پلی ساکاریدهای سیستانچ جذب اکیناکوزید را در داخل بدن افزایش می دهند و بر میکروبیوتای روده تأثیر می گذارند.

مخاطب: emily.li@wecistanche.com

ژیفی فو و همکاران

خلاصه

پلی ساکاریدها وگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدیاز جانبCistanche deserticolaنشان داده شده است که مزایای سلامتی مختلفی دارد، با این حال، اثر تعاملی بین این دو نوع ترکیب در داخل بدن به طور دقیق مشخص نیست. هدف از این مطالعه بررسی اثرات هم افزایی پلی ساکاریدهای سیستانچ با گلیکوزید فنیل اتانوئید و اثرات پلی ساکاریدها بر میکروبیوتای روده بود. موش‌های Sprague-Dawley به مدت 20 روز با انواع مختلف پلی‌ساکارید سیستانش تغذیه شدند، در روز آخر، به همه موش‌ها تزریق شد.اکیناکوزیددر 100 میلی گرم بر کیلوگرم نتایج عمدتاً بر روی تفاوت در پارامترهای فارماکوکینتیک، ترکیب میکروبیوتای روده و محتوای اسیدهای چرب با زنجیره کوتاه مقایسه شد. نتایج نشان داد که تمامی پلی ساکاریدهای سیستانش از جمله پلی ساکاریدهای خام دارای مولکولی بالا هستند.پلی ساکاریدهای وزنیو پلی ساکاریدهای با وزن مولکولی کم، می توانند تنوع میکروبیوتای روده را تنظیم کنند، باکتری های مفید را افزایش دهند و به ویژه رشد گونه های Prevotella را افزایش دهند. و همچنین تولید اسیدهای چرب با زنجیره کوتاه و جذب اکیناکوزید را بهبود می بخشد. با بررسی فعالیت های هم افزایی پلی ساکاریدها با مولکول های کوچک، این یافته ها نشان می دهد که پلی ساکاریدهای سیستانچ، به ویژه پلی ساکاریدهای با وزن مولکولی کم، می توانند به عنوان یک دستکاری میکروبیوتای روده برای ارتقای سلامت مورد استفاده قرار گیرند.

کلید واژه ها:سیستانچدسرتیکولاپلی ساکاریداکیناکوزیدمیکروبیوت روده

برای دریافت اطلاعات بیشتر در مورد محصولات سیستانچ اینجا را کلیک کنید

1. مقدمه

در سال‌های اخیر، مشخص شده است که پلی‌ساکاریدها ترکیب میکروبیوتای روده را تعدیل می‌کنند و این تغییرات می‌تواند باعث جذب چندگانه تغذیه‌ای شود [1] و عملکرد فیزیولوژیکی را ایجاد کند [2،3]. پلی ساکاریدهای طب سنتی چینی (TCM) کاندیدهای ایده آلی برای تنظیم میکروبیوتای روده هستند و اثرات پربیوتیکی را نشان می دهند. در دستگاه گوارش، پلی ساکاریدها و برخی ترکیبات مولکولی کوچک در تماس ناگزیر، برخی از اثرات را بر فعالیت های بیولوژیکی نشان می دهند [4]. پلی ساکاریدها به عنوان یکی از مواد اصلی فعال در جینسینگ Panax که هزاران سال است به طور گسترده مورد استفاده قرار گرفته است، عملکرد خوبی داشتند.بهبوددرروده ایمتابولیسموجذبازجین سنوزیدهاin vivo [5]. پلی ساکاریدهای Codonopsis pilosula اثر ارتقاء جذب ساپونین ها را در موش کولیت ناشی از سدیم سولفات دکستران نشان دادند [6]. پلی ساکاریدهای گانودرما لوسیدوم، به ویژه کسر با وزن مولکولی بالا، نشان داده شد که دارایپری بیوتیککارکرددر مدل های موش دیس بیوز روده ناشی از رژیم غذایی پرچرب [7]. پلی ساکاریدهای Longan میکروبیوتای روده و متابولیت های روده (افزایش محتویات پیروات و بوتانوات) را برای تولید فعالیت های تعدیل کننده ایمنی تنظیم می کنند [8].

Cistanche deserticola، به عنوان یک طب سنتی چینی، به طور گسترده ای به عنوان یک مکمل غذایی در چین استفاده می شود. مطالعات فارماکولوژیک نشان داد که آن را به نمایش گذاشته استمحافظ عصبی, تعدیل کننده ایمنی, هورمونیمتعادل کردن, ضد-خستگی, ضد-التهابیمحافظت از کبد،ضد-اکسیداتیو, ضد-باکتریایی, ضد-ویروسی، وضد-توموراثرات [9]. تجزیه و تحلیل شیمیایی نشان داد که گلیکوزیدها و پلی ساکاریدهای فنیل اتانوئید ترکیبات فعال اصلی بودند. Echinacoside، گلیکوزید فنیل اتانوئید اصلی در C. deserticola، اثرات دارویی گسترده ای از خود نشان داده است، با این حال، دارویی بودن آن به دلیل فراهمی زیستی ضعیف، متابولیسم سریع و گسترده در داخل بدن محدود است. مطالعات تأیید کرده اند که اکیناکوزید می تواند توسط میکروبیوتای روده در شرایط آزمایشگاهی متابولیزه شود [10،11]. با این حال، شواهد in vivo مورد بررسی قرار نگرفته است. همانطور که می دانیم، میکروبیوتای روده نقش مهمی در میانجیگری متابولیسم زیست فعالی داروهای گیاهی ایفا می کند. بنابراین، هدف اصلی این کار بررسی تأثیرپلی ساکاریدهای سیستانچبر روی میکروبیوتای روده و اثرات آن بر متابولیسم اکیناکوزید.

2. مواد و روشها

2.1. مواد و مواد شیمیایی

Cistanche deserticola YC Ma از آلاشان، مغولستان داخلی، شرکت توسعه صنعت شن و ماسه ماندلا، LTD، چین به دست آمد. آنها توسط پروفسور لیجوان ژانگ (دانشگاه طب سنتی چینی تیانجین) تأیید شدند. یک نمونه کوپن در آزمایشگاه ما سپرده شد. ماده استاندارد مانند اکیناکوزید، آکتئوزید و اسید کلروژنیک از موسسه ملی کنترل محصولات دارویی و بیولوژیکی (پکن، چین) تهیه شده است. خلوص هر استاندارد بیشتر یا مساوی 98 درصد بود. استونیتریل و متانول درجه کروماتوگرافی از Fisher Scientific (Pittsburgh, PA) خریداری شد. اسید فرمیک از Anaqua Chemical Supply Inc. (ویلمینگتون، ایالات متحده آمریکا) خریداری شد. سایر معرفهای شیمیایی از درجه تحلیلی بودند و از شرکت واکنشگر شیمیایی سینوفارم (شانگهای، چین) خریداری شدند.

