تأثیر چهار عصاره گیاهی چینی بر سلول‌های سرطان ریه سلول‌های کوچک حساس به دارو و مقاوم به چند دارو

دیوید صداواجولی آن می ژان Mei-Lin Pangجین دینگسوزان ای. کین

هدف چکیده:ما فارماکولوژی، زیست‌شناسی سلولی و زیست‌شناسی مولکولی سلول‌های کارسینومای سلول کوچک ریه را که با چهار عصارهداروهای گیاهی چینی. بسیاری از بیماران سرطانی این داروها را مصرف می کنند، اما اثرات آنها در سطح سلولی تا حد زیادی ناشناخته است. ما به ویژه به اثرات بر روی سلول های مقاوم به دارو علاقه مند بودیم، زیرا مقاومت یک مشکل بالینی مهم درسرطان ریهr روش‌ها: سلول‌های حساس به دارو (H69)، مقاوم به چند دارو (H69VP) و سلول‌های اپیتلیال ریه طبیعی (BEAS{5}}) در معرض عصاره‌های دو گیاه مورد استفاده در طب گیاهی چینی قرار گرفتند.سرطان ریه: Glycyrrhiza glabra (GLYC) و Olenandria difusa (OLEN) و به عصاره دو ترکیب تجاری موجود ازداروهای گیاهی چینی، SPES (15 گیاه) و PC-SPES (8 گیاه). سمیت سلولی بر حسب مهار رشد سلولی (IC50) اندازه گیری شد. سینتیک قطعه قطعه شدن DNA پس از قرار گرفتن در معرض عصاره های گیاهی با برچسب گذاری BudR و سپس ELISA اندازه گیری شد. آپوپتوز با روش TUNEL و سپس فلوسایتومتری اندازه گیری شد. بیان ژن‌های مربوط به آپوپتوز و چرخه سلولی با رونویسی معکوس mRNA و سپس هیبریداسیون فیلتر به آرایه‌های پروب و تشخیص با نورتابی شیمیایی اندازه‌گیری شد. یافته‌ها: در هر مورد، چهار عصاره گیاهی به طور مساوی نسبت به H69 و H69VP و کمتر برای BEAS سمیت سلولی داشتند. هر چهار عصاره تکه تکه شدن DNA در سلول های سرطان ریه را القا کردند. سینتیک قطعات DNA را نشان داد که در محیط کشت (نشانه نکروز) در کشت های در معرض GLYC، اما در داخل سلول ها (نشانه آپوپتوز) در کشت های در معرض OLEN-، SPES- و PC-SPES منتشر شد. تجزیه و تحلیل TUNEL تأیید کرد که قرار گرفتن در معرض سه عصاره اخیر، اما نه با GLYC، منجر به آپوپتوز می شود. در مقایسه با سلول‌های تیمار نشده و تیمار شده با GLYC، سلول‌های H69 و H69VP تیمار شده با OLEN، SPES و PC-SPES بیان بالایی از تعدادی از ژن‌های دخیل در آبشار آپوپتوز را نشان دادند، مشابه سلول‌های تیمار شده با اتوپوزید و وین کریستین.

نتیجه:راداروی گیاهی چینیعصاره های OLEN، SPES و PC-SPES هم نسبت به دارو مقاوم و هم حساس به دارو سیتوتوکسیک هستند.سرطان ریهسلول‌ها، ویژگی‌های سلولی تومور را در مقایسه با تأثیرشان بر سلول‌های طبیعی نشان می‌دهند، و همانطور که با شکست‌های DNA و بیان ژن اندازه‌گیری می‌شوند، پرواپوپتوز هستند. واکنش سلول های تومور به این عصاره ها مشابه واکنش آنها به داروهای شیمی درمانی معمولی بود.

