جذب سیتوکین در طی پرفیوژن کلیه انسان، امضای ژن التهابی مرتبط با عملکرد پیوند با تاخیر را کاهش می دهد.

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

جان آر فردیناند1,2|Sarah A. Hosgood2,3|تام مور2,3|اشلی فرو1|کریستوفر جی وارد1|توماس کاسترو-دوپیکو1|مایکل ال نیکلسون2,3|Menna R. Clatworthy1،2

1 واحد ایمنی مولکولی، گروه پزشکی دانشگاه کمبریج، آزمایشگاه زیست شناسی مولکولی، کمبریج، انگلستان

2 موسسه ملی تحقیقات سلامت واحد تحقیقات خون و پیوند در اهدای عضو، کمبریج، انگلستان

3 گروه جراحی دانشگاه کمبریج، کمبریج، انگلستان

پیوند درمان بهینه برای اکثر بیماران در مرحله پایانی استکلیهمرضاما کمبود اعضا یک چالش بزرگ است. پرفیوژن ماشین نورموترمیک (NMP) برای بازسازی اندام های حاشیه ای استفاده شده است. با این حال، مکانیسم هایی که توسط آن NMP ممکن است برای اندام ها مفید باشد به خوبی شناخته نشده است. با استفاده از جفت کلیه‌های انسانی که از یک اهداکننده به دست آمده‌اند، اثر NMP را با ذخیره‌سازی سرد بر روی جهانی مقایسه کردیم.کلیهرونوشت. ما دریافتیم که ذخیره سازی سرد منجر به کاهش جهانی در بیان ژن، از جمله ژن های مسیر التهابی و ژن های مورد نیاز برای فرآیندهای تولید انرژی، مانند فسفوریلاسیون اکسیداتیو (OXPHOS) شد. در مقابل، در طول NMP، تنظیم مثبت ژن‌های OXPHOS، و همچنین تعدادی از ژن‌های مسیر ایمنی و التهابی وجود داشت. با استفاده از نمونه‌برداری از کلیه‌های تحت NMP که متعاقباً پیوند شدند، دریافتیم که بیان ژن التهابی بالاتر در اندام‌هایی با عملکرد پیوند تاخیری طولانی مدت (DGF) رخ می‌دهد. بنابراین، ما از یک همجذب (HA) برای حذف سیتوکین های پیش التهابی استفاده کردیم. این بیان ژن التهابی ضعیف، ژن‌های مسیر OXPHOS را افزایش داد و اثرات بالقوه بالینی مهمی در کاهش بیان امضای ژن مرتبط با DGF داشت. با هم، داده‌های ما نشان می‌دهد که جذب واسطه‌های پیش‌التهابی از پرفیوزیت، یک مداخله بالقوه است که ممکن است زنده‌مانی اندام را بهبود بخشد.

کلید واژه ها:تحقیقات / عمل بالینی، عملکرد پیوند تاخیری (DGF)، اهداکنندگان و اهدا: متوفی،کلیه(آلوگرافت) عملکرد / اختلال عملکرد،کلیهمرض: ایمنی / التهابی، کلیه

گیاه سیستانچ عملکرد کلیه را بهبود می بخشد

1. مقدمه

کلیهپیوند نشان دهنده درمان بهینه برای اکثر بیماران استمرحله پایانیکلیهمرضکمبود عضو یک چالش بزرگ است، و چندین استراتژی برای افزایش تعداد کلیه‌های موجود، از جمله استفاده از اهداکنندگان مرگ‌های گردش خون (DCD) و اهداکنندگان معیارهای گسترده (ECD) به کار گرفته شده است. ، که هر دو با نرخ بالاتری از عملکرد پیوند تاخیری (DGF) در مقایسه با اهداکننده مرگ ساقه مغز (DBD) مرتبط هستند. 2،3 در کلیه های DCD، قرار گرفتن در معرض ایسکمی گرم در طول فرآیند توقف گردش خون سهم قابل توجهی در DGF دارد. . DGF به دلیل آسیب یا مرگ سلول های لوله ایسکمیک رخ می دهد، که می تواند فعال شدن ایمنی ذاتی را از طریق مجموعه التهابی NLRP3 که منجر به تولید اینترلوکین (IL)1 و IL18 می شود، تحریک کند. به عنوان نشانگر زیستی استفاده می شودحادکلیهصدمهو DGF.7-9

پرفیوژن ماشینی نورترمیک (NMP) به اندام های پیوندی اجازه می دهد تا با گلبول های قرمز خون گرم و اکسیژن دار، در غیاب اجزای ایمنی در گردش، از جمله کمپلمان و نوتروفیل ها، پرفیوژن شوند.10-14 این فرآیند برای ارزیابی اندام های حاشیه ای15 و برای "استفاده شده است. بازسازی اندام‌هایی برای تسهیل پیوند کلیه‌ها که در ابتدا پس از پیشنهاد از طریق یک سرویس ملی تخصیص عضو رد شدند. تجربه قبلی ما با استفاده از NMP، منطق یک کارآزمایی تصادفی‌سازی و کنترل‌شده را برای ارزیابی اثربخشی آن در پیشگیری از DGF در کلیه‌های DCD ارائه کرد. مکانیسم هایی که توسط آن NMP ممکن است برای کلیه های پیوند مفید باشد به طور کامل شناخته نشده است. علاوه بر این، این سوال که آیا دستکاری اضافی ازکلیهدر طول NMP، به عنوان مثال با حذف سیتوکین های پیش التهابی و کموکاین ها از پرفیوژن، ممکن است مزایای بیشتری در بهینه سازی اندام قبل از پیوند در کلیه های انسان ارائه دهد، اما مطالعه ما در مورد NMP خوک نتایج امیدوارکننده ای را نشان داد.

در اینجا ما رویکردی بی‌طرفانه برای پرداختن به این دو سؤال با استفاده از تحلیل رونویسی انسان در پیش گرفتیمکلیهبیوپسی‌های گرفته شده در ابتدا و انتهای NMP برای ارزیابی تغییرات جهانی در بیان ژن. ما از جفت کلیه‌های انسان از یک اهداکننده استفاده کردیم که امکان مقایسه اثر مداخلات مختلف در اندام‌هایی با زمینه ژنتیکی یکسان را فراهم می‌کرد و توانستیم تأثیر آن تغییرات را بر پیش‌بینی نتیجه پیوند ارزیابی کنیم.