موش های نر نژاد Sprague-Dawley (200-220 گرم) توسط Beijing HFK Bioscience CO.، LTD (پکن، چین، شماره مجوز SCXK (Jing) 2014- 0004) عرضه شدند. همه حیوانات تحت شرایط SPF در مرکز حیوانات پرورش و نگهداری شدند. این آزمایش بر اساس دستورالعمل های ایجاد شده توسط مراقبت از حیوانات انجام شد و از کمیته TJUTCM استفاده کرد و مطابق با راهنمای مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی منتشر شده توسط مؤسسه ملی بهداشت ایالات متحده (نشریه NIH شماره 85-23، اصلاح شده در 1996) ). پس از یک هفته عادت‌پذیری، موش‌ها به‌طور تصادفی به چهار گروه کنترل، گروه پلی‌ساکارید کل، گروه پلی‌ساکارید با مولکول بالا و گروه پلی‌ساکارید کم مولکول تقسیم شدند. هر گروه شامل 6 موش بود که در همان قفس پرورش داده شدند.

2.2. آماده سازی پلی ساکارید سیستانچ

3. 0 کیلوگرم Cistanche deserticola YC Ma تمیز و در دمای 40 درجه در اجاق خشک کن هوا خشک شد، سپس به صورت پودر درشت خرد شد. پودر درشت خشک با 85 درصد اتانول آبی (v/v) در دمای 60 درجه دو بار و برای هر بار 2 ساعت استخراج شد. نسبت جامد به مایع به ترتیب 1:12 و 1:10 بود. بقایای گیاهی با آب در دمای 100 درجه دو بار دیگر استخراج شد، زمان عصاره گیری و نسبت جامد به مایع با اتانول 85 درصد یکسان بود. محلول آب ترکیب و تحت فشار کاهش یافته تغلیظ شد و سپس در اتانول 80 درصد رسوب داده شد و به مدت 24 ساعت در دمای 4 درجه قرار گرفت. رسوب از طریق سانتریفیوژ در 8000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه جداسازی شد و سپس برای بدست آوردن پلی ساکاریدهای کل (ZT) لیوفیلیز شد. سپس ZT در آب دیونیزه حل شد و بر روی یک غشای اولترافیلتراسیون فیبر توخالی 100 کیلو دالتون فیلتر شد، پلی ساکاریدهای مولکولی بالا با نفوذ نگهدارنده (HM) جمع آوری شدند. فیلتر نفوذ شده با یک غشای اولترافیلتراسیون 6 کیلو دالتون فیلتر شد. پلی ساکاریدهای مولکولی میانی فیلتر نگهدارنده (MM) و پلی ساکاریدهای مولکولی کم فیلتر تصفیه شده (LM) بدست آمدند.

2.3. خصوصیات اولیه پلی ساکاریدهای سیستانش

محتوای پلی ساکارید با استفاده از روش فنل اسید سولفوریک با استفاده از گلوکز به عنوان استاندارد تعیین شد [12]. محتوای پروتئین کل با روش BCA [13] تعیین شد. تجزیه و تحلیل ترکیب مونوساکارید توسط HPLC (سیستم Ultimate 3{17}}00) مجهز به ستون SinoPak C18 (5 میکرومتر، 150 میلی‌متر × 4.6 میلی‌متر) و آشکارساز آرایه دیود (VWD-3000) ​​انجام شد. جداسازی کروماتوگرافی مشتقات پیش ستونی PMP ({9}}فنیل{10}} متیل-5-پیرازولن) با استفاده از بافر فسفات 100 میلی مولار و استونیتریل به نسبت 82:18 (v/v) انجام شد. ، درصد) به عنوان یک فاز متحرک با سرعت جریان 1.0 میلی لیتر در دقیقه. 10 میکرولیتر از هر نمونه تزریق شد و زمان اجرای آنالیز 30 دقیقه با تشخیص در 245 نانومتر استفاده شد. جمع‌آوری و پردازش داده‌ها با استفاده از نرم‌افزار Chromeleon 7.1 (Dionex، Sunnyvale، CA، USA) انجام شد.

وزن مولکولی (Mw) توسط کروماتوگرافی حذف اندازه با کارایی بالا (HPSEC, Ultimate 30{{10}}0 سیستم)، مجهز به ژل TSK G3000 PWXL تعیین شد. (7.8 × 300.0 میلی متر، توسو، ژاپن) و ژل TSK GMPWXL (7.8 × 300.0 میلی متر، Tosoh، ژاپن) ستون و یک آشکارساز ضریب شکست RefractoMax521 (RID). نمونه ها با 0.1 مول در لیتر Na2SO4 با سرعت جریان 0.5 میلی لیتر در دقیقه شسته شدند. دمای ستون در 35 درجه حفظ شد. دکستران به عنوان استاندارد و منحنی استاندارد با توجه به زمان شستشو در برابر لگاریتم وزن مولکولی رسم شد.