سیستانچ، یک گرانبهاداروی گیاهی چینی، دارای اثر افزایش ایمنی وسرطان ریه. سیستانچ سابقه طولانی در استفاده دارویی دارد. اولین بار در "شن نونگ ماتریا مدیکا" ضبط شد. شنونگ طعم انواع گیاهان را میل کرد. اثر و نقش سیستانچ در تقویت کلیه و اسانس تغذیه کننده، رفع خستگی، مرطوب کننده روده ها و اجابت مزاج، تغذیه کننده یانگ و تغذیه کننده یین و ... قابل توجه است، بنابراین در کتاب ثبت شد. در دوران پس از سلسله تانگ، سیستانچ به عنوان یکی از 9 نوع چمن پری چینی ثبت شد. تحقیقات مدرن در مورد آن بیش از 60 سال است که انجام شده است. ، ضد پیری، به تقویت حافظه و ایمنی و غیره کمک می کند.

کلید واژه ها:سرطان ریهمقاومت داروییداروهای گیاهی چینی,سیستانچ

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com

مقدمه

سلول کوچکسرطان ریه(SCLC) حدود 20 درصد از کل را تشکیل می دهدسرطان های ریهو تهاجمی است، با نرخ بقای 5-ساله در تشخیص کمتر از 10 درصد [19]. بیماران معمولاً با بیماری منتشر مراجعه می کنند، و بنابراین درمان با شیمی درمانی، با ترکیباتی که معمولاً شامل سیس پلاتین، اتوپوزید، دوکسوروبیسین، 5-فلوراوراسیل و تاکسول است [12] است. متأسفانه، این درمان در نهایت بی اثر می شود زیرا اکثر تومورهای SCLC مقاومت چند دارویی ایجاد می کنند [18]. از آنجایی که مکانیسم های مقاومت زیادی وجود دارد [15]، غلبه بر مقاومت یک چالش بالینی اصلی است.

در مواجهه با مراقبت های تسکینی، بسیاری از بیماران سرطانی از داروهای جایگزین، از جمله درمان های گیاهی استفاده می کنند [6، 23]. در میان این درمان‌ها، طب سنتی چینی احتمالاً بهترین تثبیت و مدون است که قدمت چندین هزار ساله دارد. اساس نظری این سیستم پزشکی به نیروهای متضاد یین و یانگ، چرخه های زایشی و مخرب و نیروی حیات یا چی مربوط می شود [2]. عصاره‌های گیاهی و ترکیبات خاصی برای درمان بیماری‌های خاص از جمله سرطان ابداع شده‌اند [11، 27]. اگرچه برخی شواهد تجربی وجود دارد که نشان می‌دهد این گیاهان در درمان سرطان مؤثر هستند، مکانیسم اثر آنها در سطح سلولی تا حد زیادی ناشناخته است. اگر بیماران استفاده خود را با شیمی درمانی معمولی ترکیب کنند، این اهمیت بیشتری پیدا می کند. همچنین اثرات عصاره های گیاهی بر مقاومت دارویی گزارش نشده است.

ما اثرات چهار مورد را بررسی کردیمداروهای گیاهی چینیروی سه رده سلولی: SCLC، SCLC مقاوم به چند دارو و اپیتلیوم ریه طبیعی. دو تا از چهار عصاره از گیاهان منفرد بودند که اغلب برای سرطان ریه تجویز می‌شدند، گلیسیریزا گلابرا (GLYC) و Olenandria diffusa (OLEN). دو مورد دیگر از ترکیبات تجاری موجود از گیاهان به نام SPES و PC-SPES بودند. OLEN (نام چینی Bai Hua she cao) دارای فعالیت های ضد توموری، ضد جهش زایی و تحریک کننده سیستم ایمنی است [1، 25، 29]. GLYC (نام چینی gan car) ضد التهاب، ضد تومور و ضد جهش زا است [7، 11]. SPES، توسعه یافته توسط BotanicLabs (Brea، کالیفرنیا)، به شکل کپسول حاوی عصاره لیوفیلیزه 15 گیاه چینی است و نشان داده شده است که درد را در بیماران مبتلا به سرطان های پیشرفته کاهش می دهد [14]. از جمله گیاهان موجود در SPES محرک سیستم ایمنی استسیستانچdeserticola، عامل ضد تومور Rabdosia rubescens، و عامل ضد التهابی Zanthoxylum iridium [1، 11]. PC- SPES که توسط BotanicLabs نیز تهیه شده است، حاوی هشت گیاه از جمله آنتی آندروژنیک Serenoa repens که از هیپرپلازی پروستات جلوگیری می کند [21]، مهارکننده پروتئین کیناز C Scutellaria baicalensis [13]، عامل ضد تومور Panax ginseng [30] و Glybrarrhi (Glybrarrhi) می باشد. بالا را ببین). در حالی که شواهد دقیقی برای اثربخشی بالینی ضد تومور GLYC، OLEN و SPES وجود ندارد، شواهدی برای اثربخشی PC-SPES وجود دارد. هم در سلول های سرطانی پروستات و هم در مدل های حیوانی، PC-SPES پرواپوپتوتیک و سیتوتوکسیک است [8، 9، 10، 28]. کارآزمایی‌های بالینی نشان داده‌اند که در کاهش سطوح آنتی ژن اختصاصی پروستات و توقف رشد تومور در سرطان پروستات وابسته به آندروژن و مستقل از آندروژن مؤثر است [4، 5، 17، 20، 26].

