اکیناکوزید با تعدیل انتقال سیگنال AKR1B10/ERK از پیشرفت بدخیم سلول‌های MCF{0} سرطان پستان جلوگیری می‌کند

چکیده: این مطالعه به تحلیل تاثیراکیناکوزید(ECH) در تکثیر، متاستاز و مقاومت آدریامایسین (ADR).سرطان پستان(BC) سلول‌های MCF{0}} از طریق مدولاسیون آلدو-کتو ردوکتاز خانواده ۱ عضو ۱۰ (AKR1B10)/ مسیر کیناز تنظیم‌شده با سیگنال خارج سلولی (ERK). ساختار شیمیایی ECH ابتدا تایید شد. سلول های MCF{7}} با غلظت های مختلف (0، 10، 20، 40 ug·mL{12}}) ECH به مدت 48 ساعت تحت درمان قرار گرفتند. وسترن بلات برای تجزیه و تحلیل بیان پروتئین های مرتبط با مسیر AKR1B10/ERK و کیت شمارش سلولی (CCK{18}}) برای تعیین زنده ماندن سلول استفاده شد. سلول های MCF{19}} جمع آوری و به گروه کنترل، گروه ECH، گروه ECH به اضافه Ov-NC و گروه ECH به علاوه OvAKR1B10 طبقه بندی شدند. سپس از وسترن بلات برای تجزیه و تحلیل بیان پروتئین های مرتبط با مسیر AKR1B10/ERK استفاده شد. برای بررسی تکثیر سلولی از سنجش CCK-8 و 5-اتینیل{28}}'-deoxyuridine (EdU) استفاده شد. مهاجرت سلولی با روش خراش، سنجش ترانس ول و وسترن بلات ارزیابی شد. در نهایت، سلول‌های MCF{30}} با ADR به مدت 48 ساعت تحت درمان قرار گرفتند تا مقاومت ADR ایجاد کنند. زنده ماندن سلولی با استفاده از روش CCK{32}} مورد آزمایش قرار گرفت و آپوپتوز سلولی بر اساس روش برچسب گذاری انتهایی ترمینال دئوکسی نوکلئویتیدیل ترانسفراز (TUNEL) و وسترن بلات برآورد شد. بر اساس بانک اطلاعات پروتئین (PDB) و اتصال مولکولی، میل اتصال ECH به AKR1B10 ارزیابی شد. دوزهای مختلف ECH بیان پروتئین های مرتبط با مسیر AKR1B10/ERK را به روشی وابسته به دوز کاهش داد و زنده ماندن سلول را در مقایسه با گروه کنترل کاهش داد. در مقایسه با گروه کنترل، 40 ug·mL{40}} ECH مسیر AKR1B10/ERK را در سلول‌های MCF{43}} مسدود کرد و از تکثیر، متاستاز و مقاومت ADR سلول‌ها جلوگیری کرد. در مقایسه با گروه ECH + Ov -NC، گروه ECH به علاوه Ov-AKR1B10 بازیابی برخی از رفتارهای بیولوژیکی سلول‌های MCF{48}} را نشان داد. ECH همچنین AKR1B10 را هدف قرار داد. ECH می تواند تکثیر، متاستاز و مقاومت ADR سلول های BC را با مسدود کردن مسیر AKR1B10/ERK مهار کند.

