کالبد شکافی پاسخ آنتی بادی افراد واکسینه شده با گام-COVID-Vac نشان دهنده دخالت اپی توپ های خارج از RBD در خنثی سازی SARS-CoV{3}}

خلاصه: میلیون‌ها نفر با Gam-COVID-Vac واکسینه شده‌اند، اما ویژگی‌های ظریف آنتی‌بادی‌های القا شده به طور کامل مورد مطالعه قرار نگرفته است. پلاسما از 12 بیمار ساده و 10 مبتلا به بیماری کروناویروس 2019 (COVID-19) در حال نقاهت قبل و بعد از دو ایمن سازی با Gam-COVID-Vac گرفته شد. واکنش‌پذیری آنتی‌بادی در نمونه‌های پلاسما (n=44) ​​بر روی پانلی از پروتئین‌های سندرم تنفسی حاد شدید کروناویروس 2 (SARS-CoV-2) و 46 پپتید که روی سنبله را پوشانده‌اند تا شده و بازشده نوترکیب ریزآرایه مورد مطالعه قرار گرفت. پروتئین (S) و توسط ایمونوگلوبولین G (IgG) زیر کلاس ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA). توانایی آنتی بادی های القا شده توسط Gam-COVID-Vac برای مهار اتصال دامنه اتصال گیرنده (RBD) به گیرنده آنزیم مبدل آنژیوتانسین 2 (ACE2) در یک سنجش تعامل مولکولی (MIA) مورد بررسی قرار گرفت. ظرفیت خنثی‌سازی ویروس آنتی‌بادی‌ها توسط تست خنثی‌سازی ویروس شبه‌تایپ (pVNT) برای ووهان-هو-1 و Omicron مورد بررسی قرار گرفت. ما دریافتیم که واکسیناسیون Gam-COVID-Vac باعث افزایش قابل توجه IgG1 شد اما نه در سایر زیر کلاس های IgG در برابر S تا خورده، زیرواحد پروتئین سنبله 1 (S1)، زیرواحد پروتئین سنبله 2 (S2) و RBD به روشی قابل مقایسه در ساده و در حال نقاهت. فاعل، موضوع. خنثی‌سازی ویروس با آنتی‌بادی‌های ناشی از واکسیناسیون خاص برای RBD تاخورده و یک پپتید جدید (یعنی پپتید 12) ارتباط زیادی داشت. پپتید 12 نزدیک به RBD در قسمت N ترمینال S1 قرار داشت و ممکن است به طور بالقوه در انتقال ترکیب پروتئین اسپایک از قبل به بعد از همجوشی نقش داشته باشد. به طور خلاصه، واکسیناسیون Gam-COVID-Vac آنتی‌بادی‌های IgG1 اختصاصی S-را در افراد ساده و در حال نقاهت به روشی قابل مقایسه القا کرد. علاوه بر آنتی بادی های اختصاصی برای RBD، آنتی بادی های القا شده علیه پپتید نزدیک به انتهای N RBD نیز با خنثی سازی ویروس مرتبط بودند.

کلمات کلیدی: SARS-CoV-2; کووید-19؛ Gam-COVID-Vac; اپی توپ پادتن؛ خنثی سازی ویروس؛ سنجش برهمکنش مولکولی؛ Omicron

مزایای مکمل سیستانچ - افزایش ایمنی

برای مشاهده محصولات Cistanche Enhance Immunity اینجا را کلیک کنید

【بیشتر بخواهید】 ایمیل:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

1. معرفی

پس از اولین موارد ابتلا به سندرم حاد تنفسی شدید Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) در پایان سال 2019 در ووهان چین، بیماری کروناویروس جدید (COVID-19) به سرعت در سراسر جهان گسترش یافت. جهان و به یک بیماری همه گیر جهانی تبدیل شد [1-4]. توسعه سریع واکسن‌های کووید{7}} و معرفی برنامه‌های واکسیناسیون جهانی همراه با ظهور انواع کمتر بیماری‌زای SARS-CoV{9}} عوامل مهمی برای کاهش مرگ‌ومیرهای مرتبط با کووید هستند. و شدت همه گیری [1،5]. اولین واکسن‌هایی که در دسترس قرار گرفتند، واکسن‌های ژنتیکی مبتنی بر انتقال با واسطه آدنوویروس ژن کدکننده پروتئین سطحی SARS-CoV{15}} S [6-8] بودند. پروتئین SARS-CoV{19}} S شامل زیرواحد S1 حاوی دامنه اتصال گیرنده (RBD) متصل به گیرنده آن ACE2 در سلول های انسانی و زیرواحد S2 است که اتصال ویروس به غشای سلول میزبان را با شکاف پروتئولیتیک تضمین می کند. پپتید فیوژن (FP) در طول عفونت ویروسی [9]. ژن S که برای انتقال ژن در برخی از واکسن‌های مبتنی بر آدنوویروس استفاده می‌شود (مثلاً واکسن کووید{25}} واکسن جانسن) ممکن است برای تثبیت پروتئین و تأثیر بر برش آن اصلاح شود، اما این مورد برای بقیه صدق نمی‌کند [10]. سلول‌های انسانی که توسط آدنوویروس‌های حاوی ژن کدکننده S آلوده می‌شوند، مقدار متفاوتی از آنتی‌ژن S تولید می‌کنند که آزاد می‌شود و توسط کمپلکس اصلی سازگاری بافتی (MHC) کلاس II به سلول‌های T ارائه می‌شود که منجر به کمک سلول‌های T CD{28}} می‌شود. برای تولید آنتی بادی های اختصاصی S. پروتئین S بیان شده توسط سلول های ترانسفکت شده نیز توسط MHC کلاس I بر روی سطح سلول آلوده ارائه می شود و باعث فعال شدن سلول های T سیتوتوکسیک اختصاصی S می شود که می تواند سلول های تولید کننده آنتی ژن S را شناسایی کرده و آنها را از بین ببرد. اصل واکسیناسیون، یعنی وارد کردن اطلاعات ژنتیکی رمزکننده S به سلول‌های میزبان و تولید بعدی آنتی‌ژن S توسط سلول‌های آلوده، مشابه واکسن‌های پیام‌رسان ریبونوکلئیک اسید (mRNA) است، اگرچه فناوری انتقال ژن با آدنوویروس متفاوت است. واکسن های مبتنی بر بنابراین، «واکسن‌های ژنتیکی» تا حدی از عفونت طبیعی SARS-CoV{36} تقلید می‌کنند. شناسایی اپی توپ‌های شناسایی شده توسط آنتی‌بادی‌های افراد واکسینه شده درگیر در خنثی‌سازی ویروس نه تنها برای درک مکانیسم عملکرد واکسن‌های موجود، بلکه برای توسعه واکسیناسیون فعال تصفیه‌شده و استراتژی‌های ایمن‌سازی غیرفعال در برابر COVID بسیار مهم است [11] ، 12]. بیشتر واکسن‌های فعلی بر روی دستیابی به پاسخ آنتی‌بادی اختصاصی S با توجه ویژه به پاسخ آنتی‌بادی اختصاصی RBD متمرکز شده‌اند، زیرا دیده شده است که آنتی‌بادی‌های اختصاصی RBD با فعالیت خنثی‌کننده بالا در برابر SARS-CoV مرتبط هستند. 13-15]. با این حال، تعداد جهش‌های به‌دست‌آمده توسط هر نوع جدید نگرانی (VOC)، نشان‌دهنده اهمیت شناسایی اپی‌توپ‌های حفاظت‌شده در میان VOC‌های هدف‌گیری شده توسط آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده هستند که نه تنها در RBD، بلکه در خارج از RBD نیز قرار دارند [16]. در واقع، مطالعاتی وجود اپی توپ های خنثی کننده خارج از RBD را نشان می دهد که پس از ایمن سازی توسط آنتی بادی ها شناسایی می شوند [17-20]. در سال 2020 واکسن مبتنی بر ناقل Gam-COVID-Vac که Sputnik-V نیز نامیده می شود، برای استفاده در عمل بالینی در دسترس قرار گرفت و در حال حاضر برای استفاده در بیش از 70 کشور تایید شده است (https://sputnikvaccine.com/about-vaccine). / (دسترسی در 17 ژانویه 2023)). بر اساس منبع داده‌های ما در جهان (OWID)، 79 میلیون نفر در روسیه حداقل یک واکسن از این واکسن دریافت کردند و 72 میلیون نفر کاملاً واکسینه شده‌اند (https://ourworldindata.org/ covid-vaccinations?country{62}} RUS (دسترسی در 22 مارس 2022)). Gam-COVID-Vac از دو نوع واکسن تشکیل شده است که بر اساس دو ناقل آدنوویروس انسانی مختلف (hAd26 و hAd5) هستند که شکل اصلی پروتئین S سویه ووهان-هو-1 SARS-CoV را دارند. 73}}. Sputnik-V شامل دو تزریق است، یکی با hAd26 و دیگری با hAd5 و نور اسپوتنیک، تنها با hAd26. دو ناقل آدنوویروس مختلف برای ایمن سازی اول و دوم استفاده می شود تا احتمال ایجاد ایمنی در افراد واکسینه شده در برابر ایمنی پروتئین S در برابر آدنوویروس کاهش یابد. در واقع، آنتی‌بادی‌های اختصاصی آدنوویروس، با خنثی‌سازی وسیله نقلیه ناقل آدنوویروس، کارایی واکسیناسیون‌های تقویت‌کننده را محدود می‌کنند. بنابراین، در روز بیست و یکم پس از تجویز اولین دوز واکسن با rAd26، تحویل آنتی ژن مکرر با وکتور rAd5 انجام می شود [8،21]. تعداد کمی از مطالعات پاسخ‌های آنتی‌بادی اختصاصی S و RBD و فعالیت خنثی‌سازی ویروس در سرم‌های واکسن‌های Gam-COVID-Vac را به میزان قابل‌توجهی بررسی کرده‌اند [10،22،23]. افزایش آنتی بادی های IgG اختصاصی RBD سه ماه پس از تجویز Gam-COVID-Vac گزارش شده است و نشان داده شده است که آنتی بادی ها با انواع آلفا، بتا، دلتا و Omicron واکنش متقابل نشان می دهند [24-26]. Gam-COVID-Vac همچنین با چندین واکسن مجوزدار دیگر علیه SARS-CoV{100}} مقایسه شده است که خنثی‌سازی ویروس و اثربخشی بالایی را در برابر مرگ‌ومیر ناشی از کووید برای Sputnik-V نشان می‌دهد، اگرچه حقارت کمی دارد. به برخی از واکسن‌های mRNA مربوط به خنثی‌سازی ویروس پیدا شد [24]. در نهایت، نشان داده شده است که ایمن سازی بیماران مبتلا به گام-COVID-Vac با ویروس نقص ایمنی انسانی مثبت (HIV+) تحت درمان با درمان ضدرتروویروسی (تحت درمان با ART) اثر اپیدمیولوژیک در برابر نوع وحشی اصلی و نوع دلتای SARS-CoV نشان می‌دهد{{{ 113}} [27]. با این حال، تا کنون هیچ تجزیه و تحلیل دقیقی از تشخیص اپی توپ توسط آنتی بادی ها در افراد واکسینه شده Gam-COVID-Vac انجام نشده است و برای درک ایزوتیپ ایمونوگلوبولین و پاسخ های زیر کلاس IgG در افراد واکسینه شده Gam-COVID به داده هایی نیاز است. در اینجا ما دو گروه از افراد را بررسی کردیم که با Gam-COVID-Vac واکسینه شده بودند، یکی که قبلاً عفونت SARS-CoV{122}} داشت، و گروه دیگری از افراد ساده SARS-CoV{124}}. ما یک تجزیه و تحلیل دقیق از ویژگی اپی توپ آنتی‌بادی‌های القا شده با استفاده از پروتئین‌ها و پپتیدهای تاخورده و تاشده مشتق‌شده از SARS-CoV{127} و پپتیدهای ریز آرایه‌شده انجام دادیم که شامل پروتئین کامل S، از جمله RBD می‌شود. علاوه بر این، پاسخ های زیر کلاس IgG مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. مطالعه ما نشان می‌دهد که افراد واکسینه شده با Gam-COVID-Vac آنتی‌بادی‌های اختصاصی RBD را نصب می‌کنند که قادر به مسدود کردن تعامل RBD-ACE2 هستند. جالب توجه است، ما دریافتیم که خنثی‌سازی ویروس با آنتی‌بادی‌هایی که علیه یک پپتید خارج از RBD هدایت می‌شوند، مرتبط است، که ممکن است در انتقال ساختار قبل از ترکیب پروتئین اسپایک دخیل باشد.