اگرچه بیماران سرطانی بدون شک از عصاره های گیاهی استفاده می کنند، اطلاعات بالینی یا بالینی کمی در مورد اثرات این عصاره ها بر SCLC وجود دارد. هدف ما شروع این تجزیه و تحلیل با بررسی فارماکولوژی (سمیت سلولی)، زیست شناسی سلولی (روش مرگ سلولی)، و زیست شناسی مولکولی (بیان ژن) در سلول های SCLC حساس به دارو و مقاوم به دارو بود.

مواد و روش ها

عصاره ها و مواد شیمیایی

GLYC و OLEN به عنوان گیاهان خشک شده از گروه پزشکی Jen-On (Monterey Park، کالیفرنیا) به دست آمد. برای تهیه عصاره، 0.5 گرم با هاون و هاون به پودر ریز آسیاب شد و در 30 میلی لیتر آب مقطر معلق شد. در طب چینی، عصاره های گیاهی را پس از حرارت دادن به عنوان چای مصرف می کنند. بنابراین سوسپانسیون با تکان دادن در دمای 70 درجه به مدت 18 ساعت انکوبه شد. پس از سانتریفیوژ در 1500 گرم به مدت 10 دقیقه، مایع رویی با فیلتر کردن از طریق یک فیلتر 0.{9}}lm با استفاده از یک سرنگ استریل شد. عصاره به دست آمده با آب مقطر تا 17 میلی گرم بر میلی لیتر بر اساس ماده گیاهی اصلی تنظیم شد. عصاره ها تا زمان مصرف در دمای 4 درجه تا 1 هفته نگهداری شدند.

SPES و PC-SPES از BotanicLabs (Brea، Calif.) به عنوان کپسول به دست آمد. روش استخراج مورد استفاده در مطالعات قبلی این فرآورده ها مورد استفاده قرار گرفته است [8، 9، 10]. محتویات یک کپسول (320 میلی گرم) در 1 میلی لیتر اتانول 95 درصد حل شد و سوسپانسیون با تکان دادن در دمای 37 درجه به مدت 1 ساعت انکوبه شد. پس از سانتریفیوژ در 3000 گرم به مدت 10 دقیقه، مایع رویی مانند بالا فیلتر شد. غلظت نهایی 300 میلی گرم بر میلی لیتر بر اساس ماده گیاهی اصلی بود. عصاره ها تا زمان استفاده در دمای 20- درجه تا 1 هفته نگهداری شدند.

کشت سلولی و اندازه گیری سمیت سلولی

سلول های NCI-H69 SCLC در دمای 37 درجه در اتمسفر حاوی 5 درصد CO2 به عنوان سوسپانسیون در محیط بدون سرم AIM-V (Life Technologies، Grand Island، NY) رشد کردند. یک رده سلولی مقاوم به چند دارو (H69VP) انتخاب شده در اتوپوزید [16] نیز در AIM-V رشد کرد و مقاومت متقاطع به اتوپوزید ({12}} برابر)، دوکسوروبیسین (20- برابر) و وین کریستین نشان داد. (10-fold) (داده‌ها نشان داده نمی‌شوند). این سلول ها مکانیسم های متعددی برای مقاومت دارویی دارند، از جمله تغییرات در توپوایزومراز II و بیان پمپ های غشایی، MDR1 و MRP. سلول‌های اپیتلیال ریه طبیعی BEAS [22] در DMEM-F12 همراه با 10 درصد سرم جنین گاوی رشد کردند.