فواید عصاره سیستانچ: جلوگیری از حادکلیهصدمه

2. نتایج

2.1. کلیه های جفت شده از نظر ژنتیکی مشابه هستند و یک مدل مفید برای ارزیابی مداخلات هستند

ما تغییرات رونویسی مرتبط با حفظ اندام و NMP را در دو مطالعه مستقل، هر کدام با پنج جفت کلیه، که در مجموع 10 جفت / 20 کلیه انسان را تشکیل می‌دهند، بررسی کردیم. از این تعداد، دو نفر از DBD و هشت نفر از اهداکنندگان DCD بودند (جدول S1، S2، و شکل S1). در این مطالعات، ما بیوپسی های قشر مغز را قبل و بعد از مداخله (ذخیره سرد یا NMP) گرفتیم و چشم انداز رونویسی را با استفاده از توالی یابی RNA (RNA-Seq) بررسی کردیم. استفاده از کلیه های جفت شده و بیوپسی های جفت از همانکلیهبه ما اجازه داد تا تغییرات بیولوژیکی را کنترل کنیم و این مخدوش کننده را از تحلیل خارج کنیم (شکل S2A). ما آن را تایید کردیمکلیهجفت ها با یک چشم انداز رونویسی مشترک (شکل S2B) و با اعمال مداخلات مختلف برای هر یک شروع می شوند.کلیهدر یک جفت، ما قادر به مطالعه اثر یک مداخله مستقل از تنوع بیولوژیکی هستیم.

شکل 1 کلیه هایی که در معرض انبار سرد قرار گرفته اند تغییرات محدودی را در بیان ژن در مقایسه با کلیه هایی که تحت NMP قرار می گیرند نشان می دهند. یک جفت کلیه به دست آمد که برای استفاده در پیوند رد شده بود. یکیکلیهدر سردخانه استاتیک نگهداری شد و دیگری تحت پرفیوژن دستگاه نورموترمیک (NMP) قرار گرفت. در ابتدا و پس از 2 ساعت بیوپسی از قشر بیرونی گرفته شد. B، نمودار آتشفشان نشان دهنده تغییر در بیان ژن در 2 ساعت برای گروه نشان داده شده نسبت به شروع است. نقاط قرمز نشان دهنده ژن های متفاوت بیان شده با مقدار P تنظیم شده است<0.05 and="" the="" experimental="" group="" is="" indicated="" above="" the="" plot.="" c,="" gene="" set="" enrichment="" analyses="" of="" the="" differential="" expressions="" from="" b="" against="" the="" hallmarks="" pathways.="" only="" significant="" pathways="" (fdr="" q="" value=""><0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="" (nes).="" d,="" heatmap="" of="" the="" top="" 20="" significantly="" upregulated="" genes="" during="" nmp,="" genes="" are="" ranked="" by="" log2="" fold="" change.="" e,="" string="" analysis="" of="" the="" top="" 50="" genes="" upregulated="" during="" nmp.="" the="" color="" of="" each="" node="" indicates="" membership="" of="" each="">

شکل 2 همبستگی رونوشت به دنبال NMP با طول عملکرد پیوند تاخیری. بیان ژن با طول DGF در بیوپسی های گرفته شده به دنبال NMP به عنوان بخشی از یک کارآزمایی بالینی تصادفی شده مرتبط بود. سطح بیان 1000 ژن با بیشترین همبستگی با نتیجه رسم شده است. B، GSEA برای همبستگی از A در برابر مجموعه داده های مشخصه انجام شد. فقط مسیرهای مهم (مقدار FDR q<0.05) are="" plotted.="" red="" dots="" indicate="" positive="" enrichment="" and="" blue="" negative,="" the="" size="" of="" the="" dot="" is="" inversely="" correlated="" with="" the="" fdr="" q="" value="" and="" the="" position="" indicates="" the="" normalized="" enrichment="" score="">

2.2. NMP منجر به افزایش ژن های OXPHOS و مسیر التهابی در مقایسه با ذخیره سازی سرد می شود

برای بررسی مکانیسم‌های بالقوه‌ای که NMP ممکن است بر کلیه‌ها تأثیر بگذارد، در ابتدا پنج مورد استفاده کردیمکلیهجفت (n {0}} اهداکننده DCD و n=1 اهداکننده مرگ ساقه مغز [DBD] فوت شده، شکل S1، جدول S1) و یک زمان 0 (0 ساعت) بیوپسی قشر مغز انجام دادند. . در این مرحله، کلیه ها به طور تصادفی به انبار سرد ثابت یا NMP، همانطور که قبلاً 10 توضیح داده شد، تقسیم شدند (شکل 1A). پس از 2 ساعت، نمونه‌برداری دوم از هر دو کلیه گرفته شد و RNA-Seq انجام شد. هنگام مقایسه بیان ژن بین زمان بیوپسی 0- و 2-ساعت، متوجه شدیم که کلیه‌هایی که در سردخانه ثابت قرار می‌گیرند، هیچ تغییر آماری معنی‌داری در بیان هیچ یک از ژن‌های منفرد هنگام اصلاح برای آزمایش‌های متعدد ندارند (شکل 1B ، پانل سمت چپ). در مقابل، در طول 2 ساعت NMP، 956 ژن تنظیم مثبت و 353 ژن کاهش یافت (شکل 1B، پانل سمت راست). ما بعداً تغییرات در بیان گروه‌های ژن‌ها را در یک مسیر مشترک ارزیابی کردیم، ده‌ها یا صدها ژن را به جای هر ژن فردی با هم مقایسه کردیم، در نتیجه تأثیر تنوع بیولوژیکی بین‌فردی بر آنالیز را کاهش دادیم. این تغییرات در مسیرهای عملکردی مهم را نشان داد، جایی که بیان هر ژن فردی در آن مسیر با اندازه کافی برای رسیدن به اهمیت آماری تغییر نمی کرد. این تجزیه و تحلیل غنی‌سازی مجموعه ژن (GSEA) نشان داد که ذخیره‌سازی سرد تأثیر قابل‌توجهی بر تعدادی از مسیرهای متابولیک دارد (شکل 1C، پانل سمت چپ). به طور خاص، کاهش قابل توجهی در ژن‌های دخیل در فسفوریلاسیون اکسیداتیو (OXPHOS)، یک مسیر کلیدی مورد نیاز برای تولید ATP وجود داشت. در مقابل، OXPHOS یکی از مسیرهایی بود که به طور قابل‌توجهی در طول NMP تنظیم شده بود (شکل 1C، پانل سمت راست)، با مزایای بالقوه برای زنده ماندن سلولی و بازیابی هموستاز سلولی. علاوه بر این، تعدادی از مسیرهای درگیر در فرآیندهای ایمنی یا التهابی در طول NMP القا شد، با "سیگنال TNF از طریق NFkB" بزرگترین افزایش را نشان داد. مطابق با این، TNF، و همچنین IL1B و کموکاین‌های جذب کننده نوتروفیل CXCL8 (IL8) و CXCL2، از جمله ژن‌های تنظیم‌شده‌تر در بیوپسی‌های NMP ساعتی 2- بودند (شکل 1D). تجزیه و تحلیل رشته ای از 50 ژن برتر تنظیم مثبت، دخیل بودن ژن های مرتبط بیوشیمیایی را نشان داد که به چهار گره اصلی خوشه شدند. IL8 و کموکاین های جذب کننده نوتروفیل، ژن های مرتبط با التهاب، سیگنال دهی NFkB و تنظیم رونویسی (شکل 1E). نکته قابل توجه، کلیه‌های DBD و DCD از نظر رونویسی در ابتدا مشابه بودند (شکل S2C)، و مسیرهای ژنی که در طول NMP تغییر می‌کردند در کلیه‌های DBD و DCD مشابه بودند (شکل S2D). با هم، تجزیه و تحلیل ما نشان می‌دهد که در طول NMP، بیان ژن‌هایی که تولید انرژی را افزایش می‌دهند، با اثرات بالقوه مفید برای اندام، اما القای همزمان ژن‌های پیش‌التهابی وجود دارد که ممکن است مضر باشد.

