جذب سیترات فریک انترال به فروپورتین پروتئین انتقال آهن بستگی دارد

خلاصه

فریک سیترات به عنوان یک فرآورده جایگزین آهن در بیماران مبتلا به بیماری مزمن کلیوی غیر دیالیز و کم خونی فقر آهن تایید شده است. آهن تحویلی با سیترات فریک از طریق روده جذب می شود، اما مکانیسم های خاص درگیر، از جمله احتمالات جذب متعارف، با واسطه فروپورتین بین سلولی و/یا جذب پاراسلولی با واسطه سیترات، ارزیابی نشده است. در اینجا، ما برای اولین بار کارایی سیترات آهن را در مدل های هپسیدین بالا، از جمله موش های حذفی Tmprss6 (که با کم خونی فقر آهن مقاوم به آهن مشخص می شود) با و بدون بیماری مزمن کلیوی ناشی از رژیم غذایی آدنین نشان می دهیم. در مرحله بعد، برای ارزیابی اینکه آیا جذب سیترات آهن روده ای به فروپورتین وابسته است یا خیر، ما اثرات سیترات آهن را در مدل موشی حذفی فروپورتین خاص انتروسیتی القایی با تاموکسیفن (Villin-Cre-ERT2، Fpn flox/flox) ارزیابی کردیم. در این مدل، حذف فروپورتین کارآمد بود، زیرا تزریق تاموکسیفن باعث کاهش 4000- برابری بیان mRNA فروپورتین دوازدهه شد، با پروتئین فروپورتین غیرقابل تشخیص روی وسترن بلات انتروسیت‌های دوازدهه، که منجر به فنوتیپ کم خونی شدید فقر آهن شد. در موش‌های دارای کمبود فروپورتین، سه هفته مکمل غذایی سیترات فریک 1 درصد، دوزی که از کمبود آهن در موش‌های کنترل جلوگیری می‌کرد، وضعیت آهن را بهبود بخشید یا فنوتیپ کم خونی فقر آهن را نجات نداد. ما آزمایش حذفی مشروط فروپورتین را در شرایط اورمی با استفاده از یک مدل نفروپاتی آدنین تکرار کردیم، که در آن سه هفته مکمل غذایی سیترات فریک 1 درصد دوباره نتوانست وضعیت آهن را بهبود بخشد یا فنوتیپ کم خونی فقر آهن را نجات دهد. بنابراین، داده‌های ما نشان می‌دهد که جذب سیترات آهن روده‌ای وابسته به انتقال آهن انتروسیتی معمولی توسط فروپورتین است و در این مدل‌ها، جذب پاراسلولی قابل‌توجهی رخ نمی‌دهد.

کلید واژه ها

سیترات آهن؛ فروپورتین; هپسیدین؛ اهن؛ کم خونی؛ بیماری مزمن کلیوی.

برای اطلاع از تاثیر سیستانچ بر کلیه اینجا را کلیک کنید

معرفی

Auryxia (سیترات آهن [FC]؛ Akebia Therapeutics, Inc., Cambridge, MA) یک ترکیب جدید است که برای استفاده بالینی به عنوان یک اتصال دهنده فسفات روده در بیماران مبتلا به بیماری مزمن کلیوی (CKD) بزرگسالان تحت دیالیز تایید شده است. در کارآزمایی‌های تصادفی‌سازی‌شده و کنترل‌شده با پلاسبو که در بیماران CKD غیر وابسته به دیالیز انجام شد، FC به طور قابل‌توجهی غلظت فسفات سرم را کاهش داد. .3،4

Auryxia همچنین در ایالات متحده برای استفاده بالینی به عنوان یک محصول جایگزین آهن در بیماران CKD غیر دیالیزی با کم خونی فقر آهن تایید شده است. در 4 کارآزمایی تصادفی‌سازی و کنترل‌شده فوق، که در گروه‌های CKD غیر وابسته به دیالیز و وابسته به دیالیز انجام شد، FC به طور قابل‌توجهی اشباع ترانسفرین سرم (TSAT) را افزایش داد. منبع آهن روده ای

به طور قابل‌توجهی، FC کمبود آهن را در زمینه CKD، و حتی بیماری کلیوی در مرحله نهایی، تصحیح می‌کند، زیرا این‌ها حالت‌هایی با سطوح بالای هپسیدین هستند. صادرکننده شناخته شده آهن سلولی.9 در شرایط سطوح بالای هپسیدین، فعالیت فروپورتین - واقع در سطح پایه انتروسیت ها - کاهش می یابد، بنابراین جذب آهن غذایی و دارویی از مجرای گوارشی 10 مهار می شود.