برای آزمایش سمیت سلولی، عصاره‌ها همانطور که نشان داده شد به سلول‌های در حال رشد لگاریتمی در کشت‌های 1- میلی‌لیتری حاوی 6000 سلول در میلی‌لیتر اضافه شدند. پس از 4 روز مواجهه مداوم، سلول ها در شمارنده Coulter Z{3}} شمارش شدند. پس از رنگ آمیزی با تریپان بلو، شمارش به صورت میکروسکوپی توسط هموسیتومتر تایید شد. تمام آزمایش ها در سه تکرار انجام شد و حداقل سه بار تکرار شد. مقادیر IC50 که به‌عنوان غلظت عصاره‌ای که تعداد سلول‌ها را در روز چهارم به میزان 50 درصد کاهش داده بود، در مقایسه با کنترل‌های حلال محاسبه شد. میانگین مقادیر با استفاده از ANOVA برای سه رده سلولی آن عصاره محاسبه و مقایسه شد.

سنجش مرگ سلولی

مکانیسم سمیت سلولی توسط سینتیک تکه تکه شدن DNA سلولی (کیت Boehringer-Mannheim، Indianapolis، Ind.) مورد بررسی قرار گرفت. به طور خلاصه، 105·5 سلول در میلی لیتر به مدت 16 ساعت در دمای 37 درجه در اتمسفر حاوی 5 درصد CO2 در محیط AIM-V حاوی 10 لیتر مولار BudR انکوبه شدند. سلول ها شسته و مجدداً با غلظت 105 در میلی لیتر در محیط بدون BudR معلق شدند و 200 لیتر از این کشت با عصاره گیاهی در دمای 2·IC50 برای مدت زمان مشخص شده انکوبه شد و پس از آن 100 لیتر از محیط کشت برای تعیین کمیت DNA برداشته شد. قطعات توسط الایزا این معیاری برای نکروز سلولی است. قطعات DNA درون سلول ها، تولید شده توسط آپوپتوز، پس از لیز سلولی در آلبومین سرم گاوی (BSA) / Tween 20 در دمای 21 درجه به مدت 30 دقیقه اندازه گیری شد. پس از سانتریفیوژ، لیزات برای الایزا استفاده شد.

الایزا در یک صفحه میکروتیتر ته گرد پوشیده شده با آنتی بادی ضد DNA (موش موش ضد DNA مونوکلونال، کلون MCA{3}}) در دمای 4 درجه یک شب انجام شد. پس از مسدود شدن با BSA، محلول قطعه DNA نشاندار شده 100 لیتری به چاهک های پوشش داده شده اضافه شد و سپس به مدت 90 دقیقه در دمای 21 درجه انکوباسیون شد. DNA با تابش مایکروویو در 500 W به مدت 5 دقیقه ثابت و دناتوره شد. موش anti-BudR (مونوکلونال موش BMG 6HB) کونژوگه با پراکسیداز اضافه شد و پس از انکوباسیون در تاریکی به مدت 120 دقیقه در دمای 21 درجه، واکنش با افزودن 500 لیتر H2SO4 غلیظ متوقف شد. رنگ حاصل با جذب در 450 نانومتر اندازه‌گیری شد. نمونه های تیمار شده با عصاره به عنوان پس زمینه با کنترل های تیمار نشده مقایسه شدند.

