اثر پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولا بر تکثیر لنفوسیت ها

وانگ شیانگیان، چی یون، کای رانلان، لی شیائوونگ، یانگ میهوا، شی یوئه

(موسسه گیاهان دارویی، کالج پزشکی اتحادیه پکن، آکادمی علوم پزشکی چین، پکن 100193)

هدف، واقعگرایانهTo مطالعه اثرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولا(CDPS) بر تکثیر لنفوسیت در موش. 

مواد و روش هااز روش MTT برای تشخیص تکثیر لنفوسیت های طحال در موش استفاده شد. سیکلوفسفامید (Cy) برای تکثیر مدل‌های حیوانی حیوانات دارای نقص ایمنی استفاده شد و شاخص‌های طحال و تیموس حیوانات سالم و نقص ایمنی اندازه‌گیری شد. فعالیت اینترلوکین{0}} (IL-2) با روش تکثیر تیموسیت اندازه‌گیری شد. نتایجپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابه طور قابل توجهی تکثیر لنفوسیت‌های فعال میتوژن (ConA و LPS) و سلول‌های عادی غیرفعال‌شده را ترویج کرد و ترشح IL{0}} را در لنفوسیت‌ها افزایش داد. تجویز داخل صفاقی نشان داد کهپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاشاخص طحال موش های سالم و دارای نقص ایمنی را به طور قابل توجهی افزایش داد و همچنین اثر آنتاگونیستی قابل توجهی بر کاهش شاخص تیموس ناشی از Cy داشت. نتیجهپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولامی‌تواند به طور قابل‌توجهی تکثیر لنفوسیت‌های طحال را در موش‌ها تقویت کند، که ممکن است با افزایش ترشح IL{0}} مرتبط باشد.

سیستانچ زندگی بیابانی

[کلید واژه ها]پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولا; شاخص طحال؛ شاخص آویشن؛ تکثیر لنفوسیت ها؛ اینترلوکین-2

پلی ساکاریدهای گیاهی به دلیل اثرات تعدیل کننده سیستم ایمنی گسترده و سمیت نسبتا کم آنها توجه گسترده ای را به خود جلب کرده اند [1].Cistanche deserticola ma، معروف به "Desert Ginseng"، ساقه پوسته پوسته، خشک و گوشتی Cistanche deserticola است., گیاهی از Oroaceae که دارای اثرات دارویی گسترده است.جوشانده آب آن می تواند درصد فاگوسیتوز و شاخص فاگوسیتوز ماکروفاژها را به میزان قابل توجهی افزایش دهد.مطالعات بیشتر نشان داده است که پایه مادی آن پلی ساکارید کل گیاه سیستانچ دسرتیکولا است[3]. Zeng Qunli و همکاران. [4] دریافته اند که یک جزء واحد ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولادارای اثر تکثیر قابل توجهی بر روی لنفوسیت های تیموس موش در شرایط آزمایشگاهی است. اثر ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولادر تکثیر لنفوسیت در داخل بدن و در شرایط آزمایشگاهی مشاهده شد.

فرمول مولکولی Cistanche deserticola

1. مواد و روش ها

1.1 داروها و معرف ها

پلی ساکارید از Cistanche deserticola توسط بخش گیاهی و شیمیایی موسسه پزشکی و کاشت، دانشکده پزشکی ارائه می شود. از آن استخراج می شودپودر عصاره سیستانچو محتوای پلی ساکارید 87 درصد است.

پودر عصاره سیستانچ

Before using in vivo experiments, dissolve and dilute with physiological saline to the required concentration, and boil for sterilization. Before the use of in vitro experiments, the RPMI-1640 culture medium was dissolved and diluted, and high-pressure sterilization was performed. Lipopolysaccharide (LPS), concanavalin (ConA), dexamethasone (DEX), and MTT are all products of Sigma Corporation. Cyclophosphamide, a Sino-American joint venture of Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd. Fetal bovine serum, RPMI1640 culture medium, and trypsin are all Gibco products. Other reagents are domestic analytical reagents.

1.2 حیوانات

موش های جوان BALB c (سطح SPF) توسط Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003] ارائه شده است. حیوانات با درجه SPF در یک اتاق بزرگ می شوند و آزادانه غذا می دهند و می نوشند.