عصاره سیستانچ توبولوزا: بهبود عملکرد کلیه

2.3. ژن های مسیر التهابی در کلیه های NMP مرتبط با تاخیر طولانی مدت عملکرد پیوند

به منظور پیوند تغییرات رونویسی رخ داده در حین نگهداری در سردخانه و NMP با نتایج بالینی، ما RNA-Seq را بر روی بیوپسی های گرفته شده از 33 کلیه DCD که تحت NMP قرار گرفته بودند، به عنوان بخشی از یک کارآزمایی بالینی تصادفی شده انجام دادیم که در حال حاضر کارآیی آن را ارزیابی می کند.17 نمونه در دسترس بود. زیرمجموعه ای از کلیه ها به طور تصادفی به بازوی NMP مطالعه که متعاقباً پیوند زده شد (جدول S3، شکل S1). DGF در کلیه های DCD شایع تر است و به طور کلاسیک به عنوان نیاز برای دیالیز در هفته اول پس از پیوند تعریف می شود. با این حال، در دوره بلافاصله پس از پیوند، برخی از بیماران یک قسمت دیالیز را برای هیپرکالمی دریافت می کنند، که لزوما نشان دهنده وجود نکروز حاد لوله ای قابل توجه نیست. بنابراین، ما از مدلی استفاده کردیم که بیان ژن را با زمان بین جراحی پیوند و آخرین جلسه دیالیز (یعنی مدت زمان DGF) مرتبط می‌کند. این تغییرات رونویسی مشخص تری را در پیوندهایی که نیاز به دیالیز فراتر از 24 ساعت اول پس از پیوند دارند (شکل 2A) و همچنین ارتباط مثبت معنی داری بین بیان ژن های مسیر التهابی از جمله " سیگنال دهی TNFA از طریق NFkB" و مسیرهای "پاسخ التهابی" و مسیرهای "پاسخ التهابی" نشان داد. طول DGF، با غنی‌سازی بیشتر این مسیرها در کلیه‌هایی که پس از پیوند DGF طولانی‌تر را تجربه کردند (شکل 2B). برعکس، طول DGF با میزان بیان ژن های مسیر "OXPHOS" همبستگی منفی داشت (شکل 2B). روی هم رفته، این داده‌ها نشان می‌دهند که به دنبال NMP، کلیه‌هایی که بیان کمتری از ژن‌های مسیر التهابی و بیان بالاتر ژن‌های مسیر "OXPHOS" دارند، کمتر مستعد ابتلا به طولانی‌مدت DGF پس از پیوند هستند. این نتیجه گیری را تایید می کند که تغییرات مولکولی که در طول NMP رخ می دهد ممکن است هم اثرات مفید (القای ژن های مسیر OXPHOS) و هم اثرات مضر (القای ژن های مسیرهای التهابی) داشته باشد.

2.4. برون ده ادرار و جریان خون کلیوی در طول NMP ارتباط متفاوتی را با ژن های OXPHOS و مسیر التهابی نشان می دهد.

مقدار ادرار تولید شده در طول NMP یکی از تعدادی از پارامترهای موجود در نمرات ارزیابی کیفیت جراحی است که برای تصمیم گیری در مورد استفاده از اندام استفاده می شود، اما اینکه آیا خروجی ادرار بالا در طول NMP واقعاً پیش آگهی خوبی برای کلیه و مسیرهای مولکولی زیربنایی فعال شده در کلیه ها با برون ده ادرار زیاد نامشخص است. در مجموع 10 کلیه تحت NMP (کلیه‌ها فقط NMP، جدول S1 و S2، شکل S1)، طیفی از برون ده ادرار را از 0 تا 340 میلی‌لیتر در طول 2-ساعت پرفیوژن مشاهده کردیم. (شکل 3A پانل سمت چپ). شایان ذکر است، وقتی مسیرهای تغییر در طول NMP در پنج کلیه را در دو آزمایش مستقل مقایسه کردیم، متوجه شدیم که مسیرهای مشابهی القا شده است (شکل S3A) که تکرارپذیری طرح تجربی ما و کاربرد مقایسه مسیرها به جای ژن‌های فردی را تأیید می‌کند. در بیوپسی‌های 2-ساعتی پس از پرفیوژن، بیان 11 ژن با حجم ادرار تولید شده در این دوره ارتباط معنی‌داری داشت. اینها شامل پروتئین های شوک حرارتی (HSP)، HSPA1A، HSPA1B، و HSPH1 بود که با افزایش خروجی ادرار همبستگی مثبت داشت (شکل 3A پانل سمت راست). تجزیه و تحلیل غنی سازی مجموعه ژن نشان داد که برون ده ادرار نیز با ژن های مسیر "سیگنال دهی TNF از طریق NFkB" و ارتباط منفی با ژن های OXPHOS در بیوپسی های پس از پرفیوژن همبستگی مثبت دارد (شکل 3B، S3C). به طور مشابه، در نمونه‌برداری‌های قبل از پرفیوژن، OXPHOS با برون ده ادرار در این کلیه‌ها همبستگی منفی داشت، در حالی که مسیرهای مرتبط با فعال‌سازی ایمنی از جمله سیگنال‌دهی TNF از طریق NFkB و «رد آلوگرافت» با خروجی ادرار همبستگی مثبت داشت، که نشان می‌دهد NMP تأثیر کمی بر این فرآیندها دارد. یا در سایر مسیرهای تجزیه و تحلیل شده، در کلیه های با خروجی ادرار بالا (شکل 3B، S3C-D). از آنجایی که القای ژن‌های مسیر التهابی در نمونه‌های بالینی ما با DGF طولانی‌مدت مشاهده شد (شکل 2B)، این داده‌ها این عقیده را که برون ده ادرار بالا در کلیه‌های سالم‌تر و زنده‌تر رخ می‌دهد را به چالش می‌کشد و نشان می‌دهد که در واقع، این کلیه‌ها ممکن است بیشتر داشته باشند. پتانسیل التهابی، کمتر قادر به تولید انرژی هستند و این به طور قابل توجهی در طول NMP تغییر نمی کند.

