استفاده رژیمی از منابع متیونین و باسیلوس آمیلولیک فاسینس CECT 5940 بر عملکرد رشد، بافت شناسی کبدی پانکراس، هضم، ایمنی، و میکروبیوتای گوارشی Litopenaeus Vannamei Fed رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی تاثیر می گذارد.

خلاصه ساده: گسترش شتابان پرورش میگو نیازمند منابع پروتئینی با ارزش غذایی بالا برای فرموله کردن خوراک هایی است که نیازهای تغذیه ای میگو را برآورده کند. پودر ماهی (FM) منبع اصلی پروتئین برای فرمولاسیون آکوافید است. با این حال، عرضه محدود و هزینه بالای آن، تحقیق بر روی منابع پروتئین جایگزین را برای فرموله کردن خوراک‌های سودآورتر که به پایداری آبزی پروری کمک می‌کند، تشویق می‌کند. کنجاله سویا (SBM) و کنجاله فرعی طیور (PBM) به عنوان منابع پروتئینی برای جایگزینی پودر ماهی استفاده شده است، اما عدم تعادل اسید آمینه ضروری آنها به عملکرد پایین رشد میگو کمک می کند و بر سلامت میگو تأثیر می گذارد. بنابراین، هدف مطالعه بررسی اثر جایگزینی FM توسط SBM و PBM در رژیم‌های غذایی حاوی DL-Met، MET-MET (AQUAVI®)، Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) و ترکیبات آنها بر روی عملکرد رشد و سلامت نوجوانان Litopenaeus vannamei. نتایج نشان داد که FM را می توان تا حدی با SBM و PBM در خوراک میگو جایگزین کرد که با 0.19% MET-MET یا 0.06% MET-MET به اضافه 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 بدون بر عملکرد رشد و رفاه Litopenaeus vannamei تأثیر منفی می گذارد. این نتایج ممکن است برای توسعه خوراک کم پودر ماهی و کمک به پایداری آبزی پروری جالب باشد.

مزایای مکمل سیستانچ - افزایش ایمنی

خلاصه:یک کارآزمایی تغذیه هفته‌ای {{0}} اثر جایگزینی پودر ماهی (FM) با کنجاله سویا (SBM) و غذای فرعی طیور (PBM) را در جیره‌های حاوی DL-Met، MET-MET (AQUAVI) بررسی کرد. ®)، Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) و ترکیبات آنها بر عملکرد رشد و سلامت جوان Litopenaeus vannamei. در مجموع شش جیره آزمایشی با توجه به نیازهای غذایی L. vannamei فرموله شد. در مجموع 48{17}} میگو (0.30 ± 0.0}4 گرم) به طور تصادفی در 24 مخزن (4 تکرار در هر رژیم غذایی) توزیع شد. , 20 میگو/تانک). میگوها با جیره شاهد (CD؛ 200 گرم بر کیلوگرم پودر ماهی) و پنج جیره با 50 درصد جایگزینی FM همراه با منابع مختلف متیونین، پروبیوتیک (B. amyloliquefaciens CECT) تغذیه شدند. 5940) و ترکیبات آنها: D1 (0.13% DL-MET)، D2 (0.06% MET-MET)، D3 ({{ 69}}.19٪ MET-MET)، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940 و D5 (0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940). D3 و میگو D5 افزایش وزن نهایی، هفتگی و زیست توده نهایی در مقایسه با میگوهای تغذیه شده با CD به طور قابل توجهی بالاتر بود (05/0p <). (05/0p<) در همین حال، میگوهای تغذیه شده با D1 دارای کاهش قابل توجهی در ژن های مرتبط با ایمنی بودند (05/0p<). علاوه بر این، میگوهای تغذیه شده با D3 و D5 فراوانی میکروارگانیسم های سودمند پروکاریوتی مانند سودوآلتروموناس و دمکوینا مرتبط با متابولیسم کربوهیدرات و کربوهیدرات را افزایش دادند. تحریک همچنین، میگوهای تغذیه شده با D3 و D5 فراوانی میکروارگانیسم های یوکاریوتی مفید را افزایش دادند زیرا Aurantiochytrium و Aplanochytrium با تولید اسید ایکوزاپنتانوئیک (EPA) و دوکوزاهگزانوئیک اسید (DHA) مرتبط بودند که در تقویت رشد یا افزایش ایمنی ارگانیسم یک ارگانیسم نقش دارد. بنابراین، پودر ماهی را می‌توان تا حدود 50 درصد با SBM و PBM در جیره‌های حاوی 0.19 درصد MET-MET (AQUAVI®) یا 0.06 درصد MET-MET (AQUAVI®) به اضافه 0.10 درصد B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) جایگزین کرد. و عملکرد تولیدی، سلامتی و ایمنی میگوی سفید را بهبود بخشد. تحقیقات بیشتر برای بررسی اثرات هم افزایی اسیدهای آمینه و پروبیوتیک ها در رژیم غذایی میگوی پرورشی، و همچنین ارزیابی اینکه چگونه SBM و PBM بر ترکیب اسیدهای چرب رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی و کیفیت ماهیچه میگو تاثیر می گذارند، ضروری است. با این وجود، این اطلاعات می تواند برای تولید خوراک کم پودر ماهی برای آبزی پروری بدون تأثیر بر رشد و رفاه موجودات آبزی جالب باشد.

فواید سیستانچ توبولوزا-تقویت سیستم ایمنی بدن

برای مشاهده محصولات Cistanche Enhance Immunity اینجا را کلیک کنید

【بیشتر بخواهید】 ایمیل:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

کلیدواژه: Litopenaeus vannamei; تغذیه میگو؛ جایگزینی پودر ماهی؛ متیونین؛ پروبیوتیک ها؛ کارایی؛ سلامتی؛ میکروبیوتا

1. معرفی

پرورش میگو در سال 2022 تقریباً 11.2 میلیون تن محصول داشت و میگوی سفید اقیانوس آرام (Litopenaeus vannamei) با 52٪ از کل تولید، نماینده ترین گونه بود [1]. پایداری و سودآوری تولید آبزی پروری مستلزم تامین مواد خام با ارزش غذایی بالا برای فرمولاسیون خوراک است که نیازهای تغذیه ای میگوهای پرورشی را برآورده می کند [2،3]. پودر ماهی به دلیل ارزش غذایی بالا، ماده اصلی تشکیل دهنده آبزیان است [4]. با این حال، عرضه محدود و هزینه بالای پودر ماهی نیازمند تحقیق در مورد منابع جایگزین برای خوراک است که سودآورتر بوده و به پایداری آبزی پروری کمک می کند [5،6]. مطالعات قبلی که عمدتاً بر عملکرد تولیدی میگو متمرکز بودند، گزارش کردند که پودر ماهی را می توان تا حدی با منابع مختلف حیوانی و گیاهی جایگزین کرد [6]. در میان منابع پروتئین گیاهی، کنجاله سویا دارای محتوای پروتئین بالایی است. با این حال، وجود عوامل ضد تغذیه‌ای، قابلیت هضم ضعیف و عدم تعادل اسیدهای آمینه ضروری (EAA) که بر میکروبیوتای گوارشی تأثیر می‌گذارد، باعث پاسخ التهابی در اندام‌های گوارشی، عملکرد کم بهره‌وری و بر پاسخ ایمنی موجودات آبزی می‌شود [5،7، 8]. کنجاله فرعی طیور یک منبع حیوانی با پروتئین بالا است که دارای کمبود متیونین و لیزین است، بنابراین استفاده از آن در خوراک کاهش یافته پودر ماهی می تواند بر رشد و رفاه موجودات آبزی تأثیر بگذارد [9]. متیونین یک EAA کمیاب در آبزیان کم پودر ماهی است و برای رشد طبیعی [10]، سنتز پروتئین [11] و عملکرد ایمنی [12] موجودات آبزی ضروری است. بنابراین، مکمل متیونین در خوراک کم پودر ماهی برای تعادل اسیدهای آمینه و کاهش اثرات منفی بر رشد و متابولیسم موجودات آبزی پرورشی مورد نیاز است [13]. انواع منابع متیونین به صورت تجاری در دسترس هستند، مانند مخلوط راسمیک ایزومرهای D-Met و L-Met به نام DL-متیونین (DL-Met) و مخلوطی از چهار استریوایزومر متیونین مختلف (LD-Met-Met، DL-Met). -Met، LL-Met-Met و DD-Met-Met) که به عنوان AQUAVI® (Met-Met) تجاری شده اند [10]. با این حال، AQUAVI® دارای خواص فیزیکوشیمیایی بهتری مانند حلالیت بسیار کم در آب و جذب بالاتر نسبت به DL-Met است [10،14]. از سوی دیگر، گزارش شده است که مکمل پروبیوتیک ها (Bacillus subtilis) اثرات مثبتی بر عملکرد رشد و سلامت در میگوی سفید (L. vannamei) و قورباغه گاو نر (Lithobates catesbeianus) تغذیه شده با غذای کم پودر ماهی دارد [15،16]. پروبیوتیک‌ها میکروارگانیسم‌های زنده‌ای هستند که به دلیل ظرفیتشان برای بهبود استفاده از خوراک، هضم آنزیمی، پیشگیری از بیماری‌زا، پاسخ ایمنی و رشد، در آبزیان مورد استفاده قرار می‌گیرند [15]. بنابراین، گنجاندن پروبیوتیک ها در خوراک کاهش یافته پودر ماهی می تواند سلامت و رفاه موجودات آبزی را بهبود بخشد [16]. باکتری های باسیلوس به طور گسترده در آبزی پروری به عنوان پروبیوتیک مورد استفاده قرار می گیرند زیرا آنها ظرفیت تولید ترکیبات ضد میکروبی و اگزونزیم هایی را دارند که هضم مواد مغذی، مهار پاتوژن، تعدیل پاسخ ایمنی، حفظ یکپارچگی روده و در نتیجه عملکرد رشد را بهبود می بخشد [17]. B. amyloliquefaciens فعالیت ضد باکتریایی دارد و آنزیم‌های گوارشی تولید می‌کند که از هضم غذا حمایت می‌کنند [18].

با توجه به موارد فوق، منابع جایگزین برای پودر ماهی، همراه با بسیاری از مواد افزودنی در آبزیان برای تضمین تامین مواد مغذی ضروری، بهبود عملکرد تولیدی، حفظ ترکیب فیزیکوشیمیایی جیره و حفظ کیفیت محیط آبی استفاده شده است [19]. از این رو، رژیم غذایی کم پودر ماهی همراه با منابع مختلف متیونین و B. amyloliquefaciens عملکرد رشد و کارایی تغذیه موجودات آبزی پرورشی را بهبود بخشیده است [3،7،8،20،21]. همچنین، B. amyloliquefaciens CECT 5940 و اثرات آن بر عملکرد رشد و سلامت جوجه های گوشتی [22] و تیلاپیا نیل (Oreochromis niloticus) [21] گزارش شده است. با این حال، مطالعات کمی اثرات رژیم غذایی کم پودر ماهی و مواد افزودنی را بر سلامت گوارش و پاسخ ایمنی میگو تایید کرده اند. بنابراین، هدف اصلی این مطالعه بررسی اثر جایگزینی FM با SBM و PBM در جیره های مکمل DL-Met، MET-MET (AQUAVI®)، B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) و ترکیبات آنها بر رشد بود. عملکرد، بافت شناسی کبدی پانکراس، فعالیت آنزیمی گوارشی، پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی، و ترکیب میکروبی سیستم گوارشی میگوی سفید نوجوان اقیانوس آرام (L. vannamei).

