گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانش توبولوزا آپوپتوز را در سلول های سرطان کبدی H22 از طریق هر دو مسیر سیگنال دهی بیرونی و درونی القا می کنند.

زمینه

سرطان کبد در رتبه ششم بروز سرطان و چهارمین مرگ و میر ناشی از سرطان در سراسر جهان قرار دارد. علاوه بر این، رتبه چهارم بروز سرطان و اولین مرگ و میر ناشی از سرطان را در کشورهایی با شاخص اجتماعی جمعیت شناختی پایین کسب کرد [1]. در چین، سرطان کبد سومین علت مرگ ناشی از سرطان در سال 2015 است [2]. بیش از 90 درصد از سرطان های اولیه کبد، سرطان کبد (HCC) در جهان هستند [3]. در حال حاضر، رزکسیون کبدی گزینه اصلی برای درمان HCC است. با این حال، کمتر از 30٪ از بیماران مبتلا به HCC معیارهای رزکسیون درمانی کبدی را داشتند و میزان بقای کلی 5-ساله هنوز به دلیل نرخ بالای عود، کمتر از 35-50% است [4، 5] . در دسترس بودن گزینه های درمانی برای بیماران مبتلا به HCC متوسط ​​تا پیشرفته بسیار محدود است. Sorafenib، یک داروی هدفمند مولکولی، توسط FDA به عنوان خط اول درمان برای HCC پیشرفته تایید شده است. با این حال، سورافنیب تنها حدود 3 ماه بقا را طولانی می کند و نرخ پاسخ کمتر از 4٪ است [6، 7]. توسعه داروها یا استراتژی های جدید علیه HCC ضروری است.

طب سنتی چینی (TCM) به تنهایی یا همراه با استراتژی‌های دیگر برای درمان HCC استفاده شده است و مزایای بالینی از جمله طولانی‌مدت زمان بقا، بهبود کیفیت زندگی، کاهش واکنش‌های جانبی و غیره نشان داده شده است [8، 9]. سیستانچ، نوعی TCM، عملکردهای بیولوژیکی مختلفی مانند ضد اکسیداسیون، ضد التهاب، ضد پیری و محافظت عصبی دارد [10، 11]. گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی جزء اصلی فعال سیستانچ در نظر گرفته شده‌اند که دارای فعالیت‌های متنوعی از جمله آنتی‌اکسیداسیون، ضد التهاب، محافظت از کبد و محافظت عصبی هستند [12-15]. گروه ما گزارش داده استگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی Cistanche tubulosa (CTPG)می تواند آپوپتوز را در سلول های B{0}}F10 ملانوم القا کند و رشد تومورها را در موش مهار کند [16]. در این مطالعه، ما اثر ضد توموری CTPG بر سلول‌های HCC H22 را هم در شرایط in vitro و هم in vivo اندازه‌گیری کردیم و مکانیسم‌های آن را بررسی کردیم. ما دریافتیم که CTPG از طریق هر دو مسیر سیگنال دهی بیرونی و درونی آپوپتوز را در سلول های H22 القا می کند و رشد تومورهای H22 را در موش سرکوب می کند.

توبولوزای طبیعی سیستانچ برای بهبود عملکرد جنسی PHGS75% ECH 30% ACT 12%

مواد و روش ها

خط تلفن

سلول های سرطان کبد H22 موش از آزمایشگاه کلیدی منابع بیولوژیکی و مهندسی ژنتیک سین کیانگ، دانشگاه سین کیانگ (اورومچی، سین کیانگ، چین) به دست آمد و در محیط RPMI 1640 (Gibco) حاوی 100 U/ml پنی سیلین و 10 کشت داده شد. استرپتومایسین و 10 درصد سرم جنین گاوی غیرفعال شده با حرارت (Gibco) در دمای 37 درجه در یک اتمسفر مرطوب با 5 درصد CO2.