مکانیسم هایی که توسط آن FC بر بلوک آهن روده ای ناشی از سطوح هپسیدین بالا و فروپورتین پایین غلبه می کند نامشخص است. یک فرضیه این است که قسمت سیترات در FC یون های کلسیم را کلات می کند، که منجر به اختلال در اتصالات محکم بین سلولی انتروسیت می شود، که امکان جذب آهن پاراسلولی را فراهم می کند که مستقل از مسیر هپسیدین-فروپورتین است. نکته جالب توجه این است که ترکیبات سیترات برای تسهیل جذب روده ای پاراسلولی آلومینیوم ذکر شده اند، که این احتمال را افزایش می دهد که جذب آهن با همان مکانیسم افزایش می یابد. برای ارزیابی اینکه آیا جذب آهن روده ای مرتبط با FC از طریق یک مسیر بین سلولی و وابسته به فروپورتین در مقابل یک مسیر پاراسلولی و مستقل از فروپورتین رخ می دهد، ما جذب FC روده ای را در مدل های موش، با یا بدون CKD، با فعالیت فروپورتین انتروسیت کم یا غایب ارزیابی کردیم.

مکمل سیستانچ

مواد و روش ها

1. آزمایشات موش

آزمایش‌ها توسط بخش دستورالعمل‌های پزشکی حیوانات آزمایشگاهی دانشگاه کالیفرنیا، لس‌آنجلس (UCLA) انجام شد و پروتکل‌های مطالعه توسط دفتر نظارت بر تحقیقات حیوانات UCLA تأیید شد. موش‌ها در UCLA در قفس‌های استاندارد با بسترهای تراشه‌ای که دو بار در هفته تعویض می‌شد، قرار گرفتند. اتاق‌های نگهداری حیوانات دما و رطوبت کنترل می‌شدند، با چرخه نور 12-ساعت. ما ابتدا اثرات FC را در موش‌های حذفی سرین پروتئاز 6 (Tmprss6) ارزیابی کردیم، مدلی که با سطوح بالای هپسیدین، فعالیت فروپورتین پایین، و کم خونی ناشی از فقر آهن مقاوم به آهن مشخص می‌شود، چه بدون و چه با افزودن رژیم غذایی آدنین. CKD ناشی از CKD، که سطح هپسیدین را بیشتر افزایش می‌دهد. برای مهار کامل فعالیت فروپورتین روده‌ای، ما در مرحله بعد اثرات FC را در مدل حذفی فروپورتین خاص انتروسیتی (FPN) القایی با تاموکسیفن (Villin-Cre-ERT2، Fpnflox/flox) ارزیابی کردیم. در نهایت، ما اثرات FC را در مدل Villin-Cre-ERT2، Fpnflox/flox با CKD ناشی از رژیم غذایی آدنین ارزیابی کردیم.