2. مواد و روشها

2.1. آماده سازی رژیم غذایی آزمایشی

در مجموع شش رژیم غذایی آزمایشی با توجه به نیازهای تغذیه ای L. vannamei [23] و توصیه های سازنده (گروه تحقیق و توسعه Evonik Aqua) فرموله شد. رژیم غذایی کنترل (CD) به گونه ای فرموله شد که حاوی مخلوطی از پروتئین FM (39٪)، پروتئین SBM (53٪) و پروتئین PBM (8٪) مانند یک رژیم غذایی معمولی تجاری میگو باشد. SBM و PBM منابع اصلی پروتئین جایگزین برای جایگزینی FM بودند، در حالی که آرد گندم به عنوان یک ماده اتصال دهنده و پرکننده استفاده می شد. روغن ماهی به عنوان منبع اصلی چربی برای برآوردن نیازهای اسید چرب ضروری میگو مورد استفاده قرار گرفت. CD حاوی 2{{10}}0 گرم بر کیلوگرم پودر ماهی بدون هیچ مکملی بود. پنج رژیم غذایی دیگر (D1-D5) که در آن SBM و PBM جایگزین FM در 50٪ شدند، با منابع مختلف متیونین، B. amyloliquefaciens، و ترکیبات آنها تکمیل شدند. D1: 0.13% DL-MET، D2: 0.06% MET-MET (AQUAVI®)، D3: 0.19% MET-MET (AQUAVI®)، D4 : 0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®) و D5: 0.06٪ MET-MET (AQUAVI®) به علاوه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940 (ECOBIOL®). علاوه بر این، نسبت پایداری آب به عنوان ویژگی فیزیکی یک رژیم غذایی با روشی که قبلا شرح داده شده بود ارزیابی شد [24]. فرمولاسیون، ترکیب تقریبی و مقادیر پایداری آب جیره های آزمایشی در جدول 1 نشان داده شده است.

جدول 1. مواد تشکیل دهنده و ترکیب تقریبی جیره های آزمایشی (گرم بر کیلوگرم وزن خشک).

جدول 1. ادامه

2.2. میگو، آزمایش تغذیه و جمع آوری نمونه

جوان L. vannamei از مزرعه میگو در سونورا، مکزیک به دست آمد. طبق روش‌هایی که در کتابچه راهنمای آزمایش‌های تشخیصی برای حیوانات آبزی سازمان جهانی بهداشت حیوانات [25] توضیح داده شده است، میگوها عاری از بیماری‌زا بودند. قبل از آزمایش تغذیه، همه میگوها در آزمایشگاه آبزی پروری در مخازن 1500-L با آب دریا تحت شرایط کنترل شده (دمای 30 ± 0.5 ◦C، اکسیژن محلول بیشتر از یا برابر 4 میلی گرم در لیتر، شوری 37 گرم در لیتر، pH بیشتر یا مساوی 7 و دوره نوری 12 ساعت نوری) و با خوراک تجاری به مدت 7 روز تغذیه می شود. در ابتدا، 48 میگوی سالم با (0.02 ± 0.30 گرم) به مدت 24 ساعت ناشتا قرار گرفتند و به طور تصادفی در 24 مخزن دایره ای (حجم 150 لیتر) با تراکم 20 میگو در هر مخزن (معادل تراکم) توزیع شدند. از 133 میگو در متر مکعب). چهار مخزن تکراری وجود داشت که به طور تصادفی برای هر تیمار رژیم غذایی تخصیص داده شدند. میگوها با جیره اولیه 12 درصد از زیست توده خود به سه جیره در طول روز (8:{24}}، 13:00 و 16:00 ساعت) برای سیر شدن تغذیه شدند. 56 روز، بسته به وجود یا عدم وجود خوراک باقیمانده، روزانه تنظیم می شود. دما (27.84 تا 28.36 ◦C)، شوری (36.98 تا 37.07 g/L)، اکسیژن محلول (4.{39}} تا 5.17 mg/L) و pH (7.41 تا 7.84) ثبت شد. هر روز 30 درصد آب تعویض می شد. خوراک نخورده، مدفوع، پوست اندازی و میگوهای مرده روزانه حذف می شدند. پس از یک آزمایش تغذیه و یک دوره ناشتا 24 ساعته، سه میگو به طور تصادفی از هر تکرار نمونه برداری شد تا 400 میکرولیتر همولنف برای تجزیه و تحلیل بیان ژن به دست آید [26]. میگوهایی که قبلاً از آنها خون گرفته شده بود، برای به دست آوردن کل روده و هپاتوپانکراس آن‌ها به صورت غیرعفونی تشریح شدند، سپس در دمای -80 درجه سانتیگراد تا فعالیت آنزیمی گوارشی و تجزیه و تحلیل میکروبیوم نگهداری شدند. علاوه بر این، دوازده میگوی کامل (سه میگو/تکرار) به طور تصادفی از هر تیمار نمونه برداری شد و برای تجزیه و تحلیل بافت شناسی در محلول AFA Davidson ثابت شد.

2.3. عملکرد رشد

تمام میگوها برای محاسبه عملکرد رشد طبق معادلات گزارش شده توسط مطالعات قبلی [27-29] وزن و شمارش شدند.

وزن نهایی=(Σ وزن نهایی فردی)/تعداد نهایی میگو. افزایش وزن هفتگی=(وزن نهایی - وزن اولیه)/تعداد هفته. نرخ رشد ویژه=100 × (ln وزن نهایی - ln وزن اولیه)/روزهای آزمایش. میزان بقا=100 × (تعداد نهایی میگو/تعداد اولیه میگو). زیست توده نهایی=وزن نهایی × تعداد نهایی میگو. خوراک مصرفی=ورودی خوراک (وزن خشک) - خوراک جمع آوری شده (وزن خشک). نرخ تبدیل خوراک=مصرف خوراک/زیست توده نهایی.

2.4. بافت شناسی هپاتوپانکراس

نمونه‌های هپاتوپانکراس میگو تثبیت شده در محلول دیویدسون طبق روشی که توسط بل و لایتنر [30] توضیح داده شد، پردازش شدند. مقاطع بافت شناسی با ضخامت 4 میکرومتر با استفاده از میکروتوم چرخشی (LEICA RM2115RT) برش داده شدند. رنگ‌آمیزی بافت، مشاهده اسلاید و دیجیتالی کردن تصاویر طبق روشی که توسط کاسیلاس-هرناندز [31] توضیح داده شد، محقق شد. تصاویر بافت ها برای اندازه گیری ارتفاع سلول هپاتوپانکراس با استفاده از سیستم تصویر دیجیتال Image-Pro Premier نرم افزار نسخه 9.0 (Media Cyvernetics Inc., Rockville, MD, USA) استفاده شد.

cistanche tubulosa - سیستم ایمنی را بهبود می بخشد

2.5. فعالیت آنزیم های گوارشی

روده ها و هپاتوپانکراس به طور جداگانه به نسبت 10% با محلول سالین 0.9% همگن شدند و در 3500 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شدند و مایع رویی بلافاصله برای سنجش آنزیم های گوارشی با دستگاه میکروپلیت خوان آنالیز شد (Bio) -راد، هرکول، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا). فعالیت پروتئاز و لیپاز توسط یک کیت تجاری (Sigma-Aldrich®، Louis، MO، USA) مورد سنجش قرار گرفت. فعالیت آمیلاز با استفاده از نشاسته محلول به عنوان سوبسترا اندازه گیری شد [32]. غلظت کل پروتئین محلول با اصل اتصال پروتئین به رنگ با استفاده از آلبومین سرم گاوی به عنوان استاندارد تعیین شد [33]. سنجش همه در سه نمونه تکرار اجرا شد. فعالیت آنزیم های گوارشی به صورت U/mg پروتئین بیان می شود.

2.6. پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی

همولنف با سرعت 35{30}}0 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه در دمای 4 ◦C سانتریفیوژ شد تا هموسیت ها از پلاسما جدا شوند. RNA کل از هموسیت ها با معرف TRIZol (Invitrogen، Carlsbad، CA، USA) استخراج شد و با DNase عاری از RNA (Promega®، Madison، WI، USA) تیمار شد. cDNA با RNA کل (500 نانوگرم) با استفاده از سیستم رونویسی معکوس Improm-II™ (Promega®) و oligo d(T)20 (T4OLIGO) سنتز شد. سنتز cDNA با رونویسی معکوس در دمای 42 ◦C به مدت 60 دقیقه انجام شد. سپس رونوشت معکوس در دمای 70 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه غیرفعال شد تا واکنش متوقف شود. cDNA با 80 میکرولیتر آب فوق خالص رقیق شد و 5 میکرولیتر به عنوان یک الگو برای واکنش کمی PCR (qPCR) در زمان واقعی استفاده شد. پاسخ رونویسی از پنج ژن مرتبط با ایمنی و اکتین به عنوان یک ژن مرجع مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت (جدول 2) [34]. qPCR بر روی یک سیستم PCR بلادرنگ StepOne (Thermo Fisher Scientific) با استفاده از کیت SensiFAST™ SYBR® Hi-ROX (Bioline™، لندن، انگلستان) انجام شد. شرایط qPCR دناتوراسیون اولیه در دمای 95 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه، به دنبال آن 40 چرخه دناتوراسیون در دمای 95 درجه سانتیگراد به مدت 15 ثانیه، و بازپخت / اکستنشن در دمای 60 درجه سانتیگراد به مدت 1 دقیقه بود. تجزیه و تحلیل منحنی تفکیک (60-95 ◦C) با نرخ انتقال دمای 0.5 ◦C / s برای هر جفت آغازگر انجام شد. روش کمی سازی نسبی برای تجزیه و تحلیل بیان ژن بر اساس رودریگز-آنایا [35] و کاسیلاس-هرناندز [36] استفاده شد.

جدول 2. آغازگرهای اختصاصی مورد استفاده برای پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی L. vannamei.

2.7. استخراج DNA و تجزیه و تحلیل توالی

DNA ژنومی از هپاتوپانکراس و روده 12 میگو در هر تیمار با استفاده از Quick-DNA™ Fecal/Soil Microbe (Zymo Research، Irvine، CA، USA)، به دنبال دستورالعمل های سازنده استخراج شد. غلظت DNA با استفاده از اسپکتروفتومتر NanoDrop 2000 (Thermo-Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) اندازه‌گیری شد و کیفیت DNA با الکتروفورز ژل آگارز (1% w/v) ارزیابی شد. سپس نمونه‌های DNA ژنومی به آزمایشگاه ژنومیک میکروبی (CIAD، مکزیک) برای تهیه کتابخانه DNA و تعیین توالی با استفاده از پروتکل‌های استاندارد Illumina برای تکثیر برون سپاری شدند [37]. به طور خلاصه، ناحیه متغیر V4 ژن‌های 16S rRNA و 18S rRNA توسط PCR با پرایمرهای زیر با استفاده از آداپتورهای Illumina تکثیر شد: 16S-V{11}}F (50 - GTG CCA GCM GCC GCG GTA A{{{ 13}} ), 16S-V4_806R (50 -TAA TCT WTG GGV HCA TCA GG-30 ), 18S-V9_Euk_1391F ( 50 -GTA CAC ACC GCC CGT C-30، و 18S-V9_EukBr (50 -TGA TCC TTC TGC AGG TTC ACC TAC-30). در نهایت، آمپلیکون‌ها در کیوبیت اندازه‌گیری شدند، در یک استخر equimolar مخلوط شدند و بر روی پلت فرم Illumina Miniseq تحت شرایط استاندارد (300 سیکل، 2 × 150) توالی‌یابی شدند.