کلید واژه ها:اکیناکوزید; سیگنالینگ AKR1B10/ERK؛ سرطان پستان؛ مقاومت آدریامایسین

سرطان پستان (BC) شایع ترین بدخیمی زنان با میانگین سنی تشخیص حدود 60 سال است [1]. نسبت موارد جدید قبل از میلاد مسیح در چین 12.2 درصد از نسبت جهانی را به خود اختصاص می دهد و نسبت مرگ و میر قبل از میلاد مسیح در جهان 9.6 درصد است [2]. عوامل ژنتیکی و محیطی مانند رژیم غذایی پرچرب، مصرف الکل و فعالیت بدنی ناکافی از عوامل خطر سرطان سینه هستند [3-4]. درمان‌های مدرن هنوز هم شامل جراحی، پرتودرمانی و دارودرمانی است [1]. داروهای بالینی متداول شامل سیکلوفسفامید، 5-فلورواوراسیل، پیراروبیسین، تاموکسیفن سیترات و غیره است [5]، و وجود مقاومت دارویی در سلول‌های BC نیز تا حدودی باعث درمان BC می‌شود. چالش بزرگ [6]. در عین حال، به عنوان یک تومور ناهمگن، BC بیشتر احتمال دارد به اندام هایی مانند استخوان، ریه، کبد و مغز متاستاز دهد، که سرطان سینه متاستاتیک را تا حد زیادی غیرقابل درمان می کند [7]. سیستانچ یک ماده دارویی سنتی در کشور من است. از خانواده گیاهان است و به «جنسینگ صحرایی» معروف است[8].اکیناکوزید(ECH) یک گلیکوزید فنیل اتانوئیدی است که از Cistanche deserticola استخراج می شود. مطالعات اخیر بر آن تاکید کرده استاکیناکوزیددارای خواص آنتی اکسیدانی قوی، ضد التهابی و ضد سرطانی است. به عنوان مثال، با مهار مسیر mTOR/STAT3، ECH می تواند پاسخ التهابی و استرس اکسیداتیو را در آسیب کبدی ناشی از پاراستامول کاهش دهد [9]. شواهد متعددی تایید کرده‌اند که ECH عمدتاً نقش سرکوب‌کننده تومور را در BC ایفا می‌کند و مکانیسم آن ممکن است مربوط به کاهش بیان miR-4306 و miR-4508 [10] یا مسدود کردن Wnt/-catenin باشد. سیگنال دهی [11].

آلدو کتو ردوکتاز 1B10 (AKR1B10)، عضوی از ابرخانواده آلدو کتو ردوکتاز، می‌تواند مواد سمی را از طریق واکنش‌های ردوکس به مواد غیرسمی تبدیل کند و الکل‌های مربوطه را تولید کند، بنابراین یک اثر محافظتی بر روی سلول‌های میزبان اعمال می‌کند [12]. مطالعات نشان می دهد که AKR1B10 عمدتاً در بافت های طبیعی انسان مانند روده بزرگ و روده کوچک بیان می شود [13]. مطالعات بیشتر نشان داد که AKR1B10 عمدتاً به عنوان یک انکوژن در سرطان سینه عمل می کند و ممکن است به یک نشانگر زیستی بالقوه سرطان پستان تبدیل شود [{13}}]. به عنوان یک عضو کلیدی از خانواده MAPK، پروتئین کینازهای تنظیم شده خارج سلولی (ERKs) فرآیندهای سلولی مختلف حفظ شده از نظر تکاملی را در متازوئن ها کنترل می کنند و اختلال در تنظیم ERK می تواند منجر به بیماری های مختلف شود [17]. LI J و همکاران [18] نشان دادند که AKR1B10 می تواند با فعال کردن سیگنال دهی ERK، پیشرفت سرطان سینه را افزایش دهد. جالبتر اینکه وب سایت SwissTargetPrediction AKR1B10 را به عنوان یک هدف بالقوه اکیناسه پیش بینی کرد. با این حال، اینکه آیا ECH در پیشرفت سرطان پستان با واسطه سیگنالینگ AKR1B10/ERK نقش دارد یا خیر، ناشناخته است.

این مطالعه بر بررسی اثرات خاص ECH بر روی فنوتیپ سلول‌های بدخیم BC و روشن کردن رابطه بین ECH و مسیر AKR1B10/ERK در سلول‌های BC متمرکز شد.

1 ماده

رده سلولی اپیتلیال پستان طبیعی انسان MCF-10A و رده سلولی سرطان سینه انسان MCF-7 توسط مرکز منابع سلولی مؤسسه‌های علوم زیستی شانگهای، آکادمی علوم چین ارائه شد. سلول های مقاوم در برابر MCF{2}} از شرکت صنعتی شانگهای هوژن خریداری شد. محیط DMEM/F1 (شماره دسته ای PM150310)، سرم اسب (شماره دسته ای 164215) و سرم جنین گاو (شماره دسته ای 164210) خریداری شد. از Wuhan Proceeds Life Technology Co., Ltd. ECH (شماره دسته ای 07668) از سیگما آلدریچ، ایالات متحده آمریکا خریداری شد. ADR (شماره لات KGA8181) از شرکت Biotechnology Jiangsu Kaiji خریداری شد. محلول لیز RIPA (شماره لات R0020) از Beijing Soleibao Technology Co., Ltd. خریداری شد. معرف کمی پروتئین BCA (تعداد لات CX0013S) از Kangwei Century Biotechnology Co., Ltd. خریداری شد. معرف CCK{13} (شماره دسته ای C0037) از شرکت بیوتکنولوژی شانگهای بییونتیان خریداری شد. معرف ترانسفکشن Lipofectamine 2000 (بچ شماره 11668019) از شرکت Thermo Fisher Scientific Co., Ltd خریداری شد.