2. موش های حذفی Tmprss6

موش های حذفی Tmprss6 در زمینه ژنتیکی C57BL/6 با مهربانی توسط دکتر جودی بابیت (بیمارستان عمومی ماساچوست) ارائه شد. ما ابتدا اثرات FC را در موش‌های حذفی Tmprss6 و نوزادان نوع وحشی (WT) بدون CKD ارزیابی کردیم. موش‌های 4 تا 7 هفته‌ای به مدت 3 هفته با رژیم غذایی آهن 5{8}} ppm بدون آدنین (Envigo، Hackensack، NJ)، با یا بدون 0.1 درصد FC (Akebia Therapeutics, Inc.) تغذیه شدند. ، و سپس معدوم شدند. ما بعداً اثرات FC را در موش‌های حذفی Tmprss6 و همزاد WT مبتلا به CKD ارزیابی کردیم. موش‌های 8 تا 12 هفته‌ای برای القای CKD، 15-17 به مدت 6 هفته با رژیم‌های غذایی آهن 50 ppm با 0}.2 درصد آدنین (Envigo) تغذیه شدند. برای 3 هفته آخر رژیم‌ها، 0.1 درصد FC (Akebia Therapeutics, Inc.) برای یک گروه اضافه شد و برای گروه دیگر اضافه نشد. این دوز FC در موش با دوز معمولی FC انسان بالغ مطابقت دارد. در یک انسان بالغ، 2 قرص Auryxia که سه بار در روز مصرف می شود (6000 میلی گرم FC) حاوی دوز تجمعی آهن فریک روزانه 1260 میلی گرم، مقداری معادل تقریباً یک سوم کل آهن بدن است. در موش‌ها، تقریباً یک سوم کل آهن بدن معادل 8/0 میلی‌گرم آهن فریک در روز یا 4 میلی‌گرم FC در روز است که با توجه به مصرف غذای روزانه 4 گرم موش، با غذای حاوی 1/0 درصد FC مطابقت دارد. در این آزمایش‌ها، هر گروه تقریباً شامل نیمی مرد و نیمی ماده بود. پس از قربانی، خون کامل، سرم، کبد و انتروسیت اثنی عشر را جمع آوری کردیم. برای جداسازی انتروسیت های اثنی عشر، بخش پروگزیمال دوازدهه (~2 سانتی متر) از طول باز شد و به محلول اتیلن دی آمین تترا استیک اسید سرد یخی منتقل شد. محلول برای تسهیل جداسازی سلول گرداب شد و سلول های پراکنده با فیلتراسیون جمع آوری شدند.

3. موش های ناک اوت فروپورتین انتروسیتی غیر CKD

موش های حذفی فروپورتین مخصوص انتروسیت (FPN) القایی با تاموکسیفن با پرورش موش های Villin-Cre-ERT2 با موش های Fpnflox/flox، که هر دو در زمینه های ژنتیکی C57BL/6 هستند، تولید شدند. موش های Villin-Cre-ERT2 با مهربانی توسط دکتر پیتر تونتونوز (UCLA) ارائه شدند. برای توصیف این مدل، ما موش‌های Fpnflox/flox را، با یا بدون VillinCre-ERT2، با یا بدون القای تاموکسیفن ({12}}) ارزیابی کردیم. روز؛ سیگما آلدریچ، سنت لوئیس، MO). برای ارزیابی اثرات FC در این مدل، ما از موش‌های Villin-Cre-ERT2، Fpnflox/flox با سن 6 تا 8 هفته استفاده کردیم که با روغن آفتابگردان (گروه غیرالقای) یا تاموکسیفن (0.075 میلی‌گرم بر گرم وزن بدن) داخل صفاقی تزریق شدند. گروه القایی) یک بار در روز به مدت 4 روز متوالی. موش ها در رژیم غذایی آهن با غلظت 50 پی پی ام (Envigo) نگهداری شدند و 7 هفته پس از تزریق کشته شدند. برخی از موش های القا شده با تاموکسیفن 1 درصد FC به مدت 3 هفته بلافاصله قبل از قربانی شدن به رژیم غذایی آنها اضافه شده بود. در این آزمایش‌ها، 1 درصد FC - یک دوز فوق فیزیولوژیک - انتخاب شد تا اثر ثانویه به دوز ناکافی FC از دست نرود. برای نشان دادن اثربخشی این دوز، ما یک آزمایش کنترل مثبت جداگانه انجام دادیم که در آن ارزیابی کردیم که آیا 3 هفته مکمل غذایی 1 درصد FC می‌تواند فنوتیپ کم خونی فقر آهن را در موش‌های Villin-Cre-ERT2، Fpnflox/flox غیر القا شده نجات دهد یا خیر. رژیم غذایی کم آهن (4ppm) (Envigo). در آزمایش‌های حذفی فروپورتین انتروسیتی غیر CKD، هر گروه شامل نر و ماده بود. پس از قربانی، خون کامل، سرم، کبد، انتروسیت های اثنی عشر و کل دوازدهه را برای رنگ آمیزی آهن جمع آوری کردیم. انتروسیت های دوازدهه همانطور که در بالا توضیح داده شد جدا شدند. برای رنگ‌آمیزی آهن اثنی عشر، نمونه‌های دوازدهه پروگزیمال در فرمالین تثبیت شدند، سپس در بلوک‌های پارافینی جاسازی شدند که از آن لام‌ها ایجاد شد. مقاطع پارافین شده با رنگ آبی پرلز پرلز برای آهن غیرهم رنگ آمیزی شدند و با رنگ قرمز سریع هسته ای رنگ آمیزی شدند. درجه رنگ آمیزی آهن انتروسیت دوازدهه در مقیاس نیمه کمی توسط یک بازبین کور (SN) ارزیابی شد.