2.8. تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک

فایل‌های FASTQ از خوانده‌های جفت‌شده با استفاده از بسته DADA2 v1.24 تجزیه و تحلیل شدند.{4}} [38]. گردش کار تجزیه و تحلیل توالی شامل فیلتر کردن، حذف کردن، استنتاج نمونه، شناسایی وایمر، و ادغام خوانده‌های انتهای زوجی (PE) برای گروه‌بندی آنها در ASV (انواع توالی آمپلیکون) بود. DADA2 شامل روش "بیزی ساده" با استفاده از پایگاه های داده SILVA برای هر دو منطقه 16S-V4 (silva_nr99_v138.{14}}train_set.fa) و هم منطقه 18S-V9 (silva_132.18s.99_rep_set.dada2.fa). اطلاعات تاکسونومیک با Phyloseq V1.4{26}}.{29}} و بسته میکروبیوم v1.18.0 برای به دست آوردن تنوع آلفا و بتا و مقادیر ترتیب آنالیز شد [37]. تنوع بتا بر اساس فاصله UniFrac وزن‌نشده انجام شد و با استفاده از PCoA ساخته شده با ggplot در R مشاهده شد. در نهایت، تفاوت‌های سطح جامعه چند متغیره بین گروه‌ها با تجزیه و تحلیل واریانس چند متغیره جایگشتی (PERMANOVA) [39] اندازه‌گیری شد. جدول نهایی ASVs از توالی های 16S نیز به عنوان ورودی برای پیش بینی متاژنومیک عملکردی با استفاده از PICRUSt استفاده شد [40]. محتوای مسیر KEGG به‌دست‌آمده توسط PICRUSt نرمال‌سازی شد و سپس برای به دست آوردن پیش‌بینی‌های عملکردی متاژنومی در سطوح مختلف KEGG سلسله مراتبی (1، 2 و 3) استفاده شد [41]. توالی یابی Illumina با استفاده از پرایمرهای ناحیه فوق متغیر V4 در ژن 16S rRNA 976065 PE 150 جفت باز مربوط به روده و هپاتوپانکراس L. vannamei با میانگین 81338 خواندن در هر نمونه به دست داد. پس از فرآیند فیلترینگ کیفی و حذف کایمراها، به طور متوسط ​​58235 توالی در هر نمونه حفظ شد، معادل 71.6 درصد و به 709 ASV اختصاص یافت. از سوی دیگر، از توالی یابی V{51}}S rDNA، 871699 PE خواندن 150 جفت باز با میانگین 72642 در هر نمونه به دست آمد. پس از گردش کار تجزیه و تحلیل توالی، میزان خواندن تقریباً 12.7٪ کاهش یافت. با این حال، هنگام انجام شناسایی طبقه‌بندی و گروه‌بندی ASV، بیشتر توالی‌ها با DNA میزبان (L. vannamei) مطابقت داشتند و نمونه‌ها را از هپاتوپانکراس حذف می‌کردند. بنابراین، داده های ارائه شده در مورد خصوصیات میکروبیوتای یوکاریوتی با میکروارگانیسم های موجود در روده مطابقت دارد. مجموعه داده مورد استفاده 12970 دنباله بود که به 43 ASV اختصاص داده شد.

2.9. تحلیل آماری

نتایج عملکرد رشد، ارتفاع سلول های کبدی، فعالیت آنزیمی گوارشی، و پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA) ارزیابی شد. در صورت مشاهده معنی‌داری، آزمون توکی برای مقایسه میانگین‌ها انجام شد. تجزیه و تحلیل آماری با Statgraphics Centurion XVI انجام شد. معناداری در سطوح احتمال 95 درصد تعیین شد.

3. نتایج

3.1. عملکرد رشد

مقادیر عملکرد رشد در جدول 3 ارائه شده است. در مقایسه با CD، بالاترین مقادیر عملکرد رشد (وزن نهایی، افزایش وزن و زیست توده نهایی) با میگوهای تغذیه شده با D3 و D5 مشاهده شد که به طور قابل توجهی بالاتر از میگوهای تغذیه شده با D1 بود (p < 0.05)، اما بدون تفاوت آماری با میگوهای تغذیه شده با D2 و D4 و (p > 0.05). کمترین مقدار نرخ تبدیل خوراک در میگوهای تغذیه شده با D3 مشاهده شد، اما تفاوت معنی داری در FCR در بین تمام تیمارهای جیره مشاهده نشد (p > 0.{19}}5). در حالی که مصرف خوراک در میگوهای تغذیه شده با D1 به طور قابل توجهی (05/0p<) کاهش و در میگوهای تغذیه شده با D5 به طور قابل توجهی افزایش یافت (05/0>p). تفاوت معنی داری در میزان بقا در بین تمام تیمارهای رژیم غذایی مشاهده نشد (05/0p>).

جدول 3. تأثیر جیره های آزمایشی بر عملکرد رشد Litopenaeus vannamei.

3.2. بافت شناسی کبد پانکراس

هپاتوپانکراس میگو دارای ساختار منظمی بود (شکل 1A). به جز میگوهای تغذیه شده با D1، تمام میگوهای تغذیه شده با رژیم غذایی با پودر ماهی کاهش یافته، ارتفاع سلولهای اپیتلیال هپاتوپانکراس (05/0 < 0) بالاتر از میگوهای تغذیه شده با CD داشتند (شکل 1B).

شکل 1. بافت شناسی هپاتوپانکراس میگو L. vannamei تغذیه شده با جیره شاهد و 5 0% جیره جایگزین پودر ماهی. (الف) میکروگراف های نوری از بخش های طولی (4 میکرومتر) هپاتوپانکراس رنگ آمیزی شده با هماتوکسیلین و ائوزین، ساختاری منظم را نشان می دهد. فلش ها ساختار طبیعی سلول های اپیتلیال توبول شامل سلول های ترشحی (سلول های B) را نشان می دهد. نوار مقیاس: 100 میکرومتر. (ب) سلول های ارتفاع اپیتلیال هپاتوپانکراس میگو. داده ها به صورت میانگین ± SE ارائه می شوند، مقادیر با حروف مختلف به طور قابل توجهی متفاوت هستند (p < 0.05). مخفف ها: توبول ها (Tb)، سلول های اپیتلیال (EC) و سلول های B (HpB). CD (20{{30}} گرم/کیلوگرم FM)، D1 (0.13٪ DL-MET)، D2 (0.06٪ MET-MET)، D3 (0.19٪ MET-MET) ، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940) و D5 (0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940).

3.3. فعالیت آنزیم گوارشی

اثر منابع غذایی مختلف متیونین و Bacillus amyloliquefaciens بر فعالیت آنزیم‌های گوارشی روده و پانکراس کبدی از جیره‌های کاهش‌یافته پودر ماهی با L.vannamei در جدول 4 نشان داده شده است. فعالیت‌های آمیلاز، پروتئاز و لیپاز هپاتوپانکراس از میگوهای تغذیه شده با D3 به طور قابل‌توجهی بود. بالاتر (p < 0.05) نسبت به CD تغذیه شده با میگو، در حالی که فعالیت آنزیم های گوارشی روده تحت تأثیر قرار نگرفت (p > 0.05). در کبد پانکراس از میگو تغذیه شده با D1 کمترین مقدار آمیلاز و لیپاز مشاهده شد، در حالی که در روده فعالیت آنزیم های گوارشی کمترین مقدار را داشت اما تفاوت معنی داری (05/0p>) در مقایسه با میگوی تغذیه شده با CD مشاهده نشد.

جدول 4. تأثیر جیره های آزمایشی بر فعالیت آنزیم های گوارشی Litopenaeus vannamei.

3.4. پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی

پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی میگوی سفید تغذیه شده با رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی با مواد افزودنی تعیین و با میگوهای تغذیه شده با CD مقایسه شد (شکل 2). به جز میگوهای تغذیه شده با D1، تمام ژن های مرتبط با ایمنی که در این مطالعه تجزیه و تحلیل شدند، بیان بیشتری نسبت به میگوهای تغذیه شده با CD داشتند. Hc و pPO در میگوهای تغذیه شده با D3 و D5 به طور قابل توجهی (p < 0.05) تنظیم مثبت شد. LGBP به طور قابل توجهی (p < 0.{18}}5) در میگوهای تغذیه شده با D2 و D3 افزایش یافت. MnSOD به طور قابل توجهی (P <0.05) در میگوهای تغذیه شده با D2، D3 و D5 تنظیم مثبت شد. HSP60 به طور قابل توجهی (P <0.05) در میگوهای تغذیه شده با D5 تنظیم مثبت شد. کمترین مقدار پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی در میگوهای تغذیه شده با D1 در مقایسه با تمام تیمارهای رژیمی مشاهده شد.

شکل 2. پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی میگوهای تغذیه شده با جیره شاهد و 50% جیره های جایگزین پودر ماهی. (الف) هموسیانین (Hc)، (B) پروفنول اکسیداز (pPO)، (C) لیپوپلی ساکارید و پروتئین متصل شونده به گلوکان (LGBP)، (D) سیتوزولی سوپراکسید دیسموتاز منگنز (MnSOD) و (E) پروتئین شوک حرارتی 6{ {11}} (HSP60). داده ها به صورت میانگین ± SE ارائه می شوند، مقادیر با حروف مختلف به طور قابل توجهی متفاوت هستند (p < 0.05). اختصارات: CD (20{{3{33}}}} گرم/کیلوگرم FM)، D1 (0.13٪ DL-MET)، D2 (0.06٪ MET-MET)، D3 (0.19٪ MET- MET)، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940) و D5 (0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940).

3.5. تجزیه و تحلیل میکروبیوتای گوارشی و پیش بینی عملکردی

تجزیه و تحلیل منحنی نادری نشان داد که گونه های مشاهده شده در هر نمونه برای هر دو توالی 16S-V4 (شکل 3A) و 18S-V9 (شکل 4A) کافی بود. با توجه به تنوع آلفا، نتایج 16S نشان داد که شاخص‌های Chao1، Shannon و Simpsons در هپاتوپانکراس بیشتر از روده‌ها بود (شکل 3B). از سوی دیگر، نتایج 18S نشان داد که تمام شاخص های تنوع آلفا در روده میگو تغذیه شده با رژیم غذایی کم پودر ماهی در مقایسه با شاهد کاهش یافت (شکل 4B). با این حال، تفاوت معنی‌داری بین تیمارهای غذایی در نتایج 16S و 18S وجود نداشت.

شکل 3. توالی یابی ژن 16S rRNA روده و پانکراس کبدی از رژیم غذایی کنترل تغذیه شده میگو و جیره های جایگزین پودر ماهی 50 درصد. (الف) منحنی نادر، (B) تنوع آلفا، و (C) ساختار میکروبیوتا با استفاده از نمودارهای تجزیه و تحلیل مختصات اصلی (PCoA) تجسم شده است. مخفف ها: روده (I) و هپاتوپانکراس (H). CD (200 گرم/کیلوگرم FM)، D1 (0.13% DL-MET)، D2 ({{20}}).{27 }}6٪ MET-MET)، D3 (0.19٪ MET-MET)، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940) و D5 (0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens 594 CE ).

