کریستال های اسید اوریک در مفاصل می شود و باعث التهاب دردناک می شود و 5 تا 30 درصد از جمعیت جهان از نقرس رنج می برند که در نظر گرفته می شود. یک عامل خطر مهم برای سلامت انسان باشد [4،5]. برای درمان نقرس، معمولاً از مهارکننده‌های XO که غلظت اسید اوریک پلاسما را کاهش می‌دهند، استفاده می‌شود [6]. اگرچه آلوپورینول، یک مهارکننده XO، برای درمان نقرس استفاده شده است، یک مهارکننده جدید XO، فبوکسوستات، اخیرا ساخته شده است. با این حال، این دارو عوارض جانبی زیادی دارد، از جمله هپاتیت، نفروپاتی و واکنش های آلرژیک [7]. بنابراین، جستجو برای مهارکننده های XO جدید با فعالیت درمانی خوب و عوارض جانبی کمتر ادامه یافته است.

تیروزیناز یک آنزیم اکسیداتیو حاوی مس محدود کننده سرعت است که معمولاً در گیاهان، میکروارگانیسم ها و حیوانات وجود دارد. تیروزیناز در مسیرهای سنتزی ملانین با هیدروکسیل شدن ال-تیروزین به 3،{5}دی هیدروکسی فنیل آلانین (DOPA) و تبدیل DOPA به دوپاکی نون درگیر است [8]. ملانین توسط ملانوسیت های ملانوزوم ها تولید می شود و نقش مهمی در محافظت از اپیدرم در برابر اثرات مضر اشعه ماوراء بنفش (UV) از نور خورشید دارد. هیپرپیگمانتاسیون پوست ناشی از افزایش فعالیت آنزیم مصنوعی ملانین در اثر قرار گرفتن بیش از حد در معرض اشعه ماوراء بنفش ممکن است باعث اختلالات پوستی از جمله ملاسما، ویتیلیگو و لنتیگو شود [9،10]. اخیراً، مهارکننده‌های تیروزیناز برای جلوگیری از مشکلات رنگدانه‌ای و سایر اختلالات پزشکی مرتبط با ملانین مهم شده‌اند. از آنجایی که بسیاری از زنان ترجیح می دهند لکه های تیره پوست خود را روشن کنند، صنایع پزشکی و آرایشی بر روی مهارکننده های تیروزیناز برای درمان پرپیگمانتاسیون پوست تمرکز کرده اند [11]. برای مقابله با این مشکلات، ترکیبات آلی ناشی از میکروارگانیسم‌ها و گیاهان، مانند اسید کوجیک، آربوتین، آزلائیک اسید، جنتیزیک اسید و غیره به عنوان عوامل سفیدکننده پوست ساخته شده‌اند [12]. اثربخشی ترکیبات سفیدکننده با مهار تیروزیناز در سیستم‌های بدون سلول یا با مهار تیروزیناز سلولی تعیین می‌شود و منابع جدید مهارکننده‌های تیروزین از گیاهان و میکروارگانیسم‌ها به‌طور مداوم در حال بررسی هستند [13].

پیری پوست یک فرآیند بیولوژیکی اجتناب ناپذیر موجودات زنده است که توسط عوامل درونی و بیرونی تحریک می شود. پیری درونی پوست که پیری وابسته به سن یا پیری زمانی نیز نامیده می‌شود، ناشی از عوامل فیزیولوژیکی درونی بدن است، در حالی که پیری بیرونی ناشی از عوامل خارجی بسیاری از جمله قرار گرفتن پوست در معرض اشعه ماوراء بنفش، سیگار کشیدن، آلودگی هوا است. و غیره این عوامل می توانند باعث ایجاد چین و چروک، رنگدانه و تغییر در ضخامت پوست شوند [14]. پوست بافت نرم خارجی است که از بافت اپیدرمی، پوستی و زیر جلدی تشکیل شده است. بیرونی ترین قسمت پوست یک ماتریکس خارج سلولی (ECM) است و از کلاژن و الاستین تشکیل شده است [15]. کلاژن خاصیت ارتجاعی، استحکام و انعطاف پذیری پوست را فراهم می کند. همچنین چارچوب ساختاری پوست را حفظ می‌کند و نقشی اساسی در حفظ عملکردهای سلولی طبیعی در مورفوژنز پوست ایفا می‌کند [16]. الاستین یک پروتئین کلیدی است که در بافت همبند ECM وجود دارد و خاصیت ارتجاعی پوست را فراهم می کند. کلاژناز، یک اندوپپتیداز وابسته به روی، قادر به تخریب اجزای ECM، به ویژه، کلاژن نوع 1 است. الاستاز، آنزیم پروتئاز، الاستین و کلاژن را تجزیه می کند و خواص مکانیکی و ساختاری بافت همبند ECM را تعیین می کند [17]. بنابراین، ایجاد مهارکننده های دارویی برای جلوگیری از پیری پوست، مانند افتادگی و چین و چروک پوست، مطلوب است.

قارچ ها به عنوان منابع غذایی خوب و طب سنتی سنتی هزاران سال در بسیاری از کشورهای مختلف مورد استفاده قرار گرفته اند. بدن میوه آنها حاوی متابولیت های بیولوژیکی فعال با ارزش دارویی بالا، از جمله ب-گلوکان، پلی ساکاریدها، پلی فنول ها، فلاونوئیدها، ترپنوئیدها و سایر ترکیبات آلی است که محرک سیستم ایمنی، ضد تومور، ضد قند خون، ضد هیپرگلیسمی است. فعالیت های بازدارنده کلسترول، محافظت از کبد و التهاب [18-20].

Phellinus vaninii که معمولاً به عنوان "sanghuang" شناخته می شود، متعلق به Basidiomycota، Aphyllophorales، Hymenochaetacae است و در شرق آسیا و روسیه پراکنده است [21]. چندین گونه قارچ متعلق به جنس Phellinus، از جمله Ph. baumi، Ph. gilvus، Ph. linteus، Ph. merrillii و Ph. pini، به دلیل پتانسیل آنتی اکسیدانی دارویی، ضد دیابت، ضد چربی خون، مورد مطالعه قرار گرفته اند. فعالیت های ضد میکروبی و ضد توموری [22،23].

اگرچه Ph. vaninii در کره در دسترس قرار گرفته است، تنها گزارش های کمی از اثرات دارویی آن وجود دارد [24]. بنابراین، هدف از این مطالعه بررسی اثرات آنتی اکسیدانی، ضد گزانتین اکسیداز، ضد ملانوژنیک و ضد چروک عصاره متانولی و آب گرم اندام های میوه Ph. vaninii بود.