cistanche tubulosa - بهبود سیستم ایمنی

2. نتایج

2.1. افراد گام-COVID-واکسینه شده شامل افراد ساده و در حال نقاهت کووید{5}}

افراد در حال نقاهت با توجه به شیوع و توالی داده های به دست آمده در زمان آلودگی در منطقه مسکو، توسط سویه ووهان-هو{1}} آلوده شدند. افراد ساده لوح هیچ علائمی از کووید-19 نداشتند و در زمان استخدام فاقد آنتی بادی‌های اختصاصی SARS-CoV{4}}بودند. افراد مورد مطالعه شامل 15 زن و 7 مرد با میانگین سنی 60 سال (یعنی 70-25 سال) بودند (جدول 1).

جدول 1. مشخصات دموگرافیک، بالینی و سرولوژیکی افراد.

یک نمونه پلاسما از هر یک از افراد در نقطه زمانی 0 (یعنی خط پایه) (شکل 1A) گرفته شد، سپس هر آزمودنی با Sputnik-V با فاصله تقریبی 21 روز بین اول و دوم واکسینه شد. تزریق (نقاط زمانی 1 و 2). در نقطه زمانی 3 یک نمونه پلاسما دوم برای تعیین پاسخ آنتی بادی ناشی از واکسن جمع آوری شد (شکل 1A). افراد به مدت 120 روز دیگر تحت نظر قرار گرفتند. در روز 110 پس از واکسیناسیون نهایی، یک آزمودنی (یعنی آزمودنی 22) مبتلا به کووید{12}} بود در حالی که بقیه هیچ علامتی از کووید-19 نداشتند (جدول 1).

شکل 1. طراحی مطالعه و پاسخ های آنتی بادی خاص SARS-CoV قبل و بعد از واکسیناسیون با اسپوتنیک-V. (الف) طراحی مطالعه. نمونه‌های پلاسما از افراد مبتلا به کووید{4} ساده (n=12) و در حال نقاهت (n=10) در نقطه زمانی 0 (خط پایه) گرفته شد، سپس افراد دو Sputnik-V دریافت کردند. واکسیناسیون در نقاط زمانی 1 و 2 به ترتیب و یک نمونه پلاسما در نقطه زمانی 3 (یعنی روز 8{21}}-85 پس از اولین واکسیناسیون) به دست آمد. (ب) سطوح آنتی بادی IgG اختصاصی نوکلئوکپسید (محور y: ISU) در افراد ساده و در حال نقاهت (محور x) در ابتدا. خط افقی نقطه برش مثبت را نشان می دهد. (C) سطوح آنتی بادی IgG (محورهای Y: ISU) مخصوص RBD، S، S1، و S2 در افراد در نقطه زمانی 0 و 3 (محورهای x). (D) از چپ به راست سطوح آنتی بادی IgG1، IgG2، IgG3، و IgG4 (محورهای y: مقادیر OD چگالی نوری) تا S (قسمت بالایی) و RBD (قسمت پایین) در نقاط زمانی 0 و 3 ( محورهای x). تفاوت معنی‌داری بین گروه‌ها که با آزمون Wilcoxon تعیین شد نشان داده شده است: ** p < 0.

2.2. واکسیناسیون Gam-COVID-Vac پاسخ های گسترده IgG را به S از جمله S1، RBD، و S2 القا می کند.