آپوپتوز با تجزیه و تحلیل TUNEL تایید شد. سلول های در حال رشد لگاریتمی به مدت 3 ساعت در معرض عصاره گیاهی در دمای 1·IC5{13}} قرار گرفتند. سپس آنها دو بار در سالین بافر شده با فسفات (PBS) حاوی 1 درصد BSA شسته شدند و مجدداً در PBS/BSA در 5·105 سلول در میلی‌لیتر معلق شدند. به سلول های 500 ll، 100 لیتر پارافورمالدئید 4 درصد اضافه شد و سلول ها به مدت 1 ساعت در دمای 21 درجه ثابت شدند. پس از شستشو در PBS، سلول ها در بافر نفوذپذیری سرد 100 لیتری (0.1 درصد Triton X{15}}، 0.1 درصد سیترات سدیم) به مدت 2 دقیقه در دمای 4 درجه مجدداً معلق شدند. سلول ها دو بار در PBS شسته شدند و سپس در یک مخلوط 50 لیتری TUNEL حاوی دئوکسی ریبونوکلئوتید ایدیل ترانسفراز (TdT) و فلورسئین-dUTP (کیت Boehringer-Mannheim) مجدداً معلق شدند. پس از انکوباسیون در تاریکی در دمای 37 درجه به مدت 1 ساعت، سلول ها با پروپیدیوم یدید رنگ آمیزی شدند و توسط فلوسایتومتری آنالیز شدند.

تجزیه و تحلیل بیان ژن

کشت (6 میلی‌لیتر) سلول‌های در حال رشد لگاریتمی (5·1{11}}5 سلول در میلی‌لیتر) در محیطی حاوی عصاره گیاهی در دمای 1·IC50 در دمای 37 درجه در اتمسفر حاوی 5 درصد CO2 به مدت 3 ساعت انکوبه شدند. پس از دو بار شستشو در PBS، گلوله های سلولی در دمای 70- درجه یک شبه منجمد شدند. RNA توسط پروتکل RNeasy Mini (Qiagen، Valencia، Calif.) جدا شد. به طور کلی، این روش 0.5 RNA LG به دست می دهد. این مقدار RNA به cDNA رونویسی معکوس شد و با بیوتین-dUTP نشان‌دار شد و به پروب‌های دناتوره‌شده به ژن‌های مربوط به آپوپتوز و چرخه سلولی روی فیلترها هیبرید شد. هیبریداسیون با اتصال آلکالین فسفاتاز-استرپتاویدین به cDNA با استفاده از یک سوبسترای نورتابی شیمیایی، CDP-Star (SuperArray، Bethesda، Md.)، و به دنبال آن قرار گرفتن در معرض فیلم اشعه ایکس، به طور کلی برای 1-2 دقیقه، تشخیص داده شد.

هدف های ژنی کنترل روی هر فیلتر شامل b-actin و GAP-DH به عنوان کنترل مثبت و pUC18 به عنوان کنترل منفی بود. ژن‌های مرتبط با چرخه سلولی و آپوپتوز زیر اهداف هیبریداسیون بودند: bad، bcl{5}}، BCL-w، BCL-x، کاسپاز 1-10، c-myc، E2F، fas، لیگاند fas، gadd45، iNOS , mdm2, NFkB, p21Waf1, p53, pig7, pig8, Rb, DR5, trail, Casper, CRADD, DAXX, IAP-1, IAP-2, NIK, TNFR2, TRAF2, TRAF3, TRAF5 و DR5. شدتهیبریداسیون به صورت بصری در نقاط تکراری پشت سر هم بر روی فیلتر در رابطه با کنترل های مثبت به دست آمد.

نتایج

آزمایش‌های اولیه ما سمیت سلولی عصاره‌های گیاهان چینی را روی سلول‌های SCLC حساس به دارو و مقاوم به دارو و همچنین سلول‌های اپیتلیال طبیعی ریه آزمایش کردند. همانطور که در جدول 1 نشان داده شده است، چهار عصاره گیاهی در غلظت های پایین سیتوتوکسیک بودند. این یافته‌ها مشابه یافته‌های SPES و PC-SPES در سایر رده‌های سلولی تومور است [8]. در هر مورد، مقادیر IC50 برای سلول‌های مقاوم به چند دارو (H69VP) با سلول‌های حساس به دارو (H69) تفاوتی نداشت. همچنین، مقادیر IC50 برای سلول های اپیتلیال ریه طبیعی به طور قابل توجهی بالاتر از رده های سلولی تومور بود.