سنجش MTT

CTPG از Hetian Dichen Biotech Co., Ltd. (Hetian، Xinjiang، چین) خریداری شد و ترکیبات اصلی CTPG با کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا واجد شرایط و کمی شدند [16]. زنده ماندن سلول توسط 3- (4، 5-دی متیل تیازول-2-یل)-2، 5-دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT) (Sigma, St. Louis, MO ارزیابی شد ، ایالات متحده) سنجش. سلول‌های H22 در 96-صفحه‌های چاهک با تراکم 2 × 104 سلول در محیط کشت 1{20}} ul در هر چاهک تلقیح شدند و در دمای 37 درجه کشت شدند. پس از 24 ساعت، سلول ها با غلظت های مختلف CTPG (0، 100، 200، 300 و 400 میکروگرم در میلی لیتر) یا 0.3٪ DMSO (برابر با غلظت 400 میکروگرم در میلی لیتر CTPG) به مدت 24، 48 و 72 ساعت تیمار شدند. به ترتیب. پس از سانتریفیوژ در 1000 دور در دقیقه به مدت 7 دقیقه، مایع رویی دور ریخته شد و 100 میکرولیتر محلول MTT (5 میلی گرم در میلی لیتر در PBS) به هر چاهک اضافه شد. پلیت ها در دمای 37 درجه به مدت 4 ساعت انکوبه شدند و 100 لیتر DMSO به آن اضافه شد تا کریستال های فرمازان تشکیل شده حل شود. مقادیر OD490 توسط یک خواننده میکروپلیت چاهی (Bio-Rad Laboratories, CA, USA) 96- شناسایی شد. زنده ماندن سلول طبق فرمول محاسبه شد: زنده ماندن سلولی (%)=(ODtreated/ODuntreated) × 100%.

تشخیص آپوپتوز

سلول‌های H22 با غلظت‌های مختلف CTPG (0، 100، 200، 300 و 400 میکروگرم در میلی‌لیتر) یا 0.3 درصد DMSO به مدت 24 ساعت تیمار شدند و سپس با Annexin VFITC/Propidium رنگ‌آمیزی شدند. کیت تشخیص آپوپتوز یدید (PI) (YEASEN، چین) طبق دستورالعمل سازنده. نمونه ها با فلوسیتومتری (BD FACSCalibur، ایالات متحده آمریکا) آنالیز شدند.

تشخیص پتانسیل غشای میتوکندری

سلول‌های H22 با غلظت‌های مختلف CTPG ({1}}، 200 و 400 میکروگرم در میلی‌لیتر) به مدت 24 ساعت تیمار شدند و سپس با رنگ JC{6}} نفوذپذیر از غشاء (بیوتیم، چین) به مدت 20 ساعت رنگ‌آمیزی شدند. دقیقه در 37 درجه پس از دو بار شستشو با بافر JC{9}}، نمونه‌ها مجدداً با 300 ul از بافر JC{11}} معلق شدند و با فلوسایتومتری (BD FACSCalibur، ایالات متحده آمریکا) آنالیز شدند.

تجزیه و تحلیل چرخه سلولی

سلول‌های H22 در ظروف کشت 6{2}} میلی‌متری تلقیح شدند و با غلظت‌های مختلف CTPG (0، 1{18}}0، 200، 300 و 400 میکروگرم در میلی‌لیتر) یا 0.3 درصد DMSO تیمار شدند. به مدت 24 ساعت تمام سلول ها جمع آوری و دو بار با PBS شسته شدند. سلول ها در اتانول سرد یخ 70 درصد در دمای 20- درجه به مدت 2 ساعت تثبیت شدند و دو بار با PBS شسته شدند، سپس مجدداً در 300 میکرولیتر پروپیدیوم یدید/RNase بافر رنگ آمیزی (BD Biosciences) معلق شدند. پس از 10 دقیقه در دمای اتاق، نمونه ها با فلوسیتومتری (BD FACSCalibur، ایالات متحده آمریکا) جمع آوری شدند و توزیع چرخه سلولی با نرم افزار ModFit LT 3.0 تجزیه و تحلیل شد.

رنگ آمیزی Hoechst 33258

تغییرات مورفولوژیکی هسته سلولی H22 با رنگ آمیزی متصل شونده به DNA به غشاء، رنگ آمیزی Hoechst 33258 آنالیز شد. سلول‌های H22 در یک صفحه چاهی با غلظت 1×1{12}}5 سلول در چاهک در محیط 2 میلی‌لیتری کاشته شدند. پس از تلاقی 60 تا 70 درصد، سلول ها با CTPG (0، 100، 200، 300 و 400 میکروگرم در میلی لیتر) به مدت 24 ساعت تیمار شدند. سلول ها جمع آوری و با 4% پارافورمالدئید سرد در دمای 4 درجه به مدت 10 دقیقه ثابت شدند. پس از شستشو با PBS، سلول ها با Hoechst 33258 (Beyotime، چین) در دمای 4 درجه به مدت 10 دقیقه رنگ آمیزی شدند. نمونه ها توسط یک میکروسکوپ فلورسانس معکوس (Nikon Eclipse Ti-E، ژاپن) مشاهده شدند.