2.4. مطالعه فارماکوکینتیک

نمونه‌های خون از کانتوس داخلی در {{0}} ساعت، 0 جمع‌آوری شد.083 ساعت، 0.167 ساعت، 0.25. ساعت، 0.5 ساعت، 0.75 ساعت، 1.{16}} ساعت، 2.0 ساعت، 3.{{20}} ساعت، 4. 0 ساعت، 6.0 ساعت، 8.0 ساعت، 10 ساعت، 12 ساعت و 24 ساعت پس از تجویز اکیناکوزید (100 میلی گرم بر کیلوگرم). نمونه های پلاسما با سانتریفیوژ کردن به مدت 10 دقیقه در ساعت 7500 بعد از ظهر به دست آمد. به 100 میکرولیتر از نمونه پلاسما، 10 میکرولیتر محلول IS (اسید کلروژنیک) و 500 میکرولیتر متانول اضافه شد. سپس مخلوط به مدت 3 دقیقه ورتکس شد و سانتریفیوژ در 14، {34}} دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه انجام شد. مایع رویی جمع آوری و در نیتروژن در دمای اتاق خشک شد. پس از آن، باقی مانده در 100 میکرولیتر متانول آبی 50 درصد، سانتریفیوژ در 14، {39}} دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه دوباره حل شد. در نهایت، 3 میکرولیتر از مایع رویی برای تجزیه و تحلیل به سیستم LC-MS/MS تزریق شد. نمونه ها با استفاده از روشی که قبلاً گزارش شده بود، تجزیه و تحلیل شدند. فاز متحرک شامل CH3CN (حلال A) و H2O (حاوی 0.1 درصد HCOOH؛ حلال B) با استفاده از گرادیان زیر بود: 0-1 دقیقه، 10 درصد A. 1-8 دقیقه، 10-90 درصد A; 8-9 دقیقه، 90-10 درصد A; 9-11 دقیقه: 10 درصد A. نمونه بر روی ستون ACQUITY HSS T3 (1.8 میکرومتر، 100 میلی‌متر × 2.1 میلی‌متر id) جدا شد. سرعت جریان 0.3 میلی لیتر در دقیقه و دمای ستون روی 35 درجه تنظیم شد. در تجزیه و تحلیل MS، حالت یونیزاسیون منفی، با پارامترهای بهینه شده زیر استفاده شد: ولتاژ مویرگی، 2.5 کیلو ولت. دمای انحلال، 450 درجه نیتروژن به‌عنوان محلول‌زدایی و گاز مخروطی به ترتیب با دبی 900 لیتر در ساعت و 150 لیتر در ساعت استفاده شد. بنابراین کمی سازی با استفاده از MRM انتقال m/z 785.29 → 623.26 برای اکیناکوزید، m/z 353.06 → 191.07 برای اسید کلروژنیک (IS)، m/z 623.24 → 161.09 برای اکتئوزید انجام شد. ولتاژ مخروط برای اکیناکوزید، IS و اکتئوزید 100 ولت، 32 ولت و 74 ولت بود. انرژی برخورد، 32 ولت، 14 ولت و 30 ولت.

2.5. مطالعه اسیدهای چرب با زنجیره کوتاه (SCFAs).

موش های صحرایی نر نژاد Sprague-Dawley به مدت 3 هفته به صورت خوراکی ZT، HM و LM تجویز شدند. تعیین SCFAs (اسید استیک، اسید پروپیونیک، اسید ایزوبوتیریک، اسید بوتیریک، اسید ایزووالریک، اسید والریک و هگزانوئیک اسید) توسط کروماتوگرافی گازی (GC) همانطور که قبلاً با چند اصلاح توضیح داده شد انجام شد [14]. به طور خلاصه، 0.5 گرم نمونه مدفوع در 2.5 میلی لیتر آب Milli-Q پخش شد، به مدت 1{13}} دقیقه و 7.5 میلی لیتر محلول 1 درصد HCl/اتانول حاوی استانداردهای داخلی (اسید بوتیریک 24.0 میکروگرم) گرداب شد. /mL و 2- اتیل هگزانوئیک اسید 1.32 ug/mL به عنوان استانداردهای داخلی) اضافه شد. مخلوط‌ها به مدت 5 دقیقه همگن شدند و با سرعت 14،{19}} دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتریفیوژ شدند. پنج میکرولیتر مایع رویی در حالت تقسیم به نسبت 30: 1 تزریق شد. گاز حامل N2 (99.999 درصد) با 1 میلی لیتر در دقیقه بود. گاز ترکیبی (N2) 25 میلی لیتر در دقیقه بود. سرعت جریان H2 و هوا به ترتیب 30 میلی لیتر در دقیقه و 300 میلی لیتر در دقیقه بود. نمونه مدفوع در روز بیستم این مطالعه جمع آوری و بلافاصله در دمای 80- درجه نگهداری شد.

2.6. جمع آوری مدفوع، استخراج DNA و تعیین توالی ژن 16S rRNA

تقریباً 200 میلی گرم از نمونه مدفوع تازه در یک لوله 1.5 میلی لیتری اپندورف استریل از هر موش جمع آوری شد و در دمای 80- درجه برای آماده سازی DNA بعدی نگهداری شد. DNA با استفاده از کیت QIAamp DNA Stool Mini (QIAGEN) از مدفوع استخراج شد. مقدار DNA با استفاده از اسپکتروفتومتر NanoDrop (شرکت Thermo Electron) تعیین شد. یکپارچگی و اندازه توسط الکتروفورز ژل آگارز 1.0 درصد بررسی شد. با توجه به غلظت، DNA با استفاده از آب استریل به 1 نانوگرم در میکرولیتر رقیق شد.

16S rRNA با استفاده از پرایمر خاص (V4: 515F{3}}R) با بارکد تکثیر شد. تمام واکنش های PCR با Phusion® High Fidelity PCR Master Mix (New England Biolabs) انجام شد. حجم مساوی از بافر بارگذاری 1× (حاوی SYB سبز) را با محصولات PCR مخلوط کنید و برای تشخیص روی ژل آگارز 2 درصد الکتروفورز انجام دهید. نوارهای اصلی روشن بین 400 تا 450 جفت باز برای آزمایش های بیشتر انتخاب شدند. محصولات PCR در نسبت تراکم اتحادیه اروپا مخلوط شدند. سپس مخلوط محصولات PCR با کیت استخراج ژل کیاژن (Qiagen، آلمان) خالص سازی شد.

کتابخانه های توالی یابی با استفاده از کیت آماده سازی نمونه رایگان TruSeq® DNA PCR (Illumina، USA) با پیروی از توصیه های سازنده ساخته شدند و کدهای فهرست اضافه شدند. کیفیت کتابخانه بر روی Qubit® 2.0 فلورومتر (Thermo Scientific) و سیستم Agilent Bioanalyzer 2100 ارزیابی شد. این کتابخانه بر روی پلتفرم Illumina HiSeq 2500 توالی یابی شد و خوانش های انتهای زوجی 250 جفت باز تولید شد.

2.7. تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک

قطع کردن توالی بارکد و پرایمر، مونتاژ توالی و فیلتر کردن داده ها طبق QIIME (V 1.7.0). توالی هایی با شباهت بیشتر یا مساوی 97 درصد به همان OTU اختصاص داده شدند. OTU ها به عنوان برچسب های SILVA حاشیه نویسی می شوند. شاخص‌های تنوع آلفا که غنای جامعه میکروبی روده را ارزیابی می‌کنند (متریک‌های ACE و Chao1) و تنوع جامعه (سنجه‌های شانون و سیمپسون) با استفاده از Qiime (نسخه 1.9.1) محاسبه شدند. تجزیه و تحلیل تنوع بتا برای بررسی تغییرات ساختاری جوامع میکروبی با استفاده از فاصله UniFrac استفاده شد. تفاوت بین همه گروه ها با آزمون توکی و تست ویلکاکس مورد بررسی قرار گرفت. تجزیه و تحلیل مختصات اصلی (PCoA) برای توضیح تفاوت‌های ترکیبی بین چهار گروه با استفاده از بسته‌های R استفاده شد. روش اندازه اثر تجزیه و تحلیل متمایز خطی (LEfSe) به طور خاص برای کشف نشانگرهای زیستی و داده های توالی یابی توضیح داده شده است. و تجزیه و تحلیل تشخیص خطی (LDA) برای محاسبه اندازه اثر هر یک از میکروب‌های روده متفاوت و ویژگی‌های مرتبط با هر گروه از موش‌ها استفاده شد. تجزیه و تحلیل همبستگی با استفاده از بسته های R gcorrplot (نسخه 1.1.463) اجرا شد.