مزایای مکمل سیستانچ - افزایش ایمنی

ما تجزیه و تحلیل دقیقی از پاسخ‌های آنتی‌بادی نسبت به پانل بزرگی از پروتئین‌ها و پپتیدهای SARS-CoV تا شده و بازشده با ریزآرایه انجام دادیم که پروتئین S را در نمونه‌های پلاسما از SARS-CoV-2-آزمودنی‌های ساده و در حال نقاهت پوشانده بودند. پس از یک دوره کامل ایمن سازی با Gam-COVID-Vac (شکل 1A,B؛ جدول 1). هنگام مقایسه نمونه‌های پلاسما از نقطه زمانی 0 و نقطه زمانی 3 پس از واکسیناسیون، القای قابل‌توجهی از پاسخ‌های IgG در برابر RBD، S، S1 و S2 تا شده اما باز نشده یافت شد (شکل 1C). سه ماه پس از واکسیناسیون، آزمودنی‌ها افزایش 21- برابری آنتی‌بادی‌های IgG اختصاصی RBD را نشان دادند (p < 0.{{20}}001) و {0 18}}افزایش برابری آنتی‌بادی‌های IgG اختصاصی S (به ترتیب نقطه زمانی 0: میانه 0.291، نقطه زمانی 3: میانه 5.778) (0001/0p<). آنتی بادی های IgG به S1 3.{30}} برابر (p=0.0023) و آنتی بادی های IgG نسبت به S2 2.{35}} برابر (p=0.0094) افزایش یافت (شکل 1C) ). واکسیناسیون با Gam-COVID-Vac عمدتاً پاسخ‌های IgG به S، S1، و RBD چین خورده را در افراد ساده و در حال نقاهت القا کرد (شکل‌های 1C، S2 و S3)، که نشان می‌دهد می‌توان از آن برای تقویت SARS-CoV استفاده کرد{46} پاسخ آنتی بادی خاص نیز در افراد در حال نقاهت. افزایش قابل توجهی از آنتی بادی های IgG به RBD، S و S1 در افراد ساده و در حال نقاهت مشاهده شد (شکل S2) و تفاوت معنی داری در مورد سطوح IgG نسبت به RBD، S، S1، و S2 در افراد ساده و در حال نقاهت در زمان 3 وجود نداشت. (شکل S3).

2.3. واکسیناسیون Gam-COVID-Vac عمدتاً پاسخ زیر کلاس IgG1 به S و RBD را القا می کند.

گزارش شده است که ایمونوتراپی اختصاصی آلرژن (AIT) عمدتاً پاسخ‌های IgG1 و IgG4 مخصوص آلرژن را القا می‌کند که نه تنها از نظر عملکردهای مؤثرشان متفاوت است (IgG1 می‌تواند واسطه سمیت سلولی وابسته به آنتی‌بادی (ADCC) و فعال‌سازی مکمل باشد در حالی که IgG4 اینها را ندارد. عملکردهای مؤثر) بلکه در مورد سینتیک آنها (IgG1: شروع سریع و کاهش زودرس: IgG4: شروع آهسته اما سطوح پایدار) [28-30]. بنابراین ما پاسخ های زیر کلاس IgG (یعنی IgG1-IgG4) به S و RBD را در افراد واکسینه شده با Sputnik-V بررسی کردیم. شکل 1D نشان می دهد که واکسیناسیون تقریباً به طور انحصاری پاسخ زیر کلاس IgG1 به S و RBD را القا می کند. افزایش قابل توجهی در سطوح IgG1 خاص برای S و RBD (به ترتیب 0.0002.0=0 و 0071.0=0) پس از واکسیناسیون یافت شد. با این حال، هیچ پاسخ مربوط به زیر کلاس IgG2، IgG3، یا IgG4 خاص برای S و RBD قابل تشخیص نیست (شکل 1D).

2.4. القای آنتی بادی های خنثی کننده ویروس و آنتی بادی های مهار کننده تعامل RBD-ACE2 با واکسیناسیون Gam-COVID-Vac

برای تشخیص آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده ویروس، ما از یک آزمایش pVNT استفاده کردیم، که در آن ذرات شبیه ویروس با پروتئین S از سویه اصلی Wuhan-Hu{3}} و VOC Omicron که اخیراً توصیف شده است، شبه‌تایپ شدند. آنتی‌بادی‌هایی با فعالیت خنثی‌کننده برای سویه ووهان هو{4}} در همه افراد به جز یک مورد (یعنی موضوع 22) از 22 نفر (شکل 2A، جدول 2) یافت شد، در حالی که تیتر آنتی‌بادی خنثی‌کننده برای Omicron به‌طور معنی‌داری کمتر بود (شکل 2B) و تنها در 17 مورد از 20 مورد یافت شد (شکل 2A، جدول 2). هیچ خنثی سازی مرتبطی برای افراد 6، 7، 10، 11، 15 یافت نشد (شکل 2A، جدول 2). تیترهای خنثی سازی ویروس برای Omicron 25 برابر کمتر از WT بود (متوسط ​​141.9 و 5.7 برای Wuhan-Hu-1 و Omicron، به ترتیب) (شکل 2B).

شکل 2. فعالیت خنثی کننده ویروس در پلاسما 3 ماه پس از واکسیناسیون Sputnik-V و ارتباط با پاسخ آنتی بادی IgG به پپتیدهای مشتق شده از RBD و S. (الف) خنثی سازی ویروس (ID50) (محور y) در برابر سویه Wuhan-hu-1 (سبز) و Omicron (نارنجی) با پلاسما از ساده (آبی) و نقاهت (قرمز) بدست آمد. موضوعات (محورهای x). (ب) مقایسه خنثی‌سازی ویروس (محور y: ID5{26}} به‌دست‌آمده برای پلاسما از افراد مورد آزمایش، میله‌ها نشان‌دهنده میانه‌ها با محدوده بین چارکی (IQR) ووهان هو-1 (سبز) و Omicron (نارنجی) هستند. خط افقی نشان‌دهنده نتایج به‌دست‌آمده با پلاسما از یک فرد کنترل سالم و غیر آلوده (کنترل سالم، HC) است. {{3{32}}}}001. (C) محلی سازی RBD و پپتیدهای مرتبط با خنثی سازی ویروس در طرحی از S (S1, S2). (D) ارتباط بین تیترهای خنثی سازی ویروس برای ووهان-هو{19 }} (WT) یا Omicron (محورهای Y) و سطوح IgG خاص برای RBD و پپتیدهای مشتق شده از سنبله 12، 32، و 46A (محورهای x: ISU). نمادهای آبی و قرمز به ترتیب نشان دهنده افراد ساده و در حال نقاهت هستند. ستاره ها با توجه به آزمون اسپیرمن ناپارامتریک همبستگی معنی‌دار را نشان می‌دهد، * p <0.05، ** p <0.01، *** p <0.001 **** p <0.0001، ns=معنی‌دار نیست.

جدول 2. مقایسه سطوح IgG خاص برای S، S1، S2، و RBD اندازه گیری شده توسط ریزآرایه با مهار اتصال RBD به ACE2 و تیترهای خنثی سازی ویروس (ووهان-هو-1، Omicron) تعیین شده برای پلاسما از موضوعات مورد بررسی نقشه برداری حرارتی برای هر پارامتر به طور جداگانه با استفاده از Excel انجام شد. بالاترین سطح قرمز تیره و کمترین سطح سفید در نظر گرفته شد.

این واقعیت که در همه افراد به جز یک مورد (یعنی موضوع 22) آنتی بادی های خنثی کننده ویروس پس از واکسیناسیون افزایش یافت نشان می دهد که آنها توسط واکسیناسیون القا شده اند (جدول 2). آزمودنی 21 قبلاً انسداد بالایی از تعامل RBD-ACE2 در MIA و خنثی سازی ویروس بالا در ابتدا نشان داد (جدول 2). به طور قابل‌توجه، نمونه‌های پلاسما از افراد در حال نقاهت واکسینه شده با Gam-COVID-Vac که بیماری متوسط ​​داشتند (#1، 2، 17، 18، 21) عیار خنثی‌سازی ویروس بالاتری نسبت به افراد در حال نقاهت داشتند که بیماری خفیف (#22) داشتند یا هیچ علامتی نداشتند. (#4، 5، 7، 9) (جدول 1 و 2). با این حال، یک یافته کلیدی این بود که مهار اتصال RBD به ACE2 و خنثی سازی ویروس همیشه مرتبط نبودند. بیش از 25٪ مهار اتصال RBD ووهان هو به ACE2 فقط برای 6 نفر که در آزمایش خنثی سازی ویروس به دلیل واکسیناسیون نیز مهار شده بودند (یعنی افراد 1، 2، 3، 17، 18) رخ داد. ، و 19) (جدول 2). جالب توجه است که فعالیت خنثی کننده ویروس (50٪ دوز عفونی (ID50) > 100) برای 6 نفر مشاهده شد، اگرچه آنها هیچ یا مهار ضعیفی از اتصال RBD به ACE2 نشان دادند (جدول 2: افراد 6، 10، 12، 13، 16، 20). .