سپس مکانیسم سمیت سلولی را با استفاده از سینتیک قطعه قطعه شدن DNA به عنوان نشانه آپوپتوز (قطعه هایی که به آرامی در سلول ها تشکیل می شوند) یا نکروز (قطعه هایی که به سرعت از سلول های آسیب دیده تشکیل شده و آزاد می شوند) بررسی کردیم. سلول ها بین 30 دقیقه تا 8 ساعت در عصاره گیاهی انکوبه شدند و سپس قطعات DNA با روش الایزا در محیط کشت و لیزات سلولی تخمین زدند. شکل 1 داده های نماینده سلول های H69 را نشان می دهد که به مدت 90 دقیقه در معرض چهار عصاره قرار گرفته اند. با سه مورد از عصاره ها (SPES، PC-SPES، OLEN)، بیشتر قطعات DNA از داخل سلول ها (لیزات) آمده اند، که نشان دهنده آپوپتوز است. با این حال، با GLYC، قطعات از سلول های آسیب دیده به محیط آزاد شدند که نشان دهنده نکروز است. نتایج مشابهی با H69VPcells به دست آمد (داده‌ها نشان داده نشده است).

این آزمایش‌های سمیت سلولی با سنجش TUNEL شکست‌های DNA در محل دنبال شدند. در مقایسه با گروه شاهد درمان نشده (1 تا 3 درصد سلول‌های آپوپتوز در چهار آزمایش)، سلول‌های SCLC تیمار شده با SPES (58-85 درصد)، PC-SPES (63-77 درصد) و OLEN (49-81 درصد) TUNEL مثبت نشان دادند، در حالی که سلول های تیمار شده با GLYC (1-2 درصد) این کار را نکردند (شکل 2). نتایج مشابهی با H69VPcells به دست آمد (داده‌ها نشان داده نشده است).

ما رونویسی ژن را در پاسخ به عصاره های گیاهی با استفاده از GeneArrays تجزیه و تحلیل کردیم. این آرایه ها دارای ژن های مرتبط با چرخه سلولی و آپوپتوز هستند. ما این آزمایش ها را دو بار با نتایج مشابه انجام دادیم. شکل 3 نمودارهای آرایه اتورا سلول های H69 را نشان می دهد که در معرض اتوپوزید یا SPES قرار گرفته اند. نتایج ما برای سلول‌های H69 در جدول 2 خلاصه شده است. در حالی که کنترل‌های درمان‌نشده بیان قابل تشخیصی از تنها تعداد کمی از ژن‌های مورد مطالعه داشتند، سلول‌های درمان‌شده با داروهای شیمی‌درمانی معمولی (اتوپوزید و وین کریستین) سیگنال‌های قوی برای تعدادی از ژن‌های دخیل در چرخه سلولی نشان دادند. تنظیم و آپوپتوز سلول‌های تیمار شده با OLEN، SPES و PC-SPES الگویی مشابه با آن‌هایی که با این دو دارو به دست آمده بودند نشان دادند. به طور کلی سلول‌های تیمار شده با GLYC این الگوی رونویسی را نشان ندادند و در عوض بیان قوی ژن آنتی آپوپتوز BCL{5}} را نشان دادند.

بحث

ما به دو دلیل این مطالعات را انجام دادیم. اول، یک سنت باستانی از طب گیاهی چینی وجود دارد که مبتنی بر نظریه ها و فلسفه خود است [2]، و ما می خواستیم در اصطلاح پزشکی غربی اثرات داروهای گیاهی را درک کنیم. این گیاهان به‌عنوان مخلوط استفاده می‌شوند، و در حالی که پیشرفت‌هایی در تجزیه آن‌ها به اجزای شیمیایی منفرد حاصل شده است[11]، مطالعات ما بر روی آن‌ها متمرکز شد زیرا در عمل سنتی استفاده می‌شوند. انگیزه دوم ما این بود که بسیاری از بیماران سرطانی از این گیاهان در کنار درمان‌های مرسوم استفاده می‌کنند [6، 23] و درک اثرات سلولی گیاهان می‌تواند اطلاعات مهمی را برای تصمیم‌گیری بالینی فراهم کند.