اثرات رژیم غذایی آزمایشی بر ساختار میکروبیوتا با استفاده از فاصله UniFrac تعیین و با استفاده از نمودارهای PcoA مشاهده شد. نتایج جدایی واضحی را در بین رژیم‌های غذایی آزمایشی نشان داد، اما بدون تفاوت معنی‌دار در جوامع پروکاریوتی از روده یا هپاتوپانکراس (شکل 3C) و همچنین میکروبیوتای یوکاریوتی از روده (شکل 4C). با این حال، تجزیه و تحلیل تنوع بتا جدایی واضحی را بین جوامع اوتیک پروکاری از روده و هپاتوپانکراس نشان داد (شکل 3C).

شکل 4. توالی یابی ژن 18S rRNA روده از رژیم غذایی کنترل تغذیه شده میگو و جیره های جایگزین پودر ماهی 50 درصد. (الف) منحنی نادر، (B) تنوع آلفا، و (C) ساختار میکروبیوتا با استفاده از نمودارهای تجزیه و تحلیل مختصات اصلی (PCoA) تجسم شده است. مخفف: روده (I). CD (200 گرم/کیلوگرم FM)، D1 (0.13% DL-MET)، D2 ({{20}}).{27 }}6٪ MET-MET)، D3 (0.19٪ MET-MET)، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940) و D5 (0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens 594 CE ).

بر اساس نتایج میکروبیوتای پروکاریوتی، در مجموع 19 فیلا باکتریایی مختلف شناسایی شد. پروتئوباکتری ها شاخه غالب در روده میگو بودند، در حالی که پروتئوباکتری ها و اکتینوباکتری ها فیلاهای غالب در هپاتوپانکراس میگو بودند. در روده میگو تغذیه شده با D3 و D5، افزایش فراوانی نسبی اکتینوباکتریا مشاهده شد در حالی که فراوانی نسبی Bacteroidota اندکی کاهش یافت. در آتوپانکراس میگوی تغذیه شده با D1، D2 و D4، افزایش جزئی در فراوانی نسبی Bacteroidota مشاهده شد، در حالی که در هپاتوپانکراس میگو تغذیه شده با D3 و D5 فراوانی نسبی اکتینوباکتریا افزایش یافت (شکل 5A). در سطح جنس، Pseudoalteromonas بیشترین شیوع را در روده میگو و Demequina در هپاتوپانکراس میگو داشت. Demequina افزایش کمی در روده میگو با D3 و D5 داشت، در حالی که Lysinimicrobium و Ruegeria در هپاتوپانکراس میگو تغذیه شده با D3 و D5 افزایش یافت (شکل 5B). نتایج دسته‌بندی‌های عملکردی (KEGG سطح 2) نشان داد که توالی‌های باکتریایی با فرآیندهای سلولی و مسیرهای متابولیسم مرتبط هستند (شکل 5C و جدول تکمیلی S1). متابولیسم اسیدهای آمینه، متابولیسم کربوهیدرات، کوفاکتورها و متابولیسم ویتامین در مسیرهای متابولیسم بیشترین فراوانی را داشتند، در حالی که تحرک سلولی در فرآیندهای سلولی فراوان بود. پس از حذف توالی خوانی شده از DNA میزبان، سه فیلا روی میکروبیوتای یوکاریوتی مشاهده شد. شاخه SAR (Stramenopiles, Alveolate y Rhizaria) در همه روده های میگو شایع ترین بود، با این حال افزایش در شاخه Opisthokonta در روده میگوی تغذیه شده با D5 مشاهده شد (شکل 6A). در سطح جنس، آپلانوشیتریوم در روده میگو که از D2 تا D5 تغذیه می‌شد، فراوان‌ترین بود، اما فراوانی در D5 به‌طور قابل‌توجهی بیشتر بود. آلوئول کشت نشده در CD تغذیه شده با روده میگو غنی شد. Auranti ochitrium بیشتر در D2 تا D4 با فراوانی بالاتر در D3 بود. در نهایت، Ebria بیشتر در روده میگو تغذیه شده با D1 بود (شکل 6B).

شکل 5. میکروبیوتای پروکاریوتی روده ها و هپاتوپانکراس از میگوهای تغذیه شده با جیره شاهد و 5 0% جیره های جایگزین پودر ماهی. (الف) ده برتر فراوانی فیلا. (ب) تجزیه و تحلیل نقشه حرارتی 4 0 جنس برتر، و (ج) تجزیه و تحلیل نقشه حرارتی پیش‌بینی عملکرد بر اساس تحلیل مسیرهای KEGG. اختصارات: روده (I) و هپاتوپانکراس (H). CD (2{13}}0 گرم/کیلوگرم FM)، D1 ({{20}}.13% DL-MET)، D2 (0}.06% MET -MET)، D3 (0.19٪ MET-MET)، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940) و D5 (0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940).

شکل 6. میکروبیوتای یوکاریوتی روده از میگوهای تغذیه شده با جیره شاهد و 50% جیره های جایگزین پودر ماهی. (اِ) فراوانی فیلا. (ب) تجزیه و تحلیل نقشه حرارتی فراوانی جنس. مخفف: روده (I). SAR (Stramenopiles، Alveolate y Rhizaria). CD (2{8}}0 گرم/کیلوگرم FM)، D1 (0.13% DL-MET)، D2 (0).06% MET -MET)، D3 (0.19٪ MET-MET)، D4 (0.13٪ DL-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940) و D5 (0.06٪ MET-MET به علاوه 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940).

4. بحث

4.1. عملکرد رشد

مطالعات قبلی اثرات رژیم‌های غذایی کاهش‌یافته پودر ماهی همراه با منابع غذایی مختلف متیونین را بر عملکرد رشد L. vannamei، مانند خوراک میگو با 5% تا 10% پودر ماهی و مکمل با سطحی بین {{15} ارزیابی کرده‌اند. }}.15% و 1.7% از MET-MET (AQUAVI®) یا 3% از DL-MET [2,3,8,20,42,43]. با این وجود، مطالعه‌ای با شرایط کشت مشابه که از میگوی جوان (L. vannamei) با وزن اولیه 0.98 ± 0 استفاده کرد.02 گرم، پیشنهاد 0 0.20% MET-MET (AQUAVI®) برای عملکرد رشد بهتر هنگام تغذیه میگو، خوراک پودر ماهی را کاهش داد [2{39}}]. DL-MET روی میگوهای جوان با وزن اولیه 3.{43}} گرم ثابت شده است که سطوح بین 0 را پیشنهاد می‌کند.{{5{55}}}}6–0.3 0% برای پاسخ مولد خوب هنگامی که میگو تغذیه می شد، خوراک پودر ماهی را کاهش داد [2]. از طرف دیگر، اثرات B. amyloliquefaciens (104 و 1{{{90}}}3 UFC/mL) محلول در آب یک سیستم لخته زیستی برای L. vannamei پرورشی بود. گزارش شده است [44،45]، اما هیچ گزارشی در مورد اثرات این پروبیوتیک مکمل در کاهش خوراک پودر ماهی بر عملکرد رشد L. vannamei وجود ندارد. بنابراین، این مطالعه اثر جایگزینی FM توسط SBM و PBM را در جیره میگوهای مکمل با 0.13٪ DL-MET (D1)، 0.06٪ از MET-MET (D2)، 0.19٪ از MET-MET (D3) و با توجه به توصیه های سازنده، ما از ترکیبات 0.13٪ از DL-MET به اضافه 0.1٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940 (معادل 109 UFC/g) (D4) و 0.06٪ از MET-MET به اضافه 0.1٪ از B. amyloliquefaciens 5940CT استفاده کردیم. (D5). همه رژیم‌های غذایی کاهش‌یافته با مکمل‌های حاوی متیونین و پروبیوتیک‌ها، ارزش پایداری آب خوبی را نشان دادند. بنابراین، جیره‌های کاهش‌یافته با پودر ماهی ارزیابی‌شده در این مطالعه مطابق با گزارش‌های قبلی بوده و تمامی تیمارهای غذایی پاسخ خوبی در عملکرد رشد میگو نشان دادند. با این وجود، میگوهای تغذیه شده با D1 پارامترهای عملکرد کمتری داشتند، در حالی که میگوهای تغذیه شده با D3 و D5 پارامترهای عملکرد بالاتری داشتند. عملکرد پایین رشد قابل توجه در میگوهای تغذیه شده با D1 می تواند به مصرف خوراک ضعیف به دلیل کمبود متیونین مرتبط باشد که باعث کاهش خوش طعمی در کاهش خوراک پودر ماهی می شود [20]. عملکرد رشد بالا در میگوهای D3 در مقایسه با میگوهای تغذیه شده با D1 و D2 می تواند به دلیل کمبود و منبع متیونین باشد. موارد فوق ممکن است به این دلیل باشد که گزارش شده است که دی پپتید MET MET دارای انحلال پذیری در آب کم و فراهمی زیستی بالا است، که می تواند به طور موثر توسط میگو برای ارتقاء ارزش عملکرد رشد بهتر مورد استفاده قرار گیرد [2،10،14]. میگوهای تغذیه شده با D5 حتی با همان سطح و منبع متیونین در D2 عملکرد رشد بالایی داشتند، اما با افزودن 0.10٪ B. amyloliquefaciens CECT 5940. عملکرد رشد بالا می تواند به دلیل خواص مفید پروبیوتیک باشد که شامل فعالیت ضد میکروبی و تولید آمیلاز، سلولاز و پروتئاز که قابلیت هضم و جذب ماده مغذی را افزایش می دهد [46]. همچنین، یک مطالعه قبلی گزارش داد که B. amyloliquefaciens یک تولید کننده متیونین است [47] و این می تواند به حفظ تعادل این EAA در D5 کمک کند. علاوه بر این، گزارش شده است که مخلوطی از افزودنی های خوراک می تواند اثربخشی عملکرد رشد موجودات آبزی [48-50] و جوجه های گوشتی [51] را افزایش دهد. بنابراین، جایگزینی 50% FM توسط SBM و PBM در جیره‌های حاوی 0.19% MET-MET و 0.06% MET-MET به اضافه 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 می‌تواند استفاده از مواد مغذی و در نتیجه عملکرد رشد میگو را بهبود بخشد. توجه به این نکته مهم است که SBM و PBM دارای سطوح بالایی از اسیدهای چرب هستند، اما n{96}} اسیدهای چرب غیراشباع با زنجیره بلند در این منابع پروتئینی کمبود دارند [52]. در این زمینه، تحقیقات بیشتری برای تعیین اینکه چگونه استفاده از SBM و PBM بر ترکیب اسیدهای چرب رژیم‌های غذایی کاهش‌یافته پودر ماهی و کیفیت عضلات میگو تأثیر می‌گذارد، ضروری است.