2. مواد و روشها

2.1. مواد شیمیایی و معرف ها

هیدروکسی تولوئن بوتیله (BHT)، 1،1-دی فنیل-2- پیکریل هیدرازی (DPPH)، دی متیل سولفوکسید، (DMSO) گزانتین اکسیداز، تیروزیناز، L-3،4-دی هیدروکسی فنی -لالانین (DOPA)، گزانتین اکسیداز، آلوپورینول، کوجیک اسید، آربوتین، کلاژناز و الاستاز پانکراس خوک از شرکت سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) و سایر مواد شیمیایی و حلال های مورد استفاده برای آزمايش‌هاي مطالعه از نوع تحليلي بودند.

2.2. عصاره قارچ

بدن باردهی Ph. vaninii از موسسه تحقیقات قارچ موسسه فناوری کشاورزی Gyeonggi در کره به دست آمد. اجسام میوه در هوا خشک شدند (45 درجه به مدت 48 ساعت) و ریز پودر شدند. برای تهیه عصاره متانولی (ME)، 20 گرم پودر در 400 میلی لیتر متانول 80 درصد در شیکر اوربیتال (125 دور در دقیقه) به مدت 24 ساعت در دمای 25 درجه نگهداری شد. محلول از طریق کاغذ صافی فیلتر شد. برای به دست آوردن عصاره آب گرم (HE)، همان مقدار پودر به مدت 3 ساعت با 400 میلی لیتر آب مقطر دیونیزه شده جوشانده شد و از طریق کاغذ صافی فیلتر شد. سپس باقیمانده به ترتیب با 400 میلی لیتر متانول 80 درصد یا آب داغ دو بار، همانطور که در بالا توضیح داده شد، استخراج شد. سپس عصاره های ترکیب شده در دمای 40 درجه تا خشک شدن تبخیر شدند و آب باقیمانده با یخ خشک کن خارج شد.

عصاره سیستانچ

2.3. محتوای کل فنول و فلاونوئیدها

محتوای فنلی کل ME و HE با استفاده از یک اصلاح جزئی در سنجش فولین- سیوکالتئو [25] تعیین شد. مقدار 1 میلی لیتر از ME و HE به 1 میلی لیتر محلول 10 درصد Folin-Ciocalteu اضافه شد. محلول گرداب شد و به مدت 3 دقیقه در دمای 25 درجه باقی ماند. سپس 3 میلی لیتر کربنات سدیم 2 درصدمحلول (Na2CO3) اضافه شد و به مدت 2 ساعت در دمای 25 درجه سانتی گراد نگهداری شد. جذب با یک طیف سنج در 760 نانومتر اندازه گیری شد. محتوای فنلی کل به صورت میلی گرم معادل اسید گالیک (GAE) بیان شد.

محتوای کل فلاونوئیدها با استفاده از روش رنگ سنجی کلرید آلومینیوم (AlCl3) کمی تغییر یافته اندازه گیری شد [26]. مقدار کمی (1 میلی لیتر) از ME و HE در 1 میلی لیتر آب دیونیزه حل شد. این محلول (1 میلی‌لیتر) به 3.0 میلی‌لیتر الکل 95 درصد، 0.2 میلی‌لیتر 10 درصد کلرید آلومینیوم، 0.2 میلی‌لیتر استات پتاسیم (1M) اضافه شد. و 5.6 میلی لیتر آب دیونیزه. سپس مخلوط واکنش در دمای 25 درجه به مدت 40 دقیقه انکوبه شد و جذب با طیف‌سنج در طول موج 415 نانومتر اندازه‌گیری شد. محتوای فلاونوئید کل به صورت میلی گرم معادل کوئرستین (QE) بیان شد.

2.4. سنجش بقای سلولی

2.4.1. کشت سلولی

رده سلولی ملانوم B16-F10 موش از بانک رده سلولی کره ای بنیاد تحقیقات خط سلولی کره، سئول، کره به دست آمد. سلول ها در محیط کشت اصلاح شده عقاب Dulbecco (DMEM) همراه با 10 درصد سرم جنین گاوی غیرفعال شده با حرارت (FBS) و 1 درصد پنی سیلین-استرپتومایسین در دمای 37 درجه در انکوباتور مرطوب شده با 5 درصد CO2 اتمسفر کشت شدند.

2.4.2. زنده ماندن سلولها

تأثیر ME و HE بر روی زنده‌مانی سلول‌های B{{0}}}}}سلول‌های B{{{0}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}}‎‎‎‎‎‎{{{{{{{{۱۲}}}}}}}}}}}}}}}}}}}‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎{{{{۱۲}}}}}}}}}}}}}}}}‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎‎ سلول ها (5 104) در یک پلیت چاهک کشت داده شدند و به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه انکوبه شدند. سپس، سلول‌ها با غلظت‌های مختلف ME و HE (25-750 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر) تیمار شدند و به مدت 48 ساعت انکوبه شدند. سپس، هر چاهک با 200 میلی‌لیتر محلول MTT (0.5 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر) تکمیل شد و به مدت 4 ساعت در تاریکی انکوبه شد. بلورهای رنگی فرمازان به دست آمده در 200 میلی لیتر DMSO حل شدند و جذب با دستگاه میکروپلیت خوان در طول موج 570 نانومتر اندازه گیری شد.

2.5. سنجش آنتی اکسیدانی

2.5.1. فعالیت پاکسازی DPPH

اثر مهار رادیکال ME و HE از اندام های میوه دهی Ph. vaninii با استفاده از روش DPPH [28] با تغییرات جزئی تعیین شد. به طور خلاصه، 1 میلی‌لیتر از غلظت‌های مختلف ME و HE (0.125-2.{5}}mg/mL) با یک میلی‌لیتر DPPH (0.1 میلی‌مولار) در متانول مخلوط شد. مخلوط تکان داده شد و به مدت 30 دقیقه در دمای 25 درجه نگهداری شد. جذب با یک اسپکتروفتومتر در طول موج 517 نانومتر اندازه گیری شد. اثر مهار رادیکال DPPH با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

درصد فعالیت مهار رادیکال DPPH=[ (Absc—Abss) / Absc ] × 100,

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه است. BHT به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