2.5. خنثی سازی ویروس در افراد واکسینه شده با گام-COVID با پاسخ های IgG به RBD و پپتید 12 مشتق شده از S ارتباط قوی دارد.

همانطور که قبلاً اشاره شد، پلاسمای چندین فرد واکسینه شده با Gam-COVID-Vac (به عنوان مثال، در افراد 6، 10، 12، 13، 16، 20؛ جدول 2) فعالیت خنثی کننده ویروس را نشان داد اما تعامل RBD-ACE2 را مهار نکرد. بنابراین ما واکنش‌پذیری آنتی‌بادی IgG را به پپتیدهای پوشاننده پروتئین S با تجزیه و تحلیل تراشه مبتنی بر ریز آرایه [13] (شکل S4 و شکل 2C) تجزیه و تحلیل کردیم و پاسخ‌های IgG خاص پپتید را با خنثی‌سازی ویروس در ووهان-هو مرتبط کردیم{19} } سویه و Omicron (شکل 2D). پاسخ‌های IgG به سه پپتید (یعنی پپتیدهای 12، 32، 46A) مانند پاسخ‌های IgG به RBD چین‌خورده به طور قابل‌توجهی با خنثی‌سازی سویه ووهان-هو{25}} همبستگی دارد (شکل 2C، D). پپتید 12 برجسته بود زیرا پاسخ آنتی بادی به پپتید 12 باز شده (شکل S1)، اما نه به پپتیدهای بازشده 32 و 46A به طور قابل توجهی توسط Gam-COVID Vac در افراد ساده لوح تقویت شد (شکل 3A) و همچنین به طور قابل توجهی با خنثی سازی Omicron (شکل 2D) مرتبط بود. ). هیچ افزایش قابل توجهی برای افراد در حال نقاهت به پپتیدهای 12، 32، یا 46A مشاهده نشد (شکل 3A). توالی پپتید 12 در بین سویه‌های SARS-CoV{41} بسیار حفظ شده است (شکل 4) و در S1 نزدیک به انتهای N RBD قرار دارد و از این رو منطقه‌ای را نشان می‌دهد که ممکن است برای انتقال پیش از بیماری مرتبط باشد. به ساختار پس از همجوشی پروتئین S (شکل 3B).

شکل 3. سطح آنتی بادی IgG میانه (محورهای Y: ISU) به پپتیدهای مشتق از S (P12، P32، P46A) در افراد ساده و در حال نقاهت واکسینه شده در نقاط زمانی 0 و 3 (x-ax) (A) . تفاوت معنی‌دار بین گروه‌ها که با آزمون Wilcoxon تعیین شد نشان داده شده است: * p < 0.05، ns=معنی‌دار نیست. (F) (B) شکل 3. میانه سطح آنتی بادی IgG (محورهای Y: ISU) به پپتیدهای مشتق شده از S (P12، P32، P46A) در افراد ساده و در حال نقاهت واکسینه شده در نقاط زمانی 0} و 3 (x) -محور) (الف). تفاوت معنی داری بین گروه ها که با آزمون Wilcoxon تعیین شد نشان داده شده است: * p <0.05، ns=معنی دار نیست. (ب) تجسم پپتیدهای 12، 32، و 46A در نمایش سطحی SARS-CoV{28}} تریمر پروتئین اسپایک (نمای جانبی، ترکیب پیش از همجوشی) تولید شده با PyMOL. پپتید 12 در مدل S-trimer با رنگ قرمز، پپتید 32 با رنگ آبی و 46A با رنگ نارنجی مشخص شده است. کربوهیدرات ها به رنگ خاکستری روشن نشان داده شده اند.

شکل 4. هم ترازی توالی پروتئین Wuhan-Hu-1 (بالا) و Omicron (زیر) از SARS-CoV-2 پروتئین S. RBD به رنگ زرد روشن است و پپتیدهای 12، 22، 25، 32، 33، 46A و 47 زیر آنها خط کشیده شده است. توالی پروتئین S ووهان مربوط به ایزوله WA1 است (GeneBank Accession Nr.: BCN86353.1). https://www.gisaid.org/ (دسترسی در 15 مارس 2022)). جایگزین‌های آمینواسید بر اساس ویژگی‌های آبگریز و بار آن‌ها کد رنگی می‌شوند (صورتی=آبگریز، سبز=خنثی، آبی روشن=هیدروفیل پایه، و قرمز روشن=اسیدی آب دوست).