پلاسمیدهای Ov-AKR1B10 و Ov-NC توسط Chongqing Youbao Biotechnology Co., Ltd. ارائه شدند. معرف EdU (شماره لات C00003) و کیت TUNEL (شماره لات C11026-1) از شرکت بیوتکنولوژی گوانگژو ریبو خریداری شد. DAPI (شماره لات 40727ES10) از Guangzhou Ribo Biotechnology Co., Ltd. از Shanghai Yisheng Biotechnology Co., Ltd. خریداری شد. ماتریژل (لات شماره 354230) و اتاقک ترانسول (لات شماره 3450) از شرکت کورنینگ، ایالات متحده آمریکا خریداری شد. محلول Paraformaldehyde (Lot No. 158127)، Crystal Violet (Lot No. C0775) و Triton X{12}} (Lot No. T8787) توسط شرکت سیگما در ایالات متحده ارائه شد. خرگوش AKR1B10 (شماره دسته ab192865)، ERK1/2 فسفریله (p-ERK1/2، شماره دسته ab278538)، ERK1/2 (شماره دسته ab184699)، E-cadherin (E-cadherin، Lot ab212059)، N-cadherin -cadherin، lot ab76011)، حلزون (lot ab216347)، لنفوم سلول B-2 (Bcl-2، lot ab182858)، Bcl-2 پروتئین X مرتبط (Bcl{38}} آنتی بادی X، Bax، شماره دسته ab182733) و آنتی بادی ثانویه ضد خرگوش بز با برچسب HPR (بچ شماره ab6702) از Abcam، ایالات متحده خریداری شد. کیت لومینسانس ECL (باچ شماره SL1350) از Beijing Cool Lamb Technology Co., Ltd. خریداری شده است. نرم افزار Image-Pro Plus از Media Cybernetics، ایالات متحده خریداری شده است. میکروسکوپ فلورسانس لایکا DM1000 و میکروسکوپ معکوس لایکا DM ILLED از Leica Microsystems آلمان خریداری شد. نرم افزار SPSS 22.0 از IBM آمریکا خریداری شد.

2 روش

2.1 کشت سلولی و مدیریت

سلول‌های MCF{0}}A در DMEM/F12 حاوی 5 درصد سرم اسب، 20 نانوگرم در میلی‌لیتر{4}} فاکتور رشد اپیدرمی، 0.5 ug·mL-1 کورتیزول، 10 نانوگرم کشت داده شدند. ·mL-1 انسولین، 100ng·mL{11}} محیط کشت توکسین وبا. سلول های MCF-7 و MCF-7/ADR بودند

کشت در محیط DMEM/F12 با 10 درصد FBS. تمام محیط ها با 1 درصد آنتی بادی مضاعف تکمیل و در دمای 37 درجه در یک اتمسفر مرطوب با 5 درصد CO2 ذخیره شدند. متعاقبا، سلول‌های MCF-7 با ECH در غلظت‌های مختلف ({14}}، 10، 20، 40 ug·mL-1) به مدت 48 ساعت مداخله شدند. و 1.0 mg·L{15}} ADR برای حفظ مقاومت دارویی سلول‌های MCF-7/ADR استفاده شد. رابطه ی جنسی. 2.2 روش وسترن بلات پروتئین موجود در سلولهای MCF{19}} با لیز RIPA استخراج شد و غلظت پروتئین توسط معرف BCA تعیین شد. پروتئین های جدا شده توسط 10 درصد SDS-PAGE با استفاده از غشای PVDF منتقل شدند. پس از مسدود کردن با شیر بدون چربی 5 درصد به مدت 2 ساعت در دمای اتاق، غشاء /{24}}، E-cadherin (1/10 000)، N-cadherin (1/5 000) بود. , Snail (1/1 000), Bcl-2 (1/1 000), Bax (1/{1 000) آنتی بادی اولیه یک شب در 4 درجه انکوبه شد و به دنبال آن افزودن آنتی بادی ثانویه ضد خرگوش بز نشاندار شده با HPR (1/2 000) به مدت 1 ساعت در دمای اتاق. پروتئین هدف با افزودن کیت لومینسانس ECL شناسایی شد و فراوانی پروتئین توسط نرم افزار Image-Pro Plus آنالیز شد.