2.5.2. مهار پراکسیداسیون لیپیدی

فعالیت مهاری پراکسیداسیون لیپیدی ME و HE از اندام های میوه دهی Ph. vaninii با استفاده از روشی که قبلاً شرح داده شده [29] با تغییرات جزئی ارزیابی شد. به طور خلاصه، 250 میلی‌لیتر هموژنه زرده تخم‌مرغ (10 درصد در آب مقطر)، 50 میلی‌لیتر از هر ME و HE و 200 میلی‌لیتر آب مقطر به لوله آزمایش اضافه شد. . 25 میلی لیتر FeSO4 (0.07 مولار) اضافه شد و به مدت 30 دقیقه در دمای 25 درجه سانتیگراد انکوبه شد. سپس 750 میلی لیتر اسید استیک 20 درصد (PH 3.5) و 750 میلی لیتر تیوباربیتوریک اسید 0.8 درصد (TB) در 1.1 درصد سدیم سدیم انکوبه شد. سولفات (SDS) با 25 میلی لیتر تری کلرواستیک اسید 20 درصد (TCA) اضافه شد و مخلوط گرداب شد و در حمام آب به مدت 60 دقیقه در دمای 100 درجه سانتیگراد انکوبه شد. پس از خنک شدن تا دمای 25 درجه سانتیگراد، 3 میلی لیتر 1- به هر لوله بوتانول اضافه شد و به مدت 10 دقیقه با دور 3000 سانتریفیوژ شد. جذب محلول با یک اسپکتروفتومتر در طول موج 532 نانومتر اندازه گیری شد. اثر مهاری پراکسیداسیون لیپیدی با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

مهار پراکسیداسیون لیپیدی (درصد)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100،

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه آزمایشی است. BHT به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

2.5.3. فعالیت مهار رادیکال هیدروکسیل

اثر مهار رادیکال هیدروکسیل ME و HE از اجسام بارده Ph. vaninii با استفاده از روش منتشر شده [3{2}}] با تغییرات جزئی اندازه‌گیری شد. به طور خلاصه، 0.5mL غلظت های مختلف ME و HE (0.125-2.0mg/mL) در محلولی حاوی 10 انکوبه شد. {34}}میلی‌لیتر 2.8 میلی‌مول 2-دئوکسی ریبوز در بافر فسفات (10 میلی‌مولار، pH 7.4)، 200 میلی‌لیتر FeCl3 (200 میکرومولار) - EDTA (1.04 میکرومولار) (1:1 ولت در حجم)، 100 میلی‌لیتر H2O2 (1.0 میلی‌مولار)، و 100 میلی‌لیتر اسید اسکوربیک (1.0 میلی‌مولار). مقدار تجزیه دئوکسی ریبوز پس از افزودن 1.0 میلی لیتر TBA 1 درصد و سپس انکوباسیون در 100 درجه سانتیگراد به مدت 20 دقیقه اندازه گیری شد. جذب بر روی یک طیف سنج در طول موج 532 نانومتر اندازه گیری شد. اثر مهاری مهار رادیکال هیدروکسیل با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

مهار رادیکال هیدروکسیل (درصد)=[(Absc – Abss) / Absc] × 100

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه آزمایشی است. BHT به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

2.6. مهار گزانتین اکسیداز

فعالیت بازدارنده گزانتین اکسیداز (XO) ME و HE از بدن میوه‌دهی Ph. vaninii با استفاده از گزانتین به عنوان بستر با روش منتشر شده با تغییرات جزئی اندازه‌گیری شد [31]. مقدار 1 میلی لیتر از غلظت های مختلف ME و HE ({3}}.5-8.0 mg/ml) به 2.9 میلی لیتر بافر فسفات (pH 7.5) و 0 اضافه شد. 1.1 میلی لیتر محلول آنزیم گزانتین اکسیداز ({15}}.1 واحد در میلی لیتر در بافر فسفات pH 7.5) و از قبل در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه انکوبه شد. سپس، واکنش با افزودن 2 میلی لیتر از محلول بستر (150 میلی مولار گزانتین در بافر) آغاز شد. مخلوط به مدت 30 دقیقه در دمای 25 درجه سانتیگراد انکوبه شد و واکنش با افزودن 1 میلی لیتر هیدروکلراید 1 N پایان یافت. میزان جذب با اسپکتروفتومتر در طول موج 290 نانومتر اندازه گیری شد. آلوپورینول به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد. مهار گزانتین اکسیداز با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

مهار زانتین اکسیداز (درصد)=[(A–B)–(C–D) / (A–B) ] × 100،

که در آن A فعالیت آنزیم بدون عصاره است، B کنترل A بدون عصاره و آنزیم است. C فعالیت عصاره با XO، D فعالیت عصاره بدون XO است.

2.7. اثرات ضد ملانوژنیک

2.7.1. مهار در شرایط آزمایشگاهی تیروزیناز

فعالیت مهاری تیروزیناز عصاره قارچ با استفاده از روش منتشر شده [32] با تغییرات جزئی تعیین شد. به طور خلاصه، مخلوط‌های واکنش با افزودن 4 0 میلی‌لیتر تیروزیناز (31 واحد در میلی‌لیتر) به 4{8}} میلی‌لیتر از غلظت‌های مختلف ME و HE (0) تهیه شد. 125-2.0mg/mL)، 40ml L-تیروزین 1.5mM و 80mL بافر فسفات 0.1M (pH 6.8). سپس مخلوط به مدت 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه شد. جذب با دستگاه میکروپلیت ریدر در طول موج 475 نانومتر اندازه گیری شد. مهار تیروزیناز با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

مهار تیروزیناز (درصد)=[(Absc – Abss) / Absc] × 100،

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه آزمایشی است. BHT به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

سیستانچ یک مهارکننده تیروزیناز است.

2.7.2. مهار در شرایط آزمایشگاهی اکسیداسیون خودکار DOPA

فعالیت بازدارندگی خود اکسیداسیون L-DOPA عصاره قارچ با استفاده از روش کمی اصلاح شده تعیین شد [33]. به طور خلاصه، مخلوط‌های واکنش با افزودن 4 0 میلی‌لیتر تیروزیناز (31 واحد در میلی‌لیتر) به 4{{1{19}}}} میلی‌لیتر از غلظت‌های مختلف ME و HE (0.125-) تهیه شدند. 0/2 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر، و به مدت 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی‌گراد انکوبه شد. سپس واکنش با افزودن 40 میلی‌لیتر محلول 2.5 میلی‌مولار L-DOPA (در بافر فسفات) و 80 میلی‌لیتر بافر فسفات (0.1 مولار، pH) آغاز شد. 6.8) و به مدت 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد در تاریکی انکوبه شد. جذب با میکروپلیت ریدر در طول موج 475 نانومتر اندازه گیری شد. درصد مهار خود اکسیداسیون L-DOPA با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

مهار اکسیداسیون خودکار DOPA ( درصد )=[(Absc – Abss)/Absc] × 100،

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه آزمایشی است. اسید کوجیک به عنوان یک استاندارد مرجع استفاده شد.