جریان خون کلیوی در طول پرفیوژن نیز به عنوان پارامتری ارزیابی شده است که ممکن است عملکرد پیوند بعدی را منعکس کند. 15 در 10 کلیه مورد مطالعه، جریان خون کلیوی در 2 ساعت پرفیوژن از 14.1 تا 168.8 میلی لیتر در دقیقه متغیر بود (شکل 3C پانل سمت چپ). در 2-ساعت بیوپسی پس از پرفیوژن، هشت ژن به طور قابل توجهی با افزایش جریان خون کلیوی (شکل 3C پانل سمت راست)، از جمله HSPA1L همبستگی مثبت داشت، اما هیچ همپوشانی مستقیمی بین این لیست ژنی و آنهایی که با برون ده ادرار مرتبط هستند وجود نداشت (شکل 3A) ). تجزیه و تحلیل غنی‌سازی مجموعه ژن نشان داد که جریان خون کلیوی بالا با ژن‌های OXPHOS در بیوپسی‌های {12}ساعته همبستگی مثبت دارد، اما برخلاف آن‌هایی که بالاترین خروجی ادرار را داشتند، پرفیوژن تأثیر قابل‌توجهی داشت که منجر به همبستگی منفی با «OXPHOS» شد. ژن های مسیر 2 ساعت (شکل 3D، شکل S4A-B). جریان خون کلیوی با تعدادی از مسیرهای ژن ایمنی و التهابی در هر دو بیوپسی 0- و 2-ساعته (شکل 3D، شکل S4B) همبستگی منفی دارد، برخلاف خروجی ادرار (شکل 3B، شکل S3C). مجموع این داده‌ها نشان می‌دهد که جریان خون کلیوی و برون ده ادرار ممکن است شاخص‌های معادل یک کلیه بادوام‌تر نباشند، اما اولی ممکن است با وفاداری بیشتری یک کلیه را شناسایی کند.کلیهکمتر احتمال دارد DGF طولانی مدت داشته باشد.

فواید و عوارض سیستانچ: ضد التهاب

2.5. افزودن یک جاذب لبه به مدار پرفیوژن هیچ تاثیری بر پارامترهای پرفیوژن ندارد اما به طور قابل توجهی بیان ژن التهابی از جمله NLRP3 و IL1B را کاهش می دهد.

تجزیه و تحلیل ازکلیهپرفیوزات افزایش قابل توجهی در غلظت سیتوکین ها و کموکاین های پیش التهابی در طول دوره هیپوترمی و NMP نشان داده اند. با توجه به اینکه تجزیه و تحلیل ما از پیوندکلیهنمونه‌ها نشان دادند که القای ژن‌های وابسته به TNF در کلیه‌های NMP با DGF مرتبط است (شکل 2B)، ما فرض کردیم که حذف سیتوکین‌ها و کموکاین‌ها از مدار پرفیوژن ممکن است القای ژن التهابی را با اثرات مفید بالقوه برای کلیه کاهش دهد. چنین رویکردی تا حدی در بیماران مبتلا به سندرم پاسخ التهابی سیستمیک، 22،23 اثربخشی نشان داده است، و با افزایش جریان خون کلیوی در کلیه‌های خوک تحت NMP همراه بود. NMP به مدت 4 ساعت با بیوپسی در 0، 2 و 4 ساعت (شکل S1). در هر مورد، یک جاذب سیتوزول (HA) که مولکول‌های با وزن مولکولی 10-50 کیلو دالتون را حذف می‌کند به مدار پرفیوژن یک کلیه در هر جفت (NMP به اضافه HA) اضافه شد (شکل 4A). همانطور که پیش‌بینی می‌شد، افزودن HA منجر به غلظت‌های کمتری از انواع سیتوکین‌ها در پرفیوژن شد (شکل 4B) اما تأثیری بر جریان خون کلیوی، خروجی یا ترکیب ادرار، مصرف اکسیژن و هموستاز اسید-باز نداشت (شکل 4C، جدول S4، S5). بنابراین، بیش از 4 ساعت NMP، HA هیچ تاثیری بر پارامترهای پرفیوژن که در حال حاضر از نظر بالینی برای ایجاد امتیاز ارزیابی کیفیت استفاده می‌شوند، نداشت، اما تأثیر قابل‌توجهی بر بیان ژن داشت. به دنبال NMP، ژن های 1794 و 4026 به ترتیب در 2 و 4 ساعت تنظیم مثبت شدند، از جمله TNF و IL6 (شکل 4D، E). اما تنها نیمی از این عدد (n=898 و n=2606) با وجود HA افزایش یافت (شکل 4D، شکل S5A و B). تعداد ژن‌های تنظیم‌شده نیز با افزودن HA کاهش یافت (شکل 4D). پس از 4 ساعت NMP، 46 ژن به طور قابل توجهی تنظیم مثبت و 181 ژن با افزودن HA کاهش یافت (شکل 4F). این پاسخ رونویسی ضعیف شامل ژن‌های مرتبط با فعال‌سازی التهابی NLRP3، مانند IL1B، NLRP3، و CASP1 (شکل 4G، شکل S4B) و برخی از کموکاین‌های جذب کننده نوتروفیل (شکل S5C)، که قبلاً با آسیب کلیوی در مدل‌های حیوانی مرتبط بودند، بود. این نشان می دهد که واسطه های محلول آزاد شده ازکلیهچرخش مجدد و بیان مجدد ژن های التهابی در اندام را تحریک می کند، اما این امر می تواند با حذف آنها از مدار پرفیوژن کاهش یابد.

شکل 4 افزودن یک جاذب سجاف به مدار پرفیوژن دستگاه نرموترمیک اثرات قابل توجهی بر سطح سیتوکین در پرفیوزیت و رونوشت دارد، اما نه بر پارامترهای فیزیکی ثبت شده روی دکل. یک جفت کلیه انسان از یک اهداکننده گرفته شد، یکی از آنها به مدت 4 ساعت تحت پروتکل استاندارد پرفیوژن دستگاه نورموترمیک (NMP) قرار گرفت و دیگریکلیهتحت NMP با افزودن یک جاذب سجاف به مدار قرار گرفت. نمونه‌ها برای RNA-Seq قبل از پرفیوژن ({2}} ساعت)، بعد از 2 ساعت و در پایان (4 ساعت) گرفته شد. B، غلظت سیتوکین های کلیدی در پرفیوژن پس از 4 ساعت NMP. خط نشان دهنده جفت کلیه ها است. اندازه گیری سیتوکین به محتوای کل پروتئین پرفیوژن نرمال شد. P-value بیان شده از آزمایش t زوجی برای کاهش سیتوکین ها با افزودن HA است. C، تولید ادرار و جریان خون کلیوی (RBF) در طول دوره پرفیوژن. خط سبز نشان دهنده NMP به تنهایی و نارنجی با افزودن جاذب سجاف است. D، نمودار ون که تعداد ژن‌هایی را که در مقایسه نمونه‌های 2-hr یا 4-hr با نمونه‌های قبل از ({0-hr) تفاوت معنی‌داری بیان می‌کنند، نشان می‌دهد. نمودارهای قرمز، ژن‌های تنظیم‌شده بالا و آبی با تنظیم پایین هستند. محل تلاقی ژن هایی است که به طور متفاوت در هر دو نقطه زمانی در یک جهت بیان می شوند. E، log2 مقادیر بیان نرمال شده برای ژن های نشان داده شده در سراسر پرفیوژن از رونوشت بافت، نوارهای خطای استاندارد نشان داده شده است. F، نمودار آتشفشان برای مقایسه زوجی NMP به تنهایی با NMP به علاوه HA در 4 ساعت. رنگ قرمز بیانگر ژن های متفاوت با مقدار P تنظیم شده است<0.05. g,="" as="" for="">