3. بحث

واکسن مبتنی بر ناقل Gam-COVID-Vac که Sputnik-V نیز نامیده می‌شود، یکی از اولین واکسن‌های SARS-CoV-2 بود که برای استفاده در عمل بالینی در دسترس قرار گرفت. با این حال، اطلاعات نسبتا کمی در مورد ویژگی‌های دقیق پاسخ‌های آنتی‌بادی در افرادی که با کووید واکسینه شده‌اند در دسترس است. در این مطالعه، ما یک تجزیه و تحلیل دقیق از پاسخ‌های آنتی‌بادی نسبت به پروتئین‌ها و پپتیدهای SARS-CoV تاشده و بازشده با ریزآرایه انجام دادیم که پروتئین S را در نمونه‌های پلاسما از SARS CoV{11}}آزمودنی‌های ساده و در حال نقاهت بعد از یک دوره کامل ایمن سازی با Gam COVID-Vac. Gam-COVID-Vac عمدتاً IgG1 را القا کرد، اما هیچ پاسخ زیر کلاس IgG دیگری به S، S1، S2، و RBD تاخورده را به روشی قابل مقایسه در افراد ساده و در حال نقاهت القا کرد، که نشان می دهد می توان از آن برای تقویت SARS-CoV استفاده کرد{19}} پاسخ آنتی بادی خاص نیز در افراد در حال نقاهت. مانند سایر واکسن‌های ژنتیکی، پاسخ آنتی‌بادی ناشی از Gam-COVID-Vac عمدتاً در زیر کلاس IgG1 قرار داشت که نیمه‌عمر کوتاه‌تری در مقایسه با پاسخ زیر کلاس IgG4 که پایدارتر است، دارد. به عنوان مثال، پاسخ‌های خاص زیر کلاس IgG4 با محافظت طولانی‌مدت در طول ایمونوتراپی مخصوص آلرژن همراه است در حالی که پاسخ‌های خاص IgG1 به سرعت ایجاد می‌شوند اما پس از چند ماه محو می‌شوند [28-30]. بر این اساس، تزریق‌های تقویت‌کننده مکرر Gam-COVID-Vac و سایر واکسن‌های ژنتیکی برای حفظ پاسخ‌های آنتی‌بادی خنثی‌کننده در سطح بالا مورد نیاز است. واکسیناسیون با Gam-COVID-Vac باعث ایجاد پاسخ آنتی بادی می شود که تا حد زیادی شبیه آن چیزی است که پس از عفونت طبیعی با SARS-CoV یافت می شود{37}} [13]. علاوه بر این، پاسخ های آنتی بادی پس از عفونت طبیعی عمدتاً به زیر کلاس IgG1 تعلق دارد و علیه S، S1، S2، و RBD چین خورده است [13]. یافته جدید و جالب مطالعه ما این بود که پلاسمای چندین فرد واکسینه شده با Gam-COVID-Vac (به عنوان مثال، در افراد 6، 10، 12، 13، 16، 20؛ جدول 2) فعالیت خنثی کننده ویروس را نشان داد، اما مانع از آن نشد. تعامل RBD-ACE2. بنابراین، ما واکنش‌پذیری آنتی‌بادی IgG را به پپتیدهای پوشاننده پروتئین S کامل با تجزیه و تحلیل تراشه‌های مبتنی بر ریز آرایه [13] (شکل‌های 2D و S4) تجزیه و تحلیل کردیم و پاسخ‌های IgG ویژه پپتید را با خنثی‌سازی ویروس Wuhan-Hu مرتبط کردیم{62} } سویه و Omicron BA.1 (شکل 2D). پاسخ‌های IgG به سه پپتید (یعنی پپتیدهای 12، 32، 46A) مانند پاسخ‌های IgG به RBD به طور قابل‌توجهی با خنثی‌سازی سویه ووهان-هو{69}} ارتباط دارد (شکل 2C، D). با این حال، پپتید 12 منحصر به فرد بود زیرا پاسخ آنتی بادی فقط به پپتید 12، اما نه به پپتیدهای 32 و 46A به طور قابل توجهی با واکسیناسیون تقویت شد (شکل 3A) و همچنین به طور قابل توجهی با خنثی سازی Omicron (شکل 2D) همبستگی داشت. میزان افزایش پاسخ های IgG به پپتید 12 ناشی از واکسن در افراد ساده لوح کم اما قابل توجه بود و کاملاً با تقویت آنتی بادی های IgG هدایت شده به S و S1 قابل مقایسه بود. با این حال، آنتی‌بادی‌های IgG علیه پپتید تا شده جدا شده (شکل S1) ممکن است تنها بخشی از آنتی‌بادی‌هایی را نشان دهند که علیه پپتید 12 در پروتئین تا شده است. علاوه بر این، نه تنها سطح، بلکه میزان علاقه آنتی بادی ها نیز مهم است. توالی پپتیدهای 12 در میان سویه ووهان-هو{84}} و BA.1 Omicron VOC (شکل 4) بسیار حفظ شده است و از ناحیه ای مشتق شده است که ممکن است برای انتقال پیش به پس همجوشی مرتبط باشد. ترکیب پروتئین S (شکل 3B). علاوه بر این، مقایسه انواع جهش یافته جدید Omicron (BA.1، BA.2، BA.4/5، BA.2.12.1، BA.2.75، BQ.1)، نشان می دهد که پپتید 12 (284-313 aa. ) بر خلاف پپتید 32 (https://covariants.org/shared-mutations، (در 28 نوامبر 2022) از نظر توالی اسید آمینه بدون تغییر باقی می ماند. به طور قابل‌توجهی، آنتی‌بادی‌های مونوکلونال با قابلیت خنثی‌سازی ویروس که ناحیه N-terminal domain (NTD) را که پپتید 12 بخشی از آن است، مورد هدف قرار می‌دهند [31] توصیف شده‌اند، و گزارش شده است که سایر واکسن‌ها نیز می‌توانند پاسخ آنتی‌بادی علیه این ناحیه را القا کنند. [18-20،32]، نشان می دهد که منطقه تعریف شده توسط پپتید 12 ممکن است برای القای آنتی بادی های خنثی کننده مهم باشد. بنابراین می توان فرض کرد که آنتی بادی های القا شده توسط واکسیناسیون Gam-COVID-Vac می توانند SARS-CoV{117}} را با دو مکانیسم خنثی کنند، یکی صرفاً با مهار تعامل RBD-ACE2 و دیگری با هدف قرار دادن ناحیه حاوی پپتید 12 S-. پروتئینی که ممکن است در تغییرات ساختاری (یعنی انتقال پیش فیوژن به ترکیب همجوشی S) دخیل باشد. مطالعه ما محدودیت هایی دارد. به عنوان مثال، ما از یک سنجش خنثی سازی مبتنی بر لنتی ویروس های شبه تایپ استفاده کردیم، اما این سنجش ها به طور گسترده مورد استفاده و قابل اعتماد هستند [33]. همچنین این یک محدودیت در مطالعه ما است که پپتیدهای موجود در ریزآرایه ما باز شده اند و بنابراین ممکن است تنها کسری از آنتی بادی های خنثی کننده را شناسایی کرده باشند که پپتیدهای تا شده را تشخیص می دهند در حالی که بخش بزرگتری از آنتی بادی ها ممکن است به اپی توپ های ساختاری در شناسایی شده متصل شده باشند. منطقه علاوه بر این، این یک محدودیت مطالعه ما است که ما فقط تعداد کمی از موضوعات را تجزیه و تحلیل کردیم. با این حال، مطالعه ما به وضوح نشان می‌دهد که آنتی‌بادی‌هایی با ویژگی اپی‌توپ متفاوت ممکن است در اثر محافظتی واکسیناسیون گام کووید-واکس نقش داشته باشند. علاوه بر این، این مطالعه پاسخی به یک پپتید بالقوه حفاظت شده را نشان می دهد که می تواند برای ایجاد آنتی بادی های خنثی کننده گسترده استفاده شود.

مزایای مکمل سیستانچ-چگونه سیستم ایمنی بدن را تقویت کنیم

4. مواد و روش ها

4.1. جمعیت مطالعه و بیانیه اخلاق

افراد سالم با (n {0}}) یا بدون (n=12) عفونت قبلی SARS-CoV-2 در این مطالعه در دسامبر 2020 در موسسه مرکز تحقیقات ملی ثبت نام کردند. ایمونولوژی آژانس بیولوژیکی پزشکی فدرال روسیه (شماره اخلاق: #12-1، 29 دسامبر 2020). همه شرکت کنندگان رضایت آگاهانه کتبی ارائه کردند. عفونت قبلی SARS-CoV{9}} یا با آزمایش PCR مثبت قبلی و علائم COVID{10}} یا با حضور آنتی‌بادی‌های اختصاصی SARS-CoV{12}به سمت آنتی‌ژن نوکلئوکپسید و/یا تأیید شد. آنتی ژن RBD و/یا S همانطور که توضیح داده شد [13]. همه آزمودنی ها با دو دوز اسپوتنیک-وی (Gam-COVID-Vac، Biocard، مسکو، روسیه) به فاصله سه هفته به صورت عضلانی واکسینه شدند. نمونه خون یک روز قبل از اولین واکسیناسیون (T0، شکل 1A) و 80 تا 85 روز پس از اولین واکسیناسیون (T3، شکل 1A) گرفته شد.