وسترن بلات

آنتی کاسپاز-3، کاسپاز ضد شکاف-3، Anti-Bcl-2 و آنتی‌باکس از Beyotime Biotech Co., Ltd. (شانگهای، چین) خریداری شد. آنتی کاسپاز-7، ضد کاسپاز-7، ضد کاسپاز-8، ضد کاسپاز-8، ضد کاسپاز-9، ضد -کاسپاز شکافته شده{20}}، ضد PARP، PARP ضد شکاف، IgG-HRP ضد موش و IgG-HRP ضد خرگوش از Cell Signaling Technology خریداری شد. آنتی{26}}اکتین از Beijing ComWin Biotech Co., Ltd. (پکن، چین) خریداری شد.

سلول‌های H22 با غلظت‌های مختلف CTPG (0، 100، 200، 300 و 400 میکروگرم در میلی‌لیتر) یا 0.3 درصد DMSO به مدت 24 ساعت تیمار شدند. سلول ها جمع آوری و با محلول لیز سلولی RIPA (Beijing ComWin Biotech Co., Ltd) به مدت 30 دقیقه روی یخ لیز شدند. نمونه ها (12،{11}} گرم به مدت 15 دقیقه در 4 درجه) چرخانده شدند تا مواد رویی جمع آوری شود و غلظت پروتئین با کیت BCA (Thermo Fisher Scientific, USA) اندازه گیری شد. مقدار مساوی از پروتئین در هر نمونه توسط 12% SDS-PAGE جدا شد و به غشاهای PVDF (Biosharp، چین) منتقل شد. پس از مسدود شدن با بافر TBST حاوی 5 درصد شیر بدون چربی، غشاها به ترتیب با آنتی بادی های اولیه مربوطه و آنتی بادی های ثانویه کونژوگه شده با پراکسیداز ترب کوهی (HRP) انکوبه شدند. پس از شستشو با TBST، پروتئین های هدف توسط کیت سنجش ECL (Beyotime، چین) شناسایی شدند.

بیانیه حیوانات و اخلاق

موش های نر کونمینگ 6-8 هفته ای از مرکز آزمایشگاه حیوانات، دانشگاه پزشکی سین کیانگ (اورومچی، سین کیانگ، چین) خریداری شدند. موش‌ها در دانشگاه سین‌کیانگ در یک مرکز حیوانی با دمای استاندارد و چرخه نور نگهداری شدند. تمام مطالعات حیوانی بر اساس دستورالعمل های کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات دانشگاه سین کیانگ انجام شد. این پروتکل توسط کمیته اخلاقیات آزمایشات حیوانی آزمایشگاه کلیدی منابع بیولوژیکی و مهندسی ژنتیک سین کیانگ (BRGE-AE001)، دانشگاه سین کیانگ تأیید شد.

مطالعه تومور موش

برای القای مدل موش تومور، موش‌های نر کونمینگ به صورت زیر جلدی با 1 × 10 6 سلول H22 در 10 0 ul PBS به سمت راست تزریق شدند. پس از 3 روز، موش ها به طور تصادفی به 3 گروه (7 موش / گروه) تقسیم شدند. به گروه کنترل 0.1 میلی لیتر DMSO به صورت زیر جلدی در اطراف تومور تزریق شد. گروه های CTPG{9}} و CTPG{10}} به صورت زیر جلدی 200 یا 400 میلی گرم بر کیلوگرم CTPG در 0.1 میلی لیتر DMSO در اطراف تومور تزریق شدند. موش ها هر 2 روز یکبار تا 21 روز تحت درمان قرار گرفتند. اندازه تومورها با استفاده از کولیس تا 25 روز اندازه گیری شد و حجم تومور طبق فرمول: حجم تومور (mm3 )=(طول×عرض2)/2 محاسبه شد. پس از 25 روز، بقای موش های تومور تا پایان این مطالعه هر روز بررسی شد.