1.3 دستگاه

نشانگر آنزیمی Multikan Ascent محصول شرکت Thermo Electron آمریکا. Leici PHS-3بی پی اچ متر دقیق، شرکت ابزار دقیق علمی شانگهای، آموزشی ویبولیتین انکوباتور دی اکسید کربن Napco 5410، NAPCO، ایالات متحده. BCN-1360 میز کار Ultra Clean، Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Microscope Inverted, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 روش

1.4.1 اثر بر تکثیر لنفوسیت [5]:

آماده‌سازی معمول لنفوسیت‌های طحال از موش‌های BALL c، با استفاده از RPMI-1640 برای تنظیم غلظت سلولی به 107 × 1 میلی‌لیتر، تلقیح شده بر روی یک صفحه کشت 96 چاهک، با 100 سوسپانسیون سلولی اضافه شده به هر چاهک μ 50. -با غلظت های مختلف کشت می شودپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولا(غلظت نهاییپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابرای تکثیر لنفوسیت های غیرفعال به ترتیب 6.25، 12.5، 25، 50 و 100 میلی گرم در لیتر بود. غلظت نهایی ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابرای تکثیر لنفوسیت های T فعال شده با ConA به ترتیب 3.9، 7.8، 15.6، 31.2 و 62.5 میلی گرم در لیتر بود. و غلظت نهایی ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابرای تکثیر لنفوسیت های B فعال LPS به ترتیب 1.56، 3.13، 6.25، 12.5 و 25 میلی گرم در لیتر) و از محیط ConA یا LPS، RPMI-1640 به عنوان شاهد استفاده شد. حجم کل هر سوراخ 200 میکرولیتر است، هنگام اضافه کردن میتوژن ConA و LPS (کنترل RPMI{11}} حاوی غلظت های متناظر از ConA یا LPS است)، غلظت نهایی هر دو 2.5 میلی گرم در لیتر و 10 میلی گرم در لیتر است. به ترتیب. سه سوراخ موازی برای درمان های مختلف ایجاد شد. صفحه کشت را به مدت 68 ساعت در انکوباتور با رطوبت 37 درجه و 5 درصد CO2 اشباع شده قرار دهید، MTT را اضافه کنید و به مدت 4 ساعت به کشت ادامه دهید. مقدار A540 نانومتر را با یک نشانگر آنزیمی با استفاده از روش MTT اندازه گیری کنید تا تکثیر را تشخیص دهید. هنگام مقایسه هر گروه، مقدار A540nm را طبق فرمول زیر به نرخ تکثیر لنفوسیت تبدیل کنید:نرخ تکثیر لنفوسیت=نمونه A شاهد × 100 درصد .

اثرات سیستانچ - بهبود ایمنی

1.4.2 اثر بر وزن اندام های ایمنی در موش های طبیعی [6,7]:

موش‌های جوان BALB c (نر، 4- هفته‌ای، با وزن بدن 10-15 گرم) به‌طور تصادفی به گروه شاهد (سالین) و گروه‌های دوز مختلف (125 میلی‌گرم (کیلوگرم · وزن بدن) تقسیم شدند. و 250 میلی گرم (کیلوگرم وزن بدن))، با 11 موش در هر گروه. این دارو یک بار در روز به مدت 7 روز متوالی به صورت داخل صفاقی تجویز شد. موش ها پس از دررفتگی دهانه رحم کشته شدند. طحال و تیموس گرفته شد، بافت چربی و فاسیا برداشته شد و مایع سطحی با کاغذ صافی خشک شد. پس از توزین، شاخص طحال=100 × وزن طحال (میلی گرم) وزن بدن (میلی گرم); شاخص تیموس=100 × وزن آویشن (میلی گرم) وزن بدن (میلی گرم) شاخص طحال و شاخص تیموس را به ترتیب برای هر 100 میلی گرم وزن بدن محاسبه کنید.

1.4.3 اثر بر وزن اندام ایمنی در موش های دارای نقص ایمنی [7,8]:

موش های صحرایی جوان BALB c (نر، 6 هفته، وزن بدن 15-20 گرم) به طور تصادفی بر اساس وزن بدن به 12 گروه تقسیم شدند. به جز گروه کنترل نرمال (تزریق داخل صفاقی حجم معادل فیزیولوژیک فیزیولوژیک)، به سایر گروه ها Cy 50 میلی گرم (کیلوگرم وزن بدن) روزانه به صورت داخل صفاقی تزریق شد و محلول داروی مورد آزمایش به صورت داخل صفاقی [125 و 250 میلی گرم (کیلوگرم · وزن بدن) تزریق شد. bw)]، به گروه کنترل نرمال و گروه مدل، به مدت 13 روز متوالی، یک بار در روز، همان حجم سالین فیزیولوژیک داده شد. تغییرات وزن حیوان در طول آزمایش مشاهده شد. 24 ساعت پس از آخرین تزریق، شاخص های طحال و تیموس با همان روش 1.4.2 اندازه گیری و محاسبه شد.