داده های SCFA با استفاده از ANOVA SPSS 22 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.{1}}.

3. نتایج و بحث

3.1. تهیه و آنالیز شیمیایی پلی ساکاریدهای سیستانش

Cistanches Herba به عنوان غذا و دارو در چین استفاده می شود. پلی ساکاریدهای جدا شده از آن به دلیل فعالیت های قابل توجهی که دارند توجه زیادی را به خود جلب کرده اند. در این تحقیق، چهار قسمت پلی ساکارید سیستانش (ZT، HM، MM و LM) به روش استخراج آب، رسوب الکلی و اولترافیلتراسیون بدست آمد. ترکیبات شیمیایی چهار قسمت از پلی ساکاریدها در جدول 1 نشان داده شده است.

محتوای قند کل نمونه ها با استفاده از منحنی استاندارد گلوکز. نتایج نشان داد که بازده HM و LM بیشتر از MM بود. پلی ساکاریدها خواص دارویی متنوعی، به ویژه فعالیت ایمنی را نشان دادند. مطالعات نشان داده است که محتوای مونوساکارید و نوع، وزن مولکولی، نوع گروه جانشین نقش مهمی در فعالیت پلی ساکاریدها دارد [15]. بخش های مختلف ترکیب مونوساکارید پلی ساکاریدهای سیستانش مشابه بودند و مانوز (Man)، اسید گالاکترونیک (GalUA)، گلوکز (Glc)، گالاکتوز (Gal) و آرابینوز (Ara) مونوساکاریدهای اصلی بودند.

با این حال، مطالب در میان چهار بخش متفاوت بود. گلوکز و آرابینوز اجزای اصلی ZT و HM بودند، در حالی که گلوکز واحد قند اصلی LM بود، علاوه بر این، رامنوز کمی و اسید گلوکورونیک (GlcUA) نیز در این فراکسیون‌ها شناسایی شد.

وزن‌های مولکولی نسبی نمونه‌ها توسط کروماتوگرافی حذف اندازه با کارایی بالا (HPSEC) بررسی شد. با توجه به منحنی استاندارد دکستران و زمان ماند در ستون‌ها، وزن‌های مولکولی پیک اصلی در ZT در 106×106×1.68 Da و 1.70×104 Da، در HM 106×1.54، 105×2.06 تعیین شد. 4.81 × 104، در MM و LM به ترتیب 1.09 × 104 و 2.05 × 104 تعیین شد. بازده آنها در جدول 1 ذکر شده است و بازده MM کم و برای آزمایش حیوان کافی نیست. مطالعات قبلی اثرات وابسته به ساختار پلی ساکاریدهای سیستانچ را بر فعالیت های زیستی متنوع نشان داده اند [16]. آزمایشات بیشتر هنوز مورد نیاز است، به ویژه تصفیه، تجزیه و تحلیل ساختاری ظریف باید برای مطالعه ساختار-فعالیت اعمال شود.

3.2. مطالعه فارماکوکینتیک

فارماکوکینتیک اکیناکوزید پس از تجویز خوراکی اکیناکوزید توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی فوق العاده بالا طیف سنجی جرمی چهار قطبی سه گانه (UPLC و Xevo TQ-S) مورد بررسی قرار گرفت. میانگین پروفایل های غلظت پلاسما-زمان اکیناکوزید در شکل 1 نشان داده شده است. با توجه به دارو و نرم افزار آماری (DAS، نسخه 2.{6}})، فارماکوکینتیک اکیناکوزید متناسب با یک مدل یک محفظه ای است و مدل دیگر. پارامترهای گروه‌های ZT، HM و LM در جدول 2 خلاصه شده‌اند، از جمله زمان رسیدن به حداکثر غلظت (Tmax)، حداکثر غلظت (Cmax)، سطح زیر منحنی غلظت-زمان (AUC)، و میانگین زمان اقامت (MTR). ). یک مطالعه فارماکوکینتیک نشان داد که میانگین Cmax اکیناکوزید در گروه‌های ZT، HM و LM برابر با 646.4 نانوگرم در میلی‌لیتر، 732.{13}} نانوگرم در میلی‌لیتر و 898.4 نانوگرم در میلی‌لیتر بود که 1.6، 1.8 و 2.2 بود. نسبت به گروه کنترل (406.8 نانوگرم در میلی لیتر) برابر بود. با پیش تیمار با پلی ساکاریدها، AUC({24}} h) اکیناکوزید به ترتیب در گروه های ZT، HM و LM به ترتیب 6.6 درصد، 36.7 درصد و 63.6 درصد در مقایسه با گروه کنترل افزایش یافت که ثابت کرد پلی ساکاریدها نشان دادند. فعالیت ارتقاء جذب یک مولکول کوچک. این نتایج کاملاً مشابه این بود که کیتوالیگوساکاریدها باعث بهبود فراهمی زیستی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی در عصاره Fructus Forsythia [17] و پلی ساکاریدهای Polygonum multiflorum خواص بیودارویی 2، 3، 5، 4'-tetrahydroxy-sti-lb را بهبود بخشیدند. O{39}}D-گلوکوزید در موشهای صحرایی اسپراگ داولی نرمال [18]. میکروبیوتای روده حاوی انواع مختلفی از آنزیم‌های مرتبط با متابولیسم دارو است و مکانیسم شکل‌های میکروبیوم، فارماکوکینتیک و فارماکودینامیک دارو هنوز ناشناخته است [19]. پلی ساکاریدها ممکن است با افزایش سیستم ایمنی، جذب مواد مغذی و کاهش رشد پاتوژن ها، میکروبیوتای روده را تغذیه کنند [20،21]. اگرچه ادبیات گزارش می دهد که پلی ساکاریدهای سیستانچ می توانند متابولیت های اکیناکوزید (مانند اکتئوزید) را در شرایط آزمایشگاهی افزایش دهند، ما متوجه نشدیم که پلی ساکاریدهای همزیست برای تبدیل اکیناکوزید به آکتئوزید در داخل بدن سودمند باشند [10،11].