فواید سیستانچ برای مردان - تقویت سیستم ایمنی بدن

4.2. بافت شناسی کبد پانکراس

هپاتوپانکراس میگو یک اندام گوارشی است و نقش مهمی در ترشح آنزیم های گوارشی، انتقال مواد مغذی، ذخیره سازی و جذب دارد، بنابراین عملکرد آن کلید عملکرد رشد و سلامت میگو است [30،53]. با این حال، گزارش شده است که رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی می تواند مورفولوژی ساختاری اندام های گوارشی را تغییر دهد و شرایط فیزیولوژیکی موجودات آبزی را مختل کند که منجر به تاخیر در رشد می شود [54]. بافت شناسی کبدی پانکراس به عنوان شاخصی از عملکرد رشد، سلامت و وضعیت تغذیه میگو مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. آسیب در ساختار هپاتوپانکراس مشاهده نشد، سلول های B شایع ترین سلول های کبدی پانکراس بودند و ارتفاع اپیتلیال آنها به طور قابل توجهی در تمام تیمارهای غذایی به استثنای میگوهای تغذیه شده با D1 افزایش یافت که پاسخ مشابهی با جیره شاهد داشت. نتایج نشان می‌دهد که هپاتوپانکراس به گنجاندن منابع غذایی مختلف متیونین و B. amyloliquefaciens در رژیم‌های غذایی کاهش‌یافته آرد ماهی، افزایش سلول‌های B، تأثیر بر ترشح آنزیم‌های گوارشی، جذب و جذب مواد مغذی و استفاده از خوراک، همانطور که در مطالعات دیگر گزارش شده است، حساس است. منابع و مواد افزودنی جایگزین پودر ماهی [53،55-58]. علاوه بر این، گزارش شده است که مکمل متیونین می تواند تغییرات هپاتوپانکراس را به دلیل کمبود آن در رژیم غذایی کم پودر ماهی کاهش دهد [8]. بنابراین، با توجه به تجزیه و تحلیل بافت شناسی، هیچ شواهدی از سمیت ناشی از رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی همراه با منابع غذایی مختلف متیونین و B. amyloliquefaciens در L. vannamei hepatopancreas وجود ندارد.

4.3. تجزیه و تحلیل آنزیم گوارشی

فعالیت گوارشی آنزیم یک فرآیند فیزیولوژیکی است که هضم و جذب مواد مغذی را بهبود می بخشد و بنابراین یک عامل کلیدی برای ارتقاء عملکرد رشد میگو است [59]. با این وجود، مطالعات قبلی گزارش کرده‌اند که فعالیت آنزیم‌های گوارشی با کاهش رژیم غذایی پودر ماهی بدون مکمل‌های افزودنی به طور قابل توجهی کاهش می‌یابد [6{4}}،61]. فعالیت آنزیم های گوارشی به عنوان شاخصی از عملکرد گوارشی میگو استفاده شد. در مطالعه حاضر، میگوهای تغذیه شده با D3 فعالیت آنزیم گوارشی کبدی را در مقایسه با همه گروه‌ها بهبود بخشید (05/0p<) و تفاوت معنی‌داری در فعالیت آنزیم گوارشی روده مشاهده نشد. به طور کلی، فعالیت آنزیم های گوارشی کم در هر دو اندام میگوی تغذیه شده با D1 مشاهده شد. در توافق با این نتایج، مکمل متیونین باعث افزایش فعالیت آنزیم های گوارشی در ماهی ماهی قرمز (Pagrus major) [62]، ماهی کپور (Ctenopharyngodon idella) [63]، میگوی سفید (L. vannamei) [2،3،20] و ماهی روهو (Labeo rohita) [59]. اثرات خوراک مکمل شده با B. amyloliquefaciens بر فعالیت آنزیم گوارشی میگو در L. vannamei گزارش نشده است، اما مشخص است که پروبیوتیک ها فعالیت آنزیم های گوارشی را افزایش می دهند و استفاده و هضم غذا را بهبود می بخشند [64]. علاوه بر این، چندین کار، خوراک‌های مختلف آبزی پروری را با مکمل‌های افزودنی همراه با پروبیوتیک‌ها ارزیابی کردند و افزایش فرآیند گوارش را نشان دادند. [48،50]. با این وجود، ناهماهنگی در فعالیت آنزیم‌های گوارشی در جوجه‌های گوشتی با اسیدهای آلی، پروبیوتیک‌ها و ترکیبات، احتمالاً به دلیل سطح القایی افزودنی‌ها و ترکیبات خوراک در سطوح پایین‌تر از حد مطلوب، مشاهده شد [51]. این مطالعه همچنین ناسازگاری را در فعالیت آنزیم گوارشی کبدی در میگوهای تغذیه شده با D3، D4 و D5 گزارش کرد. با این حال، نتایج نشان می دهد که مکملی که قبلا ذکر شد بر عملکرد گوارشی میگو تأثیر نمی گذارد.

4.4. پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی

پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی برای به دست آوردن اطلاعات مربوط به وضعیت سلامت میگو بسیار مهم است [35]. با این حال، گزارش شده است که رژیم‌های غذایی کم پودر ماهی، پاسخ ایمنی و آنتی‌اکسیدانی میگو را به دلیل عدم تعادل مواد مغذی، عوامل ضد تغذیه‌ای بالا، و محتوای فیبر که بر مصرف خوراک، خوش‌مزه بودن و قابلیت هضم تأثیر می‌گذارد، مختل می‌کند [56،65-67]. قبلاً، ما اثرات منبع و سطح پروتئین را بر روی ژن‌های مرتبط با ایمنی (Hc، pPO، LGBP)، ظرفیت آنتی‌اکسیدانی (MnSOD) و تحمل استرس (HSP6{20}}) بررسی کردیم و پیشنهاد کردیم که مکانیسم‌های دفاعی تحت تأثیر قرار نگرفت. زمانی که میگوها با جیره های حاوی پروتئین گیاهی (30 تا 35 درصد) در سطوح متوسط ​​تغذیه شدند [35]. از سوی دیگر، گزارش شده است که رژیم غذایی کم پودر ماهی، زمانی که پودر ماهی از 250 گرم بر کیلوگرم به 100 گرم بر کیلوگرم کاهش یابد، اثرات نامطلوبی بر پاسخ ایمنی میگو دارد [68]. با این وجود، پاسخ آنتی اکسیدانی بدون تأثیر بر وضعیت اکسیداتیو کبد و روده تعدیل شد زمانی که ماهی باس اروپایی (Dicentrarchus labrax) با پودر ماهی کم همراه با سطح DL-Met 12 درصد کمتر از نیاز تعیین شده آنها تغذیه شد [69]. همچنین، پاسخ ایمنی و ظرفیت آنتی اکسیدانی زمانی بهبود یافت که میگوهای سفید (L. vannamei) [8] و تیلاپیا نیل (O. niloticus) [14] با رژیم غذایی کم پودر ماهی با 0.15٪ MET-MET تغذیه شدند. علاوه بر این، یک مطالعه نشان داد که تیلاپیا نیل (O. niloticus) با رژیم غذایی کم پودر ماهی همراه با Spirulina platensis و B. amyloliquefaciens، پاسخ ایمنی و ظرفیت آنتی اکسیدانی را افزایش داده است، اما تحمل استرس را کاهش داده است [21]. نتایج این مطالعه نشان داد که پاسخ‌های رونویسی ژن‌های مربوط به ایمنی، ظرفیت آنتی‌اکسیدانی و تحمل استرس با تغذیه میگو با D2، D3، D4 و D5 بهبود یافته است، که جالب است زیرا این نشان می‌دهد که مکمل‌های متیونین و پروبیوتیک می‌توانند به طور مثبتی تعدیل کنند. مکانیسم های دفاعی، کاهش اثرات ناشی از خوراک کم پودر ماهی. در مقابل، پاسخ رونویسی کم ژن‌های مرتبط با ایمنی مشاهده شده در میگوهای تغذیه شده با D1 می‌تواند به دلیل کمبود متیونین باشد. با این حال، با توجه به عملکرد تولیدی، بهترین درمان های غذایی می تواند D3 و D5 بدون تاثیر بر رشد و سلامت میگو باشد.

4.5. تجزیه و تحلیل میکروبیوتای گوارشی و پیش بینی عملکردی

سیستم گوارشی میگو میزبان جوامع میکروارگانیسم‌هایی است که تحت سلطه باکتری‌ها هستند، اما میکروارگانیسم‌های یوکاریوتی نیز ممکن است وجود داشته باشند و یک اکوسیستم میکروبی بزرگ به نام میکروبیوتا ایجاد کنند [7{22}}]. میکروبیوتای سیستم گوارشی میگو بر ایمنی یا مقاومت، تولید متابولیت های مفید و هضم و جذب مواد مغذی تأثیر می گذارد [71،72]. رژیم غذایی یکی از عوامل محیطی اصلی است که بر میکروبیوتای سیستم گوارشی میگو تأثیر می گذارد [73]. این مطالعه اثرات رژیم‌های غذایی کم پودر ماهی را بر تنوع، ساختار و فراوانی نسبی میکروارگانیسم‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی از روده و هپاتوپانکراس L. vannamei با استفاده از توالی‌یابی 16S و 18S ارزیابی کرد. نتایج مطالعه نشان داد که تنوع و ساختار میکروبیوتا (پروکاریوتی و یوکاریوتی) بین تیمارهای غذایی تفاوتی ندارد. با این حال، مقایسه تنوع بتا مشخص کرد که میکروبیوتای پروکاریوتی روده به طور جداگانه از میکروبیوتای پروکاریوتی کبدی پانکراس جمع شده است، که نشان دهنده یک طاقچه اکولوژیکی منحصر به فرد با توجه به اندام گوارشی میگو است [74]. بنابراین، میکروارگانیسم‌های تخصصی هم در روده و هم در هپاتوپانکراس به بهبود انرژی دریافتی میزبان و فرآیندهای متابولیکی لازم برای رشد، پاسخ ایمنی، هضم مواد مغذی و جذب کمک می‌کنند [75]. همانطور که در زیر توضیح داده خواهد شد، نتایج مطالعه نشان می‌دهد که فراوانی میکروارگانیسم‌های پروکاریوتی و یوکاریوتی می‌تواند به میگوها کمک کند تا به طور موثر از مواد مغذی رژیم‌های غذایی کم پودر ماهی برای فرآیندهای متابولیکی لازم برای کسب انرژی، رشد، ایمنی، هضم و تغذیه استفاده کنند. با توجه به فراوانی پروکاریوت‌ها در کلیه روده‌ها و نمونه‌های هپاتوپانکراس، شایع‌ترین گروه پروتئوباکتری‌ها و شاخه اکتینوباکتریا در نمونه‌های هپاتوپانکراس حضور بیشتری داشتند. این نتایج مطابق با یک مطالعه قبلی است [36]، و همچنین توضیح داده شده است که این فیلاها در میگوهای جوان و بالغ (Penaeus monodon) غالب بودند [76]. Pseudoalteromonas متعلق به شاخه Proteobacteria یک آنزیم گوارشی (پروتئازها، آمیلازها، گالاکتوزیدازها و فسفولیپازها) است که میکروارگانیسمی تولید می کند که به هضم مواد مغذی میگو کمک می کند [77-79]. همچنین گزارش شده است که به سنتز اسیدهای چرب اشباع نشده چندگانه (PUFA) و اسیدهای چرب با زنجیره کوتاه (SCF) کمک می کند [8{25}}،81]. Ruegeria، متعلق به شاخه Proteobacteria، فعالیت تری استراز را تولید می کند و به فرآیندهای گوارشی میزبان و همچنین فعالیت ضد باکتریایی علیه Vibrio anguillarum کمک می کند [82]. Demequina متعلق به شاخه Actinobacteria می تواند -آمیلاز، زایلاناز و سلولاز تولید کند که در جذب و استفاده کربوهیدرات ها نقش دارند [83-{19}}]. با توجه به پروفایل های شیمی تاکسونومیک و ژنومیک، Lysinimicrobium را می توان مترادف ذهنی Demequina [87] در نظر گرفت و در نتیجه می تواند سهم یکسانی در فعالیت آنزیم های گوارشی و هضم کربوهیدرات داشته باشد. نقش میکروارگانیسم‌های پروکاریوتی در سیستم گوارشی میگو ارتباط نزدیکی با پیش‌بینی‌های عملکرد در پایگاه داده KEGG دارد که شامل آمینو اسید، کربوهیدرات، کوفاکتورها و متابولیسم ویتامین و همچنین تحرک سلولی بود. تولید آنزیم گوارشی و سنتز اسیدهای چرب ضروری نشان دهنده نقش مفید میکروبیوتا در سلامت و تحریک ایمنی سیستم گوارشی میگو است. علاوه بر این، فرآیندهای تحرک سلولی مانند کموتاکسی باکتریایی و تجمع تاژک‌ها می‌توانند از میکروارگانیسم‌های پروکاریوتی در سازگاری با محیط گوارش میزبان حمایت کنند [88]. بنابراین، رژیم های غذایی کم پودر ماهی، همراه با 0.19٪ MET-MET یا 0.06٪ MET-MET به علاوه پروبیوتیک (B. amyloliquefaciens) به نقش های مفید جوامع پروکاریوتی در سیستم گوارشی میگو کمک می کند.

