اثر فنلتانول گليکوزيدها بر عامل رشد دگرگون کننده - مسير سيگنالینگ P1/Smads در فيبروبلاست های اسکار هایپرتروفیک انسانی

اثر گليکوزيدهای فنيليلتانوئيدی بر عامل رشد دگرگون کننده - مسير سيگنال p1/Smads در فيبروبلاست های اسکار هایپرتروفیک انسان

برای اطلاعات بیشتر information:Ali.ma@wecistanche.com

[چکیده]هدف بر اساس عامل رشد دگرگون کننده - pl (TGF - pl)/Smads مسیر سیگنالینگ برای بررسی اثراتگلیکوسایدهای فنایلتانوئیدازسیستانچه توبولوسا(CPhGs) بر روی فیبروباست اسکار هیپرتروفیزیک انسان (HSFbs) و مکانیسم ممکن است. روش ها از مارس تا ژوئن 2019، 9 بیمار مبتلا به اسکار هیپرتروفیزیک پس از بستری شدن بام. فیبروباست ها از زخم هایپرتروفیزیک جدا شدند و کشت شدند. زخم های هیپرتروفیزیک انسان برداشته شد و فیبروبلاست ها در آزمایشگاهی کشت داده شدند. گروه خالی، گروه مدل، گروه کنترل مثبت (TGF - pl + 5 - fluorouracil) و گروه تجربی (TGF - pl + CPhGs) راه اندازی شدند. اثراتگلیکوسایدهای فنایلتانوئیدازسیستانچه توبولوسادر غلظت های مختلف بر روی تکثیر HSFbs توسط کیت شمارش سلول - 8 (CCK - 8) assay تشخیص داده شد. بیان Smad2، Smad3، Smad7، کلاژن I (COL -1) و کلاژن HI (COL -3) mRNA توسط رونویسی معکوس کمی زمان واقعی - واکنش زنجیره ای پلیمراز (RT - qPCR) در هر گروه شناسایی شد. بیان Smad2، Smad3، phosphorylated Smad2 (p - Smad2)، Sad3 فسفریلاته (p - Smad3)، Smad7، COL -1 و COL - 3 پروتئین ها توسط وسترن بلاتینگ شناسایی شد. داده های اندازه گيری به عنوان ميانگين ± انحراف استاندارد (ميانگين انحراف ± شدند. چند گروه با استفاده از ANOVA يک طرفه مقايسه شدند. يافته ها: نتايج مهار فيبروبلاست ها پس از درمان با CPhGs در 60 ، 90، و 120 میلی گرم در L برای 48 ساعت بود (36.87 ±0.06)٪ در مقابل (43.52 ±0.04)٪ در مقابل (78.11 ±0.03)٪ ، ارزش F =45.070، P<0.01. the="" inhibitory="" effects="" of="" cphgs="" on="" fibroblasts="" increased="" with="" the="" increase="" of="" drug="" concentration="" and="" the="" prolonga­tion="" of="" action="" time.="" rt="" -="" qpcr="" results="" showed="" that="" as="" compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" expression="" of="" col="" -1,="" col="" -="" 3,="" smad2,="" smad3="" mrna="" was="" reduced,="" and="" the="" expression="" of="" smad7="" mrna="" was="" in­creased="" in="" the="" experimental="" and="" positive="" control="" groups="" (0.21="" ±="" 0.04="" vs.="" 0.3="" ±0.25="" vs.="" 1.56="" ±="" 0.01,="" f="" value="39.755,"><0.01), (0.55="" ±0.04="" vs.="" 0.27="" ±0.04="" vs.="" 1.66="" ±0.22,="" f="" value="61.991,">< 0.01),="" (0.55="" ±0.03="" vs.="" 0.78="" ±0.76="" vs.="" 1.06="" ±0.15,="" f="" value="17.769,"><0.01), (0.46="" ±0.08="" vs.="" 0.55="" ±="" 0.10="" vs.="" 2.05="" ±="" 0.29,="" f="" value="56.796," p="">< 0.01),="" (1.77="" ±="" 0.59="" vs.="" 0.11="" ±="" 0.02="">