3.3. محتوای SCFA در مدفوع موش

پلی ساکاریدهای تخمیر شده میکروبیوتای روده، پلیمرها و متابولیت های زیست فعال مختلف مانند SCFA ها را تولید می کنند [3]. به عنوان متابولیت های اصلی پلی ساکاریدها، SCFA ها در مدفوع آنالیز شدند. گزارش شده است که SCFAها شامل اسید استیک، اسید پروپیونیک و بوتیرات اثرات مفیدی بر متابولیسم گلوکز، کلسترول و لیپیدها دارند. استات SCFAs اصلی در روده بزرگ است و یک سوبسترای مهم برای سنتز کلسترول، پروپیونات یک سوبسترا برای گلوکونئوژنز در کبد و بوتیرات سوبسترای انرژی ترجیحی کلونوسیت ها است و دارای خاصیت ضد التهابی در روده است [22،23].

نتایج ما نشان داد که استات SCFAهای اصلی تشکیل‌شده در مدفوع برای همه گروه‌ها و به دنبال آن بوتیرات و پروپیونات بود، در حالی که غلظت SCFAهای والرات و شاخه‌دار (اسید ایزوبوتیریک و اسید ایزووالریک) کمتر بود. نشان داده شده است که استات فعالیت آنزیم را در بافت کبد افزایش می دهد و در نتیجه کنترل بهتر قند خون را در پی دارد [24]. در روز دوم (شکل 2)، گروه LM به طور قابل توجهی سطح استات بالاتری داشت (05/0 pb)، نسبت پروپیونات تمایل به کاهش داشت، و نسبت بوتیرات تمایل به افزایش داشت اگرچه تغییر در مدفوع در مقایسه با گروه کنترل ناچیز بود.

با این حال، گروه HM نسبت بوتیرات به طور قابل توجهی کمتر از گروه کنترل بود (05/0. 0 pb). محتوای کل SCFAs بین LM و HM نسبت به گروه کنترل روند معکوس داشت و تنها گروه LM تفاوت معنی‌داری داشت.

عوامل زیادی بر سطح SCFA ها در مدفوع تأثیر می‌گذارند، از جمله ترکیب و مقدار میکروبیوتای روده، منبع غذایی، و زمان لازم برای عبور غذا از دستگاه گوارش [22]. مطالعات انباشته نشان می دهد که ساختار پلی ساکاریدها، از جمله ترکیب بقایای مونوساکارید، درجه پلیمریزاسیون، هر دو می توانند بر خواص تخمیر و تولید SCFA ها تأثیر بگذارند [25]. از نتایج ما، می‌توان نتیجه گرفت که پلی‌ساکاریدهای سیستانچ تولید SCFAs را تعدیل می‌کنند و پلی‌ساکاریدهای ساختاری متفاوت اثرات متفاوتی دارند.

3.4. پلی ساکاریدهای سیستانچ تغییرات هسته ای را در ترکیب و تنوع میکروبیوتای روده ایجاد کردند

ترکیب باکتریایی نمونه‌های مدفوع (n=4) با استفاده از تکنیک توالی‌یابی با توان بالای Illumina مورد بررسی قرار گرفت. این کتابخانه بر روی پلتفرم Illumina HiSeq2500 توالی یابی شد و خوانش های جفتی 250 جفت باز تولید شد. آنها برای شناسایی طبقه بندی و تجزیه و تحلیل تنوع پردازش شدند. منحنی‌های نادریافت (شکل 3a) نشان داد که برای هر نمونه، غنای گونه‌ای باکتریایی با افزایش عمق نمونه‌برداری کاهش می‌یابد، که نشان می‌دهد تلاش توالی‌یابی کافی بوده و تنوع کل در نمونه ثبت شده است. منحنی شانون (شکل 3b) نشان داد که با افزایش تعداد توالی های شناسایی شده، تعداد گونه های باکتریایی منحصر به فرد افزایش یافت. اشباع منحنی های شانون به این معنی است که داده های توالی برای پوشش همه گونه های باکتری کافی بود.

تجزیه و تحلیل تنوع آلفا برای اندازه گیری تنوع در یک نمونه استفاده می شود. شاخص های تنوع Chao1، ACE، شانون و سیمپسون با آزمون توکی برای توصیف تنوع آلفا محاسبه شدند. تجزیه و تحلیل تنوع بر اساس شاخص های ACE و Chao 1 غنای جامعه میکروبیوتای روده را در سطح OTU نشان داد. شاخص‌های ACE و Chao 1 در نمونه‌های مدفوع گروه LM در مقایسه با گروه کنترل به طور قابل‌توجهی کمتر بود (05/0pb 0) (شکل 4a, b) که به این معنی است که غنای گونه‌ای میکروبیوتای روده کاهش یافته است. توسط تغذیه LM. تجزیه و تحلیل تنوع بر اساس شاخص های شانون و سیمپسون، تنوع اجتماعی میکروبیوتای روده را نشان داد. هیچ تغییر آشکاری در شاخص‌های تنوع شانون و سیمپسون هنگام درمان با پلی‌ساکارید سیستانچ در مقایسه با گروه کنترل وجود نداشت.

پلی ساکاریدهای سیستانچ تغییرات عمده ای در گونه ها ایجاد کردند. علاوه بر این، در چهار گروه N98 درصد از OTU ها مربوط به فیلا باکتروئیدت ها، فیرمیکوت ها و پروتئوباکتری ها بود. غالب ترین گروه Bacteroidetes بود که 55.{18}}9 درصد، 57.89 درصد، 52.72 درصد و 69.{{2{24}}}}4 درصد از میکروبیوتای مدفوع در کنترل، ZT، HM، گروه های LM به ترتیب و پس از آن Firmicutes با 41.39 درصد، 38.{26}}3 درصد، 42.15 درصد و 28.15 درصد به ترتیب (شکل 5a, b). در مقایسه با گروه کنترل، نشان داده شد که گروه ZT اثرات ضعیفی بر فراوانی نسبی فیلاهای اصلی دارد، با این تفاوت که فراوانی کم اکتینوباکتریا به طور قابل توجهی افزایش یافته است (MetaStat، pb 0.05). در گروه HM، پروتئوباکتری ها به طور قابل توجهی افزایش یافت (01/0 pb). این نشان داد که پلی ساکارید HM Cistanche می‌تواند غنی‌سازی پروتئوباکتری‌ها را تقویت کند تا بر متابولیسم مواد در موش‌ها تأثیر بگذارد. در گروه LM، فراوانی باکتری‌ها، که مشارکت‌کنندگان اصلی آن‌ها Prevotellaceae و Prevotellaceae_UCG-001 بودند، به‌طور معنی‌داری افزایش یافت (0.05 pb) و فراوانی Firmicutes، از جمله Peptococcaceae، به‌طور معنی‌داری کاهش یافت (1b) . اعضای Prevotella و Bacteroides قبلاً به عنوان تجزیه کننده فیبر غذایی [26] توصیف شده بودند که محصولات نهایی متابولیکی مانند سوکسینات و استات را تولید می کردند [27]. چنین یافته هایی مطالعات قبلی را تأیید می کند که نشان می دهد برخی از گونه های Prevotella. می تواند پلی ساکاریدهای پیچیده گیاهی را تجزیه کند. گزارش‌های قبلی همچنین نشان داد که دو تقسیم باکتریایی غالب، افزایش نسبت فیلا فیرمیکوتز/باکتروئیدت‌ها با چاقی مرتبط هستند [28]. فراوانی کمتر اولی و فراوانی بیشتر دومی در گروه LM نشان می‌دهد که LM می‌تواند به کاهش وزن کمک کند.

