تعیین محتوای پنج ترکیب در Semen Rehmanniae و تعیین اثر انگشت HPLC آن

جدول 3 نتایج آزمون بازیابی (n=6)

2.4 تعیین نمونه

شش دسته رحمانیا جمع آوری شده بر اساس روش "2.2.2" تهیه و با توجه به شرایط کروماتوگرافی در "2.1" نمونه برداری و تعیین شدند. نتایج تعیین محتوا در جدول 4 نشان داده شده است. نتایج نشان می دهد که در بین 5 جزء، محتوای رحمانیا گلیکوزید D بیشترین مقدار را دارد که از 0}.460% تا {{1} متغیر است. 0}}.730%; محتوای گلیکوزید لئونوری در رتبه دوم قرار دارد که از 0.100٪ تا 0.270٪ متغیر است و محتوای دو جزء در نمونه های مناطق مختلف تولید تفاوت معنی داری ندارد. در نمونه SX1، به جز اکیناکوزید، محتویات چهار جزء دیگر به طور قابل توجهی بالاتر از سایر دسته های نمونه است. محتویات اکیناکوزید، سیستانچزید A و ورباسکوزید در Rehmannia glutinosa از مناطق مختلف تولید کاملاً متفاوت و نامنظم است.

گیاه سیستانچ باثبات کیفیت خوب

2.5 ایجاد و ارزیابی شباهت اثر انگشت HPLC Rehmannia glutinosa

کروماتوگرام ها و داده های تعیین محتوای چند جزئی در Rehmannia glutinosa به نرم افزار "Chinese Herbal Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System (2{3}}12 Edition)" وارد شد و کروماتوگرام نمونه آزمایشی SX1 انتخاب شد. به عنوان طیف مرجع عرض پنجره زمانی روی 0.10 دقیقه تنظیم شد و از روش میانه برای تولید طیف‌های روی هم قرار گرفته و طیف مرجع استفاده شد. در مجموع 23 قله مشترک شناسایی شد (شکل 3 را ببینید). شباهت بین اثر انگشت نمونه Rehmannia glutinosa و مرجع 0.904~0.950 بود که نشان می دهد نمونه های Rehmannia glutinosa از مناطق مختلف تولید و بین Rehmannia glutinosa خام و Rehmannia glutinosa پخته شده مشابه بوده و از قوام کیفیت خوبی برخوردار بودند.

جدول 4 نتایج تعیین محتوای 5 جزء در سمن رحمانیا/%

13. rehmannioside D; 17. leonuride; 19. اکیناکوزید; 20. castanoside A; 21. اکتئوزید

شکل 3 روکش کروماتوگرام های HPLC از 6 دسته سمن رحمانیا (SX{2}}SX4، HN1، HN2) و مرجع (R)

3 بحث

3.1 انتخاب شرایط کروماتوگرافی

چهار سیستم فاز متحرک، استونیتریل-آب، استونیتریل-0.1% محلول اسید فرمیک، متانول-آب و محلول اسید فرمیک{4}}.1% متانول، در این مطالعه بررسی شدند. نتایج نشان داد که پنج جزء اثرات جداسازی خوبی در سیستم استونیتریل داشتند. در مقایسه با سیستم فاز متحرک استونیتریل-آب، پیک‌های گلیکوزیدهای rehmannia glutinosa و motherwort در فاز متحرک استونیتریل{7}}.1% محلول اسید فرمیک باریک‌تر و دارای تقارن پیک خوبی بودند. در عین حال، به دلیل جذب متفاوت فرابنفش پنج جزء، محتوای اجزاء بسیار متفاوت است. به منظور تعیین دقیقتر محتوای هر جزء و اطمینان از اینکه شدت جذب پنج جزء به طور مساوی در یک کروماتوگرام توزیع شده است، جذب اشعه ماوراء بنفشرحمانیا گلیکوزید Dگلیکوزید، اکیناکوزید، سیستانچزید A و ورباسکوزید مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و تعیین طول موج متغیر انتخاب شد، یعنی 0-24 دقیقه، اولین گلیکوزید rehmannia جدا شده در 203 نانومتر و 24-40 دقیقه تعیین شد. اکیناکوزید جدا شده، cistancheside A، و verbascoside در 330 نانومتر تعیین شد. علاوه بر این، این مطالعه همچنین اثرات استخراج متانول، محلول متانول 70 درصد، محلول متانول 50 درصد و محلول استونیتریل 50 درصد به عنوان حلال های استخراج را بررسی کرد. نتایج نشان داد که محلول متانول 70 درصد به عنوان حلال استخراج می تواند اجزای مورد آزمایش را بهتر حل کند و نمونه استخراج شده ناخالصی کمتری دارد. بنابراین، این مطالعه متانول 70 درصد را به عنوان حلال استخراج، استونیتریل{9}}.1 درصد محلول اسید فرمیک را به عنوان سیستم فاز متحرک انتخاب کرد و از طول موج متغیر برای تعیین محتویات پنج جزء در رحمانیا استفاده کرد.