درمان بیماری های کلیوی عصاره گیاه سیستانچ

2.6. HA با کاهش امضای ژن مرتبط با عملکرد پیوند تاخیری همراه است

تجزیه و تحلیل غنی سازی مجموعه ژن کاهش قابل توجهی را در مسیر "سیگنال دهی TNF از طریق NFkB" در کلیه های NMP به علاوه HA در مقایسه با NMP به تنهایی نشان داد (شکل 5A-B). قابل ذکر است، حضور HA نه تنها بیان ژن التهابی را در داخل کاهش می دهدکلیهبلکه مسیرهای متابولیسم OXPHOS و اسیدهای چرب را نیز افزایش داد که هر دو به تولید انرژی کمک می کنند (شکل 5A-B). بنابراین، تغییرات در مسیرهای بیان ژن که با HA اتفاق می‌افتد، این نتیجه‌گیری را تایید می‌کند که اثرات آن از نظر بالینی مفید است، زیرا سیگنال‌دهی TNFA از طریق ژن‌های مسیر NFkB را کاهش می‌دهد و ژن‌های مسیر OXPHOS را افزایش می‌دهد، که هر دو با کوتاه‌تر مرتبط هستند. مدت زمان DGF (شکل 2B).

برای بررسی بیشتر رابطه بین تغییرات رونویسی در NMP و نتایج بالینی، ما به دنبال بررسی یک امضای ژن موجود در کلیه‌ها با DGF بودیم. ما 100 ژن برتر با تنظیم مثبت (بالا) و منفی (پایین) را شناسایی کردیم (رده بندی شده بر اساس تغییر log fold) که با طول DGF در 33 نمونه کارآزمایی بالینی همبستگی داشت (شکل 5C، داده S1). ما غنی‌سازی قابل‌توجهی از امضای ژن مرتبط با افزایش طول DGF را در نمونه‌هایی با برون ده ادرار بالاتر یافتیم (شکل 5D)، که نشان می‌دهد خروجی ادرار بالا در طول NMP، کلیه‌ها را در معرض خطر DGF طولانی‌تر شناسایی می‌کند. هیچ ارتباط آماری معنی داری بین امضای DGF و ژن های مرتبط با جریان خون کلیوی بالاتر وجود نداشت (شکل 5E). ما در مرحله بعد ارزیابی کردیم که آیا و چگونه افزودن HA به مدار NMP بر بیان امضاهای ژن DGF "UP" و "DOWN" تأثیر می گذارد یا خیر. به طور قابل توجهی، این نشان داد که بیان امضای ژن مرتبط با افزایش طول DGF با افزودن HA به طور قابل توجهی کاهش یافت و امضای مرتبط با کاهش طول DGF با افزودن HA به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 5F).

به طور کلی، تغییرات رونویسی که ما شناسایی کرده‌ایم نشان می‌دهد که NMP مزایای بالقوه‌ای نسبت به ذخیره‌سازی سرد از نظر اثرات آن بر تولید انرژی در کلیه دارد. با این حال، در طول پرفیوژن، برخی از مولکول‌های فعال زیستی از کلیه به مدار پرفیوژن رها می‌شوند و یک حلقه تقویتی ایجاد می‌کنند که باعث ایجاد التهاب در هنگام ورود مجدد به کلیه می‌شود. حذف این مولکول‌ها این حلقه را قطع می‌کند و ممکن است برای کاهش التهاب و افزایش تولید انرژی، افزایش بیشتر اثرات مفید NMP و کاهش حساسیت به DGF مفید باشد (شکل 6).

شکل 5 افزودن جاذب ژامبون، امضای ژن مرتبط با DGF را کاهش می دهد. تجزیه و تحلیل GSEA از اثر افزودن HA به رونوشت پس از 4 ساعت NMP در برابر مسیر مشخصه ژن ها. فقط مسیرهای مهم ترسیم شده است. نقاط قرمز نشان دهنده غنی سازی مثبت و آبی منفی است، اندازه نقطه با مقدار FDR q رابطه معکوس دارد و موقعیت نشان دهنده امتیاز غنی سازی نرمال شده (NES) است. B، نمودارهای غنی‌سازی از GSEA برای مسیرهای کلیدی از پایگاه داده Hallmark برای مقایسه از A. خط نشان‌دهنده امتیاز غنی‌سازی در حال اجرا و نمودار ویولن نشان‌دهنده توزیع ژن‌های عضو مجموعه ژن در سراسر فهرست ژن رتبه‌بندی‌شده مورد استفاده در هر تجزیه و تحلیل است. C، Heatmap از چهار بزرگ ترین همبستگی مثبت (UP) و منفی (DOWN) با طول DGF و به عنوان بخشی از امضای بیان ژن برای DGF استفاده می شود. امضای کامل DGF در داده های تکمیلی ارائه شده است. امضای ژن مرتبط با DF، DGF با GSEA برای بررسی بیان امضا در همبستگی خروجی ادرار 2- ساعت با 2- رونوشت hr (D)، همبستگی 2- ساعت RBF مورد استفاده قرار گرفت. با 2- رونوشت hr (E)، و اثر افزودن HA بر رونوشت در 4 ساعت (F). توطئه هایی مانند A

شکل 6 خلاصه گرافیکی. A، در طول ذخیره سازی سرد، کاهش جهانی در رونویسی وجود دارد. در طول NMP، بیان ژن ها در تعدادی از مسیرها از جمله فسفوریلاسیون اکسیداتیو (OXPHOS) و ژن های مسیر التهابی مانند TNF، IL8 و NFkB تنظیم می شود. B پانل سمت چپ، در طول NMP، واسطه های التهابی (دایره های زرد) از قسمت آزاد می شوندکلیهبه محلول پرفیوژن آنها رونویسی ژن پیش التهابی را در کلیه به گردش در می آورند و تحریک می کنند و با کاهش ژن های تولید مسیر انرژی و کاهش ATP همراه هستند. پانل سمت راست، وجود جاذب سجاف (HA) این حلقه تقویت التهابی را می شکند