2.7.3. فعالیت تیروزیناز سلولی

فعالیت تیروزیناز سلولی در سلول‌های B{{{{0}}}}}}F10 با استفاده از اصلاح جزئی روش منتشر شده اندازه‌گیری شد [34]. سلول ها (5 105 سلول در چاه) در 96-صفحه چاه کشت داده شدند. پس از درمان با غلظت‌های مختلف نمونه (25-500 میلی‌گرم در میلی‌لیتر) به مدت 24 ساعت، سلول‌های ملانوما با PBS شسته شدند و با بافر فسفات 0.1 مولار (PH 6.8) حاوی 1 درصد تریتون ایکس لیز شدند. سلول‌ها به مدت 10 دقیقه روی یخ نگه‌داشته شدند و لیزات‌ها به مدت 10 دقیقه در 10،{19}} گرم سانتریفیوژ شدند. سپس میزان پروتئین موجود در مایع رویی به روش برافورد با آلبومین سرم گاوی (BSA) به عنوان استاندارد تعیین شد. برای اندازه‌گیری فعالیت تیروزیناز، 100 میلی‌لیتر محلول لیزات سلولی و 100 میلی‌لیتر 2.5 میلی‌مولار L-DOPA (در همان بافر فسفات) و به هر چاهک یک صفحه چاهی اضافه شد. پس از انکوباسیون در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت، جذب در طول موج 475 نانومتر با استفاده از دستگاه میکروپلیت ریدر اندازه گیری شد. فعالیت تیروزیناز سلولی با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

فعالیت تیروزیناز سلولی ( درصد )=(Abss/Absc) × 100،

که در آن Abss نشان دهنده جذب نمونه و Absc نشان دهنده جذب کنترل است. آربوتین به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

2.7.4. سنتز ملانین سلولی

اندازه‌گیری محتوای ملانین در سلول‌های ملانوم B{{{0}}}F10 B{0}}در تیمار شده با غلظت‌های مختلف از عصاره‌های قارچ با استفاده از روش منتشر شده توسط Hosoi و همکاران انجام شد. [35]. سلول ها (4 × 104 سلول در چاهک) در یک صفحه 96- چاهک در DMEM کشت داده شدند. پس از 24 ساعت انکوباسیون، سلول ها با ME و HE (25-500 میلی گرم در میلی لیتر) به مدت 72 ساعت حاوی 0.4 میلی مولار هورمون محرک ملانوسیت (MSH) تحت درمان قرار گرفتند. سلول ها با افزودن 300 میلی لیتر تریتون 100 (1 درصد، PBS) جمع آوری شدند، به مدت 5 دقیقه با دور 3000 سانتریفیوژ شدند و مایع رویی خارج شد. سپس 100 میلی‌لیتر NaOH 1N و 200 میلی‌لیتر DMSO (10 درصد) به گلوله‌های سلولی اضافه شد و به مدت 1 ساعت در دمای 60 درجه سانتی‌گراد نگهداری شد. جذب محلول با استفاده از میکروپلیت‌خوان در طول موج 405 نانومتر اندازه‌گیری شد. اثر ME و HE بر سنتز ملانین تعیین شد. آربوتین به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

سیستانچ ملانین را مهار می کند.

2.8. اثرات ضد چروک

2.8.1. مهار الاستاز

اثر مهاری الاستاز ME و HE با روش های گزارش شده قبلی ارزیابی شد [36]. الاستاز پانکراس خوک (PE-EC. 3.4.21.36) در آب استریل حل شد تا یک محلول ذخیره 3.33 میلی گرم بر میلی لیتر ساخته شود. سوبسترا، N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (AAAPVN)، در بافر Tris-HCl 0.2M (pH 8.{17}}) حل شد. واکنش در یک میکروپلیت 96-چاهی انجام شد. هر چاهک حاوی 120 میلی‌لیتر بافر 0}.2M تریس هیدروکلراید، 50 میلی‌لیتر عصاره قارچ (0.125-2.0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر) در بافر Tris-HCl، 30 بود. میلی لیتر PE و 50 میلی لیتر 1.6 میلی مولار AAAPVN. عصاره آزمایش در دمای 25 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه قبل از افزودن سوبسترا از قبل انکوبه شد. جذب با دستگاه میکروپلیت خوان در 402 نانومتر اندازه گیری شد. درصد مهار استراز به صورت زیر محاسبه شد:

مهار استراز (درصد)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100،

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه آزمایشی است. از EGCG به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد، در حالی که از آب مقطر به عنوان کنترل منفی استفاده شد.

2.8.2. مهار کلاژناز

اثر مهاری کلاژناز ME و HE از اندام های میوه دهی Ph. vaninii با استفاده از روش های گزارش شده قبلی [37] با برخی تغییرات مورد بررسی قرار گرفت. کلاژناز از کلستریدیوم هیستولیتیکوم (ChC-EC.3.4.23.3) در 50 میلی مولار 1.44 U/ml Tricine بافر (PH 7.8) حل شد. سوبسترا، 4-نمک تری فلورواستات فنیلازوبنزیلوکسی کربونیل-Pro-Leu-Gly-Pro-D- Arg (PZ-peptide)، در بافر 2.5 میلی مولار Tricine حل شد. 25 میکرولیتر عصاره قارچ ({25}}.125 تا 2.0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر) با 20 میلی‌لیتر آنزیم در 155 میلی‌لیتر بافر به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی‌گراد قبل از افزودن 50 میلی‌لیتر PZ-پپتید برای شروع انکوبه شدند. واکنش به مدت 60 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد. واکنش با افزودن 1 میلی لیتر اسید سیتریک (3 درصد) متوقف شد. سپس 5 میلی لیتر اتیل استات اضافه شد و محلول به شدت تکان داده شد و به مدت 10 دقیقه صبر کرد. جذب مایع رویی در طول موج 320 نانومتر با استفاده از دستگاه میکروپلیت ریدر اندازه گیری شد. EGCG به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد. مهار کلاژناز با استفاده از فرمول زیر محاسبه شد:

مهار کلاژناز (درصد)=[(Absc – Abss)/Absc] × 100،

که در آن Absc نشان دهنده جذب کنترل وسیله نقلیه و Abss نشان دهنده جذب نمونه آزمایشی است. EGCG به عنوان استاندارد مرجع استفاده شد.