4.2. تشخیص SARS-CoV{3}}پاسخ‌های خاص آنتی‌بادی

پاسخ ایمونوگلوبولین افراد ساده و مبتلا به کووید{{0}} در نمونه های پلاسما قبل و بعد از ایمن سازی با Sputnik-V مورد ارزیابی قرار گرفت (شکل 1A). IgG اختصاصی به پانل جامعی از پروتئین‌های SARS-CoV-2 و 46 پپتید (25-30 مر) که پروتئین S را در بر می‌گیرد، در نمونه‌های پلاسمای رقیق‌شده 1:50 با فناوری تراشه ریزآرایه اندازه‌گیری شد. شرح داده شد [13]. توالی اسیدهای آمینه، تعداد اسیدهای آمینه و وزن مولکولی برای همه پپتیدهای مصنوعی روی تراشه ریز آرایه شده در جدول 3 ارائه شده است. و در Human Embryonic Kidney 293 (HEK293) سلول های (تا خورده) طیف دو رنگی دایره ای (CD) ارائه شده است (شکل S1). پپتیدهای 12 و 32 هیچ ساختار ثانویه خاصی را همانطور که در شکل S1 نشان داده شده توسط دو رنگی دایره ای (CD) تعیین شده نشان ندادند. به طور مفصل، اسلایدهای شیشه ای حاوی ریزآرایه های احاطه شده توسط یک قاب اپوکسی (Paul Marienfeld GmbH & Co. KG, Lauda-Königshofen, Germany) با یک پلیمر آلی کمپلکس واکنش پذیر آمین، MCP{23}} (Lucidant Polymers, Sunnyvale, CA) فعال شدند. ، ایالات متحده) به منظور تسهیل اتصال پروتئین ها و پپتیدها. آنتی ژن/پپتیدهای SARS-CoV{25}} با استفاده از غلظت 0.5-1 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر در (75 میلی‌مولار Na2HPO4، pH=8.4) در سه تکرار با استفاده از SciFlexArrayer S12 (Scienion AG، برلین، آلمان) [13]. بیان و خالص سازی پروتئین ها و سنتز پپتید در [13] توضیح داده شده است. واکنش‌پذیری آنتی‌بادی IgG به آنتی‌ژن‌های ریز آرایه‌شده با شستن ریزآرایه‌ها به مدت 5 دقیقه با سالین بافر فسفات با 0.5% Tween 20 (PBST) و خشک کردن آن‌ها با سانتریفیوژ با استفاده از سانتریفیوژ Sigma 2-7 و MTP اندازه‌گیری شد{45} روتور (هر دو Sigma Laborzentrifugen GmbH، Osterode am Harz، آلمان). سپس مقادیر 35 میکرولیتری از نمونه های پلاسمای رقیق شده 1:50 (رقیق کننده نمونه، Thermofisher، Waltham، MA، USA) اضافه شد و به مدت 2 ساعت در دمای 22 درجه سانتیگراد انکوبه شد. پس از یک مرحله شستشوی دیگر، 30 میکرولیتر آنتی بادی ثانویه (DyLight 550 (Pierce, Rockford, IL, USA) با برچسب ضد انسانی IgG (Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove, PA, USA)) اعمال شد و به مدت 30 دقیقه در دمای 22 درجه انکوبه شد. C RT. سپس تراشه ها شسته، خشک شدند و سپس با استفاده از اسکنر لیزری کانفوکال (Tecan، Männedorf، سوئیس) اسکن شدند. تجزیه و تحلیل تصویر توسط نرم افزار جمع آوری و تجزیه و تحلیل تصویر ریزآرایه MAPIX (Innopsys، Carbonne، فرانسه) انجام شد و تبدیل واحدهای فلورسانس اندازه گیری شده به واحدهای استاندارد ISAC (ISU) همانطور که توضیح داده شد انجام شد [13]. سطوح آنتی بادی خاص در واحدهای استاندارد ISAC (ISU) بیان می شود. پاسخ آنتی‌بادی IgG1-4 اختصاصی S و RBD در نمونه‌های پلاسما (رقیق‌شده 1:50) در دو تکرار با روش ELISA اندازه‌گیری شد، همانطور که قبلاً توضیح داده شد [13] با تغییراتی از<5% for their average values.

جدول 3. پپتیدهای مشتق شده از پروتئین SARS-CoV مصنوعی §.

4.3. طیف دو رنگی دایره ای دور UV (CD).

برای پپتیدها، P12 و P32 و همچنین RBD بیان شده در سلول های E. coli و HEK293 تجزیه و تحلیل CD با استفاده از طیف قطبی متر Jasco J{3} (Japan Spectroscopic Co.، توکیو، ژاپن) که قبلاً توضیح داده شد [34] انجام شد. طیف CD از پپتیدها و پروتئین ها (شکل S1) در غلظت 1.1 میلی‌مولار 0 میلی‌گرم در میلی‌لیتر در 10 میلی‌مولار NaH2PO4 (pH 8.0) اندازه‌گیری شد که برای شناسایی آنتی‌ژن‌ها استفاده شد.

4.4. سنجش خنثی سازی ویروس مبتنی بر شبه ویروس (PVT)

فعالیت خنثی سازی ویروس در نمونه های پلاسما با روش خنثی سازی ویروس مبتنی بر شبه ویروس همانطور که قبلاً توضیح داده شد تعیین شد [35]. برای تولید ذرات شبه ویروسی SARS-CoV{5} (VLPs)، سلول‌های HEK293T با 3 پلاسمید: پلاسمید بسته‌بندی لنتی ویروسی pCMV∆8.2R (Addgene، Teddington، UK)، pUCHR-GFP و پلاسمید pCAGGS-S∆19 کد کننده پروتئین اسپایک نوع وحشی SARS-CoV (یکسان با جدایه‌های مرجع Wuhan-Hu-1 و WA1) یا پلاسمید pCAGGS-S∆19-Om رمزگذاری SARS-CoV{24}} پروتئین اسپایک Omicron (هدیه ای از آندری گورچاکوف، آزمایشگاه ایمونوژنتیک، موسسه زیست شناسی مولکولی و سلولی، شعبه سیبری آکادمی علوم روسیه، نووسیبیرسک، روسیه). قبل از استفاده در pVNT، VLP ها با رقت محدود تیتر شدند و به مدت 4 روز با سلول های HEK293T ترانسفکت شده hACE انکوبه شدند. دوزی از ذرات ویروسی که 50% پروتئین فلورسنت سبز (GFP) را سلول‌های مثبت می‌دهد برای استفاده در آزمایش انتخاب شد. برای pVNT، تمام نمونه‌های پلاسما قبل از استفاده به مدت 30 دقیقه در دمای 56 درجه سانتیگراد غیرفعال شدند. در روز چهارم، سلول‌های پس از عفونت مجدداً معلق شدند و درصد سلول‌های GFP مثبت با فلوسایتومتری اندازه‌گیری شد. مقادیر ID50 با استفاده از یک منحنی سیگموئیدی (نرم‌افزار GraphPad Prism 9.2.0، Sigmoidal، 4PL)، که با درصد خنثی‌سازی در غلظت‌های مختلف پلاسمایی نشان‌داده‌شده بازسازی شد، محاسبه شد.

4.5. سنجش برهمکنش مولکولی (MIA)

برای شناسایی ظرفیت نمونه‌های پلاسمای کووید{{{0}} افراد در حال نقاهت یا ساده‌حال (جدول 1)، قبل و بعد از ایمن‌سازی اسپوتنیک-V، برای مهار اتصال 50 نانوگرم در میلی‌لیتر RBD-hu{5}} به گیرنده ACE2 یک سنجش تعامل مولکولی (MIA) همانطور که توضیح داده شد انجام شد [13،36-39]. این روش می‌تواند مهار RBD نشان‌دار به ACE2 متصل به صفحه ELISA توسط آنتی‌بادی‌ها یا دیگر مهار ترکیبی برهم‌کنش RBD-ACE2 را اندازه‌گیری کند [38]. به طور خلاصه، ACE نوترکیب{15}} (GenScript، Piscataway، NJ، USA) (2 میکروگرم در میلی لیتر) یک شبه روی صفحات چاه NUNC Maxisorb 96 (Thermofisher) پوشانده شد. پس از آن، سه چرخه شستشو با بافر شستشو انجام شد و سپس صفحات به مدت 3 ساعت در RT با بافر مسدود کننده مسدود شدند. نمونه های سرم 1:2 در PBS، 0.05% Tween 20، 1% BSA رقیق شدند و به مدت 2 ساعت با 50 نانوگرم RBD نوترکیب با برچسب His (GenScript) پیش انکوبه شدند. سپس نمونه‌های سرم از قبل انکوبه شده به مدت 3 ساعت به پلیت‌های حاوی ACE{30}} اضافه شدند و پلیت‌ها شسته و یک شبه با آنتی‌بادی مونوکلونال ضد هیس موش رقیق‌شده 1:1000 (دیانوا، هامبورگ، آلمان) انکوبه شدند. . پس از 3 مرحله شستشو، 1:1000 آنتی بادی ضد IgG1 موش متصل به HRP رقیق شده (GE Healthcare، Chicago، IL، USA) به مدت 2 ساعت اضافه شد و تشخیص با ABTS انجام شد. مقادیر میانگین چگالی نوری (OD) مربوط به RBD محدود در 405 نانومتر و 492 نانومتر (مرجع) در یک خواننده TECAN Infinite F5 ELISA با نرم‌افزار یکپارچه i-control 2.0 (Tecan Group Ltd., Männedorf, Switzerland) اندازه‌گیری شد. کنترل بافر (پوشش بدون RBD) از هر نتیجه کم شد. تعیین‌ها به صورت تکراری انجام شد و نتایج به‌عنوان مقادیر میانگین با تغییر نشان داده می‌شوند<5%.