گیاه سیستانچ عملکرد کلیه را بهبود می بخشد

3. بحث

داده های ما نشان می دهد که ذخیره سازی سرد در محدود کردن تغییرات اساسی در بیان ژن موثر است. این مطابق با مدل‌های جوندگان است، جایی که کلیه‌های ذخیره شده تا 18 ساعت در سردخانه تغییر کمی در بیان سایتوکاین‌های پیش‌التهابی از جمله IL1، TNF و IL6 نشان دادند. اندازه‌گیری تعداد کمی از ژن‌های کاندید به ما این امکان را داد که بیان گروه‌هایی از ژن‌های موجود در مسیرهای خاص را تجزیه و تحلیل کنیم. این کاهش قابل توجهی را در بیان ژن های OXPHOS و مسیر گلیکولیز در کلیه های ذخیره شده در سرد نشان داد که به طور بالقوه ظرفیت این کلیه ها برای تولید ATP را کاهش می دهد، مطابق با مطالعه قبلی که نشان می دهد کاهش ATP در کلیه های انسان سرد ذخیره شده است. مسیرهای پیش التهابی نیز در طول ذخیره سازی سرد، از جمله فعال سازی TNF از طریق NFkB و مسیرهای گونه های اکسیژن فعال که ممکن است به طور بالقوه مفید باشند، کاهش یافتند. با این حال، ممکن است سردخانه صرفاً این مسیرها را موقتاً نگه دارد و به دنبال خونرسانی مجدد در گیرنده، تغییرات مشابهی در بیان ژن التهابی که در NMP مشاهده شد رخ دهد.

NMP اثر معکوس با ذخیره سازی سرد بر روی ژن های OXPHOS و مسیر گلیکولیز داشت و بیان آنها را افزایش داد، با پتانسیل افزایش ظرفیت سلولی برای تولید ATP و بازیابی هموستاز. قابل توجه، نشان داده شده است که پرفیوژن اکسیژن دار هیپوترمیک کلیه های انسان نیز باعث افزایش سطح ATP در مقایسه با ذخیره سازی سرد می شود، بنابراین بازیابی اکسیژن ممکن است محرک اصلی این فرآیندها به جای نورموترمی باشد. با این وجود، با توجه به مشاهده ما از یک همبستگی منفی بین افزایش بیان ژن‌های مسیر OXPHOS و طولانی‌مدت DGF، احتمالاً این تغییرات برای اندام مفید است.

مقاله اخیر توسط Hameed و همکاران 28 نیز تجزیه و تحلیل رونویسی NMP را در سه کلیه تحت NMP انجام داد. متأسفانه، نویسندگان داده های خود را در دسترس عموم قرار نداده اند، بنابراین مقایسه عمیق با مجموعه داده ما امکان پذیر نیست. با این حال، دستنوشته آنها القای ژن های مرتبط با پاسخ ایمنی را در طول NMP، از جمله IL1B، CXCL2، و TNF نشان می دهد، که با یافته های ما مطابقت دارد.

در تجزیه و تحلیل کلیه‌های تحت NMP در زمینه یک کارآزمایی بالینی، ما امضاهای بیان ژن را با طول DGF به جای بروز DGF (که به عنوان نیاز به دیالیز در هفته اول پس از پیوند تعریف می‌شود) مرتبط کردیم. به طور قابل‌توجهی، کلیه‌هایی با مدت زمان DGF 1 روز یا کمتر، از نظر رونویسی بسیار شبیه به کلیه‌هایی بودند که DGF نداشتند، که احتمالاً منعکس‌کننده نیاز دیالیز به دلیل هیپرکالمی مرتبط با حین عمل است تا DGF واقعی. ما دریافتیم که DGF طولانی‌تر با بیان بالاتر سیگنال‌دهی TNFA از طریق ژن‌های مسیر NFkB و بیان کمتر ژن‌های مرتبط با OXPHOS مرتبط است. این داده‌ها نشان می‌دهند که کلیه‌هایی با افزایش OXPHOS و کاهش سیگنال‌های ایمنی ممکن است پتانسیل بهتری را به عنوان کلیه‌های اهداکننده نشان دهند، اما این نتیجه‌گیری نیاز به اعتبارسنجی در یک مطالعه آینده‌نگر بزرگ‌تر دارد.

ما همچنین فرآیندهای مولکولی را که با برون ده ادرار و خون کلیوی در طول NMP مرتبط هستند، ارزیابی کردیم. این پارامترها قبلاً همراه با تعدادی از اقدامات دیگر برای ایجاد نمره ارزیابی کیفیت کلیه‌های پرفیوژن استفاده شده‌اند. مقادیر بالای برون ده ادرار و جریان خون کلیوی به عنوان منعکس کننده پیوند قابل دوام تری در نظر گرفته شده است. داده های ما نشان می دهد که مسیرهای مرتبط با برون ده ادرار بالا و جریان خون کلیوی بالا متفاوت است، و در واقع، این پارامترها ارتباط قطبی مخالف با مسیرهای التهابی را نشان می دهند. . برون ده ادرار بالا با بیان بیشتر ژن های مسیر ایمنی مرتبط بود در حالی که جریان خون کلیوی بالا با این مسیرها همبستگی منفی داشت. ما همچنین دریافتیم که امضای ژن DGF که ما تولید کردیم در کلیه‌ها با برون ده ادرار بالا در طول NMP غنی شده است، که نشان می‌دهد این پارامتر ممکن است برخلاف عقیده فعلی، کلیه‌هایی را که در معرض خطر DGF طولانی‌تر هستند، شناسایی کند. یک توضیح بالقوه این است که خروجی ادرار بسیار بالا نشان دهنده کلیه هایی است که آسیب لوله ای بیشتری دارند که توانایی تمرکز ادرار را ندارند. بنابراین، ممکن است یک "اثر Goldilocks" در رابطه با برون ده ادرار وجود داشته باشد، که در آن کلیه ها با برون ده ادرار کم/کم آنهایی هستند که دارای ناهنجاری های قابل توجهی در تولید فیلتر هستند، آنهایی که دارای برون ده ادرار بسیار بالا هستند، آسیب لوله ای قابل توجهی دارند که مانع از غلظت ادرار می شود. این فرضیه باید در تعداد بیشتری از کلیه‌هایی که متعاقباً پیوند شده‌اند، آزمایش شود.

در طی 4 ساعت NMP، القای ژن های التهابی در کلیه وجود داشت. با این حال، شایان ذکر است که عمل بالینی فعلی فقط شامل 1 ساعت NMP است، و این اثر ممکن است در یک زمان پرفیوژن کوتاه‌تر مشهود نباشد. با این حال، پرفیوژن طولانی تر ممکن است از نظر بازیابی اکسیژن و تولید انرژی مزایایی داشته باشد، و در آزمایش ما، اثرات منفی القای ژن ایمنی را می توان به طور قابل ملاحظه ای با معرفی یک سیتوزول HA به مدار پرفیوژن نفی کرد. این داده ها نشان می دهد که واسطه های التهابی تولید شده توسط کلیه در طول دوره NMP وارد مدار پرفیوژن می شوند و قادر به تشدید التهاب استریل هستند و حذف آنها القای ژن های مسیر التهاب مشاهده شده در طول NMP را بهبود می بخشد. نکته مهم، ما نشان دادیم که افزودن HA بر بیان ژن‌هایی که از نظر بالینی با پیامدهای بدتری مرتبط هستند، تأثیر می‌گذارد. امضای ژن DGF ما از نمونه‌های تحت NMP به‌عنوان بخشی از یک کارآزمایی بالینی برای ارزیابی اثربخشی آن مشتق شد و به ما این امکان را می‌دهد که تغییراتی را که در مطالعات کلیوی جفتی مشاهده کرده‌ایم با نقاط پایانی بالینی در کلیه‌های تحت پیوند پیوند دهیم. با این حال، استفاده از آن در زمینه یک کارآزمایی بالینی برای اثبات قطعی کاربرد کاربرد آن در قبل از پیوند کلیه مورد نیاز است. HA غیر اختصاصی است و ممکن است مولکول هایی را که مفید هستند، علاوه بر مولکول هایی که برای اندام مضر هستند، حذف کند. ما دریافتیم که اثر خالص HA بر رونوشت کلیه مفید به نظر می رسد، اما ممکن است اصلاح به طور خاص حذف واسطه های اثبات شده و مضر حتی موثرتر باشد.