سرشار از قهوه اکیناکوزید سیستانچ برای درمان سرطان سینه

2.3 سنجش CCK{2}} برای زنده ماندن سلول

سلول‌های MCF{{0}}A و MCF-7 در 96-صفحه‌های چاهک برای کشت (5×103 سلول در چاه) و پس از 24 ساعت کاشته شدند. غلظت‌های مختلف (0، 10، 20، 40 ug·mL{10}}) از ECH استفاده شد. زنده ماندن 2 ساعت بعد شناسایی شد. به منظور بررسی بیشتر اثر ECH بر روی زنده ماندن سلول‌های MCF{15}}، سلول‌های MCF{16}} ترانسفکت شده یا ترانسفکت نشده به مدت 24 ساعت و غلظت‌های مختلف (0، 10، 20، 40 میکروگرم) کشت داده شدند. mL-1) ECH برای مداخله استفاده شد. 10 درصد کسر حجمی معرف CCK{24}} به ترتیب در 24، 48 و 72 ساعت اضافه شد و روش تشخیص زنده ماندن سلولی مانند روش فوق بود. برای بررسی اثر ECH بر مقاومت سلول‌های MCF{28}} به دوکسوروبیسین، سلول‌های مقاوم به MCF-7/ADR به مدت 48 ساعت با ECH کشت داده شدند و سپس محلول کاری CCK{33}} برای تشخیص زنده ماندن سلول اضافه شده است.

2.4 ترانسفکشن پلاسمید

سلول‌های MCF{0}} در پلیت‌های چاهک (5×104/چاه) کاشته و کشت شدند. هنگامی که سلول ها به 60 درصد تا 70 درصد تلاقی رسیدند، Ov-AKR1B10 و Ov-NC به طور گذرا مطابق با دستورالعمل های معرف ترانسفکشن Lipofectamine 2000 ترانسفکت شدند. سلول های هر گروه ترانسفکت شدند و ترانسفکشن پس از 48 ساعت تکمیل شد.

2.5 رنگ آمیزی EdU برای تشخیص تکثیر سلولی

پس از تیمار سلول های MCF{{0}} با ECH و ترانسفکت شدن با پلاسمیدها، 20 میکرومول·لیتر-1 EdU به هر چاهک اضافه شد و در دمای 37 درجه به مدت 2 ساعت انکوبه شد. سپس سلول ها به ترتیب با 4 درصد پارافورمالدئید و 0.5 درصد تریتون X{8}} تثبیت و نفوذپذیر شدند. در نهایت، سلول‌های EdU مثبت رنگ‌آمیزی شده با DAPI در زیر میکروسکوپ فلورسانس شناسایی شدند.

2.6 سنجش ترمیم زخم برای تشخیص مهاجرت سلولی

سلول‌های MCF{{0}} در فاز لگاریتم رشد به 6-صفحه‌های چاهک اضافه شدند و هنگامی که سلول‌ها به 90 درصد تلاقی رسیدند، از نوک پیپت استریل 200 میکرولیتری برای ایجاد رگه استفاده کنید و 3 را بشویید. بار با PBS عرض زخم در 0 و 48 ساعت زیر میکروسکوپ معکوس اندازه گیری شد و تعداد سلول های منتقل شده تعیین شد.