4. موش ناک اوت فروپورتین مخصوص انتروسیت CKD

برای تکرار آزمایش فوق در زمینه CKD، موش‌های نر Villin-Cre-ERT2، Fpnflox/flox 6 هفته‌ای با رژیم‌های غذایی آدنین 2 درصدی 0 (Envigo) برای القای CKD شروع شدند. با توجه به تفاوت‌های جنسیتی در مدل CKD جوندگان ناشی از رژیم غذایی آدنین (ماده‌ها نسبت به اثرات آدنین غذایی مقاوم‌تر هستند)، 18 تنها موش‌های نر مورد استفاده قرار گرفتند. در سن 8 هفتگی موش‌ها، همانطور که در بالا توضیح داده شد، روغن آفتابگردان یا تاموکسیفن تزریق شد. در سن 12 هفتگی، پس از 6 هفته رژیم غذایی آدنین، موش ها به رژیم غذایی استاندارد، غیر آدنینی، 50 ppm آهن با یا بدون 1 درصد FC اضافه شدند. موش ها در سن 15 هفتگی، 7 هفته پس از تزریق و پس از 3 هفته درمان با یا بدون FC قربانی شدند. خون کامل، برای اندازه‌گیری هموگلوبین و گلبول‌های قرمز خون، زمانی که موش‌ها 8 هفته (در زمان تزریق)، 12 هفته (با شروع رژیم غذایی با یا بدون FC)، و 15 هفته (در زمان قربانی) سن داشتند، جمع‌آوری شد. سرم، برای اندازه گیری نیتروژن اوره و آهن، زمانی که موش ها در سن 12 و 15 هفته بودند جمع آوری شد. انتروسیت های کبد و اثنی عشر، همانطور که در بالا توضیح داده شد، در قربانی جمع آوری شدند.

هربا سیستانچ

5. سنجش خون

شمارش کامل خون توسط پردازنده خودکار Hemavet 950 (Drew Scientific, Oxford, CT) اندازه گیری شد. از روش های رنگ سنجی برای سنجش نیتروژن اوره سرم (BioAssay Systems، Hayward، CA) و آهن سرم (Genzyme، Cambridge، MA) استفاده شد. همانطور که قبلاً توضیح داده شد، از روش‌های ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA) برای اندازه‌گیری سطوح سرمی هپسیدین استفاده شد. 19 کیت ELISA تجاری موجود برای اندازه‌گیری اریتروپویتین سرم (R&D Systems، Minneapolis، MN) استفاده شد.

6. غلظت کمی آهن کبد

جگرهای برداشت شده در نیتروژن مایع منجمد شدند و در دمای 8-0 درجه نگهداری شدند. قطعات کوچک کبد (~ 100 میلی گرم) وزن و همگن شدند. محلول رسوب پروتئین (0.53 نیوتن هیدروکلراید و 5.3 درصد تری کلرواستیک اسید در آب دوبار تقطیر) اضافه شد و نمونه ها جوشانده و سانتریفیوژ شدند. غلظت آهن در سوپرناتانت ها با استفاده از روش رنگ سنجی (Genzyme) اندازه گیری شد، سپس به وزن نمونه های اصلی نرمال شد تا غلظت آهن بافتی حاصل شود.

7. واکنش زنجیره ای پلیمراز در زمان واقعی (PCR)