توصیف فراوانی میکروارگانیسم های یوکاریوتی با توالی یابی ژن 18S دشوار بود زیرا مقدار زیادی از DNA L. vannamei در این مطالعه شناسایی شد. علاوه بر این، در متابرکدگذاری DNA مدفوع معمول است که DNA میکرویوکاریوت ها در مدفوع سریعتر از DNA میزبان تجزیه می شود و مراحل اضافی مانند برش یا مسدود کردن DNA میزبان با استفاده از آنزیم های محدود کننده یا آغازگرهای مسدود کننده قبل یا بعد از تکثیر ضروری است [89]. ]. با این وجود، نتایج مطالعه بینشی در مورد جوامع میکرویوکاریوتی سیستم گوارشی میگو ارائه می دهد. شاخه SAR فراوان ترین در روده میگو بود که با رژیم غذایی کم پودر ماهی تغذیه می شد. Aurantiochytrium فراوانی بیشتری در روده میگو تغذیه شده با D3 داشت در حالی که Aplanochytrium در روده میگو تغذیه شده با D5 فراوان بود. علاوه بر این، Ebria شایع ترین در روده میگو تغذیه شده با D1 بود. Aurantiochytrium یک تولید کننده ایکوزاپنتانوئیک اسید (EPA) است [90] در حالی که Aplanochytrium تولید کننده دوکوزاهگزانوئیک اسید (DHA) است [91]. این اسیدهای چرب نقش اساسی در تقویت رشد یا تقویت ایمنی موجودات آبزی دارند. همچنین، EPA و DHA به ارگانیسم های آبزی کمک می کنند تا عوامل التهابی را کاهش دهند و التهاب را کاهش دهند [9{15}}]. از سوی دیگر، Ebria دارای یک اسکلت سیلیسی جامد داخلی است که می تواند منجر به هضم ضعیف توسط موجودات آبزی شود [92] که می تواند عملکرد رشد میگوهای تغذیه شده با D1 را کاهش دهد. میکروارگانیسم‌های یوکاریوتی در سیستم گوارشی و بافت‌های بی‌مهرگان دریایی زندگی می‌کنند، اما احتمالاً همانطور که قبلاً توضیح داده شد، از آب ساحلی که برای آبیاری استخر میگو استفاده می‌شد سرچشمه گرفته‌اند [93]. با این حال، استفاده از رژیم‌های غذایی سازگار با محیط زیست و مکمل‌ها با افزودنی‌ها و پروبیوتیک‌ها می‌تواند رشد ریزجلبک‌های مضر را در سیستم گوارشی میگو و محیط آن کنترل کند [94]. این با نتایج مطالعه مطابقت دارد، که نشان می‌دهد رژیم غذایی کم پودر ماهی همراه با 0}.13% DL-MET فراوانی Ebria را افزایش داده و بر عملکرد تولیدی و سلامت میگو تأثیر می‌گذارد، در حالی که رژیم‌های غذایی مکمل با 0}.19% METMET یا 0.06٪ MET-MET به اضافه 0.10٪ B. amyloliquefaciens به نقش های مفید جوامع یوکاریوتی در سیستم گوارشی میگو کمک می کند.

فواید سیستانچ برای مردان - تقویت سیستم ایمنی بدن

5. نتیجه گیری ها

پودر ماهی می‌تواند تا حد 50% توسط SBM و PBM در خوراک میگو مکمل‌شده با MET-MET و/یا B. amyloliquefaciens CECT 5940 بدون اثرات نامطلوب بر عملکرد رشد جایگزین شود. در مقایسه با جیره شاهد، میگوهای تغذیه شده با رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی با 0.19% MTE-MET و 0.06% MET-MET به اضافه 0.10% B. amyloliquefaciens CECT 5940 به ترتیب دارای 43% و 40% زیست توده نهایی بیشتر بودند. علاوه بر این، میگوهای تغذیه شده با رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی همراه با MET-MET و/یا B. amyloliquefaciens CECT 5940 دارای ارتفاع بهتر سلول های اپیتلیال هپاتوپانکراس، فعالیت آنزیم های گوارشی، پاسخ رونویسی ژن های مرتبط با ایمنی، و میکروبیوتای مفید برای سیستم گوارش بودند. تحقیقات بیشتر برای بررسی سطوح درجه بندی منابع متیونین و اثرات هم افزایی اسیدهای آمینه و پروبیوتیک ها در رژیم غذایی کاهش یافته پودر ماهی برای میگوی پرورشی ضروری است. همچنین، ارزیابی اینکه چگونه SBM و PBM بر ترکیب اسیدهای چرب رژیم‌های غذایی کاهش‌یافته پودر ماهی و کیفیت عضلات میگو تأثیر می‌گذارند، جالب است. با این وجود، این اطلاعات می تواند برای تولید خوراک کم پودر ماهی برای آبزی پروری بدون تأثیر بر رشد و رفاه موجودات آبزی جالب باشد.

منابع

1. فائو وضعیت جهانی شیلات و آبزی پروری 2022. به سوی تحول آبی. فائو: رم، ایتالیا. [CrossRef]

2. Xie, J.-J. لمه، ا. او، J.-Y. یین، پی. Figueiredo-Silva، C.; لیو، ی.-جی. Xie، S.-W. نیو، جی. تیان، L.-X. اگر با DL-Methionine (DL-Met) یا DL-MethionylDL-Methionine (Met-Met) مکمل شود، سطح پودر ماهی در میگوی سفید (Litopenaeus vannamei) با موفقیت کاهش می یابد. آکواک. Nutr. 2017، 24، 1144-1152. [CrossRef]

3. لو، ج. ژانگ، ایکس. ژو، Q. چنگ، ی. لو، جی. ماساگوندر، ک. او هست.؛ زو، تی. یوان، ی. شی، بی. و همکاران مکمل غذایی DL-methionyl-DLmethionine می تواند عملکرد رشد را تحت استراتژی های کم پودر ماهی با تعدیل مسیر سیگنالینگ TOR Litopenaeus vannamei بهبود بخشد. آکواک. Nutr. 2021، 27، 1921-1933. [CrossRef]

4. Cho, JH; کیم، آی اچ پودر ماهی - ارزش غذایی. J. Anim. فیزیول. انیمیشن. Nutr. 2011، 95، 685-692. [CrossRef] [PubMed]

5. آهنگ، X. بله، اچ. جین، اف. لی، اچ. کیم، Y.-S. شیائو، جی. Guo, Z. اثرات کنجاله سویای تخمیر شده و گوانوزین 50 -مونوفسفات بر رشد، سلامت روده و قابلیت ضد استرس پنائوس وانامی در رژیم غذایی کم ماهی. Aquaculture 2022, 548, 737591. [CrossRef]

6. یائو، دبلیو. یانگ، پی. ژانگ، ایکس. خو، X. ژانگ، سی. لی، ایکس. Leng, X. اثرات جایگزینی پودر ماهی رژیمی با پروتئین Clostridium autoethanogenum بر رشد و کیفیت گوشت میگوی سفید اقیانوس آرام (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2022, 549, 737770. [CrossRef]

7. ژانگ، ج. یانگ، اچ. یان، ی. ژانگ، سی. بله، جی. Sun، Y. اثرات پروبیوتیک های منشاء ماهی بر عملکرد رشد، پاسخ ایمنی و سلامت روده میگو (Litopenaeus vannamei) تغذیه شده با رژیم غذایی با پودر ماهی تا حدی با کنجاله سویا جایگزین شده است. آکواک. Nutr. 2020، 26، 1255-1265. [CrossRef]

8. جی، ر. وانگ، ز. او، جی. ماساگوندر، ک. خو، دبلیو. مای، ک. Ai, Q. اثرات مکمل DL-متیونیل-DL-متیونین بر عملکرد رشد، پاسخ های ایمنی و آنتی اکسیدانی میگوی سفید پا (Litopenaeus vannamei) تغذیه شده با رژیم غذایی کم پودر ماهی. آکواک. Rep. 2021, 21, 100785. [CrossRef]

9. چاکلدر، ر. سیدیک، MAB; Fotedar, R. جایگزینی کامل پودر ماهی با غذای فرعی طیور بر رشد، کیفیت عضله، ساختار بافت شناسی، ظرفیت آنتی اکسیدانی و پاسخ ایمنی جوان barramundi، Lates calcarifer تأثیر گذاشت. PLoS ONE 2020, 15, e0242079. [CrossRef]

10. نیو، ج. لمه، ا. او، J.-Y. لی، H.-Y.; Xie، S.-W. لیو، ی.-جی. یانگ، اچ.-جی. Figueiredo-Silva، C.; تیان، L.-X. ارزیابی فراهمی زیستی محصول Novel Met-Met (AQUAVI®Met-Met) در مقایسه با dl-متیونین (dl-Met) در میگوی سفید (Litopenaeus vannamei). آبزی پروری 2018، 484، 322-332. [CrossRef]

11. Skiba-Cassy، S. گیردن، آی. پانسرات، اس. Seiliez، I. عدم تعادل متیونین در رژیم غذایی، تنظیم رونویسی ژن های دخیل در متابولیسم گلوکز، لیپید و اسیدهای آمینه در کبد قزل آلای رنگین کمان (Oncorhynchus mykiss) را تغییر می دهد. آبزی پروری 2016، 454، 56-65. [CrossRef]

12. ماچادو، م. سرا، CR; اولیوا تلس، ا. کاستاس، بی. متیونین و تریپتوفان نقش‌های تعدیلی متفاوتی را در باس دریایی اروپایی (Dicentrarchus labrax) پاسخ ایمنی ذاتی و سیگنال‌دهی آپوپتوز بازی می‌کنند - یک مطالعه آزمایشگاهی. جلو. ایمونول. 2021, 12, 660448. [CrossRef]

13. ژو، ی. او، جی. آفتاب.؛ ماساگوندر، ک. خو، ام. چن، ال. لیو، کیو. بله، اچ. سان، ز. بله، C. اثرات DL-متیونین و یک آنالوگ هیدروکسی متیونین (MHA-Ca) بر رشد، پروفایل اسیدهای آمینه و بیان ژن های مربوط به سنتز تورین و پروتئین در ماهی کپور معمولی (Cyprinus carpio). Aquaculture 2021, 532, 735962. [CrossRef]