داده‌های سمیت سلولی (جدول 1) نشان داد که چهار عصاره گیاهی واقعاً برای سلول‌های تومور سیتوتوکسیک بودند، بیشتر بر اساس دوز نسبت به سلول‌های اپیتلیال ریه طبیعی، که نشان‌دهنده برخی ویژگی‌های تومور و احتمالاً شاخص درمانی مطلوب است. شباهت‌های IC50 بین سلول‌های حساس به دارو و سلول‌های مقاوم به چند دارو نشان می‌دهد که این عصاره‌ها تحت تأثیر مکانیسم‌های مقاومت دارویی نشان‌داده‌شده در سلول‌های H69VP، از جمله بیان بیش از حد دو ناقل دارو، MDR1 و MRP قرار نمی‌گیرند.

سینتیک تکه تکه شدن DNA نشان داد که عصاره های SPES، PC-SPES، و OLEN پروآپوپتوز بودند، در حالی که GLYC تمایل شهوانی داشت (شکل 1). این امر با رنگ آمیزی TUNEL در محل تایید شد (شکل 2). اکثر داروهای شیمی درمانی معمولی پرواپوپتوز هستند [3] و گروهی از ژن های آپوپتوز و تنظیم کننده چرخه سلولی در پاسخ به داروها در سلول ها تنظیم می شوند [24]. ما دریافتیم که الگوی بیان برخی از ژن‌هایی که در پاسخ به سه برنامه حرفه‌ای برای عصاره‌های گیاهی بیان می‌شوند، مشابه آنچه در این سلول‌ها پس از قرار گرفتن در معرض داروهای شیمی‌درمانی معمولی مشاهده می‌شود، بود (شکل 3، جدول 2). پاسخ به GLYC به تنهایی متفاوت به نظر می رسد، حداقل در نقطه زمانی تجزیه و تحلیل شده در این آزمایش ها. جالب اینجاست که GLYC بخشی از PC SPES است که پیشاپوپتوز بود، در حالی که GLYC به تنهایی چنین نبود. شاید سایر اجزای PC-SPES مسئول فعالیت پرواپوپتوز آن باشند. در حالی که این نتایج نشان نمی‌دهند که چگونه عصاره‌های گیاهی به سلول‌ها آسیب می‌رسانند، آنها نشان می‌دهند که سلول‌های H69 به آسیب در سطوح مولکولی (رونویسی) و سلولی (آپوپتوز) به شیوه‌ای مشابه پاسخشان به شیمی‌درمانی پاسخ می‌دهند.

مطالعات ما نشان دهنده سودمندی بالقوه این عصاره های گیاهی چینی در درمان SCLC، به ویژه بیماری مقاوم به دارو است.

قدردانیما از L. Brown برای کمک ارزشمند در زمینه سیتومتری و R. Lingeman برای کمک در پروتکل های زیست شناسی مولکولی تشکر می کنیم. سلول‌های BEAS-2 به طور سخاوتمندانه توسط دکتر I. Laird-Offringa، دانشگاه کالیفرنیای جنوبی، مرکز سرطان نوریس تهیه شد. SPES و PC-SPES هدیه ای از دکتر اس. چن، کالج پزشکی نیویورک بودند. این تحقیق توسط بنیاد خانواده پریتزکر و بنیاد WM Keck پشتیبانی شد.

سیستانچ به عنوان یک داروی گیاهی چینی می تواند ایمنی را بهبود بخشد و با سرطان مبارزه کند، برای اطلاعات بیشتر اینجا را کلیک کنید

منابع

1. Boik J (1996) سرطان و طب طبیعی: کتاب درسی علوم پایه و تحقیقات بالینی. مطبوعات پزشکی اورگان، پرینستون، ص 221

2. Chan K (1995) پیشرفت در طب سنتی چینی. Trends Pharmacol Sci 16:182-187

3. Chu E, DeVita V Jr (2001) اصول مدیریت سرطان: شیمی درمانی. در: DeVita V Jr، Hellman S، Rosenberg SA (ویرایشگران) سرطان: اصول و شیوه های سرطان شناسی. لیپینکات ویلیامز و ویلکینز، فیلادلفیا، صفحات 289-306