2.7 روش Transwell برای تشخیص تهاجم سلولی

سلول‌های MCF{2}} تیمار شده با ECH و ترانسفکت‌شده با پلاسمید در محفظه بالایی یک چاهک حاوی ماتریژل کاشته شدند و 500 میکرولیتر از محیط DMEM حاوی 10 درصد FBS به اتاقک زیرین چاهک اضافه شد. پس از 24 ساعت، سلول های سطحی با سواب پنبه پاک شدند و سلول ها به ترتیب با پارافورمالدئید و کریستال ویولت رنگ آمیزی شدند و سلول های مهاجم زیر میکروسکوپ شمارش شدند.

2.8 رنگ آمیزی TUNEL برای تشخیص آپوپتوز

پس از مداخله با 15 میکرومول L-1 ADR، سلول‌های مقاوم در برابر MCF{4}}/ADR تحت درمان با ECH و پلاسمید ترانسفکت شده در 96-صفحه‌های چاهک کاشته شدند و با 4 درصد پارافورمالدئید و {{ 8}}.5 درصد Triton X{10}} پس از عملیات نفوذپذیری، محلول تشخیص TUNEL اضافه شد و واکنش در دمای 37 درجه به مدت 45 دقیقه تحت هدایت دستورالعمل‌های کیت انجام شد و هسته سلول‌های DAPI رنگ‌آمیزی شدند. . پنج میدان بینایی به طور تصادفی برای مشاهده آپوپتوز سلولی در زیر میکروسکوپ فلورسانس انتخاب شدند.

2.9 اتصال مولکولی

ساختار سه بعدی پروتئین AKR1B10 (PDB ID: 1ZUA) از پایگاه داده PDB (https://www.rcsb.org/) به دست آمد. از نرم افزار PyMOL 2.2.0 برای حذف آب از مواد فعال و حذف لیگاندهای اصلی نامربوط استفاده کنید، سپس ساختار شیمیایی ECH را توسط نرم افزار OpenBabel 2.2.1 (http://openbabel.org/wiki) به فرمت mol2 تبدیل کنید و در نهایت از Autodock استفاده کنید. 4.2 اتصال مولکولی را انجام می دهد و حالتی را با کمترین انرژی آزاد ({13}}.8 کیلوکالری مول-1) برای تجسم انتخاب می کند.

2.10 تجزیه و تحلیل آماری

در این تحقیق از نرم افزار SPSS 22.{1}} برای تجزیه و تحلیل و پردازش داده های تجربی استفاده شد و به صورت میانگین ± انحراف معیار (x ± s) بیان شد. برای مقایسه بین گروه ها از تحلیل واریانس یک طرفه استفاده شد. زمانی که پی<0.05, the difference was statistically significant.

3 نتیجه

3.1 ECH سیگنالینگ AKR1B10/ERK را در سلول‌های MCF مهار می‌کند ابتدا نتایج وسترن بلات نشان داد که با افزایش دوز قرار گرفتن در معرض ECH، سطوح پروتئین AKR1B10 و pERK1/2/ERK1/2 در MCF{11} }} سلول کاهش یافت و روند نزولی P وابسته به دوز بود<0.001) (Fig. 1). It can be speculated that ECH may participate in the malignant progression of BC by regulating AKR1B10/ERK signaling.

Fig.1 اثراکیناکوزیددر انتقال سیگنال AKR1B10/ERK در سلول های MCF{2}} (x̄  s، n=3)

3.2 بیان بیش از حد AKR1B10 اثر مهاری ECH بر تکثیر سلولی MCF{4}} را معکوس کرد.

داده‌های تجربی CCK{{0}} نشان داد که در مقایسه با سلول‌های طبیعی MCF-10A، قرار گرفتن در معرض غلظت‌های مختلف ECH (0، 10، 20، 40 میکروگرم در میلی‌لیتر{{6}) }) منجر به کاهش وابسته به غلظت در فعالیت سلول های سرطانی MCF-7 شد (P< 0.05), and when the mass concentration of ECH was 40 μg·mL-1, the cell activity decreased most significantly, so 40 μg·mL-1 ECH was used for subsequent experiments. To further verify whether ECH regulates BC development by regulating AKR1B10/ERK signaling, MCF-7 cells were first transfected with the Ov-AKR1B10 plasmid. After transfection of Ov-AKR1B10, the expression level of AKR1B10 was significantly increased (P<0.001). Western blotting results showed that transfection of Ov-AKR1B10 plasmid induced ECH exposure-induced reduced AKR1B10 and p-ERK1/2 protein levels again increased (P<0.001). In addition, the experimental data of CCK-8 and EdU demonstrated that the inhibitory effect of ECH treatment on the proliferation of MCF-7 cells could be alleviated by the up-regulation of AKR1B10 (P<0.05) (Fig. 2). Thus, overexpression of AKR1B10 rescued the inhibitory effect of ECH on the proliferative capacity of BC cells.