تحلیل آماری

معنی‌داری آماری با استفاده از آنالیز واریانس یک‌طرفه در بین گروه‌های تیمار و کنترل محاسبه شد. تمام داده ها به صورت میانگین ± انحراف معیار (SD) بیان شد. p < 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

نتایج

CTPG زنده ماندن سلول های H22 را در شرایط آزمایشگاهی کاهش داد

برای بررسی اثر ضد توموری CTPG بر HCC، سلول‌های H22 با غلظت‌های مختلف CTPG ({1}}، 100، 200، 300 و 400 میکروگرم بر میلی‌لیتر) در شرایط آزمایشگاهی تیمار شدند. پس از 24 ساعت، مورفولوژی سلول های H22 با استفاده از میکروسکوپ معکوس مشاهده شد. ما دریافتیم که مورفولوژی سلول های H22 به طور چشمگیری با درمان CTPG تغییر کرد. با افزایش غلظت CTPG، سلول ها کوچک و گرد شدند و تعداد سلول ها نیز بسیار کاهش یافت (شکل 1a). از روش MTT برای تجزیه و تحلیل زنده ماندن سلول های H22 پس از درمان CTPG به ترتیب برای 24، 48 و 72 ساعت استفاده شد. CTPG به طور قابل توجهی زنده ماندن سلول H22 را به صورت وابسته به دوز و زمان کاهش داد (شکل 1b). CTPG در 300 ug/ml به بهترین سرعت بازدارندگی رسید (شکل 1c). مقادیر IC50 CTPG برای سلول های H22 236 ug/ml در 24 ساعت و 169.8 ug/ml در 48 ساعت است.

توبولوزای طبیعی سیستانچی برای بهبود حافظه PHGS75% ECH 30% ACT 12%

CTPG آپوپتوز را در سلول های H22 القا کرد

برای بررسی اینکه آیا کاهش زنده‌مانی سلول‌های H22 به واسطه القای آپوپتوز ایجاد می‌شود، سلول‌های H22 با غلظت‌های مختلف CTPG ({2}}، 100، 200، 300 و 400 میکروگرم در میلی‌لیتر) به مدت 24 ساعت تیمار شدند و با رنگ‌آمیزی شدند. PI و Annexin V. نتایج فلوسایتومتری نشان داد که CTPG به طور قابل توجهی آپوپتوز سلول های H22 (شامل آپوپتوز زودرس و دیررس) را به روشی وابسته به دوز القا می کند (شکل 2a). اگرچه دوز بالای CTPG نیز به طور قابل توجهی نکروز سلول های H22 را افزایش می دهد، نکروز به دلیل نسبت کمتر آن (8.3٪) در مقایسه با آپوپتوز (52.6٪) نقش جزئی در مهار رشد سلول های H22 ایفا می کند. علاوه بر این، کل پروتئین‌های سلول‌های H22 پس از تیمار CTPG جدا شد و بیان لنفوم سلول B ضد آپوپتوز 2 (Bcl{20}}) و پروتئین X مرتبط پرواپوپتوز BCL{21}(Bax) توسط وسترن شناسایی شد. لکه. داده‌های اسکن در مقیاس خاکستری نشان داد که میزان بیان Bax و Bcl{22}} به ترتیب افزایش و کاهش یافته است. نسبت Bax/Bcl{23}} به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 2b). این نتایج نشان می دهد که CTPG باعث القای آپوپتوز در سلول های H22 می شود.

CTPG باعث تراکم کروموزومی و توقف چرخه سلولی در سلول های H22 می شود

گزارش شده است که آسیب DNA و توقف چرخه سلولی ناشی از داروها می تواند رشد سلول های تومور را مهار کند و باعث آپوپتوز در سلول های تومور شود [17، 18]. برای شناسایی مورفولوژی هسته در سلول‌های H22 پس از تیمار CTPG به مدت 24 ساعت، سلول‌های H22 توسط Hoechst 33342 رنگ‌آمیزی شدند و با استفاده از میکروسکوپ فلورسنت معکوس مشاهده شدند. سلول‌های تیمار شده با CTPG افزایش وابسته به دوز کروماتین روشن هسته‌ها را نشان دادند، در حالی که سلول‌های تیمار نشده هسته‌های رنگ‌آمیزی همگن را نشان دادند (شکل 3a). توزیع چرخه سلولی در سلول‌های H22 با رنگ‌آمیزی PI پس از آن بررسی شددرمان CTPGبه مدت 24 ساعت همانطور که در شکل 3b نشان داده شده است، تیمار CTPG به طور قابل توجهی نسبت سلول های فاز G0/G1- و G2/M را افزایش داد و به طور قابل توجهی نسبت سلول های فاز S را کاهش داد، که نشان می دهد CTPG G را القا می کند. 0/G1 و G2/Mphase توقف در سلول‌های H22. دوز بالای CTPG نیز به طور قابل توجهی نسبت سلول های زیر G1 را افزایش داد.