3.2 تجزیه و تحلیل نتایج تعیین نمونه

از نتایج تعیین، می توان دریافت که پس از بخارپز کردن، به جز افزایش جزئی در محتوای اکیناکوزید، محتویات چهار جزء دیگر به طور قابل توجهی کاهش یافت، به ویژه محتوای leonuriside و cistancheside A. محتوای rehmannia گلیکوزید D و cistancheside A در Rehmannia glutinosa از همان منطقه تولید کمی متفاوت بود، و محتوای leonuriside، echinacoside و verbascoside به طور قابل توجهی متفاوت بود. محتوای اکیناکوزید در Rehmannia glutinosa از منطقه تولید هنان به طور قابل توجهی بیشتر از نمونه های منطقه تولید شانشی بود و محتوای چهار جزء دیگر کمی متفاوت بود. در عین حال، با توجه به اثر انگشت HPLC ایجاد شده در این مطالعه، شباهت بین 6 دسته از نمونه‌های رحمانیا و اثر انگشت شاهد 0.904~0.950 بود که نشان می‌دهد ماده شیمیایی اصلی اجزای 6 دسته نمونه رحمانیا قبل و بعد از پردازش بسیار سازگار بودند.

به طور خلاصه، روش تعیین محتوا و اثر انگشت HPLC ایجاد شده در این مطالعه دقیق، قابل اعتماد و از ویژگی خوبی برخوردار است. آنها می توانند برای مشخص کردن تغییرات در اجزاء و درجه پردازش Rehmannia glutinosa قبل و بعد از پردازش استفاده شوند و پشتیبانی فنی برای کنترل کیفیت Rehmannia glutinosa ارائه دهند. با این حال، این مطالعه دارای معایب دسته های نمونه کوچک و پوشش ناقص مناطق تولید است که نیاز به تجزیه و تحلیل و تأیید بیشتر دارد.

مراجع

[1] کمیته فارماکوپه چینی. فارماکوپه جمهوری خلق چین: جلد 1 [S]. پکن: چاپ علوم و فناوری پزشکی چین، 2020: 129-130.

[2] شو جون، فو ژتونگ. تحقیق در مورد تکامل تاریخی نام های Rehmannia glutinosa فرآوری شده و بررسی اثربخشی آن [J]. پزشکی ثبت اختراع چینی، 2017، 39 (9): 1913-1916.

[3] ژو جو، ژو شیانگمی، شی یوهه و همکاران. پیشرفت تحقیق در مورد Rehmannia glutinosa و تجزیه و تحلیل پیش‌بینی نشانگرهای کیفیت آن [J]. پزشکی ثبت اختراع چینی، 2022، 45 (2): 1273-1281.

[4] چن جین پنگ، ژانگ ککسیا، لیو یی و همکاران. پیشرفت تحقیقات در مورد ترکیب شیمیایی و اثرات دارویی Rehmannia glutinosa [J]. طب گیاهی چینی، 2022، 52 (6): 1772-1784.

[5] لی هونگوی، منگ شیانگل. پیشرفت تحقیقات در مورد اجزای شیمیایی و اثرات فارماکولوژیک Rehmannia glutinosa［J］.

تحقیقات ارزیابی دارو، 2015، 38(2): 218-228.

[6] Zhang Boyong، Jiang Zhenzuo، Wang Yuefei، و همکاران. تجزیه و تحلیل اجزای شیمیایی Rehmannia glutinosa تازه، Rehmannia glutinosa خام و Rehmannia glutinosa پخته شده توسط UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. طب ثبت اختراع چینی، 2016، 38(5): 1104-1108.

[7] Zhang Lixian، Wei Yue، Li Feifei، و همکاران. تشخیص الگوی اثر انگشت و تعیین محتوای چند جزئی محصولات مختلف فرآوری شده Rehmannia glutinosa (J［). Hubei Agricultural Sciences، 2023، 62(9): 135-141.

[8] چن جین پنگ، ژانگ ککسیا، لیو یی و همکاران. پیشرفت تحقیقات در مورد اجزای شیمیایی و اثرات فارماکولوژیک Rehmannia glutinosa［J］. طب گیاهی چینی، 2021، 52(6): 1772-1784.

[9] تائو یی، جیانگ یانهویی، تانگ کجیان، و همکاران. بررسی تطبیقی ​​اجزای شیمیایی Rehmannia glutinosa قبل و بعد از فرآوری توسط UHPLC-Q-TOF/MS［J］. داروهای جدید چینی و فارماکولوژی بالینی، 2016، 27(1): 102-106.

［10］ زو ژو، دای شین شین، سو شولان و همکاران. تجمع دینامیکی اجزای نوکلئوزیدی و اسید آمینه در Rehmannia glutinosa بر اساس UPLC-TQ-MS［J］. طب گیاهی چینی، 2021، 52(23): 7323-7330.

لی یوجیائو - 11. مطالعه بر روی فناوری پردازش و مکانیسم "نه بخاردهی و نه قرار گرفتن در معرض" Rehmannia glutinosa［D］. جینان: دانشگاه شاندونگ، 2023.

［12］ وانگ یو، ژو کیائو، ژانگ ژولان، و همکاران. HPLC تعیین همزمان محتویات هشت جزء در Rehmannia glutinosa و محصولات مختلف فرآوری شده آن با تجزیه و تحلیل اثر انگشت UPLC و تعیین محتوای اجزای چند شاخص [J]. مواد دارویی چینی، 2021، 44 (7): 64-68.

[13] Guo Xiaokai، Xue Shujuan، Chen Suiqing. ارزیابی کیفیت Rehmannia glutinosa بر اساس اثر انگشت UPLC و تعیین محتوای مؤلفه چند شاخص [J]. مواد دارویی چینی، 2021، 44 (4): 917-923.