جفت کلیه هایی که ما استفاده کردیم از یک فرد بودند و بنابراین از نظر ژنتیکی یکسان بودند و محیط مشابهی را در طول زندگی اهداکننده تجربه کرده بودند. ما تأیید کردیم که رونوشت زمان 0 آنها بسیار مشابه بود (شکل S2 A, B). با این حال، این نمونه‌برداری‌ها از قسمت کوچکی از کلیه نمونه‌برداری می‌کنند و جفت‌های کلیه می‌توانند به طور نامتقارن تحت تأثیر آسیب‌شناسی قرار گیرند، به عنوان مثال، کیست‌ها یا بیماری عروق کوچک. یک هشدار اضافی این است که کلیه کلیه‌های مورد استفاده در آزمایش‌های مداخله‌ای که در اینجا ارائه شده‌اند برای پیوند رد شده‌اند و برخی اعضای پیوندی را در انتهای پایین طیف کیفیت نشان می‌دهند. با این وجود، ما نتایج بسیار تکرارپذیری را هنگام مقایسه مسیرهای ژنی در گروه های پنج کلیه مشاهده کردیم. ما همچنین توانستیم نشان دهیم که کلیه‌های DCD و DBD پاسخ مشابهی به پرفیوژن دارند. با ترکیب این امضا با امضای DGF پس از NMP، ما توانستیم مزایای بالینی بالقوه را پیش بینی کنیم. این رویکرد تجربی می تواند به عنوان یک ابزار پیش بالینی برای غربالگری مداخلات آینده برای اثربخشی درمانی بالقوه استفاده شود تا امکان انتخاب منطقی مداخلات کاندید برای آزمایشات بالینی را فراهم کند.

به طور خلاصه، مطالعه ما اولین مشخصات رونویسی جهانی کلیه‌های انسانی را که تحت NMP قرار می‌گیرند، ارائه می‌کند، مسیرهای مولکولی مختلفی را که در NMP در مقایسه با ذخیره‌سازی سرد فعال می‌شوند، حل می‌کند و نشان می‌دهد که اثرات مضر مولکول‌های فعال زیستی تولید یا آزاد شده از کلیه در طول NMP می‌تواند با افزودن یک HA معکوس شود. علاوه بر این، این مداخله بیان ژن‌های مرتبط با طولانی‌مدت DGF را کاهش داد که یک منطق مکانیکی قوی برای اعمال چنین مداخله‌ای در کارآزمایی بالینی آینده ارائه می‌کند. داده‌های ما همچنین پیامدهایی برای استراتژی‌های پرفیوژن فراتر از کلیه، از جمله در پیوند کبد و ریه دارد، که نشان می‌دهد حذف مولکول‌های فعال زیستی از مواد پرفیوژن باید در این زمینه‌ها که NMP به طور فزاینده‌ای استفاده می‌شود، بررسی شود. در نهایت، مطالعه ما کاربرد پروفایل رونویسی جهانی را به صورت زوجی برجسته می‌کندکلیه هابرای ارزیابی مداخلات جدید در اندام های پرفیوژن؛ تغییرات رونویسی قبل از تغییرات در فراوانی پروتئین (به طور سنتی به عنوان نشانگرهای زیستی استفاده می شودکلیهآسیب) و ده ها هزار رونوشت ژن را می توان به راحتی اندازه گیری کرد. بنابراین، اندازه‌گیری RNA این پتانسیل را دارد که یک بازخوانی اولیه و حساس از عملکرد سلولی اندام‌های انسانی بازیابی شده برای پیوند فراهم کند که می‌تواند در مطالعات آینده اعمال شود.

قدردانی

نویسندگان از همه اهداکنندگان عضو و خانواده های آنها تشکر می کنند. آزمایشگاه Clatworthy از امکانات اصلی ارائه شده توسط آزمایشگاه بیولوژی مولکولی MRC سپاسگزار است. این کار با استفاده از منابع ارائه شده توسط Cambridge Service for Data-Driven Discovery (CSD3) که توسط سرویس محاسبات تحقیقاتی دانشگاه کمبریج اداره می شود، ارائه شده توسط Dell EMC و Intel با استفاده از بودجه Tier-2 از تحقیقات مهندسی و علوم فیزیکی انجام شد. شورا (کمک مالی EP/P020259/1)، و بودجه DiRAC از شورای تسهیلات علم و فناوری (www. Dirac. ac. UK).

افشای

نویسندگان هیچ تضاد منافعی برای افشای آن‌گونه که توسط مجله آمریکایی پیوند توصیف شده است، ندارند.

مشارکت های نویسنده

JRF، SH، MLN و MRC مطالعه را طراحی و داده ها را تفسیر کردند. JRF، SH، TM، CJW، AF و TCD آزمایش ها را انجام دادند. JRF، SH و MRC شکل ها و جداول را ایجاد کردند. MRC نسخه خطی اصلی را نوشت. JRF و SH روش ها و افسانه های فیگور را ایجاد کردند، JRF، SH و MLN نسخه خطی را ویرایش کردند.