شکل 2 اثر اکینوزید بر تکثیر سلول‌های MCF{1}} با تنظیم بیان AKR1B10 (رنگ‌آمیزی فلورسانس، × 200؛ x̄  s، n=3)

3.3 بیان بیش از حد AKR1B10 اثر مهاری ECH را بر مهاجرت سلولی MCF معکوس کرد به طور مشابه، در مقایسه با گروه کنترل، تجویز ECH منجر به کاهش قابل توجهی در تعداد مهاجرت و تهاجم سلولی شد (P<0.001); In contrast, increased expression of AKR1B10 resulted in enhanced cell migration and invasion (P<0.05). In addition, compared with the control group, the protein levels of N-cadherin and Snail were significantly decreased after ECH treatment, while the level of E-cadherin was significantly increased (P<0.001); The protein levels of cadherin and Snail increased, while the level of E-cadherin decreased (P<0.001) (Fig. 3). In conclusion, up-regulation of AKR1B10 expression rescued the inhibitory effect of ECH administration on BC cell migration and invasion.

شکل 4 اثر اکینوزید بر مقاومت ADR سلول‌های MCF-7 با تنظیم بیان AKR1B10 (رنگ‌آمیزی فلورسانس، × 200؛ x̄  s، n=3)

4. بحث

سرطان پستان به تکثیر کنترل نشده سلول های اپیتلیال پستان تحت تأثیر عوامل سرطان زا مختلف اطلاق می شود و همچنین علت اصلی مرگ و میر ناشی از سرطان در زنان است [1]. متاستاز تومور یکی از تهدیدکننده‌ترین ویژگی‌های تومورها است و همچنین علت اصلی درمان طولانی‌مدت تومورها است [19]. شیمی درمانی روشی رایج برای درمان بالینی سرطان سینه است [20]. با پیشرفت مداوم و به روز رسانی روش ها و مفاهیم درمان سرطان پستان، پیش آگهی سرطان پستان به طور قابل توجهی بهبود یافته است [20]. با این حال، ظهور مقاومت دارویی تا حد زیادی اثربخشی بالینی داروها را محدود می کند [21]. مطالعات نشان داده اند که حدود 90 درصد از بیماران مبتلا به سرطان سینه متاستاتیک و 50 درصد از بیماران سرطان سینه پیشرفته، مقاومت دارویی ایجاد می کنند [22]. ADR یک آنتی بیوتیک آنتراسایکلین است که به طور گسترده در درمان بالینی سرطان متاستاتیک یا عود کننده پستان با اثر بر ساختار شیمیایی DNA استفاده می شود و می تواند به طور موثر میزان عود و مرگ و میر بیماران مبتلا به سرطان پستان را کاهش دهد [23]. بنابراین، این مطالعه بر تکثیر، متاستاز و مقاومت ADR سلول‌های BC متمرکز شد تا مکانیزم تنظیمی پیشرفت BC و جستجوی اهداف مولکولی بالقوه برای مداخله را عمیقاً آشکار کند.