CTPG پتانسیل غشای میتوکندری را کاهش داد و آزادسازی سیتوکروم c را افزایش داد

مسیر وابسته به میتوکندری نقش مهمی در القای آپوپتوز دارد [19، 20]. تغییرات پتانسیل غشای میتوکندری (Δψm) را می توان با رنگ آمیزی JC-1 بررسی کرد زیرا دانه های JC{4} (فلورسانس قرمز) می توانند با کاهش Δψm به یک مونومر (فلورسانس سبز) تجزیه شوند [21]. پس از تیمار CTPG به مدت 24 ساعت، سلول های H22 با رنگ JC{8}} رنگ آمیزی شدند. داده‌های فلوسایتومتری نشان داد که فلورسانس قرمز در کانال FL-2 و فلورسانس سبز در کانال FL{10}} به طور قابل‌توجهی کاهش یافته و با درمان CTPG افزایش یافته است. نسبت سلول های PE-FITC+ به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 4a)، که نشان می دهد CTPG باعث کاهش Δψm در سلول های H22 می شود. این با افزایش نسبت Bax/Bcl{14}} مطابقت دارد. در نتیجه، ما مشاهده کردیم که آزادسازی سیتوکروم c با درمان CTPG به طور قابل توجهی افزایش یافته است (شکل 4b). این نتایج نشان داد که CTPG ممکن است تا حدی آپوپتوز را در سلول های H22 از طریق یک مسیر وابسته به میتوکندری (ذاتی) القا کند.

CTPG مسیر کاسپاز را فعال کرد و از ترمیم DNA جلوگیری کرد

در مرحله بعد، فعال شدن کاسپاز ناشی از CTPG از طریق هر دو مسیر سیگنالینگ بیرونی و درونی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. پس از درمان CTPG به مدت 24 ساعت، پروتئین کل از سلول های H22 جدا شد و سطوح پرو- و شکاف-کاسپازها با وسترن بلات شناسایی شد. در مقایسه با گروه کنترل نشده یا DMSO، تیمار CTPG نه تنها سطح کاسپاز بریده شده-8 (مسیر بیرونی) بلکه سطح کاسپاز شکافته-9 (مسیر درونی) را به طور قابل توجهی افزایش داد (شکل 1). 5). به‌تدریج، کاسپاز فعال-8 و -9 پروکاسپاز پایین‌دست-3 و -7 را که در شکل 5 مشاهده شد، شکافتند. کاسپاز فعال-3 DNA را شکافت آنزیم ترمیم پلی (ADP-ribose) پلیمراز (PARP) برای جلوگیری از ترمیم DNA و تجمع آسیب DNA همانطور که در شکل 3a مشاهده شده است.

این نتایج نشان داد که CTPG آپوپتوز را در سلول های H22 از طریق هر دو مسیر سیگنالینگ بیرونی و درونی القا می کند.

CTPG رشد H22 HCC را در داخل بدن سرکوب می کند و میزان بقای موش های تومور را بهبود می بخشد.

در نهایت، اثر ضد توموری CTPG بر HCC در مدل موش توموری، که با تزریق زیر جلدی سلول‌های H22 ایجاد شد، ارزیابی شد. پس از 3 روز از تزریق سلول H22، موش های تومور 8 بار با CTPG تحت درمان قرار گرفتند. وزن بدن موش ها و اندازه تومورها در نقاط زمانی مشخص شده کنترل شد. همانطور که در شکل 6a نشان داده شده است، وزن بدن موش ها در هر گروه تفاوت معنی داری ندارد، که نشان می دهد دوزهای انتخابی CTPG هیچ عوارض جانبی آشکاری ندارند.