از 72 خانواده شناسایی شده، تاکسون top10 جدا و مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت (شکل 5c، d). Lachnospiraceae و Ruminococcaceae دو خانواده از فراوان‌ترین خانواده‌هایی هستند که در محیط روده پستانداران یافت می‌شوند و با حفظ سلامت روده مرتبط هستند [29]. در مطالعه حاضر، خانواده‌های Bacteroidales گروه _S24-7_ (6.04 ± 39.11 درصد، 4.44 ± 36.88 درصد، 4.01 ± 28.37 درصد، 7.91 ± 35.81 درصد)، 4.6 ± 0.6 درصد، 5.5 ± 0.6 درصد درصد ، 8.97 ± 19.65 درصد ، 8.39 ± 21.05 درصد) ، لاچنوسپیرسه (5.20 ± 18.20 درصد ، 3.29 ± 15.09 درصد ، 7/13 درصد 12.13 درصد ، 82/13 درصد) ، و رودونوکوکاشیاسه (9.64 ± 0.88 درصد ، 10.44 درصد ، 10.45 درصد ، 10.45. 70/4 ± درصد، 72/1 ± 19/8 درصد) در هر گروه غالب بودند. خانواده S{70}} گزارش شده است که حاوی مقدار زیادی آنزیم تجزیه کننده کربوهیدرات است [30]. Prevotellaceae افزایش و Lachnospiraceae تمایل کاهشی را در گروه پلی ساکاریدها در مقایسه با گروه کنترل نشان دادند [31]. فرض بر این بود که هیچ آنزیم فعال پلی ساکارید سیستانچ مربوطه در گروه Bacteroidales_S24-7_و Lachnospiraceae یا مدول‌های اتصال کربوهیدرات باکتری در پلی‌ساکاریدها وجود ندارد. جنس Prevotella در ارتباط با مکان های استفاده از پلی ساکارید و آنزیم های فعال کربوهیدرات گزارش شده است [32]. به منظور یافتن رابطه بین باکتری ها و SCFA ها از آنالیز همبستگی اسپیرمن استفاده شد. برخی از جنس‌ها مانند Bacteroides، Prevotella و Lactobacillus در میکروبیوتای روده نقش مهمی در هیدرولیز پلی ساکاریدها به SCFA دارند [33]. نتایج ما همچنین نشان داد که Bacteroidaceae همبستگی مثبتی دارد و میکروبیوتای غالب بوتیرات بیشتری تولید می‌کنند [34]، در حالی که Prevotellaceae همبستگی مثبت دارند و میکروبیوتای غالب استات بیشتری تولید می‌کنند. لاکتوباسیلاسه و Ruminococcaceae تحت سلطه میکروبیوتا پروپیونات بیشتری تولید کردند (شکل 6).

تجزیه و تحلیل تنوع بتا برای بررسی تغییرات ساختاری میکروبیوتای روده در سراسر نمونه ها با استفاده از معیارهای فاصله UniFrac استفاده شد. تفاوت در فواصل Unifrac با آزمون Tukey و Wilcox تجزیه و تحلیل شد (شکل 7). با استفاده از تجزیه و تحلیل بدون وزن uniFrac، متوجه شدیم که موش های LM از گروه های دیگر دور می شوند. یک الگوی خوشه‌بندی آشکار برای گروه‌های کنترل، ZT، HM و LM شناسایی شد.

فراوانی این میکروبی با درمان‌های پلی‌ساکاریدی تعدیل شد. برای شناسایی گونه‌های باکتریایی خاص در هر گروه، ترکیب میکروبیوتا از گروه‌های کنترل، ZT، HM و LM با روش اندازه اثر تجزیه و تحلیل خطی (LEfSe) مقایسه شد. تجزیه و تحلیل تشخیص خطی (LDA) برای محاسبه اندازه اثر هر یک از ویژگی های فراوان استفاده می شود. آستانه امتیاز LDA بالاتر از لیست 4 است، که نشان دهنده فراوانی نسبی جامعه در گروه مربوطه نسبت به سایر گروه ها است. با استفاده از این روش، متوجه شدیم که 19 OTU در همه گروه ها تفاوت معنی داری داشتند، یعنی 6 OTU در گروه کنترل بالاتر بود، تنها 1 OTU در گروه ZT بالاتر بود، 10 OTU در گروه HM بالاتر بود. و 2 OTUS در گروه LM بالاتر از سایر گروه ها بود (شکل 8). فراوانی g_Prevotellaceae_ UCG_001 در LM به طور قابل توجهی افزایش یافت (1.9 ± 8.47 درصد در LM، 0}.40 ± {{21} }}.09 درصد در گروه کنترل، pb 0.01). نتیجه با این گزارش مطابقت داشت که پلی ساکاریدهای Porphyra haitanensis و Ulva prolifera به وضوح می توانند تکثیر Prevotellaceae UGC{20}} (pb 0.05) و Rikenellaceae RC9 (pb 0.01) را ترویج کنند [35].