14. Guo, T.-Y.; ژائو، دبلیو. او، J.-Y. لیائو، S.-Y. Xie، J.-J. Xie، S.-W. ماساگوندر، ک. لیو، ی.-جی. تیان، L.-X. Niu, J. مکمل غذایی dl-methionyl dl-methionine باعث افزایش عملکرد رشد، توانایی آنتی اکسیدانی، محتوای اسیدهای آمینه ضروری و بهبود تنوع میکروبیوتای روده در تیلاپیا نیل (Oreochromis niloticus) شد. برادر جی. نوتر. 2020، 123، 72-83. [CrossRef]

15. لین، جی. زنگ، س. ژانگ، سی. آهنگ، ک. لو، ک. وانگ، ال. رحیم نژاد، س. اثرات مکمل‌سازی باسیلوس سوبتلیس در جیره‌های حاوی کنجاله سویا بر عملکرد رشد، قابلیت هضم جیره و سلامت روده در قورباغه گاو نر Lithobates catesbeianus. آکواک. Rep. 2020, 16, 100273. [CrossRef]

16. تائو، ایکس. او، جی. لو، جی. چن، ز. جین، م. جیائو، ال. ماساگوندر، ک. لیو، دبلیو. ژو، Q. اثرات Bacillus subtilis DSM 32315 (Gutcare®) بر عملکرد رشد، وضعیت آنتی اکسیدانی، توانایی ایمنی، و عملکرد روده برای نوجوانان Litopenaeus vannamei تغذیه شده با رژیم غذایی با پودر ماهی بالا/کم. آکواک. Rep. 2022, 26, 101282. [CrossRef]

17. دی اولیویرا، MJK; ساکومورا، NK; دوریگام، JCDP; دورانعلی، ک. سوآرس، ال. Viana, G. Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 به تنهایی یا در ترکیب با محرک های رشد آنتی بیوتیکی باعث بهبود عملکرد در جوجه های گوشتی تحت چالش پاتوژن روده ای می شود. مرغ. علمی 2019، 98، 4391–4400. [CrossRef]

18. سیلوا، TFA; پتریلو، TR; یونس-آگویناگا، جی. مارکوسو، پی. کلودیانو، جی دی اس؛ de Moraes، FR; de Moraes، JRE اثرات پروبیوتیک Bacillus amyloliquefaciens بر عملکرد رشد، هماتولوژی و مورفومتری روده در تیلاپیا نیل پرورش یافته در قفس. لات صبح. جی. آکوات. Res. 2015، 43، 963-971. [CrossRef]

19. بای، س. کاتیا، ک. یون، H. مواد افزودنی در aquafeed. در تغذیه و شیوه های تغذیه در آبزی پروری؛ انتشارات وودهد: ساوستون، انگلستان، 2015; صص 171-202. [CrossRef]

20. وانگ، ال. بله، ال. هوآ، ی. ژانگ، جی. لی، ی. ژانگ، جی. او، جی. لیو، ام. Shao, Q. اثرات dietarydl-methionyl-dl-methionine (Met-Met) بر عملکرد رشد، ترکیب بدن و پارامترهای خونی میگوی سفید (Litopenaeus vannamei) تغذیه شده با جیره های مبتنی بر پروتئین گیاهی. آکواک. Res. 2019، 50، 1718–1730. [CrossRef]

21. الدرینی، ش; داوود، MA; زید، AAA; ال تراس، WF; Paray، BA; ون دوان، اچ. محمد، RA اثرات هم افزایی Spirulina platensis و Bacillus amyloliquefaciens بر عملکرد رشد، هیستومورفولوژی روده و پاسخ ایمنی ماهی تیلاپیا نیل (Oreochromis niloticus). آکواک. Rep. 2020, 17, 100390. [CrossRef]

22. سان، ی. ژانگ، ی. لیو، ام. لی، جی. لای، دبلیو. گنگ، اس. یوان، تی. لیو، ی. دی، ی. ژانگ، دبلیو. و همکاران اثرات مکمل غذایی Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 بر عملکرد رشد، وضعیت آنتی اکسیدانی، ایمنی و فعالیت آنزیم های گوارشی جوجه های گوشتی تغذیه شده با جیره غذایی ذرت، گندم و سویا. مرغ. علمی 2022، 101، 101585. [CrossRef]

23. NRC (شورای تحقیقات ملی). مواد مغذی مورد نیاز ماهی و میگو؛ مطبوعات ملی آکادمیک: واشنگتن، دی سی، ایالات متحده آمریکا، 2011. [CrossRef]

24. گوا، ج. دیویس، آر. استارکی، سی. دیویس، DA کارایی مواد پوشش داده شده مختلف برای جلوگیری از شستشوی مواد مغذی برای جیره های تجاری میگوی سفید اقیانوس آرام Litopenaeus vannamei. جی ورلد آکواک. Soc. 2020، 52، 195-203. [CrossRef]

25. دفتر بین المللی اپیزوتیکس; کمیسیون استانداردهای بهداشت حیوانات آبزی. راهنمای آزمایشات تشخیصی برای حیوانات آبزی. دفتر بین المللی اپیزوتیس. 2022. در دسترس آنلاین: https://www.woah.org/en/what-we-do/standards/codes-andmanuals/aquatic-manual-online-access/ (در 1 سپتامبر 2022 قابل دسترسی است).

26. مارتینز-پورچاس، م. ازکوئرا-بروئر، م. مندوزا-کانو، اف. هیگورا، JEC؛ وارگاس آلبورس، اف. Martinez-Cordova، LR اثر مکمل‌سازی لخته زیستی هتروتروف و فوتواتوتروفیک، بر پاسخ تولید، شرایط فیزیولوژیکی و کیفیت پس از برداشت میگوی ساق سفید، Litopenaeus vannamei. آکواک. Rep. 2020, 16, 100257. [CrossRef]

27. پنیا رودریگز، آ. الیزوندو-گونزالس، آر. نیتو لوپز، ام جی; ریک ماری، دی. Cruz-Suárez, LE رژیم های غذایی عملی برای تولید پایدار میگوهای قهوه ای، Farfantepenaeus californiensis، نوجوانان در حضور جلبک سبز Ulva clathrata به عنوان غذای طبیعی. J. Appl. فیکول. 2017، 29، 413-421. [CrossRef]

28. پیری، وی. والتر-سورینو، دی. گولارت دی اولیویرا، ک. مانوئل-دو-اسپیریتو-سانتو، سی. ناسیمنتو-ویرا، اف. Quadros-Seiffert، W. کشت میگوی دریایی در سیستم فناوری بیوفلوک (BFT) تحت قلیائیت های مختلف آب. براز جی بیول. 2015، 75، 558-564. [CrossRef] [PubMed]

29. Gonzalez-Galaviz, JR; کاسیاس هرناندز، آر. فلورس پرز، MB; لارس-ویلا، اف. Bórquez-López، RA; اثر ژنوتیپ و منبع پروتئین بر عملکرد میگوی سفید اقیانوس آرام (Litopenaeus vannamei). ایتالیایی J. Anim. علمی 2020، 19، 289-294. [CrossRef]

30. بل، TA; Lightner, DV A Handbook of Normal Penaeid Shrimp Histology; سازمان غذا و کشاورزی سازمان ملل متحد: رم، ایتالیا، 1988.

31. کاسیاس هرناندز، آر. Arévalo-Sainz، KJ; گونزالس-گالاویز، جی آر. رودریگز-جارامیلو، MDC; Bórquez-López، RA; گیل نونیز، جی سی. Flores-Pérez, MB; لارس-ویلا، اف. Ibarra-Gámez، JC; Barrios، RMM اثرات غلظت بالای دی اکسید کربن بر عملکرد و بافت شناسی بافت میگو Litopenaeus vannamei. آکواک. Res. 2021، 52، 3991-3996. [CrossRef]

32. شیائو، ز. استورمز، آر. Tsang، A. روش کمی نشاسته-ید برای اندازه گیری فعالیت های آلفا آمیلاز و گلوکومیلاز. مقعدی بیوشیمی. 2006، 351، 146-148. [CrossRef]

33. برادفورد، MM روشی سریع و حساس برای اندازه گیری مقادیر میکروگرم پروتئین با استفاده از اصل اتصال پروتئین به رنگ. مقعدی بیوشیمی. 1976، 72، 248-254. [CrossRef]

34. Zhang, S.-P.; لی، J.-F. وو، X.-C. ژونگ، W.-J. Xian، J.-A. لیائو، اس.-آ. میائو، Y.-T. وانگ، A.-L. اثرات سطوح مختلف چربی جیره بر رشد، بقا و بیان ژن‌های مرتبط با ایمنی در میگوی سفید اقیانوس آرام، Litopenaeus vannamei. صدف ماهی. ایمونول. 2013، 34، 1131-1138. [CrossRef]

35. Anaya, LR; کاسیاس هرناندز، آر. Flores-Pérez, MB; لارس-ویلا، اف. Lares-Jiménez، LF; لونا-نوارز، پی. Gonzalez-Galaviz، JR اثر خط ژنتیکی، منبع پروتئین و سطح پروتئین بر رشد، بقا و بیان ژن مربوط به ایمنی Litopenaeus vannamei. جی ورلد آکواک. Soc. 2020، 51، 1161-1174. [CrossRef]

36. کاسیاس هرناندز، آر. Arévalo-Sainz، KJ; Flores-Pérez, MB; گارسیا کلارک، جی جی. رودریگز-آنایا، LZ; لارس-ویلا، اف. BórquezLópez، RA; گیل نونیز، جی سی. Gonzalez-Galaviz، JR پاسخ رونویسی ژن‌های مرتبط با ایمنی در Litopenaeus vannamei که در سیستم‌های آبزی پروری در حال گردش با CO2 بالا کشت شده‌اند. سوتین کشیش. د زوتک 2021، 50، 20200197. [CrossRef]

37. گوزمان-ویلانووا، LT; اسکوبدو-فرگوسو، سی. Barajas-Sandoval، DR; گومز-گیل، بی. پنیا رودریگز، آ. مارتینز-دیاز، SF; بالکازار، جی ال. Quiroz-Guzmán، E. ارزیابی پویایی میکروبی و بیان ژن آنزیم آنتی اکسیدانی به دنبال تجویز پروبیوتیک در میگوی سفید پرورشی اقیانوس آرام (Litopenaeus vannamei). Aquaculture 2020, 519, 734907. [CrossRef]

38. کالاهان، بی جی; مکمردی، پی جی. روزن، ام جی; هان، AW; جانسون، آجا. هولمز، SP DADA2: استنتاج نمونه با وضوح بالا از داده‌های آمپلیکون Illumina. نات Methods 2016, 13, 581-583. [CrossRef]

39. لاهتی، ل. پکیج Shetty، S. Microbiome R; انتشار (3.16); Bioconductor: بوستون، MA، ایالات متحده آمریکا، 2017. [CrossRef]

40. Langille، MGI; زانولد، ج. کاپوراسو، جی جی؛ مک دونالد، دی. شوالیه ها، دی. ریس، ج.ا. کلمنته، جی سی; Burkepile, DE; Vega Thurber، RL; نایت، آر. و همکاران پروفایل عملکردی پیشگویانه جوامع میکروبی با استفاده از توالی های ژن نشانگر rRNA 16S. نات بیوتکنول. 2013، 31، 814-821. [CrossRef]