مزایای مکمل سیستانچ-چگونه سیستم ایمنی بدن را تقویت کنیم

4.6. تجسم پپتیدها در ساختار پروتئین اسپایک

نمایش سطحی پروتئین اسپایک SARS-CoV-2 در PyMOL (سیستم گرافیک مولکولی PyMOL، نسخه 2.5.{4}}a0، شرودینگر، LLC، نیویورک، نیویورک، ایالات متحده آمریکا) ایجاد شد. در ورودی PDB 6XR8.

4.7. تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از GraphPad Prism (نسخه 9.2.{2}} GraphPad Software، La Jolla California) انجام شد. آزمون Wilcoxon (شکل 1C، D و 3A)، آزمون Mann-Whitney (شکل 2B و S3)، و آزمون فریدمن (شکل S2) برای مقایسه بین دو یا چند گروه استفاده شد. p < 0.{12}}5 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد. همبستگی بین دو گروه با آزمون رتبه اسپیرمن تعیین شد (شکل 2D). یک رگرسیون غیرخطی نرمال شده با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism (Sigmoidal 4PL) انجام شد. داده ها به صورت میانگین ± IQR ارائه می شوند. ستاره ها تفاوت معنی داری را بین گروه ها نشان می دهند، * p < 0. ns - قابل توجه نیست.

5. نتیجه گیری ها

به طور خلاصه، مطالعه ما اولین مطالعه ای است که ویژگی اپی توپ و زیر کلاس IgG آنتی بادی های القا شده توسط Gam-COVID-Vac را به طور عمیق مطالعه می کند و مکانیسم های مختلف خنثی سازی ویروس ناشی از Gam-COVID-Vac توسط آنتی بادی ها را آشکار می کند. به طور خاص، ما شواهدی به دست آوردیم مبنی بر اینکه آنتی بادی های هدایت شده به یک پپتید (یعنی پپتید 12) که در نزدیکی اما خارج از RBD در قسمت N ترمینال S1 قرار دارد، با خنثی سازی ویروس مرتبط هستند. فعالیت بالقوه خنثی‌کننده ویروس آنتی‌بادی‌های خاص پپتید 12- ممکن است به دلیل توانایی آنها در تداخل در انتقال ترکیب پروتئین اسپایک از قبل به ترکیب پس از همجوشی باشد. ما پیشنهاد می‌کنیم که منطقه تعریف‌شده توسط پپتید 12 به شکل ایمنی‌زا در واکسن‌ها برای القای آنتی‌بادی‌ها علیه این ناحیه اپی توپ و آزمایش آنتی‌بادی‌های القا شده توسط چنین واکسن‌هایی برای خنثی‌سازی ویروس در نظر گرفته شود. در صورتی که می‌توان واکسن‌ها را خنثی‌سازی ویروس افزایش داد، گنجاندن اپی‌توپ‌های پپتید 12 ایمنی‌زا ممکن است کارایی واکسن‌های کووید{14}} را بهبود بخشد. علاوه بر این، ممکن است ایجاد آنتی بادی علیه اپی توپ 12-پپتید تعریف شده برای ایمن سازی غیرفعال در نظر گرفته شود. از آنجایی که پپتید 12-اپی توپ تعریف شده در انواع شناخته شده SARS-CoV{18}} نگهداری می شود، واکسن ها و آنتی بادی های هدایت شده به پپتید 12 می توانند در برابر انواع SARS-CoV{22}} محافظت متقاطع داشته باشند. بنابراین ما دانش جدیدی را ارائه می‌کنیم که ممکن است برای توسعه استراتژی‌های جدید واکسیناسیون فعال و غیرفعال برای COVID{23}} مفید باشد.

منابع

1. رودریگز کویرا، ج. Sokolowska، M. SARS-CoV{3}} واکسن‌های کاندید - ترکیب، مکانیسم‌های عمل و مراحل توسعه بالینی. آلرژی 2021، 76، 1922-1924. [CrossRef] [PubMed]

2. شارما، ا. احمد، فی. Lal، SK COVID-19: مروری بر تکامل، انتقال، تشخیص، کنترل و پیشگیری بیماری کروناویروس جدید. ویروس‌ها 2021، 13، 202. [CrossRef] [PubMed]

3. ارشد، ب. اقبال، ت. Bhatti, KP Review-Insights on Off-Label therapeutic strategies on Off-Label therapeutic strategies on Covid-19 خفیف و شدید. پاک جی. فارم. علمی 2021، 34، 1469-1484. [CrossRef] [PubMed]

4. زمان، و. ثاقب، س. Ullah, F. COVID-19: رویکردهای فیلوژنتیک ممکن است به یافتن منابعی برای درمان طبیعی کمک کند. فیتوتر. Res. 2020، 34، 2783-2785. [CrossRef]

5. روبیو کاسیاس، آ. Redwan، EM; Uversky، VN SARS-CoV{3}} بیماری‌زایی متناوب در نتیجه انتخاب طبیعی. کووید 2022، 2، 1089–1101. [CrossRef]

6. لوگونوف، دی. Dolzhikova، IV; Zubkova، OV ایمنی و ایمنی زایی واکسن هترولوگ هترولوگ اولیه کووید-19 مبتنی بر ناقل rAd26 و rAd5 در دو فرمولاسیون: دو مطالعه فاز 1/2 باز و غیرتصادفی از روسیه. Lancet 2020، 396، 887-897، تصحیح در Lancet 2021، 397، 98. [CrossRef]

7. Folegatti، PM; اور، کی جی. Aley، PK ایمنی و ایمنی زایی واکسن ChAdOx1 nCoV-19 علیه SARS-CoV-2: یک گزارش اولیه از یک کارآزمایی تصادفی‌سازی شده و تصادفی‌سازی فاز 1/2. Lancet 2020, 396, 467-478, Correction in Lancet 2020, 396, 1884. [CrossRef]

8. لوگونوف، دی. Dolzhikova، IV; Shcheblyakov، DV ایمنی و اثربخشی واکسن هترولوگ مبتنی بر ناقل rAd26 و rAd5 با افزایش اولیه کووید{5}}: یک تجزیه و تحلیل موقت از یک کارآزمایی تصادفی کنترل شده فاز 3 در روسیه. Lancet 2021, 397, 671-681, Correction in Lancet 2021, 397, 670. [CrossRef]

9. جکسون، سی بی; فرزان، م. چن، بی. Choe, H. مکانیسم‌های ورود SARS-CoV{2}} به سلول‌ها. نات. کشیش مول. سلول بیول. 2022، 23، 3-20. [CrossRef]

10. هاینز، FX; Stiasny، K. ویژگی‌های متمایز واکسن‌های فعلی کووید-19: شناخته‌شده‌ها و ناشناخته‌های ارائه آنتی‌ژن و روش‌های عمل. NPJ Vaccines 2021, 6, 104. [CrossRef]

11. لیم، HX; معصومیان، م. خالد، ک. کومار، AU; MacAry، PA; Poh، CL شناسایی اپی توپ‌های سلول B برای استخراج آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده علیه SARS-CoV{3}} Spike Protein از طریق بیوانفورماتیک و هدف‌گیری آنتی‌بادی مونوکلونال. بین المللی جی. مول. علمی 2022, 23, 4341. [CrossRef]

12. موری، جی. تافری، P. استراتژی های مبتنی بر پپتید در برابر حمله SARS-CoV-2: به روز شده در دیدگاه سیلیکو. جلو. دارو. کشف کنید. 2022, 2, 899477. [CrossRef]

13. گاتینگر، پ. نیسپودزیانا، ک. Stiasny، K. خنثی سازی SARS-CoV-2 به آنتی بادی علیه اپی توپ های دامنه اتصال گیرنده ساختاری نیاز دارد. آلرژی 2022، 77، 230-242. [CrossRef]

14. نیو، ال. ویتروک، KN; Clabaugh, GC چشم انداز ساختاری آنتی بادی های خنثی کننده علیه دامنه اتصال گیرنده SARS-CoV-2. جلو. ایمونول. 2021, 12, 647934. [CrossRef]