0.04 ± 0.04, ارزش F = 14.780, P< 0.05)="" ；="" western="" blotting="" results="" showed="" that="" the="" protein="" expression="" of="" p-smad2="" and="" p="" -smad3,="" col="" -="" 1,="" col="" -3,="" in="" the="" experimental="" group="" and="" positive="" control="" group="" was="" significantly="" lower="" than="" that="" in="" the="" model="" group,="" and="" the="" expression="" of="" smad7="" protein="" was="" significantly="" high­er="" than="" that="" in="" the="" model="" group="" (0.="" 16="" ±="" 0.03="" vs.="" 0.="" 11="" ±="" 0.02="" vs.="" 0.06="" ±="" 0.00),="" (0.="" 12="" ±="" 0.02="">

0.07 ± 0.01 در مقابل 0.04 ±0.01, ارزش F =7.670, P< 0.05),="" (0.12="" ±0.03="" vs.="" 0.15="" ±0.06="" vs.="" 0.23="" 土="" 0.05,="" f="" value="3.936,"><0.05), (0.27="" ±0.02="" vs.="" 0.08="" ±0.01="" vs.="" 0.05="" ±0.04,="" f="" value="34.291," p="">< 0.01),="" (0.33="" ±0.02="" vs.="" 0.16="" ±0.02="" vs.="" 0.17="" ±0.01="" f="" value="16.322,"><0.01). conclusion="" cphg="" inhibited="" hypertrophic="" scar="" fibroblasts="" proliferation="" and="" activation="" via="" blocking="" the="" tgf="" -="" pl/smad="">

[کلمات کلیدی] گلیکوسایدهای فنلتانوئیدازسیستانچه توبولوسا； Hypertrophic scar fibroblasts; Transforming growth factor - pl/Smads signaling pathway

کلیک کنید به cistanche deserticola ما و محصولات Cistanche

زخم هایپرتروفیزیک (HS) یک بیماری فیبروتیک پوست است که با تکثیر بیش از حد فیبروبلاست ها (FBS) مشخص می شود، و همچنین رسوب ماتریکسی خارج سلولی (ECM) که سلول های فعال کننده اصلی برای تشکیل اسکار هستند، می توانند مقادیر زیادی کلاژن ترشح کنند، و عامل رشد دگرگون کننده (TGF) - P / Smads مسیر سیگنالینگ ارتباط نزدیکی با تشکیل HS دارد.سیستانچهطب سنتی مقوی سنتی چینی است، که عصاره آن فنیلتانوئید استیک اسید مجموع (cphgs) یکی از مواد اصلی اعمال اثرات دارویی و داشتن توابع بیولوژیکی مختلف مانند ضد التهاب است، ضد تومور، ضد تشعشعات، روبنده رادیکال آزاد و غیره مطالعات نشان داده اند که cphgs می تواند تکثیر سلول های استلاتی هپاتیک را مهار کند، و این کار را می تواند با کاهش بیان Smad2 انجام دهد، Smad3, افزایش بیان Smad7 در نتیجه مسدود tgf - p / Smads سیگنالینگ انتقال مسیر و سپس پیشرفت فیبروز کبد به تاخیر افتاد. هدف از این مطالعه، مشاهده اثرات آن بر بیان ژن ها و پروتئین های مرتبط با فیبروبلاست های اسکار هیپرتروفیزیک انسانی (hsfbs) بر اساس مسیر سیگنالینگ TGF PL / Smad بود.

مواد و روش ها

1. مواد:سیستانچهcphgs از شرکت بیوتک دارویی hechen خریداری شد, Ltd., Hetian, چین; سرم گاو جنین از کلارک بیو ساینس، ایالات متحده آمریکا خریداری شد؛ سلول شمارش کیت TGF PL از pepro فن آوری خریداری شد, ایالات متحده آمریکا; کیت PCR کمی فلورسانس از شرکت تاکارا، ژاپن خریداری شد؛ کیت رونویسی معکوس همه از ترمو فیشر علمی خریداری شد, ایالات متحده آمریکا; Smad2 / 3 ، p - Smad2 / 3 آنتی بادی از فن آوری سیگنالینگ سلول خریداری شد ، ایالات متحده آمریکا ؛ آنتی بادی های Smad7، COL-1، COL-3، گلیسیرالدهید-۳-فسفات دی هیدروژناز (gap-dh) از آبام (انگلستان) خریداری شدند؛ غشای پلی وینیلیدن فلوراید (PVDF) از میلی پور ایالات متحده آمریکا خریداری شد.