2.9. تحلیل آماری

همه داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) بیان شد و برای تجزیه و تحلیل آماری از SPSS V.13 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA) استفاده شد. از آنالیز واریانس یک طرفه و به دنبال آن آزمون‌های چند دامنه‌ای دانکن برای مقایسه میانگین‌ها در بین گروه‌ها استفاده شد. تفاوت بین میانگین در 5 درصد (ص<.05) level="" were="" considered="" statistically="">

3. نتایج و بحث

3.1. محتویات کل فنول ها و فلاونوئیدها

محتویات کل فنول و فلاونوئید ME و HE در جدول 1 ارائه شده است. نتایج نشان داد که محتویات کل فنول و فلاونوئید ME به ترتیب 31.67 میلی گرم GAE/g و 6.83 میلی گرم QE/g بود، در حالی که برای HE 16.33 میلی گرم بود. GAE/g و 4.50mg QE/g به ترتیب. وامانو و نیتا [38] گزارش کردند که محتوای فنلی کل عصاره متانولی و آب گرم از بدن میوه Boletus edulis به ترتیب 18.96 میلی گرم GAE/g و 17.22 میلی گرم GAE/g بود، در حالی که محتوای فلاونوئیدی عصاره متانولی از Boletus aestivalis بود. و بدن باردهی Leccinum carpini به ترتیب 1.53mg CE/g و 1.48mg CE/g بود [39]. نتایج ما نشان می‌دهد که محتوای فنلی و فلاونوئیدی کل عصاره‌های قارچ بالاتر از قارچ‌های ذکر شده در بالا بوده و ممکن است در بهبود آنتی اکسیدان‌های مربوط به آنتی‌اکسانتین اکسیداز، ضد ملانوژن و ضد پوست نقش داشته باشد. -فعالیت های چین و چروک

3.2. زنده ماندن سلولها

برای تعیین اینکه آیا عصاره‌های بدن‌های میوه‌دهی Ph. vaninii اثر سیتوتوکسیک روی سلول‌های ملانوم موش B{0}} F10 نشان می‌دهند، سلول‌ها با غلظت‌های مختلف ME و HE به مدت 72 ساعت تیمار شدند و زنده‌مانی سلول توسط MTT تعیین شد. سنجش بقای سلولی سلول های تیمار شده با ME و HE به ترتیب از 74/99 تا 33/85 درصد و 67/100 تا 33/88 درصد در 50 تا 750 میلی گرم بر میلی لیتر بود (شکل 1). با افزایش غلظت عصاره قارچ، قابلیت حیات سلولی کاهش یافت. از آنجایی که قابلیت زنده ماندن سلول های تیمار شده با 500 میلی گرم در میلی لیتر ME و HE به ترتیب بیش از 90.33 درصد و 91 درصد بود و مقادیر IC50 ME و HE به ترتیب 4410 میلی گرم در میلی لیتر و 5385 میلی گرم در میلی لیتر ME و HE نبودند. سیتوتوکسیک برای سلول های ملانوم B{25}}F10 در غلظت های آزمایش شده. بنابراین، فعالیت‌های سنتز تیروزیناز و ملانین سلول‌های ملانوم B16-F10 تیمار شده با غلظت‌های مختلف عصاره قارچ انجام شد.

3.3. فعالیت آنتی اکسیدانی

3.3.1. اثر مهار رادیکال DPPH

اثرات مهار رادیکال DPPH ME و HE از بدن میوه Ph. vaninii با افزایش غلظت عصاره افزایش یافت. فعالیت‌های مهار رادیکال ME و HE در {0}}}.125. ، کنترل مثبت، فعالیت پاکسازی خوبی را نشان داد (96.19-96.97 درصد) (شکل 2 (A)). اگرچه فعالیت مهار DPPH ME و HE در غلظت‌های بین 0.125 تا 0.5 mg/ml کمتر از BHT بود، اما درصد مهار مشاهده‌شده در ME و HE در 1 بود.{{{ 24}-2.0 mg/ml از نظر آماری در مقایسه با BHT ناچیز بود. این نتایج نشان می‌دهد که عصاره‌های متانولی و آب گرم در غلظت‌های بالاتر آزمایش‌شده دارای فعالیت‌های مهار رادیکال خوبی هستند.

فعالیت‌های مهار DPPH عصاره متانولی از بدن‌های بارده Pleurotus pulmonarius از 25.67 درصد تا 92.73 درصد در 0.125 تا 2 گزارش شده است.0mg/mL [4{17}}] . مائو و همکاران [41] دریافتند که اثرات مهار رادیکال عصاره متانولی قارچ های Tricholoma giganteum، Grifola frondosa و Hericium erinaceus از 63.2 درصد تا 67.8 درصد در غلظت 6.4 میلی گرم در میلی لیتر متغیر است. بنابراین، نتایج تجربی ما نشان می‌دهد که فعالیت مهارکننده DPPH ME و HE ({20}}.125-2.0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر) از بدن‌های میوه‌دهی Ph. vaninii می‌تواند دفاع کافی در برابر آسیب‌های رادیکال آزاد و ROS ارائه دهد.

شکل 2.فعالیت آنتی اکسیدانی متانول و عصاره آب گرم از بدن میوهفلینوس وانینی.

3.3.2. مهار پراکسیداسیون لیپیدی

فعالیت بازدارنده پراکسیداسیون لیپیدی ME و HE از بدن میوه P. vaninii از 44.99 تا 66 متغیر بود.{8}}8 درصد و از 41.26 تا 64.00 درصد در {{1{{16} }}}. 125-2.0mg/mL، به ترتیب (شکل 2(B))، که نشان می‌دهد افزایش غلظت عصاره‌های قارچ، مهار پراکسیداسیون لیپیدی را افزایش می‌دهد. با این حال، اثر مهاری پراکسیداسیون لیپیدی BHT 90.30 درصد در 2.0mg/mL بود که به طور قابل توجهی بالاتر بود (p<.001) than="" those="" of="" me="" and="" he.="" the="" ic50="" values="" of="" me="" against="" lipid="" peroxidation="" from="" wild="" and="" cultivated="" mushrooms="" including="" pleurotus="" ostreatus,="" termitomyces="" robustus,="" pleurotus="" sajor-caju,="" and="" auricularia="" auricula="" were="" 0.15,="" 0.43,="" 0.75,="" and="" 1.51mg/ml,="" respectively="" [42].="" the="" inhibi-="" tory="" effects="" of="" hot="" water="" extracts="" on="" lipid="" peroxida-="" tion="" of="" 14="" different="" edible="" and="" medicinal="" mushroom="" species="" collected="" from="" malaysia="" ranged="" from="" 33.33%="" to="" 57.18%="" at="" the="" concentration="" of="" 10="" mg/ml="" [43].="" in="" this="" study,="" the="" lipid="" peroxidation="" inhibitory="" activity="" of="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" ranged="" from="" 65.87%="" to="" 78%="" at="" 2.0mg/ml="" and="" their="" ic50="" values="" were="" 0.19="" mg/ml="" and="" 0.17="" mg/ml,="" respectively.="" these="" results="" suggest="" that="" me="" and="" he="" from="" ph.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" possessed="" good="" inhibitory="" activity="" toward="" lipid="" peroxidation="" compared="" to="" the="" mushrooms="" described="" above.="" therefore,="" p.="" vaninii="" fruiting="" bodies="" could="" be="" a="" valuable="" antioxidant="">