4. نتیجه گیری

واضح است که بین ترکیبات شیمیایی TCM، میکروبیوتای روده و متابولیت‌های خاص ناشی از میکروبی روده رابطه وجود دارد. یافته های فعلی ما روشی را برای مطالعه هم افزایی متابولیسم اکیناکوزید با انواع مختلف پلی ساکاریدها بر اساس میکروبیوتای روده ارائه می کند. میکروبیوتای روده می تواند TCM را متابولیزه کند و TCM می تواند بر رشد میکروبیوتای روده تأثیر بگذارد. از یک طرف، پس از تجویز خوراکی پلی ساکاریدها در روده، انواع میکروبیوتای روده، آنزیم های متابولیک را رمزگذاری می کنند و نقش مهمی در تجزیه پلی ساکاریدها و تولید متابولیت های فعال زیستی ایفا می کنند. از سوی دیگر، مشارکت پلی ساکاریدها بر تعادل ریزمحیطی روده در فرآیند تأثیر دارد. از طریق مقایسه با یا بدون پلی ساکاریدها، متوجه شدیم که پلی ساکاریدها اگرچه مستقیماً توسط میزبان هضم نمی شوند، به طور بالقوه به عنوان پری بیوتیک عمل می کنند و با افزایش رشد پروبیوتیک ها منجر به تغییرات مطلوب در میکروبیوتای روده می شوند. پلی ساکاریدهای سیستانچ تنوع میکروبیوتای روده را تنظیم می کنند، باکتری های مفید را افزایش می دهند و به خصوص پلی ساکاریدهای مولکولی کم رشد گونه های Prevotella را افزایش می دهند. علاوه بر این، میکروبیوتای روده بهبود یافته سپس جذب اکیناکوزید را در سیستانش دسرتیکولا افزایش داد. اما دلیل آن کاملاً مشخص نیست، ممکن است نتیجه نقص ترکیبی میکروبیوتای روده، SCFAs و ایمنی باشد و تحقیقات بیشتر برای مدل بیماری ضروری است. اثبات اثرات پری بیوتیک ها در مدل های حیوانی سالم که جامعه میکروبیوتای آنها پایدار و انعطاف پذیر است، دشوار است. پلی ساکاریدهای Cistanche deserticola ممکن است به عنوان محصولات پروبیوتیکی برای تنظیم میکروبیوتای روده ایجاد شوند و می توانند در آینده برای متابولیسم سینرژیک مولکول های کوچک استفاده شوند. این داده ها به ما کمک می کند تا مداخلاتی را برای جلوگیری از گروه های آسیب پذیر مردم برای بهبود سلامت خود طراحی کنیم.

اعلامیه منافع رقابتی

نویسندگان اعلام می کنند که در مورد انتشار این مقاله تضاد منافع وجود ندارد.

قدردانی

نویسندگان با سپاس از بنیاد ملی علوم طبیعی چین قدردانی می کنند (گرنت شماره 81830112 و 81904058)