2. همه موارد از گروه ارتوپدی، اولین بیمارستان وابسته به دانشگاه پزشکی سین کیانگ انتخاب شدند و سه نمونه (که همه آنها قطعا به عنوان زخم هیپرتروفیزیک توسط آسیب شناسی تشخیص داده شد) به طور تصادفی برای کشت اولیه FBS انتخاب شدند؛ این آزمایش توسط کمیته اخلاق پزشکی اولین بیمارستان وابسته به دانشگاه پزشکی سین کیانگ (شماره تایید 71-20170214) مورد تایید قرار گرفت و رضایت آگاهانه از بیماران و خانواده های آنها به دست آمد.

3. گروه بندی سلول: به طور تصادفی به گروه خالی تقسیم; گروه مدل: 5 |ug / L TGF - & 1; کنترل مثبت: 5|ug / L TGF PI + 250 میلی گرم / L 5-فلوروراسیل (5-FU); گروه تجربی: 5|ug / L TGF PL + (60 میلی گرم / L, 90 میلی گرم / l >, 120 میلی گرم / L) cphgso.

4. تکثیر سلول توسط کیت شمارش سلول (CCK-8) تعیین شد: hsfbs در مرحله رشد لگاریتمی گرفته شد، سلول از هر گروه به عنوان طراحی شده درمان شد، و ارزش جذب هر چاه از هر گروه به طور دنباله دار در طول موج 450 nm با استفاده از یک خواننده میکروپلیت در 24، 48 و 72 ساعت نظارت شد.

5. تشخیص بیان mRNA توسط RT qPCR: hsfbs از هر گروه پس از 48 ساعت مداخله جمع آوری، RNA استخراج و میزان بیان mRNA تعیین شد.

6. بیان پروتئین توسط تجزیه و تحلیل وسترن بلات تعیین شد. پروتئین سلولی کل 48 ساعت پس از درمان از هر گروه استخراج شد تا بیان هر پروتئین را تشخیص دهد.

7. روش های آماری: نرم افزار آماری SPSS 22.0 برای تجزیه و تحلیل و داده های اندازه گیری به صورت میانگین انحراف استاندارد ± (میانگین ± SD) و تجزیه و تحلیل واریانس یک طرفه برای مقایسه بین گروه های متعدد بیان شد و 05/0P< 0.05="" was="" considered="" statistically="">

نتیجه

نتایج تکثیر سلول نشان داد که 60، 90، و 120 میلی گرم / L cphgs به مدت 48 ساعت بر روی فیبروباست، نرخ مهار [(36.87 ±0.06)٪: (43.52 ±0.04)٪ :(78.11 ±0.03)٪ ،F=45.073،P< 0.01="" ],90="" mg/l="" cphgs.="" 24h-28h="" was="" [(26.29="" ±0.04)%="" :(43.52="" ±0.04)%="" :(64.11="" 土="" 0.03)%,f=""><0.01]. it="" indicated="" that="" the="" inhibition="" rate="" of="" cphgs="" on="" hsfbs="" was="" gradually="" elevated="" with="" time="" extension="" and="" increasing="" concentration,="" showing="" a="" proportional="">

مقایسه بیان CoL-I، COL-3، Smad2 و Smad3 mRNA در هر گروه: در مقایسه با گروه مدل، هر دو گروه کنترل مثبت و تجربی می توانستند عامل رشد دگرگون کننده β - القای CoL-I، COL-3، Smad2 و Smad3 mRNA را کاهش دهند و بیان mRNA Smad7 را با تفاوت های آماری معنی دار ترویج کنند. (1.56 ±0.01:0. 30 ± 0.25 : 0.21 ±0.04,F = 39. 755,P<0.01； 1.66="" ±0.="" 22="" :="" 0.="" 27="" ±0.04="" :="" 0.="" 55="" ±0.="" 04.f="61." 991="" ,p=""><0. 01；="" 1.="" 06="" ±="" 0.15="" 比="" 0.="" 78="" ±="" 0.="" 76="" 比="" 0.="" 55="" ±="" 0.="" 03,="" f="17.769" ,p=""><0.01 ；2.05="" ±="" 0.29="" :="" 0.55="" ±="" 0.10="" :="" 0.46±="" 0.08,f=""><0.01 ；0.04="" ±0.04="" :="" 0.11="" ±0.02="" :="" 1.77±0.="" 59,f="14."><0.>