اکیناسه یک ترکیب فنیل اتانوئیدی است که از ریزوم گیاهان طبیعی Cistanche deserticola و Echinacea purpurea به دست می آید. دارای اثرات دارویی مختلفی مانند آنتی اکسیدان، ضد افسردگی، ضد التهاب، ضد ویروسی، ضد تومور و ضد باکتری [24-25] است. مطالعات اخیر گزارش داده اند که ECH می تواند از تکثیر، متاستاز و رگزایی سلول های سرطانی تخمدان با تنظیم مسیر PI3K/Akt جلوگیری کند [26]. ECH می تواند فعالیت ضد سرطانی خود را در سرطان کبد با فعال کردن مسیر TGF-1/Smad [27] اعمال کند. ECH می تواند با غیرفعال کردن مسیر سیگنالینگ Wnt/-catenin از رشد تومور BC جلوگیری کند [11]. در این مطالعه، AKR1B10 برای اولین بار توسط SwissTargetPrediction به عنوان یک هدف بالقوه ECH پیش بینی شد. بنابراین، نویسندگان حدس می زنند که ECH ممکن است با تنظیم مسیرهای سیگنال دهی مربوط به AKR1B در پیشرفت بیماری BC شرکت کند. تاکنون مشخص شده است که بیان AKR1B10 در سرطان های مختلف افزایش یافته و در ترویج سرطان نقش دارد [28]. علاوه بر این، AKR1B10 می‌تواند توسعه سرطان مثانه، آدنوکارسینوم ریه و BC را با فعال کردن سیگنال‌دهی ERK تشدید کند [18، 29-30]. بیان نابجای AKR1B10 در سلول های سرطان پستان باعث افزایش فسفوریلاسیون ERK 1/2 برای فعال کردن مسیر سیگنالینگ ERK می شود [18]. مسیر سیگنالینگ ERK با فعال کردن MMPها، به ویژه MMP2، تخریب ماتریکس خارج سلولی را ترویج می‌کند و در نتیجه تهاجم سلول‌های تومور و متاستاز تومور را ترویج می‌کند [{25}}]. نتایج این آزمایش همچنین نشان داد که بیان پروتئین‌های مرتبط با مسیر AKR1B10/ERK پس از تیمار با غلظت‌های مختلف ECH به‌صورت وابسته به دوز کاهش می‌یابد، که نشان می‌دهد ECH ممکن است با مهار AKR1B10/ERK در مکانیسم تنظیم BC شرکت کند. مسیر علاوه بر این، قرار گرفتن در معرض ECH همچنین منجر به درجات مختلف کاهش در زنده ماندن سلول های قبل از میلاد شد. برای اثبات بیشتر این نکته، این مطالعه پلاسمید بیان بیش از حد AKR1B10 را به سلول‌های MCF{34} BC انتقال داد و دریافت که اثرات مهاری درمان ECH بر مسیر AKR1B10/ERK و تکثیر سلولی، مهاجرت و تهاجم، و انتقال اپیتلیال-مزانشیمی بیش از حد بیان شده است. توسط AKR1B10 نجات یافت. علاوه بر این، در سلول‌های مقاوم به MCF{40}}/ADR، قرار گرفتن در معرض ECH منجر به کاهش IC50 و افزایش تعداد سلول‌های آپوپتوز شد. در حالی که بیان بیش از حد AKR1B10 در این تنظیم دوباره IC50 را افزایش داد و تولید سلول آپوپتوز را کاهش داد. در پایان آزمایش، رابطه هدف گیری بین ECH و AKR1B10 نیز به طور کامل تأیید شد. نتایج تجربی فوق نشان می دهد که

بیان بیش از حد AKR1B10 به یک اثر متضاد بر رشد BC سرکوب شده با ECH دست می یابد.

در نتیجه، تجویز ECH می‌تواند تکثیر، مهاجرت، تهاجم، مقاومت EMT و ADR سلول‌های BC را کاهش دهد و مکانیسم ممکن است با هدف قرار دادن AKR1B10 و مهار مسیر سیگنالینگ AKR1B10/ERK مرتبط باشد. این مطالعه در ابتدا مکانیسم بالقوه ECH در سال قبل از میلاد را روشن کرد و مبنای تجربی و پشتیبانی نظری ارزشمندی را برای کاربرد ECH در داروهای ضد BC ارائه کرد. با این حال، هنوز هم کاستی هایی در این مطالعه وجود دارد. اول، این آزمایش شامل تجزیه و تحلیل تأثیر ECH بر میزان بقا و پیش آگهی بیماران قبل از میلاد نمی‌شود. ثانیاً، این مطالعه فاقد آزمایشات حیوانی in vivo برای تأیید بیشتر نقش ECH در رشد تومورهای BC بود. در مطالعات آینده، اهمیت بالینی ECH در درمان سرطان پستان بیشتر مورد بررسی قرار خواهد گرفت.

پشتیبانی:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950