انتروسیت های اثنی عشر در Trizol (Invitrogen, Waltham, MA) همگن شدند و RNA طبق پروتکل سازنده جدا شد. ما رونویسی معکوس کمی (RT)–PCR را با استفاده از کیت iScript RT-PCR (Bio-Rad, Hercules, CA) و پرایمرهای مخصوص Fpn موش انجام دادیم (به جلو: 5'-ATGGGAACTGTGGGCCTTCAC{4}}'؛ معکوس: 5' -TCCAGGCATGAATACGGAGA-3'). ما از شرایط PCR زیر استفاده کردیم: دناتوراسیون اولیه در دمای 95 درجه به مدت 2 دقیقه، به دنبال آن 40 سیکل دناتوراسیون در دمای 94 درجه به مدت 30 ثانیه، بازپخت در دمای 58 درجه به مدت 30 ثانیه، اکستنشن در 72 درجه به مدت 1 دقیقه، و اکستنشن نهایی در 72 درجه درجه به مدت 10 دقیقه بیان ژن به هیپوگزانتین-گوانین فسفریبوزیل ترانسفراز (Hprt) نرمال شد (به جلو: 5'-CTGGTTAAGCAGTACAGCCCCAA{22}}'؛ معکوس: 5'-CAGGAGGTCCTTTTCACCAGC{{25}') و هر نمونه RNA تکراری آنالیز شد. . بیان ژن برابر نسبی با استفاده از روش دلتا دلتا Ct محاسبه شد.

8. وسترن بلاتینگ

برای تشخیص پروتئین فریتین در وسترن بلات، آنتی بادی اولیه مورد استفاده خرگوش FTH1 ضد موش (D1D4; Cell Signaling Technology, Danvers, MA) در غلظت 1:10000 بود و آنتی بادی ثانویه مورد استفاده بز ضد خرگوش IgG (فناوری سیگنالینگ سلولی)، در غلظت 1:5000. برای تشخیص فروپورتین در وسترن بلات، آنتی بادی اولیه مورد استفاده FPN ضد موش موش (1C7؛ Amgen، Thousand Oaks، CA)، در غلظت 1:3300 بود، و آنتی بادی ثانویه مورد استفاده IgG ضد موش خرگوش بود (ab102213; Abcam، کمبریج، MA)، در غلظت 1:5000. برای کنترل بارگیری پروتئین اکتین، آنتی بادی ضد اکتین موش (A3854؛ Sigma-Aldrich)، در غلظت 1:50000، استفاده شد. یک سیگنال نورتابی شیمیایی با استفاده از ChemiDoc XRS plus System با نرم افزار Image Lab (Bio-Rad) شناسایی شد.

9. تجزیه و تحلیل آماری

ایجاد شکل و تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از Graph-Pad Prism 9.2.{3}} (San Diego, CA) انجام شد. داده‌های موش به صورت میانگین ± انحراف معیار ارائه می‌شوند و برای مقایسه میانگین‌های گروهی از آزمون t استفاده شد. برای داده‌های غیرعادی توزیع شده، قبل از تجزیه و تحلیل آماری از تبدیل ورود به سیستم استفاده شد. مقادیر P < 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

کپسول سیستانچ

بحث

در مطالعات بالینی، FC نشان داده شده است که کمبود آهن را در بیماران مبتلا به CKD و بیماری کلیوی در مرحله نهایی که حالت‌هایی با سطوح هپسیدین بالا هستند، اصلاح می‌کند. ایجاد بلوک مخاطی با واسطه هپسیدین برای جذب آهن روده ای. مکانیسم هایی که توسط آن FC ممکن است بر این بلوک جذب روده غلبه کند ناشناخته است. یک فرضیه این است که قسمت سیترات اتصالات محکم بین سلولی را شل می کند و جذب آهن روده ای مستقل از فروپورتین را تسهیل می کند. ما این فرضیه را با ارزیابی اثربخشی FC در مدل‌های با هپسیدین/فروپورتین بالا - با و بدون CKD - ​​که در آن مسیر جذب آهن بین سلولی تقریباً از بین رفته یا کاملاً مسدود شده است، آزمایش کردیم.

در اولین مدل ما، موش‌های حذفی Tmprss6 بدون CKD، که در آن‌ها سطح هپسیدین خفیف بالا بود، FC وضعیت آهن را بهبود بخشید و غلظت هموگلوبین را افزایش داد. به طور مشابه، در مدل‌های حذفی WT و Tmprss6 ما با CKD، که در آن سطوح هپسیدین به طور قابل توجهی افزایش یافته است، FC تعداد گلبول‌های قرمز و هموگلوبین را افزایش داد. این داده ها اثربخشی FC را در ایالات با سطوح هپسیدین بالا نشان می دهد و با آنچه در مطالعات بالینی FC مشاهده شده است سازگار است. با این حال، این مدل‌ها مکانیسم‌هایی را پیشنهاد نمی‌کنند که توسط آن FC بر بلوک هپسیدین مخاطی غلبه می‌کند.