1.4.4 تأثیر بر فعالیت IL-2:

① القای IL-2 [9]: به ​​هر چاهک در 96-صفحه سلولی چاهی 50 میکرولیتر غلظت‌های مختلف اضافه کنید.پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولا(غلظت های نهایی به ترتیب: 91/3، 82/7، 63/15، 25/31، 5/62، 125 میلی گرم در لیتر، 50 میلی گرم در لیتر به محیط کشت چاهک کنترل μ L) و 50 میکرولیتر ConA (غلظت نهایی 5 میلی گرم در لیتر)، اضافه کنید. 1 عدد بیشتر در هر چاه × 106 سلول طحال. به مدت 24 ساعت در انکوباتور با رطوبت 37 درجه و 5 درصد CO2 اشباع شده انکوبه کنید، به مدت 20 دقیقه در 2500 rmin سانتریفیوژ کنید و مایع رویی سلول را بردارید و در دمای - 20 درجه برای آماده به کار نگهداری کنید. ② تشخیص فعالیت IL-2 [9،10]: روش اصلی مبتنی بر ادبیات [9] است و تنظیمات مناسب مطابق با ادبیات [10] انجام می‌شود. تهیه مرسوم سوسپانسیون تیموسیت موش BALB c، پلیت کشت سلولی 96 چاهک، 1 تلقیح در هر چاه × 106 تیموسیت، با افزودن 50 سلول در چاهک μ L ConA (غلظت نهایی 2.5 میلی گرم در لیتر) و سپس IL آماده شده را اضافه کنید{34 }} مایع رویی 50 میکرولیتر (50 به محلول کشت میکرولیتر سوراخ شاهد خالی اضافه کنید)، با هم به مدت 54 ساعت انکوبه کنید، MTT را اضافه کنید، انکوباسیون را به مدت 4 ساعت ادامه دهید، 10 تا 15 دقیقه در 1000 rmin سانتریفیوژ کنید، مایع رویی را دور بریزید. و DMSO 100 را در هر چاه میکرولیتر اضافه کنید، با میکرو اسیلاتور به مدت 8 دقیقه تکان دهید و مقدار A540 نانومتر را با نشانگر آنزیمی اندازه گیری کنید.

1.5 تجزیه و تحلیل آماری

داده ها به صورت میانگین و انحراف معیار (x ± s) بیان شد. برای جمع‌آوری داده‌ها از نرم‌افزار Microsoft Excel استفاده شد و آزمون t انجام شد. پ<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. نتایج

2.1 تأثیر بر تکثیر لنفوسیت ها

همانطور که از جدول 1 مشاهده می شود، افزودنپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولادر محیط کشت لنفوسیت های طحال موش کشت شده در شرایط آزمایشگاهی با غلظت بالای 25 میلی گرم در لیتر می تواند به طور قابل توجهی تکثیر لنفوسیت ها را تحریک کند، که نشان می دهد کهپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاخود اثر میتوزی دارد. همزمان،از جدول 2 و جدول 3 می توان مشاهده کرد که CDPS اثر تقویت کننده قابل توجهی بر تکثیر لنفوسیت های T ناشی از ConA یا لنفوسیت های B القا شده با LPS دارد..

Tab.1 تأثیرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولادر مورد تکثیر لنفوسیت های غیرفعال (x ±s، n =3)

توجه: در مقایسه با گروه کنترل،＊P <0.05. 

Tab.2 تأثیرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولادر مورد تکثیر لنفوسیت های القا شده توسط ConA (x ±s، n =3)

توجه: در مقایسه با گروه ConA،＊P <0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 تأثیرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولادر مورد تکثیر لنفوسیت های القا شده توسط LPS (x ±s، n =3)

توجه: در مقایسه با گروه LPS،＊P <0.05 , ＊＊P <0.01. 