41. Cornejo-Granados، F. لوپز-زاوالا، AA; گالاردو-بکرا، ال. مندوزا-وارگاس، آ. سانچز، اف. ویچیدو، آر. بریبا، ال جی؛ ویانا، MT; Sotelo-Mundo، RR; Ochoa-Leyva، A. میکروبیوم میگوی ساق سفید اقیانوس آرام ترکیب جامعه باکتریایی متفاوتی را بین شرایط شیوع وحشی، آبزی پروری و AHPND/EMS نشان می دهد. علمی Rep. 2017, 7, 1-15. [CrossRef]

42. فچنها، ف.ن. اولیویرا-نتو، آر. Figueiredo-Silva، C.; Nunes، AJ اثر تراکم جوراب میگو و سطوح درجه بندی شده متیونین جیره بر عملکرد رشد Litopenaeus vannamei پرورش یافته در یک سیستم آب سبز. آبزی پروری 2016، 463، 16-21. [CrossRef]

43. Nunes، AJP; صبری نتو، اچ. Masagounder, K. پروتئین خام در رژیم غذایی کم ماهی برای نوجوانان Litopenaeus vannamei را می توان از طریق یک مکمل متعادل از اسیدهای آمینه ضروری کاهش داد. جی ورلد آکواک. Soc. 2019، 50، 1093-1107. [CrossRef]

44. لاریو، اف. فالکو، اس. Sebastiá-Frasquet، M.-T.; اسکریو، جی. رودیلا، م. Poersch، LH نقش Bacillus amyloliquefaciens در Litopenaeus vannamei در طول بلوغ یک سیستم بیوفلوک. J. Mar. Sci. مهندس 2019، 7، 228. [CrossRef]

45. Llario، F. رومانو، لس آنجلس; رودیلا، م. سباستیا-فراسکه، MT; Poersch، LH کاربرد Bacillus amyloliquefaciens به عنوان پروبیوتیک برای Litopenaeus vannamei (بون، 1931) کشت شده در یک سیستم بیوفلوک. ایران. جی. فیش. علمی 2020، 19، 904–920.

46. ​​غریب ناصری، ک. دوریگام، JCDP; دورانعلی، ک. خراوی، س. Swick، RA; چوکت، م. وو، اس.-بی. تعدیل ژن های مربوط به یکپارچگی روده، آپوپتوز و ایمنی زمینه ساز اثرات سودمند Bacillus amyloliquefaciens CECT 5940 در جوجه های گوشتی تغذیه شده با جیره های غذایی با سطوح مختلف پروتئین در مدل چالشی آنتریت نکروزه است. J. Anim. علمی بیوتکنول. 2020، 11، 104. [CrossRef]

47. Ajogwu، TMC; Ekwealor، CC; Mbah، AN; Madukwe، EJ; Ekwealor، IA غربالگری گونه های باسیل تولید کننده متیونین از چاشنی های غذایی تخمیر شده نیجریه و اثرات برخی پارامترهای فرهنگی بر تجمع متیونین. صبح. J. Food Nutr. 2020، 9، 16–22. [CrossRef]

48. یو، م.-سی. لی، ز.-جی. لین، H.-Z. ون، جی.-ال. Ma, S. اثرات باسیل های رژیمی و گیاهان دارویی بر رشد، فعالیت آنزیم های گوارشی و پارامترهای بیوشیمیایی سرمی میگو Litopenaeus vannamei. آکواک. بین المللی 2008، 16، 471-480. [CrossRef]

49. یلماز، س. ارگون، س. یگیت، م. چلیک، ای. تأثیر ترکیب باسیلوس سوبتیلیس جیره و اسید ترانس سینامیک بر پاسخ های ایمنی ذاتی و مقاومت ماهی قزل آلای رنگین کمان، Oncorhynchus mykiss به Yersinia ruckeri. آکواک. Res. 2020، 51، 441-454. [CrossRef]

50. زارع، ر. کناری، ع.ا. ساداتی، تأثیر اسید استیک جیره، پروتئین (پروبیوتیک) و ترکیب آنها بر عملکرد رشد، میکروبیوتای روده، آنزیم های گوارشی، پارامترهای ایمنی و ترکیب اسیدهای چرب در ماهیان خاویاری سیبری (Acipenser baerii, Brandt, 1869). آکواک. بین المللی 2021، 29، 891-910. [CrossRef]

51. رودجان، پ. سویسووان، ک. Thongprajukaew، K. Theapparat، Y.; Khongthong، S. Jeenkeawpieam، J. Salaeharae, T. اثر اسیدهای آلی یا پروبیوتیک ها به تنهایی یا به صورت ترکیبی بر عملکرد رشد، قابلیت هضم مواد مغذی، فعالیت آنزیم ها، مورفولوژی روده و میکرو فلور روده در جوجه های گوشتی. J. Anim. فیزیول. انیمیشن. Nutr. 2018، 102، e931–e940. [CrossRef] [PubMed]

52. هونگ، ی. چو، جی. کربی، آر. شین، اس. Chien, A. اثرات جایگزینی پروتئین پودر ماهی با مخلوطی از کنجاله محصول جانبی طیور و کنجاله سویای تخمیر شده بر عملکرد رشد و ترکیب تغذیه ای بافت باس دریایی آسیایی (Lates calcarifer). آکواک. Res. 2021، 52، 4105-4115. [CrossRef]

53. بوری، ال. برگ، ک. چومکام، س. Jintasataporn، O. اثرات سطوح مختلف گنجاندن خوراک کنجاله کریل بر رشد و مورفولوژی هپاتوپانکراس Litopenaeus vannamei. آکواک. Res. 2020، 51، 4819–4823. [CrossRef]

54. موراشیتا، ک. ماتسوناری، ح. فوکادا، اچ. سوزوکی، ن. فورویتا، اچ. اوکو، اچ. رونستاد، آی. یوشیناگا، اچ. یاماموتو، T. اثر یک رژیم غذایی گیاهی با پودر ماهی کم بر فیزیولوژی گوارش در دم زرد Seriola quinqueradiata. آبزی پروری 2019، 506، 168-180. [CrossRef]

55. رحیم نژاد، س. یوان، ایکس. وانگ، ال. لو، ک. آهنگ، ک. ژانگ، سی. مکمل کیتولیگوساکارید در رژیم غذایی کم ماهی برای میگو سفید اقیانوس آرام (Litopenaeus vannamei): اثرات بر رشد، ایمنی ذاتی، بافت شناسی روده، و بیان ژن های مرتبط با ایمنی. صدف ماهی. ایمونول. 2018، 80، 405-415. [CrossRef]

56. پنیا رودریگز، آ. Pelletier-Morreeuw, Z.; گارسیا-لوژان، جی. رودریگز-جارامیلو، MDC; گوزمان-ویلانووا، ال. اسکوبدو رگوسو، سی. تووار رامیرز، دی. Reyes, AG ارزیابی عصاره خام محصول آگاو lechuguillaby به عنوان یک افزودنی خوراک برای میگوی جوان Litopenaeus vannamei. آکواک. Res. 2019، 51، 1336–1345. [CrossRef]

57. ری، GW; لیانگ، دی. یانگ، کیو. تان، بی. دونگ، ایکس. چی، اس. لیو، اچ. ژانگ، اس. Rimei, L. اثرات جایگزینی پودر ماهی با کنسانتره پروتئین سویا (SPC) بر رشد، شاخص‌های بیوشیمیایی سرم و عملکردهای آنتی‌اکسیدانی برای میگوی جوان Litopenaeus vannamei. Aquaculture 2020, 516, 734630. [CrossRef]

58. آمباسانکار، ک. Dayal، JS؛ واساگام، ک.ک. سیواراماکریشنان، ت. Sandeep، KP; پانی گراهی، ع. آناندا راجا، ر. بوری، ال. Vijayan، KK Growth، ترکیب اسیدهای چرب، بیان ژن مربوط به ایمنی، بافت شناسی و شاخص های هماتولوژی Penaeus vannamei با سطوح درجه بندی شده پودر کریل قطب جنوب در دو غلظت مختلف پودر ماهی تغذیه می شود. Aquaculture 2022, 553, 738069. [CrossRef]

59. نور، ز. نور، م. خان، س. یونس، دبلیو. اولیوا، دی. حسن، ز. یوسف زی، AM مکمل های غذایی متیونین عملکرد رشد، ایمنی ذاتی، آنزیم های گوارشی و فعالیت های آنتی اکسیدانی روهو (Labeo rohita) را بهبود می بخشد. فیزیول ماهی. بیوشیمی. 2021، 47، 451-464. [CrossRef]

60. یون، ح. شاهکار، ای. حمیدقلی، ع. لی، اس. برنده، اس. Bai, SC ارزیابی کنجاله سویا رژیمی به عنوان جایگزین کنجاله ماهی برای میگوی ساق سفید جوان، Litopenaeus vannamei پرورش یافته در سیستم بیوفلوک. بین المللی آکوات. Res. 2017، 9، 11-24. [CrossRef]

61. هو، ایکس. یانگ، اچ.-ال. یان، Y.-Y. ژانگ، سی.-ایکس. بله، J.-D. لو، ک.-ال. هو، L.-H. ژانگ، جی.-جی. روآن، ال. سان، Y.-Z. اثرات فروکتولیگوساکارید بر رشد، ایمنی و میکروبیوتای روده میگو (Litopenaeus vannamei) با رژیم غذایی تغذیه شده با پودر ماهی که تا حدی با کنجاله سویا جایگزین شده است. آکواک. Nutr. 2019، 25، 194–204. [CrossRef]

62. Mamauag، REP; گائو، جی. نگوین، بی تی؛ راگازا، ج.ا. کوشیو، اس. ایشیکاوا، م. Yokoyama، S. مکمل‌های dl-متیونین و متیونین دی‌پپتید در جیره‌ها برای رشد و رشد لاروها و ماهی‌های دریایی سرخ جوان، Pagrus major مؤثر هستند. جی ورلد آکواک. Soc. 2012، 43، 362-374. [CrossRef]

63. وو، پی. تانگ، ال. جیانگ، دبلیو. هو، ک. لیو، ی. جیانگ، جی. کوانگ، اس. تانگ، دبلیو. ژانگ، ی. ژو، ایکس. و همکاران رابطه بین متیونین جیره و رشد، هضم، جذب و وضعیت آنتی اکسیدانی در بافت روده و کبد پانکراس ماهی کپور علف زیر بالغ (Ctenopharyngodon idella). J. Anim. علمی بیوتکنول. 2017، 8، 1-14. [CrossRef]

64. Encarnação، P. افزودنی های خوراکی کاربردی در خوراک های آبزی پروری. در فرمولاسیون Aquafeed; مطبوعات دانشگاهی: کمبریج، MA، ایالات متحده آمریکا، 2016; صص 217-237. [CrossRef]

65. زی، اس. وی، دی. یین، پی. ژنگ، ال. گوا، تی. لیو، ی. تیان، ال. Niu, J. جایگزینی رژیم غذایی آرد ماهی با اختلال در سنتز پروتئین و پاسخ ایمنی میگوی سفید نوجوان اقیانوس آرام، Litopenaeus vannamei در شوری کم. Comp. بیوشیمی. فیزیول. قسمت B بیوشیمی. مول. Biol. 2018، 228، 26-33. [CrossRef]

66. آیکو، س. شن، جی. تان، B.-P. دونگ، X.-H.; لیو، اچ.-ای. اثرات کاهش پودر ماهی رژیمی با مکمل های مخمر بر رشد لیتوپنائوس وانامی، پاسخ ایمنی و مقاومت به بیماری در برابر ویبریو هاروی. میکروبیول. Res. 2020, 239, 126554. [CrossRef]