مقایسه p-Smad2، p-smad3، col-l، COL-3 در هر گروه: در مقایسه با گروه خالی، بیان پروتئین p-Smad2، col-l در گروه مدل افزایش یافت، در حالی که Smad7 کاهش یافت؛ در مقایسه با گروه مدل، گروه کنترل مثبت می توانستند بیان پروتئین p-smad3، COL-1، COL-3 را پایین تنظیم کنند و گروه آزمایش اثر مهاری بر بیان پروتئین بالا p-Smad2، p-smad3، col - 3 نشان دادند. بیان COL-3 تا درجات مختلف مهار شد، در حالی که بیان اسماد۷ در دو گروه نسبتاً افزایش یافت و مقادیر بیان پروتئین p-Smad2، p-smad3، Smad7، col-l، COL-3 در گروه خالی، گروه کنترل مثبت و گروه آزمايش (09/0 ±04/0/16 ±0/03،11/0 ± 02/02،06/0 ± 0.0 00),(0.07 ±0.03,0.12 ± 0.02,0.07 ± 0.01,0. 04 ±0.01,F = 7. 670, P<0. 05),="" (0.="" 22="" ±0.05、="" 0.12="" ±0.03,0.15="" ±0.06,0.23="" ±="" 0.05,="" f="3.936,">< 0.05),(0.19="" ±0.02,0.27="" ±="" 0.02,0.08="" ±0.01,0.05="" ±="" 0.04,f=""><0.01)、(0.21 ±0.04.0.="" 33="" ±0.02、="" 0.16="" ±0.02,0.17="" ±0.01,f=""><>

بحث

HS یک نتیجه اجتناب ناپذیر از ترمیم بافت است, و مکانیسم وقوع آن عمدتا FBS hyperproliferation, تخریب ناکافی و به همین دلیل منجر به تشکیل و توسعه HS. Tgf-p1 به طور گسترده ای در بیماری های سلولی، تکثیر غیرطبیعی بافتی و تماجیع نقش دارد و در سراسر بهبود زخم ادامه دارد؛ این اعمال اثرات خود را عمدتا از طریق tgf - p / Smads مسیر سیگنالینگ ، که در آن فسفریلاسیون از Smad2 / 3 پروتئین منجر به افزایش بیان پروتئین های فیبرو فیبری داخل سلولی و خارج سلولی ، ترویج تولید کلاژن ، و تسریع پیشرفت فیبروز ؛ Smad7، به عنوان یک تنظیم کننده منفی، ممکن است این مسیر را از طریق تعامل با گیرنده های فعال tgf-p1 جلوگیری کند و در نتیجه سنتز فیبر کلاژن را کاهش دهد؛ بنابراین یا افزایش بیان Smad7 و یا مهار Smad2 / 3 بیان می تواند توسعه اسکار هیپرتروفی جلوگیری کند.

این مطالعه cphgs Cistanche به HS، یک بیماری فیبروتیک پوست، و متوجه شد که دوزیست های مختلف cphgs مهار تکثیر hsfbs ناشی از tgf-p1؛ همچنین cphgs 90m & / L با ترویج بیان Smad7 و کاهش بیان Smad2 / 3 در هر دو سطح بیان ژن و پروتئین، سیگنالینگ مسیر را مهار کرد و تولید CoL-I، COL-3 را کاهش داد که به نوبه خود پیشرفت HS را مهار کرد. نتایج ما تایید کرد که cphgs تولید کلاژن را با مداخله در بیان پروتئین های مربوط به tgf-p / Smads مسیر سیگنالینگ تحت تحریک tgf-p1 مهار کرد. نتایج مطالعه حاضر نشان داد که cphgs Cistanche مانع تکثیر و به طور موثر کاهش ترشح کلاژن فیبروبلاست اسکار هیپرتروفی از طریق مسیر سیگنالینگ tgf-p / Smads.