منابع
[1] I. Khangwal، P. Shukla، پری بیوتیک های بالقوه و مکانیسم های انتقال آنها: رویکردهای اخیر، J. Food Drug Anal. 27 (3) (2019) 649-656.
[2] XF Xu، PP Xu، CW Ma، J. Tang، XW Zhang، میکروبیوتای روده، سلامت میزبان و پلی ساکاریدها، بیوتکنول. Adv. 31 (2) (2013) 318-337.
[3] NT Porter، EC Martens، نقش های مهم پلی ساکاریدها در بوم شناسی میکروبی روده و فیزیولوژی، Annu. Rev. Microbiol. 71 (2017) 349-369.
[4] QW Guo، QQ Ma، ZH Xue، XD Gao، HX Chen، مطالعات بر روی ویژگی های اتصال سه پلی ساکارید با وزن مولکولی متفاوت و فلاونوئیدهای ابریشم ذرت (Maydis stigma)، کربوهید. پلیم. 198 (2018) 581–588.
[5] SS Zhou، J. Xu، H. Zhu، J. Wu، JD Xu، R. Yan، XY Li، HH Liu، SM Duan، Z. Wang، HB Chen، H. Shen، SL Li، میکروبیوتای روده مکانیسم های درگیر در افزایش قرار گرفتن در معرض سیستمیک جین سنوزیدها با پلی ساکاریدهای همزیست در جوشانده جینسینگ، Sci. شماره 6 (2016)، 22474.
[6] YP Jing، AP Li، ZR Liu، PR Yang، JS Wei، XJ Chen، T. Zhao، YR Bai، LJ Zha، CJ Zhang، جذب ساپونین های Codonopsis pilosula بوسیله پلی ساکاریدهای همجوار باعث کاهش دیسبیوز میکروبی روده با سولفات سدیم می شود. کولیت القا شده در موش های مدل، Biomed. Res. بین المللی 2018 (2018), 1781036 (18 صفحه).
[7] CJ Chang، CS Lin، CC Lu، J. Martel، YF Ko، DM Ojcius، SF Tseng، TR Wu، YYM
Chen، JD Young، HC Lai، Ganoderma Lucidum با تعدیل ترکیب میکروبیوتای روده، Nat، چاقی را در موش ها کاهش می دهند. اشتراک. 6 (2015) 7489.
[8] JC Zhang، GM Yang، YZ Wen، SX Liu، CF Li، RL Yang، W. Li، میکروبیوتای روده در فعالیت‌های تعدیل‌کننده ایمنی پلی‌ساکارید longan، مول نقش دارند. Nutr. مواد غذایی Res. 61 (11) (2017)، 1700466.
[9] T. Wang، XY Zhang، WY Xie، Cistanche deserticola YC Ma، "Desert Ginseng": a review, Am. جی. چین. پزشکی 40 (6) (2012) 1123-1141.
[10] Y. Li، GS Zhou، SH Xing، PF Tu، XB Li، شناسایی متابولیت های اکیناکوزید تولید شده توسط باکتری های روده انسان با استفاده از مایع فوق العاده
کروماتوگرافی - طیف سنجی جرمی زمان پرواز چهار قطبی، J. Agr. مواد شیمیایی مواد غذایی 63 (30) (2015) 6764-6771.
[11] Y. Li، Y. Peng، MY Wang، PF Tu، XB Li، متابولیسم گوارشی انسان عصاره آبی گیاه گیاه سیستانچس در شرایط آزمایشگاهی: توضیح مشخصات متابولیک بر اساس شناسایی متابولیت های جامع در شیره معده، آب روده، روده انسان باکتری، و میکروزوم روده، J. Agric. مواد شیمیایی مواد غذایی 65 (34)
(2017) 7447–7456.
[12] M. Dubois، K. Gilles، JK Hamilton، PA Rebers، F. Smith، روش رنگ سنجی برای تعیین قندها و مواد مرتبط، مقعدی. شیمی. 168 (4265) (1956) 167.
[13] NH Cho، SY Seong، KH Chun، YH Kim، IC Kwon، BY Ahn، SY Jeong، ایمن سازی مخاطی جدید با ترکیبات پلی ساکارید-پروتئین محبوس شده در میکروسفرهای آلژینات، J. Control. Release 53 (1-3) (1998) 215-224.
[14] XY Zhao، ZZ Jiang، F. Yang، Y. Wang، XM Gao، YF Wang، X. Chai، GX Pan، Y. Zhu، تشخیص حساس و ساده تاثیر آنتی بیوتیک بر تغییرات پویا و همه کاره کوتاهی مدفوع اسیدهای چرب زنجیره ای، PLoS One 11 (12) (2016)، e167032.
[15] SJ Li، QP Xiong، XP Lai، X. Li، MJ Wan، JN Zhang، YJ Yan، M. Cao، L. Lu، JM Guan، DY Zhang، Y. Lin، اصلاح مولکولی پلی ساکاریدها و فعالیت های زیستی حاصل , Compr. غذای کشیش. علمی F. 15 (2) (2016) 237-250.
[16] ZF Fu، X. Fan، XY Wang، XM Gao، Cistanches Herba: مروری بر خواص شیمی، فارماکولوژی و فارماکوکینتیک آن، J. Ethnopharmacol. 219 (2018) 233-247.
[17] W. Zhou، XB Tan، JJ Shan، T. Liu، BC Cai، LQ Di، اثر کیتوالیگوساکاریدها بر
جذب روده ای گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید در عصاره Fructus Forsythia، Phytomedicine 21 (12) (2014) 1549-1558.
[18] LL Sun, M. Wang, HJ Zhang, GJ You, YN Liu, XL Ren, YR Deng, The influence of polysaccharides from Ophiopogon japonicus on 2,3,5,4′-tetrahydroxy -stilbene-2- ز. فو و همکاران / International Journal of Biological Macromolecules 149 (2020) 732–740 739 O- -d-glucoside درباره خواص بیودارویی در شرایط آزمایشگاهی و فارماکوکینتیک در داخل بدن، Int. جی. بیول. ماکرومول. 119 (2018) 677–682.
[19] KN Lam، M. Alexander، PJ Turnbaugh، پزشکی دقیق میکروسکوپی می‌شود: مهندسی میکروبیوم برای بهبود نتایج دارو، سلول میزبان میکروب 26 (1) (2019) 22-34.
[20] I. Khangwal، P. Shukla، Prospecting prebiotics، روش‌های ارزیابی نوآورانه، و کاربردهای سلامت آنها: بررسی، 3 Biotech. 9 (5) (2019) 187.
[21] GR Gibson، R. Hutkins، ME Sanders، SL Prescott، RA Reimer، SJ Salminen، K. Scott، C. Stanton، KS Swanson، PD Cani، K. Verbeke، G. Reid، انجمن علمی بین المللی پروبیوتیک ها و پری بیوتیک ها (ISAPP) بیانیه اجماع در مورد تعریف و دامنه پری بیوتیک ها، Nat. کشیش گاسترو. هپات. 14 (8) (2017) 491-502.
[22] JMW Wong، R. de Souza، CWC Kendall، A. Emam، DJA Jenkins، سلامت کولون: تخمیر و اسیدهای چرب با زنجیره کوتاه، J. Clin. گاستروانترول 40 (3) (2006) 235-243.
[23] SI Cook، JH Sellin، مقاله مروری: اسیدهای چرب با زنجیره کوتاه در سلامت و بیماری، غذا. فارم. آنجا 12 (6) (1998) 499-507.
[24] H. Yamashita، K. Fujisawa، E. Ito، S. Idei، N. Kawaguchi، M. Kimoto، M. Hinamori، H. Tsuji، بهبود چاقی و تحمل گلوکز توسط استات در دیابت نوع 2 Otsuka Long- موش های چربی ایوانز توکوشیما (OLETF)، Biosci. بیوتکنول. بیوشیمی. 71 (5) (2007) 1236-1243.
[25] AL Ho، O. Kosik، A. Lovegrove، D. Charalampopoulos، RA Rastall، تخمیرپذیری در شرایط آزمایشگاهی زایلولیگوساکاریدها و فراکسیون‌های زیلوپلی ساکارید با وزن‌های مولکولی متفاوت توسط باکتری‌های مدفوع انسان، کربوهید. پلیم. 179 (2018) 50–58.
[26] TT Chen، WM Long، CH Zhang، S. Liu، LP Zhao، BR Hamaker، ظرفیت استفاده از فیبر در میکروبیوتای روده تحت تسلط Prevotella- در مقابل Bacteroides، Sci. Rep. 7 (1) (2017) 2594.
[27] M. Sakamoto، M. Ohkuma، Bacteroides sartorii مترادف هتروتیپی قبلی Bacteroides chinchilla و دارای اولویت، Int. جی. سیست. تکامل. میکرو 62 (6) (2012) 1241-1244.
[28] PJ Turnbaugh، RE Ley، MA Mahowald، V. Magrini، ER Mardis، JI Gordon، یک میکروبیوم روده مرتبط با چاقی با افزایش ظرفیت برای برداشت انرژی، Nature 444 (7122) (2006) 1027-1131.
[29] ال اف گومز-آرانگو، اچ. –2223.
[30] KL Ormerod، DL Wood، N. Lachner، SL Gellatly، JN Daly، JD Parsons، CG Dal Molin، RW Palfreyman، LK Nielsen، MA Cooper، M. Morrison، PM Hansbro، P. Hugenholtz، خصوصیات ژنومی خانواده Bacteroidales غیرفرهنگی S24-7 ساکن روده جانوران گرمازا، میکروبیوم. 4 (1) (2016) 36.
[31] JD Zhang، LJ Song، YJ Wang، C. Liu، L. Zhang، SW Zhu، SJ Liu، LP Duan، اثر مفید Lachnospiraceae تولیدکننده بوتیرات بر حساسیت احشایی ناشی از استرس در موش‌ها، J. Gastro. هپاتول. 34 (8) (2019) 1368–1376.
[32] T. Acceto, G. Avguštin, دستگاه های تخریب کننده پلی ساکارید گیاهی متنوع و گسترده گونه های Prevotella شکمبه و روده عقبی: عاملی در همه جا بودن آنها؟ سیستم Appl. میکروبیول. 42 (2) (2019) 107-116.
[33] KE Bach Knudsen، MS Hedemann، HN Lærke، نقش کربوهیدرات ها در سلامت روده خوک ها، Anim. خوراک. علمی فنی 173 (1-2) (2012) 41-53.
[34] SA Parker، A. Geirnaert، L. Berchtold، A. Greppi، L. Krych، RE Steinert، T. de Wouters، C. Lacroix، درک پتانسیل پری بیوتیکی فیبرهای غذایی مختلف با استفاده از مدل تخمیر مداوم بالغ در شرایط آزمایشگاهی (PolyFermS)، Sci. Rep. 8 (1) (2018) 4318.
[35] ZS Zhang، XM Wang، SW Han، CD Liu، F. Liu، اثر دو پلی ساکارید جلبک دریایی بر میکروبیوتای روده در موش ارزیابی شده توسط Illumina PE250 sequencing، Int. جی. بیول. ماکرومول. 112 (2018) 796–802.