4. De la Taille A، Hayek OR، Buttyan R، Bagiella E، Burchart M، Katz AE (1999) اثرات یک عامل گیاه درمانی، PC-SPES، بر سرطان پروستات. BJU Int 84:845-850

5. DiPaola RS, Zhang H, Lambert G, Meeker R, Licitra E, Rafi M, Spaulding H, Goodin S, Toledano M, Gallo M (1998) فعالیت بالینی و بیولوژیکی یک ترکیب گیاهی استروژنیک (PC-SPES) در پروستات سرطان. New Engl J Med 339:785-791

6. Eisenberg DM، Davis RB، Ettner SL (1998) روندهای استفاده از طب جایگزین در ایالات متحده: 1990-1997: نتایج یک بررسی ملی بعدی. جاما 280:1569-1575

7. Fenwick GR، Lutomski J، Nieman C (1990) Glycyrrhiza glabra: ترکیب، استفاده و تجزیه و تحلیل. Food Chem 38:119-143

8. Halicka HD, Ardelt B, Juan G, Mittleman A, Chen S, Traganos F, Darzynkiewicz Z (1997) آپوپتوز و اثرات چرخه سلولی ناشی از عصاره های گیاهی چینی PC-SPES. Int J Oncol 11:437-448

9. Hsieh T, Chen SS, Wang X, Wu J (1997) تنظیم گیرنده آندروژن و بیان آنتی ژن اختصاصی پروستات در سلول های LNCaP پروستات انسانی پاسخگو به آندروژن توسط عصاره های اتانولی محصول چینی گیاهی PC-SPES. Biochem Mol Biol Int 42:535-544

10. Hsieh T, Ng C, Chang, C, Chen SS, Mittleman, A, Wu J (1998) القای آپوپتوز و تنظیم پایین BCL{3}} در سلولهای Mutu تیمار شده با عصاره اتانولی مکمل گیاهی چینی PC-SPES. Int J Oncol 13:1199-1202

11. Huang KC (1999) فارماکولوژی گیاهان چینی، 2^ndedn. CRC Press، بوکا راتون

12. Kalemkerian GP، Worden FP (2000) پیشرفت های درمانی در SCLC. Expert Opin Invest Drugs 9:65-79

13. Kimura Y, Okuda H, Yokio K, Matsushita N (1997) Effects of baicalein isolated from Scutellaria baicalensis on interleukin 1b- and TNF induced plasminogen activator and plasminogen activator activator inhibitor{5}hellot di cell hellot di cell hellot کشت نهایی. . Phytother Res 11:363-367

14. Lin C (1996) مشاهده ای در مورد استفاده ترکیبی از شیمی درمانی و طب سنتی چینی برای تسکین درد سرطان. J Tradit Chin Med 16:267-269

15. Mattern J، Volm M (1995) مکانیسم های مقاومت در سرطان ریه انسان. متاستاز تهاجم 15:81-94

16. Minato K، Kanzawa F، Nishio K، Nakagawa K، Fujiwara Y، Saijo N (1990) خصوصیات یک خط سرطان ریه سلول کوچک انسانی مقاوم به اتوپوزید. Cancer Chemother Pharmacol 26:313-327

17. Moyad MA، Pienta KJ، Montie JE (1999) استفاده از PC-SPES، یک مکمل تجاری موجود برای سرطان پروستات، در یک بیمار مبتلا به بیماری هورمونی ساده. اورولوژی 54:319-324

18. Nishio K, Nakamura T, Koh Y, Suzuki H, Fukumoto N, Saijo N (1999) مقاومت دارویی در سرطان ریه. Curr Opin Oncol 11:109-115

19. پاس H، میچل JB، جانسون DH، Turrisi AT، Minna J (2000) سرطان ریه: اصول و عمل. لیپینکات، فیلادلفیا

20. Pfeifer BL, Pirani JF, Hamann SR, Klippel KF (2000) PC SPES: مکمل غذایی برای درمان سرطان پروستات مقاوم به هورمون. BJU Int 85:481-485