2.2 تأثیر بر وزن اندام های ایمنی در موش های طبیعی

همانطور که از جدول 4 مشاهده می شود،پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولامی تواند به طور قابل توجهی شاخص طحال را در موش های صحرایی جوان BALB c طبیعی افزایش دهد اما تأثیری بر غده تیموس ندارد.

2.3 اثر بر وزن اندام ایمنی در موش های دارای نقص ایمنی

از جدول 5،مشاهده می شود که شاخص های طحال و اندام تیموس در موش های گروه سرکوب کننده سیستم ایمنی Cy کمتر از گروه کنترل است.پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولا(125، 250 میلی گرم بر کیلوگرم) می تواند به طور قابل توجهی شاخص های طحال و تیموس را بهبود بخشد.

2.4 تأثیر بر فعالیت IL-2

همانطور که از جدول 6 مشاهده می شود،زمانی که دوز ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابه 7.82 میلی گرم در لیتر می رسد، می تواند به طور قابل توجهی آزادسازی IL{2}} را از سلول های طحال موش افزایش دهد.

Tab.4 اثرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابر وزن اندام های ایمنی در موش های طبیعی (x ±s، n =11)

توجه: در مقایسه با گروه کنترل،＊＊P <0.01.

Tab.5 اثرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابر وزن اندام‌های ایمنی در موش‌های مبتلا به نقص ایمنی (x ±s، n =12)

توجه: در مقایسه با گروه کنترل،## P <0.01;compared with the model group , ＊＊P <0.01.

Tab.6 تأثیرپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاروی تولید IL-2 توسط لنفوسیت های طحال در موش (x ±s، n =3)

توجه: در مقایسه با گروه کنترل،＊＊P <0.01. 

3. بحث

تکثیر لنفوسیت طحال ناشی از ConA و LPS در موش یک آزمایش آزمایشگاهی برای تشخیص عملکرد لنفوسیت های T و B است و یک شاخص مهم از توانایی ایمنی خاص است. مطالعات نشان داده است که زمانی که غلظت نهایی ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولابالای 25 میلی گرم در لیتر است، می تواند به طور قابل توجهی تکثیر لنفوسیت ها را تقویت کند، که نشان می دهد اثر میتوزی خاصی دارد. در حضور میتوژن (ConA یا LPS)، دوز کمتری ازپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولامی تواند ایمنی بدن را بهبود بخشد، فعالیت پرولیفراتیو قابل توجهی را نشان دهد. می دانیم که ConA و LPS به ترتیب به طور عمده باعث تکثیر لنفوسیت های T یا لنفوسیت های B می شوند. مطالعات نشان داده استفواید سلامت پودر سیستانچ: پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولامی تواند هم تکثیر لنفوسیت های T و هم تکثیر لنفوسیت های B را افزایش دهد، اما اثر تکثیری آن بر روی لنفوسیت های B به طور قابل توجهی قوی تر از لنفوسیت های T است.

فواید سلامت پودر سیستانچ-Immprovایمنی

برای مشاهده محصولات Cistanche Immprove Immunity اینجا را کلیک کنید

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

تیموس و طحال اعضای اصلی ایمنی در حیوانات هستند. سلول های ایمنی در طحال عمدتاً لنفوسیت های B بالغ هستند، در حالی که تیموس عمدتاً لنفوسیت های T نابالغ هستند. شاخص های آویشن و طحال می توانند منعکس کننده رشد اندام های ایمنی و وضعیت عملکردی سلول های ایمنی باشند. تزریق داخل صفاقی پلی ساکارید Cistanche deserticola می تواند به طور قابل توجهی شاخص طحال موش های سالم و سرکوب شده سیستم ایمنی را افزایش دهد و اثر آنتاگونیستی قابل توجهی بر آتروفی تیموس ناشی از Cy در موش دارد.پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاتأثیر قابل توجهی بر شاخص تیموس در حیوانات عادی ندارد که با نتایج آزمایشات آزمایشگاهی که در آن ها مطابقت دارد.پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاتکثیر لنفوسیت های B را به جای لنفوسیت های T ترویج می کند.