3.3.3. اثر مهار رادیکال هیدروکسیل

اثرات مهار رادیکال هیدروکسیل ME و HE از Ph. vaninii از 75.60 تا 98.19 درصد و 65.21 تا 97.55 درصد در 0}.125 تا 2.{19}} میلی گرم در میلی لیتر متغیر بود. ترازها، به ترتیب، در حالی که مقادیر BHT از 79.89 تا 92.66 درصد متغیر بود (شکل 2 (C)). با این حال، مقادیر IC50 ME و HE از Ph. vaninii به ترتیب 0.115 mg/mL و 0.119 بود، در حالی که IC5{4{46} }}} مقدار BHT 0.111mg/mL بود، که نشان می دهد اثرات مهار رادیکال هیدروکسیل ME و HE کمی کمتر از BHT است. بنابراین، ME و HE از Ph. vaninii دارای فعالیت های مهار رادیکال هیدروکسیل نسبتاً خوب و قابل مقایسه در غلظت های آزمایش شده بودند. فعالیت‌های مهار رادیکال هیدروکسیل بالاتری که در ME و HE در این آزمایش یافت شد نشان داد که عصاره‌ها با حذف رادیکال‌های هیدروکسیل در محلول آزمایش به طور موثری از تجزیه 2-دئوکسی‌ریبوز جلوگیری کردند. گزارش شده است که عصاره متانولی از بدن‌های بارده Pleurotus pulmonarius دارای 95.13 درصد اثر مهار رادیکال هیدروکسیل در 2.0 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر [40] است که کمتر از ME (98.18 درصد) و HE (97.55 درصد) از Ph بود. vaninii در غلظت آزمایش شده. اثر مهارکننده هیدروکسیل عصاره متانولی از بدن‌های بارده قارچ Hypsizigus ulmarius 76.67 درصد در 1.0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر [44] گزارش شده است، در حالی که اثرات ME و HE 83.{43}} درصد و 77.17 درصد در قارچ‌ها گزارش شده است. 0.25 میلی گرم در میلی لیتر. روی هم رفته، نتایج ما نشان می‌دهد که اثر مهار رادیکال هیدروکسیل ME و HE از Ph. vaninii بهتر از عصاره‌های قارچ ذکر شده در بالا بود. بنابراین، ME و HE از Ph. vaninii پاک کننده های قوی رادیکال هیدروکسیل هستند که ممکن است برای جلوگیری از مشکلات مربوط به ROS استفاده شوند.

3.4. مهار گزانتین اکسیداز

فعالیت های مهاری گزانتین اکسیداز ME و HE از Ph. vaninii با افزایش غلظت افزایش یافت. مهار گزانتین اکسیداز ME و HE در {{0}}}. با این حال، آلوپورینول، استاندارد مرجع، فعالیت های مهاری عالی XO را بین 89.73 تا 97.23 درصد در همان غلظت های آزمایش شده نشان داد (شکل 3). اگرچه ME و HE فعالیت های بازدارندگی متوسط ​​XO را در غلظت های پایین تر نشان دادند، عصاره های قارچ به طور قابل توجهی XO را در غلظت های بالاتر مهار کردند. گزارش شده است که مهار XO توسط متانول و عصاره آب گرم از بدن‌های میوه Ph. gilvus از 28.6{30}} درصد تا 86.20 درصد و از 36.53 درصد تا 97.07 درصد در 0.5 تا 8.0 میلی‌گرم متغیر است. /mL، به ترتیب [45]، نشان می دهد که اثر بازدارندگی ME و HE نسبت به XO با Ph. gilvus قابل مقایسه است.

فلاونوئیدها، دسته ای از ترکیبات پلی فنلی، رایج ترین متابولیت های ثانویه گیاهان و قارچ ها هستند و گزارش شده است که دارای فعالیت مهاری گزانتین اکسیداز هستند [46]. از این رو، غلظت های بالاتر فنول و فلاونوئید شناسایی شده در ME و HE ممکن است به مهار گزانتین اکسیداز کمک کرده باشد.

3.5. اثر سفید کننده پوست

3.5.1. مهار تیروزیناز در شرایط آزمایشگاهی

فعالیت‌های مهاری تیروزیناز ME و HE از بدن‌های میوه‌دهی Ph. vaninii از 55.83 درصد تا 96.16 درصد و از 3{8}}.29 درصد تا 92.74 درصد در 0.125-2 متغیر بود. به ترتیب 17}} mg/ml (شکل 4(A)) و با افزایش غلظت افزایش یافت. با این حال، اسید کوجیک، استاندارد مرجع، فعالیت های مهاری تیروزیناز بسیار خوبی را بین 98.74 و 99.61 درصد در {{2{3{33}}}}}.125-2.0mg/mL نشان داد. نتایج نشان می‌دهد که ME اثر خوبی از خود نشان داد، در حالی که HE اثر متوسطی را در غلظت‌های آزمایش‌شده نشان داد. علم و همکاران [47] گزارش دادند که مهار تیروزیناز توسط متانول و عصاره آب گرم از بدن میوه P. salmoneostramineus به ترتیب از 20.90 درصد تا 63.29 درصد و از 15.25 درصد تا 49.25 درصد در 0.125-1.0 میلی گرم در میلی لیتر متغیر بود که نشان دهنده آن است. فعالیت Ph. vaninii بر روی تیروزیناز بیشتر از P. salmoneostramineus بود.

ترکیبات فنلی ترکیبات اسید معطر حاوی حلقه های فنلی و اسید کربوکسیلیک هستند. فلاونوئیدها گروهی از ترکیبات پلی فنلی هستند. آنها در بسیاری از گونه های گیاهی و قارچی یافت می شوند. پلی فنول ها به عنوان سوبسترا برای تیروزیناز در نظر گرفته می شوند و بزرگترین گروه مهار کننده های تیروزیناز هستند. گزارش شده است که چندین پلی فنل از طریق اتصال به محل فعال آنزیم تیروزیناز، تیروزیناز را مهار می کنند که منجر به غیرفعال شدن غیرقابل برگشت آنزیم توسط یک اثر متقابل سوبسترا می شود [48]. برخی از فلاونوئیدها نیز با کیلاسیون یون های مس موجود در تیروزیناز، اثر مهاری بر تیروزیناز نشان داده اند [49].