در این مدل‌ها، که فروپورتین دست نخورده باقی می‌ماند، FC ممکن است از طریق یک مسیر پاراسلولی، با دور زدن محور هپسیدین- فروپورتین جذب شود، یا ممکن است از طریق یک مسیر بین سلولی، با استفاده از فروپورتین جذب شود. برای ارزیابی وابستگی FC به فروپورتین روده ای، ما از یک مدل موشی حذفی فروپورتین خاص انتروسیتی القایی استفاده کردیم. این مدل در کاهش تقریباً کامل پروتئین فروپورتین انتروسیتی بسیار مؤثر است، که منجر به کاهش شدید جذب آهن روده‌ای و کم‌خونی شدید فقر آهن می‌شود، فنوتیپی که می‌تواند با تجویز تزریقی آهن نجات یابد. -مسیر وابسته به راحتی قابل تشخیص خواهد بود.

در مدل غیر CKD ما، در غیاب فروپورتین انتروسیت، یک دوز FC که در موش‌های WT موثر بود، وضعیت آهن را بهبود نداد یا فنوتیپ کم خونی فقر آهن را نجات نداد. افزایش اندک در تعداد گلبول‌های قرمز و هموگلوبین از نظر آماری معنی‌دار نبود، و نشان می‌دهد که جذب FC روده‌ای عمدتاً به فروپورتین وابسته است و مخالف جذب فراسلولی گسترده است. در شرایط CKD، عوامل مرتبط با اورمی به طور بالقوه می توانند نفوذپذیری روده را افزایش دهند، احتمالاً اتصالات محکم بین سلولی را شل کرده و درجاتی از جذب FC پاراسلولی را تسهیل می کند. با این حال، در مدل CKD ما، FC به طور قابل توجهی وضعیت آهن را در حضور فروپورتین انتروسیت بهبود بخشید، اما در غیاب آن نه. این داده ها نشان می دهد که حتی در شرایط CKD، جذب FC روده ای عمدتاً توسط انتقال فروپورتین انجام می شود و مسیرهای پاراسلولی ممکن نیست. در موش‌های CKD القا نشده، درمان با FC پروتئین فروپورتین دوازدهه را افزایش داد، علی‌رغم بیان پایین‌تر mRNA فروپورتین دوازدهه، که با مکانیسمی سازگار است که با آن تجمع آهن درون سلولی باعث کاهش سرکوب ترجمه فروپورتین با واسطه IRP می‌شود، بنابراین جذب آهن سلولی را تسهیل می‌کند و تحویل به گردش.

ما 2 آزمایش CKD را انجام دادیم. میانگین نهایی غلظت نیتروژن اوره سرم و هموگلوبین بین گروه رژیم غذایی کنترل WT CKD از آزمایش اول و گروه CKD درمان نشده از آزمایش دوم مشابه بود. با این حال، در اولین آزمایش CKD، موش های WT تحت درمان با FC افزایش قابل توجهی در هموگلوبین داشتند، اما در آزمایش CKD دوم، موش های درمان نشده با FC افزایش معنی داری در هموگلوبین نداشتند. دلیل اینکه FC به‌طور قابل‌توجهی هموگلوبین را در موش‌های القا نشده افزایش نداد، علی‌رغم بهبود آشکار وضعیت آهن، نامشخص است. با این حال، عوامل احتمالی کمک کننده شامل علت چند عاملی کم خونی CKD، اندازه نمونه کوچک موش های القا نشده، و فلبوتومی مکرر در این آزمایش است. یک محدودیت مطالعه اضافی این است که ما از مدل‌های موشی استفاده کردیم که قابلیت ترجمه آنها برای انسان قطعی نیست. همچنین، اگرچه قوی است، اما شواهد دال بر عدم جذب پاراسلولی قابل توجه FC غیر مستقیم است.

سیستانچه توبولوزا

به طور خلاصه، در مدل‌های سطح بالای هپسیدین ما، اثرات مفید FC بر روی پارامترهای آهن و گلبول قرمز را مشاهده کردیم که نشان‌دهنده جذب موثر آهن روده‌ای با وجود سطوح بالای هپسیدین است. برای ارزیابی اینکه آیا FC ممکن است بلوک هپسیدین مخاطی را از طریق جذب پاراسلولی تسهیل شده با سیترات دور بزند، ما یک مدل حذفی فروپورتین خاص انتروسیتی القایی را در حضور یا عدم وجود اختلال در عملکرد کلیه ارزیابی کردیم. در این مدل‌ها، FC فنوتیپ کم خونی فقر آهن را نجات نداد، نشان داد که جذب FC روده‌ای عمدتاً به فروپورتین وابسته است و نشان می‌دهد که مسیرهای پاراسلولی احتمالاً مسیرهای اصلی جذب FC فیزیولوژیک را تشکیل نمی‌دهند.