15. شان، س. Mok، CK; ژانگ، اس. آنتی بادی خنثی کننده قوی و محافظ انسان در برابر انواع SARS-CoV-2. جلو. ایمونول. 2021, 12, 766821. [CrossRef]

16. باجپایی، ص. سینگ، وی. چندل، الف. آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده گسترده علیه SARS-CoV-2 بینش‌های جدیدی در مورد خنثی‌سازی انواع و سایر ویروس‌های کرونای انسانی ارائه می‌کند. جلو. سلول. آلوده کردن میکروبیول. 2022, 12, 928279. [CrossRef]

17. ویشواکارما، ص. یداو، ن. Rizvi، ZA سندرم حاد تنفسی شدید کروناویروس 2 اپی توپ‌های جدید مبتنی بر پروتئین اسپایک پاسخ‌های ایمنی قوی را در داخل بدن ایجاد می‌کنند و تکثیر ویروسی را در شرایط آزمایشگاهی مهار می‌کنند. جلو. ایمونول. 2021, 12, 613045. [CrossRef]

18. گرت، من; گالووی، جی جی. Wolf, C. توصیف جامع پاسخ های آنتی بادی به SARS-CoV-2 پروتئین Spike اپی توپ های القا شده توسط واکسن اضافی را فراتر از موارد عفونت خفیف پیدا می کند. eLife 2022, 11, e73490. [CrossRef]

19. پنگ، م. دو، ایکس. Zhang، X. اپی توپ‌های آنتی ژنی محافظ با امضای ایمنی پس از سه دوز واکسن غیرفعال SARS-CoV{2}} آشکار شدند. جلو. ایمونول. 2022, 13, 938378. [CrossRef]

20. پولور، آی. پارلا، ا. زریلو، L. تنوع پاسخ ایمنی هومورال به واکسن‌های مختلف کووید-19: پیامدهای خط‌مشی «گذرگاه سبز». جلو. ایمونول. 2022, 13, 833085. [CrossRef]

21. توخواتولین، ع. Dolzhikova، IV; Shcheblyakov، DV یک کارآزمایی باز، غیرتصادفی، فاز 1/2 در مورد ایمنی، تحمل و ایمنی زایی واکسن تک دوز "Sputnik Light" برای پیشگیری از عفونت کروناویروس در بزرگسالان سالم. Lancet Reg. سلامتی یورو. 2021، 11، 100241. [CrossRef] [PubMed]

22. گونزالس، س. اولزوویکی، اس. Salazar، M. اثربخشی اولین جزء Gam-COVID-Vac (Sputnik V) بر کاهش عفونت‌های تایید شده SARS-CoV{4}}، بستری شدن در بیمارستان و مرگ و میر در بیماران 60-79 ساله: یک مطالعه کوهورت گذشته‌نگر در آرژانتین. EClinicalMedicine 2021, 40, 101126. [CrossRef] [PubMed]

23. گوشچین، VA; Dolzhikova، IV; Shchetinin، AM فعالیت خنثی کننده سرم از افراد واکسینه شده با اسپوتنیک V در برابر انواع نگرانی (VOC: B.1.1.7، B.1.351، P.1، B.1.617.2، B.1.617.3) و سارس بومی مسکو انواع -CoV{15}}. Vaccines 2021, 9, 779. [CrossRef] [PubMed]

24. وکو، ز. بوسه، ز. Surjan, G. اثربخشی پنج واکسن SARS-CoV{2}} در سراسر کشور در مطالعه HUN-VE در مجارستان. کلین. میکروبیول. آلوده کردن 2022، 28، 398-404. [CrossRef] [PubMed]

25. جیواندارا، سی. فرناندو، اس. Pushpakumara، PD پاسخ های ایمنی بدنبال اولین دوز اسپوتنیک V (Gam-COVID-Vac). علمی Rep. 2022, 12, 1727. [CrossRef]

26. ایکیگیم، اس. صدیق، MNA; فعالیت خنثی کننده CT سرم واکسن اسپوتنیک V در برابر انواع SARS-CoV-2. نات. اشتراک. 2021، 12، 4598. [CrossRef]

27. گوشچین، VA; Tsyganova، EV; Ogarkova، DA Sputnik V محافظت در برابر COVID-19 در افرادی که تحت درمان ضدرتروویروسی با HIV زندگی می‌کنند. EClinicalMedicine 2022, 46, 101360. [CrossRef]

28. شمجی، م.ح. والنتا، آر. Jardetzky، T. نقش IgE، IgG و IgA اختصاصی آلرژن در بیماری آلرژیک. آلرژی 2021، 76، 3627-3641. [CrossRef]

29. اکل دورنا، ج. وبر، ام. Stanek, V. دو سال درمان با واکسن آلرژی گرده چمن نوترکیب BM32 باعث افزایش مداوم پاسخ IgG4 مخصوص آلرژن می شود. EBioMedicine 2019، 50، 421-432. [CrossRef]

30. شمجی، م.ح. کاپن، جی اچ. آکدیس، M. نشانگرهای زیستی برای نظارت بر اثربخشی بالینی ایمونوتراپی آلرژن برای رینوکونژونکتیویت آلرژیک و آسم آلرژیک: مقاله موقعیت EAACI. آلرژی 2017، 72، 1156-1173. [CrossRef]

31. Tortorici، MA; بلتراملو، ام. آنتی‌بادی‌های انسانی فوق‌قوی Lempp، FA از طریق مکانیسم‌های متعدد در برابر چالش SARS-CoV-2 محافظت می‌کنند. Science 2020, 370, 950–957. [CrossRef]

32. سیا، جی. پوچی، اف. رومن، ام. تجزیه و تحلیل فعالیت خنثی‌کننده آنتی‌بادی‌هایی که SARS-CoV باز یا بسته را هدف قرار می‌دهند-2 تشکل‌های پروتئین اسپایک. بین المللی جی. مول. علمی 2022، 23، 2078. [CrossRef]

33. منگ، بی. داتیر، ر. دامنه N ترمینال اسپایک Choi, J. SARS-CoV{2}} ورود ویروس وابسته به TMPRSS و همجوشی زایی را تعدیل می کند. Cell Rep. 2022, 40, 111220. [CrossRef]

34. رسچ، ی. وگوفر، م. Seiberler, S. خصوصیات مولکولی Der p 10: نشانگر تشخیصی برای حساسیت گسترده در آلرژی به کنه گرد و غبار خانگی. کلین. انقضا آلرژی 2011، 41، 1468-1477. [CrossRef]

35. بیازرووا، م. یوسوبالیوا، جی. Spiridonova، A. الگوی گردش خون SARS-CoV-2-تولید سلول های B-آنتی بادی خاص و حافظه در بیماران مبتلا به کووید حاد-19. کلین. ترجمه ایمونول. 2021, 10, e1245. [CrossRef]

36. گتینگر، پ. بوروچوا، ک. Dorofeeva، Y. آنتی‌بادی‌های سرم بیماران در حال نقاهت به دنبال کووید خفیف-19 همیشه از اتصال به گیرنده ویروس جلوگیری نمی‌کنند. آلرژی 2021، 76، 878-883. [CrossRef]

37. گتینگر، پ. تولاوا، آی. Borochova، K. Omicron: یک نوع SARS-CoV-2 با نگرانی واقعی. آلرژی 2022، 77، 1616-1620. [CrossRef]

38. گتینگر، پی. Ohradanova-Repic، A.; Valenta, R. اهمیت، کاربردها و ویژگی‌های سنجش اندازه‌گیری آنتی‌بادی‌های خنثی‌کننده SARS-CoV{3}. بین المللی جی. مول. علمی 2023, 24, 5352. [CrossRef]

39. گاتینگر، پی. کراتزر، بی. تولاوا، آی. نیسپودزیانا، ک. Ohradanova-Repic، A.; گبتسبرگر، ال. بوروچوا، ک. گارنر-اسپیتزر، ای. تراپین، دی. هوفر، جی. و همکاران واکسنی مبتنی بر پروتئین همجوشی دامین-PreS اتصال گیرنده تا شده با پتانسیل ایجاد ایمنی استریل کننده در برابر انواع SARS-CoV-2. آلرژی 2022، 77، 2431-2445. [CrossRef]