بنابراین، اثر مهاری ME و HE نسبت به تیروزیناز ممکن است به دلیل ترکیبات پلی فنلی و فلاونوئیدهای موجود در عصاره قارچ باشد. اثر آنتی اکسیدانی ME و HE نیز ممکن است به مهار فعالیت تیروزیناز کمک کند.

3.5.2. مهار اکسیداسیون خودکار DOPA

L-DOPA یکی از پیش سازهای ملانین در طول ملانوژنز است. L-DOPA از ال-تیروزین توسط تیروزیناز هیدروکسیلاز سنتز می شود. تیروزیناز همچنین می تواند L-DOPA را به دوپاکینون تبدیل کند و در نهایت منجر به ملانین شود. فعالیت های بازدارنده خود اکسیداسیون L-DOPA در شرایط آزمایشگاهی P. vaninii در شکل 4 (B) خلاصه شده است. مهار خود اکسیداسیون L-DOPA توسط ME و HE به ترتیب از 38.25 درصد تا 78.46 درصد و از 29.68 درصد تا 44.77 درصد در 0.125 تا 2.0mg/mL متغیر بود. در حالی که اسید کوجیک فعالیت های بازدارنده عالی L-DOPA از 14.14 تا 98.72 درصد L-DOPA را در غلظت آزمایش شده نشان داد. نتایج نشان داد که ME و HE به طور متوسطی از خوداکسیداسیون L-DOPA جلوگیری کردند. با این حال، ME و HE فعالیت بازدارندگی کمتری بر روی اکسیداسیون خودکار L-DOPA در زمانی که L-DOPA به عنوان یک بستر استفاده شد نسبت به زمانی که L-تیروزیناز به عنوان سوبسترای تیروزیناز استفاده شد، نشان دادند. از آنجایی که تیروزیناز از دو محل اتصال متفاوت برای تیروزین هیدروکسیلاز و L-DOPA اکسیداز استفاده می کند، نتایج تجربی ما نشان می دهد که اثربخشی انتخابی تیروزیناز بر روی دو بستر مختلف در طول ملانوژنز وجود دارد.

3.5.3. فعالیت تیروزیناز سلولی

فعالیت تیروزیناز داخل سلولی پس از درمان سلول‌ها با غلظت‌های مختلف ME و HE از بدن‌های بارده Ph. vaninii تعیین شد. تأثیر ME و HE بر فعالیت تیروزیناز سلول‌های ملانوم B{{0}F10 به ترتیب از 96.94 درصد تا 61.14 درصد و از 98.12 درصد تا 84.16 درصد در غلظت 500-25 میکروگرم در میلی‌لیتر متغیر بود، در حالی که آربوتین فعالیت تیروزیناز را نشان داد. 98.52 تا 58.12 درصد در غلظت آزمایش شده (شکل 5 (A))، که نشان می دهد مهار تیروزیناز آربوتین بیشتر از ME و HE است. همچنین نتایج نشان داد که فعالیت تیروزیناز ME بیشتر از HE بوده و افزایش غلظت ME و HE منجر به کاهش فعالیت تیروزیناز داخل سلولی می‌شود. اگرچه اثرات مهاری تیروزیناز در شرایط آزمایشگاهی ME و HE در غلظت 500 میکروگرم در میلی لیتر به ترتیب 84.39 درصد و 45.64 درصد بود، مهار تیروزیناز سلولی در سلول های B16-F10 ملانوم 38.{25}} درصد و 15 بود. به ترتیب در همان غلظت آزمایش شده، نشان می دهد که عوامل عصاره قارچ مسئول مهار تیروزیناز قادر به نفوذ موثر به سلول ها نبودند. هوانگ و همکاران [50] گزارش کردند که فعالیت تیروسیناز سلولی عصاره متانولی از اجسام بارده Agaricus brasiliensis 95.75 درصد -67.12 درصد در 100-500 ug/mL در سلول های B{38}}F10 ملانوما بود که نشان دهنده فعالیت تیروزیناز سلولی بود. Ph. vaninii کمی بالاتر از A. brasiliensis در همان غلظت آزمایش شده بود.

برای ارزیابی اینکه آیا کاهش فعالیت تیروزیناز داخل سلولی و کاهش تولید ملانین مشاهده شده در سلول‌های ملانوم B{0}F10 به دلیل سمیت سلولی عصاره‌های قارچ است، سنجش MTT انجام شد. در سنجش MTT، سلول‌های ملانوم B16-F10 تیمار شده با ME و HE به ترتیب 105 درصد تا 33/90 درصد و 107 درصد تا 91 درصد در غلظت 500-50 میلی‌گرم در میلی‌لیتر زنده‌مانی سلولی را نشان دادند که نشان می‌دهد قارچ عصاره دارد. در غلظت‌های مورد آزمایش برای سلول‌های ملانوم B{11}F10 سمی نبودند (شکل 1).

3.5.4. فعالیت سنتز ملانین

برای تأیید اینکه آیا فعالیت های بازدارنده تیروزیناز سلولی خوب شناسایی شده در آزمایش قبلی با مهار سنتز ملانین در سلول های ملانوما B16-F1{34}} مرتبط است، تولید ملانین توسط سلول های ملانوما بیشتر مورد بررسی قرار گرفت. سنتز ملانین سلول‌های ملانوم B16-F1{36}} تیمار شده با ME و HE به ترتیب از 71.18 درصد تا 27.61 درصد و از 78.54 درصد تا 50.53 درصد، در 25-500 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر متغیر بود. در حالی که سنتز ملانین توسط آربوتین از 73.50 درصد تا 35.16 درصد در غلظت مورد آزمایش قرار گرفت (شکل 5 (B)). نتایج مطالعه نشان می دهد که مهار سنتز ملانین توسط آربوتین بیشتر از HE اما کمتر از ME بود. افزایش غلظت عصاره قارچ منجر به کاهش سنتز ملانین در سلول‌های ملانوما B{23}}F10 شد. نتایج نشان داد که مهار سنتز ملانین در سلول‌های ملانوم B16-F10 توسط ME به طور قابل‌توجهی بیشتر از آربوتین بود، در حالی که مهار تولید ملانین توسط HE به طور قابل‌توجهی کمتر از آربوتین بود. چا و کیم [51] نشان دادند که عصاره تخمیر شده Cordyceps militaris 66-47 درصد فعالیت سنتزی ملانین را در 1.0-3.0 میلی گرم در میلی لیتر در سلول های B{37}}F10 ملانوما نشان می دهد، که نشان می دهد فعالیت مهاری سنتز ملانین را نشان می دهد. عصاره بدن میوه Ph. vaninii بیشتر از عصاره تخمیر شده Cordyceps militaris بود. بنابراین، نتایج مطالعه نشان داد که عصاره‌های قارچ نه تنها فعالیت تیروزیناز در شرایط آزمایشگاهی و خوداکسیداسیون L-DOPA را مهار می‌کنند، بلکه باعث کاهش فعالیت تیروزیناز و تولید ملانین در سلول‌های B{44}} F10 ملانوم می‌شوند. در مجموع، یافته‌های ما نشان می‌دهد که ME و HE از اندام‌های میوه‌دهی Ph. vaninii ممکن است به‌عنوان منابع بالقوه جدید ضد ملانوژنیک محافظت در برابر رنگدانه‌های پوست ناشی از تابش فرابنفش نور خورشید در نظر گرفته شوند.