جالب توجه است که رشد تومور در موش‌های تحت درمان با 200 mg/kg و 400 mg/kg CTPG به‌طور قابل‌توجهی مهار شد (شکل 6b). علاوه بر این، دو دوز درمان CTPG بقای موش‌های تومور (3/7، 3/7) را در مقایسه با گروه کنترل (0/7) در پایان آزمایش بسیار بهبود بخشید (شکل 6b). ما همچنین دریافتیم که CTPG به طور قابل توجهی تکثیر سلول‌های طحال جدا شده از موش‌های نر کونمینگ را به روشی وابسته به دوز افزایش می‌دهد (شکل 6c)، که نشان می‌دهد CTPG دارای اثر تحریک‌کننده ایمنی است.

با بالاترین کیفیت سیستانچ توبولوزا برای بهبود عملکرد جنسی PHGS75% ECH 30% ACT 12%

بحث

TCM برای درمان بیماری های مختلف از جمله سرطان برای تاریخ طولانی مورد استفاده قرار گرفته است. گزارش شده است که TCM می تواند آپوپتوز را در انواع مختلف سلول های تومور از طریق مسیرهای سیگنالینگ بیرونی (با واسطه گیرنده مرگ) و درونی (وابسته به میتوکندری) برای اعمال اثرات ضد توموری القا کند [22-25]. این دو مسیر می توانند به ترتیب کاسپاز-8 و -9 را فعال کنند [24، 26]. در اینجا، ما دریافتیم که CTPG به طور قابل توجهی رشد سلول H22 را از طریق القای آپوپتوز و توقف چرخه سلولی سرکوب می کند. سطوح کاسپاز بریده شده-8 و -9 بطور قابل توجهی توسطدرمان CTPG، نشان می دهد که هر دو مسیر سیگنالینگ بیرونی و درونی در القای آپوپتوز نقش دارند. مطالعه قبلی ما نشان داد که CTPG با یک مسیر وابسته به میتوکندری باعث آپوپتوز در سلول‌های ملانوم B{0}}F10 می‌شود که باعث افزایش سطح کاسپاز بریده شده-9 اما نه کاسپاز-8 [16] می‌شود. CTPG ممکن است مسیرهای سیگنالینگ متمایز را در انواع مختلف سلول های تومور فعال کند.

یکپارچگی غشای میتوکندری به شدت توسط اعضای خانواده پروتئین BCL-2 از جمله Bax و Bcl-2 [27، 28] تنظیم می‌شود. نسبت Bax به Bcl نقش مهمی در مسیر آپوپتوز وابسته به میتوکندری دارد [29]. در سلول‌های H22 تیمار شده با CTPG، نسبت Bax/Bcl{8}} به طور قابل‌توجهی تنظیم شده بود، که ممکن است باعث کاهش Δψm و آزادسازی سیتوکروم c مشاهده‌شده در این مطالعه شود. در نتیجه، pro-caspase{11}} شکافت و فعال شد. در نهایت، آغازگر کاسپاز فعال-8 و -9 اعدام کننده کاسپاز-3 را فعال کردند تا PARP را برای جلوگیری از ترمیم DNA جدا کنند. روی هم رفته، این نتایج نشان داد که CTPG از طریق هر دو مسیر سیگنالینگ بیرونی و درونی، آپوپتوز را در سلول‌های H22 القا می‌کند.

در یک مدل موش توموری، CTPG به طور قابل توجهی رشد H22 HCC را سرکوب کرد و بقای موش‌های تومور را تا حد زیادی بهبود بخشید. جالب توجه است که CTPG به طور وابسته به دوز باعث افزایش تکثیر سلول‌های طحال از موش‌های کونمینگ می‌شود که با مطالعه قبلی ما مطابقت دارد [16]. این نتایج نشان داد که CTPG ممکن است رشد H22 HCC را در موش از طریق اثر مستقیم ضد توموری و تقویت غیرمستقیم ایمنی سرکوب کند.

نتیجه گیری

CTPG رشد سلول‌های H22 را هم در شرایط in vitro و هم in vivo سرکوب کرد و از طریق هر دو مسیر سیگنال‌دهی بیرونی و درونی باعث آپوپتوز در سلول‌های H22 شد. این داده ها نشان داد که CTPG ممکن است یک کاندید بالقوه برای درمان HCC باشد.