Cمکمل istanche در نزدیکی من - بهبودمصونیت

IL{0}} یک سیتوکین است که توسط لنفوسیت های T از فاز G1 چرخه سلولی تا فاز S تولید می شود. این یک فاکتور اصلی رشد سلول T است که به عنوان یک فاکتور رشد اتوکرین عمل می کند. علاوه بر این، IL{2}} می‌تواند تکثیر سلول‌های B و سنتز آنتی‌بادی را تقویت کند [11،12].پلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاآزادسازی IL-2 را از لنفوسیت‌ها ترویج می‌کند، که آشکارا مربوط به آن استپلی ساکارید سیستانش دسرتیکولاترویج تکثیر لنفوسیت های طحال.

تحقیقات پزشکی نشان می دهد که سیستانچ حاوی پلی ساکارید است،Echinacosides و Acteoside، که می تواند لنفوسیت ها را فعال کند و iتقویت ایمنی بدنy; اجزای عملکردی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ تأثیر قابل توجهی بر بازیابی سلولی پس از آسیب اشعه گاما 60 Co دارند و همچنین می توانند عملکرد ایمنی را در برابر آسیب تشعشع بهبود بخشند.مصرف روزانه مکمل سیستانچ دسرتیکولا می تواند به اثر بهبود ایمنی دست یابد.

Cمکمل istanche نزدیک من - ایمنی را بهبود بخشد

ارجاع

[1] Schepetkin IA، Quinn MT. پلی ساکاریدهای گیاهی: ماکروفاژها تعدیل ایمنی و پتانسیل درمانی [J]. Int Immunopharmacol، 2006، 6(3):317-333.

[2] هی وی، شو شیائوفن، زونگ گویژن، و همکاران. بررسی اثرات گیاه سیستانش دسرتیکولا بر تقویت کلیه و تقویت یانگ قبل و بعد از فرآوری [J]. مجله چینی داروسازی، 1996، 21 (9): 534-537

[3] وانگ شیانگیان، چی یون، کای رانلان، و همکاران. فعال سازی ماکروفاژی پلی ساکاریدهای Cistanche deserticola [J]. بولتن دارویی چینی، 2009، 25 (6): 421-424

[4] Zeng Qunli، Zheng Yifan، Lv Zhiliang. فعالیت ایمونولوژیکی و مکانیسم پلی ساکارید Cistanche deserticola [J]. مجله دانشگاه ژجیانگ (نسخه پزشکی)، 2002، 31 (4): 284-287

[5] خو شویون، بیان رولیان، چن شیو. روش شناسی تجربی فارماکولوژیکی [M]. ویرایش سوم، پکن: انتشارات سلامت مردم، 2002، 1427-1428

[6] ژانگ زو، ژانگ گورونگ، چه وی، و همکاران. اثر کلاژن پلی پپتید کروم (Ⅲ) کلات بر ایمنی موش دیابتی [J]. مجله چینی حیوانات تجربی، 2008، 16 (1): 10-14

[7] چن چی. روش تحقیق فارماکولوژیک طب سنتی چینی [M]. چاپ اول. پکن: انتشارات سلامت مردم، 1993: 779

[8] Guo Jing، Xu Jianning، Wang Quankai، و همکاران. تأثیر عصاره سویا (CKBN) بر عملکرد سیستم ایمنی در موش‌های با نقص ایمنی [J]. مجله چینی طب تطبیقی، 2008، 18 (12): 45-49

[9] خو شویون، بیان رولیان، چن شیو. روش شناسی تجربی فارماکولوژیکی [M]. چاپ سوم، پکن: انتشارات سلامت مردم، 2002: 1440-1441

[10] ژو دائوونگ، شن یوانشان، ژائو مانرویی. روشی جدید برای تعیین تبدیل لنفوسیت و فعالیت اینترلوکین 2 موش - آنالیز رنگ سنجی MTT [J]. مجله ایمونولوژی چینی، 1986، 2 (1): 39-43

[11] Wang MQ، Guilbert LJ، Li J، و همکاران یک عصاره اختصاصی از جینسنگ آمریکای شمالی (Panax quiquefolium) تولیدات IL-2 و IFN- را در سلول‌های طحال موش القا شده توسط Con-A [J] افزایش می‌دهد. Int Immunopharmacol، 2002، 4(2):311-315.

[12] Tingjun H، Rongliang Z. ترویج پلی ساکارید sophora subprosrate در تولید اکسید نیتریک و اینترلوکین-2 در لنفوسیت های T موش: Ca2 plus و پروتئین کیناز C [J].Int Immunopharmacol, 2004, 4(1):109-118.