3.6. فعالیت ضد چروک پوست

3.6.1. مهار الاستاز

الاستاز، یک پروتئاز، مسئول تجزیه الاستین است که در ECM یافت می شود.

الاستازها می توانند الاستین و همچنین سایر زیرلایه ها مانند کلاژن، فیبرونکتین و پروتئین های ECM را بشکنند. با این حال، تحت شرایط طبیعی، فعالیت الاستاز برای تجزیه پروتئین های خارجی پس از زخم ضروری است [52]. برای به تاخیر انداختن پیری پوست، مانند چین و چروک، افتادگی و کک و مک، جلوگیری از تخریب پروتئین های مرتبط با ECM و در نتیجه محافظت از از دست دادن خاصیت ارتجاعی پوست ضروری است. نرخ مهاری استراز ME و HE از بدن‌های میوه‌دهی Ph. vaninii از 37.23 درصد تا 71.24 درصد و از 28.99 درصد تا 64.65 درصد در 0.125-2.{17}} میلی‌گرم در میلی‌لیتر متغیر بود. به ترتیب، در حالی که EGCG مهار استراز را بین 17.93 تا 45.31 درصد در غلظت مورد آزمایش نشان داد (شکل 6 (A)). نرخ مهار الاستاز ME و HE ممکن است در مقایسه با EGCG عالی در نظر گرفته شود. کیم و همکاران [53] گزارش داد که عصاره میسلیوم Tricholoma matsu- take فعالیت مهاری الاستاز را به میزان 81.4 درصد در 1 00mg/mL نشان داد، که نشان می‌دهد اثرات مهاری ME و HE از Ph. vaninii بر روی الاستاز کمتر از عصاره T. matsutake بود. چوی و لی [54] مهار الاستاز را توسط متانول و عصاره آب گرم از بدن میوه‌دهی Coriolus versicolor از 21.5 درصد تا 35.47 درصد و از 17.57 درصد تا 25.{37}} درصد در 1.0 تا 3.0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر نشان دادند. به ترتیب، نشان می‌دهد که مهار الاستاز ME و HE بیشتر از بدن‌های بارده C. versicolor است. نتایج نشان می دهد که عصاره قارچ دارای پتانسیل ضد چروک برای جلوگیری از تخریب الاستین و کلاژن است.

3.6.2. مهار کلاژناز

کلاژنازها متالوپروتئینازهایی هستند که قادر به جدا کردن مولکول های مختلف موجود در سلول ها و ECM مانند کلاژن، الاستین، فیبرونکتین، ژلاتین و لامینین هستند. کلاژناز مورد استفاده در این آزمایش، کلاژناز باکتریایی (Clostridium histolyticum، ChC)، همچنین ECM را تخریب می کند [55]. بنابراین، از کلاژناز باکتریایی برای آزمایش فعالیت ضد کلاژناز عصاره قارچ استفاده شد. فعالیت های بازدارنده کلاژناز ME و HE از اندام های بارده Ph. vaninii از 41.{13}}4 درصد تا 63.{16}}2 درصد و از 26.40 درصد تا 47.33 متغیر بود. درصد در 0.125-2.0 mg/ml، به ترتیب (شکل 6 (B))، در حالی که EGCG کلاژناز را 17.93 تا 45.31 درصد در غلظت آزمایش شده مهار کرد. نتایج نشان می‌دهد که ME یک مهارکننده عالی بود، در حالی که HE اثرات بازدارندگی متوسطی را در غلظت‌های آزمایش‌شده نشان داد. چئون و همکاران [56] گزارش کردند که مهار کلاژناز توسط اتانول و عصاره آب گرم از بدن میوه‌دهی Phellinus linteus به ترتیب از 3.4 درصد تا 6.8 درصد و از 33.4 درصد تا 89.6 درصد در 0.05-1.0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بود که نشان‌دهنده این است که کلاژناز باعث کاهش می‌شود. از آنجایی که ME و HE مهار خوبی از کلاژناز نشان دادند، عصاره ها ممکن است ECM و کلاژن را از تخریب ناشی از پیری نوری محافظت کنند. اگرچه بیشتر فعالیت های بازدارنده الاستاز و کلاژناز در گیاهان از جمله چای سفید، چای سبز، پوست درخت توت و میوه های جینکو نشان داده شده است [57،58]، این اولین گزارش از فعالیت های بازدارنده الاستاز و کلاژناز از عصاره های بدن میوه است. از Ph. vaninii، و ممکن است یک منبع جدید ضد چروک باشد.

در نتیجه، عصاره های بدن میوه از Ph. vaninii فعالیت های آنتی اکسیدانی خوبی، ضد گزانتین اکسیداز، تیروزیناز، سنتز ملانین، الاستاز و فعالیت های مهاری کلاژناز را نشان دادند. فعالیت های بازدارنده گزانتین اکسیداز، تیروزیناز و ملانین می تواند برای منابع طبیعی برای کنترل نقرس و عوامل رنگدانه پوست استفاده شود و مهار الاستاز و کلاژناز ممکن است منابع خوبی برای درمان اختلالات مربوط به چین و چروک پوست باشد. تحقیقات بیشتر برای تعیین عوامل ایجاد کننده فعالیت های ضد گزانتین اکسیداز، ضد تیروسیناز و ضد چروک در عصاره های بدن میوه Ph. vaninii ضروری است.

سیستانچ یک ماده سفید کننده پوست است.

برای اطلاعات بیشتر لطفا روی عکس کلیک کنید