مزیت سیستانچ: بهبود عملکرد کلیه ها

منابع:
1. Methven S, Steenkamp R, Fraser S. ثبت کلیه UK 19 گزارش سالانه: فصل 5 بقا و علل مرگ در بیماران بزرگسال انگلستان تحت درمان جایگزین کلیه در سال 2015: تجزیه و تحلیل ملی و مرکز خاص. نفرون. 2017؛ 137 (1): 117-150.
2. سامرز DM، جانسون آر جی، آلن جی، و همکاران. تجزیه و تحلیل عواملی که بر نتیجه پس از پیوند کلیه های اهدایی پس از مرگ قلبی در بریتانیا تأثیر می گذارد: یک مطالعه کوهورت. لانست. 2010؛ 376 (9749): 1303-1311.
3. سامرز DM، جانسون RJ، هادسون A، Collett D، Watson CJ، Bradley JA. تأثیر سن اهداکننده و زمان نگهداری در سرد بر نتیجه در گیرندگان کلیه های اهدایی پس از مرگ گردش خون در انگلستان: یک مطالعه کوهورت. لانست. 2013؛ 381 (9868): 727-734.
4. Friedewald JJ، Rabb H. سلول های التهابی در نارسایی حاد کلیه ایسکمیک.کلیهبین المللی 2004؛ 66 (2): 486-491.
5. کونو اچ، راک کی ال. چگونه سلول های در حال مرگ به سیستم ایمنی بدن هشدار می دهند. Nat Rev Immunol. 2008؛ 8 (4): 279-289.
6. Berry M، Clatworthy MR. ایمونوتراپی برای حادکلیهصدمه. ایمونوتراپی 2012؛ 4 (3): 1-12.
7. Parikh CR، Coca SG، Thiessen-Philbrook H، و همکاران. بیومارکرهای پس از عمل حاد را پیش بینی می کنندکلیهآسیب و نتایج ضعیف پس از جراحی قلب بزرگسالان. جی ام سوک نفرول. 2011؛ ​​22 (9): 1748-1757.
8. Hall IE، Yarlagadda SG، Coca SG، و همکاران. IL-18 و NGAL ادراری دیالیز و بهبود پیوند را پیش‌بینی می‌کنندکلیهپیوند. جی ام سوک نفرول. 2010؛ 21 (1): 189-197.
9. Malyszko J, Lukaszyk E, Glowinska I, Durlik M. نشانگرهای زیستی تاخیر در عملکرد پیوند به عنوان شکل حادکلیهآسیب درکلیهپیوند. Sci Rep. 2015; 5:11684.
10. Hosgood SA، Nicholson ML. اولین بار در پیوند کلیه مردان پس از پرفیوژن نرموترمیک ex vivo. پیوند. 2011؛ ​​92 (7): 735-738.
11. Yong C، Hosgood SA، Nicholson ML. پرفیوژن طبیعی گرمازا ex-vivo در پیوند کلیه: گذشته، حال و آینده پیوند عضو Curr Opin. 2016؛ 21 (3): 301-307.
12. Fisher A, Andreasson A, Chrysos A, et al. مطالعه مشاهده‌ای پرفیوژن ریه اهداکننده Ex Vivo در پیوند ریه بریتانیا: DEVELOP-UK. ارزیابی فناوری سلامت 2016؛ 20 (85): 1-276.
13. Slama A, Schillab L, Barta M, et al. تهیه ریه اهداکننده استاندارد با پرفیوژن ریه خارج از بدن طبیعی: یک کارآزمایی بالینی تصادفی آینده نگر. J پیوند ریه قلب. 2017؛ 36 (7): 744-753.
14. Nasralla D، Coussios CC، Mergental H، و همکاران. یک کارآزمایی تصادفی از حفظ نورموترمیک در پیوند کبد طبیعت. 2018؛ 557 (7703): 50–56.
15. Barlow AD, Hamed MO, Mallon DH, et al. استفاده از پرفیوژن Normothermic Ex Vivo برای ارزیابی کیفیت پانکراس های اهدایی انسان دور ریخته شده. پیوند Am J. 2015؛ 15 (9): 2475-2482.

16. Hosgood SA, Saeb-Party K, Hamed MO, Nicholson ML. پیوند موفقیت‌آمیز کلیه‌های انسانی که غیرقابل پیوند تلقی می‌شود اما توسط Ex Vivo دستگاه نورموترمیک پرفیوژن احیا شده است. پیوند Am J. 2016؛ 16 (11): 3282-3285.
17. Hosgood SA، Saeb-Party K، Wilson C، Callaghan C، Collett D، Nicholson ML. پروتکل یک کارآزمایی تصادفی کنترل شده و برچسب باز پرفیوژن طبیعی گرمازا در مقابل ذخیره سازی سرد ساکن در اهدای پس از پیوند کلیه مرگ در گردش خون. BMJ Open. 2017؛ 7 (1): e012237.
18. Hosgood SA، Moore T، Kleverlaan T، Adams T، Nicholson ML. جذب همو پاسخ التهابی را کاهش می دهد و جریان خون را در طی پرفیوژن کلیوی خارج از بدن در یک مدل تجربی بهبود می بخشد. J Transl Med. 2017؛ 15 (1): 216.
19. کربس HA. تاریخچه چرخه اسید تری کربوکسیلیک Perspect Biol Med. 1970؛ 14 (1): 154-170.
20. Hoogland ER، de Vries EE، Christiaans MH، Winkens B، Snoeijs MG، van Heurn LW. ارزش غلظت بیومارکر پرفیوژن ماشین در DCDکلیهپیوندها پیوند. 2013؛ 95 (4): 603-610.
21. van Balkom BWM، Gremmels H، Ooms LSS، و همکاران. پروتئین های موجود در مایع نگهدارنده به عنوان پیش بینی کننده تاخیر در عملکرد پیوند در کلیه ها از اهداکنندگان پس از مرگ گردش خون. Clin J Am Soc Nephrol. 2017؛ 12 (5): 817-824.
22. Kogelmann K, Jurczak D, Scheller M, Druner M. Hemoadsorption توسط CytoSorb در بیماران سپتیک: یک سری موارد. Crit Care. 2017؛ 21 (1): 74.
23. دیوید اس، تام کی، اشمیت بی ام و، فالک سی اس، کیلشتاین جی تی. تأثیر حذف سیتوکین خارج از بدن بر عملکرد سد عروقی در بیمار شوک سپتیک J مراقبت های ویژه. 2017؛ 5:12.
24. Li L، Huang L، Vergis AL، و همکاران. IL-17 تولید شده توسط نوتروفیل ها مهاجرت نوتروفیل با واسطه IFN-گاما را در موش تنظیم می کند.کلیهآسیب ایسکمی خونرسانی مجدد جی کلین سرمایه گذاری. 2010؛ 120 (1): 331-342.
25. هایاما تی، ماتسویاما ام، فونائو ک، و همکاران. اثر مفید مهارکننده نوتروفیل الاستاز بر آسیب ایسکمی گرم کلیه در موش صحرایی پروسه پیوند 2006؛ 38 (7): 2201-2202.
26. Saat TC, Susa D, Roest HP, et al. مقایسه پروفایل های بیان ژن التهابی، محافظ سلولی و آسیب در کلیه ها از اهداکنندگان مرگ مغزی و مرگ قلبی پیوند. 2014؛ 98 (1): 15-21.
27. Ravaioli M، Baldassare M، Vasari F، و همکاران. راهکارهایی برای بازگرداندن سطح آدنوزین تری فسفات (ATP) پس از بیش از 20 ساعت زمان ایسکمی سرد در انسان حاشیه ایکلیهپیوندها. آن پیوند. 2018؛ 23:34-44.
28. Hameed AM, Lu DB, Patrick E, et al. دستگاه پرفیوژن مختصر نورموترمیک کلیه های دور ریخته شده انسان را جوان می کند. پیوند مستقیم 2019؛ 5 (11): e502.