منابع

1. Block GA، Fishbane S، Rodriguez M، و همکاران. یک کارآزمایی 12-هفته‌ای، دوسوکور، کنترل‌شده با پلاسبو سیترات آهن برای درمان کم‌خونی فقر آهن و کاهش فسفات سرم در بیماران مبتلا به مراحل CKD 3-5. جی کیدنی دیس هستم. 2015؛ 65:728-736. [PubMed: 25468387]

2. Yokoyama K، Hirakata H، Akiba T، و همکاران. هیدرات فریک سیترات برای درمان هیپر فسفاتمی در CKD غیر وابسته به دیالیز. Clin J Am Soc Nephrol. 2014؛ 9:543-552. [PubMed: 24408120]

3. لوئیس جی بی، سیکا ام، کوری ام جی، و همکاران. سیترات فریک فسفر را کنترل می کند و آهن را به بیماران دیالیز می رساند. جی ام سوک نفرول. 2015؛ 26:493-503. [PubMed: 25060056]

4. یوکویاما ک، آکیبا تی، فوکاگاوا ام، و همکاران. یک کارآزمایی تصادفی شده JTT-751 در مقابل سولامر هیدروکلراید در بیماران تحت همودیالیز. پیوند نفرول دیال. 2014؛ 29:1053-1060. [PubMed: 24376274]

5. Zaritsky J، Young B، Wang HJ، و همکاران. هپسیدین - یک بیومارکر جدید بالقوه برای وضعیت آهن در بیماری مزمن کلیوی. Clin J Am Soc Nephrol. 2009؛ 4: 1051-1056. [PubMed: 19406957]

6. Ashby DR، Gale DP، Busbridge M، و همکاران. سطوح هپسیدین پلاسما افزایش یافته است اما در بیماری کلیوی به درمان اریتروپویتین پاسخ می دهد. کلیه بین المللی 2009؛ 75:976-981. [PubMed: 19212416]

7. Zaritsky J, Young B, Gales B, et al. کاهش هپسیدین سرم با همودیالیز در بیماران اطفال و بزرگسالان. Clin J Am Soc Nephrol. 2010؛ 5:1010-1014. [PubMed: 20299375]

8. Troutt JS، Butterfield AM، Konrad RJ. غلظت هپسیدین در بیماران مبتلا به بیماری مزمن کلیوی به طور قابل توجهی افزایش می یابد و با نرخ های تخمینی فیلتراسیون گلومرولی همبستگی معکوس دارد. جی کلین آزمایشگاه مقعدی. 2013؛ 27:504-510. [PubMed: 24218134]

9. Nemeth E, Tuttle MS, Powelson J, et al. هپسیدین با اتصال t فروپورتین و القای درونی شدن آن، جریان آهن سلولی را تنظیم می کند. علوم پایه. 2004؛ 306: 2090-2093. [PubMed: 15514116]

10. گانز تی، بینو آ، سالوسکی آی بی. مکانیسم اثر و ویژگی های بالینی Auryxia® (سیترات آهن). مواد مخدر. 2019؛ 79:957–968. [PubMed: 31134521]

11. Froment DP، Molitoris BA، Buddington B، و همکاران. مکان و مکانیسم افزایش جذب گوارشی آلومینیوم توسط سیترات. کلیه بین المللی 1989؛ 36:978-984. [PubMed: 2601265]

12. گوپتا هیدرات سیترات فریک به عنوان یک اتصال دهنده فسفات و خطر سمیت آلومینیوم. داروسازی (بازل). 2014؛ 7:990-998. [PubMed: 25341358]

13. Folgueras AR، de Lara FM، Pendás AM، و همکاران. ماتریپتاز سرین پروتئاز متصل به غشاء{2}} (Tmprss6) یک تنظیم کننده ضروری هموستاز آهن است. خون 2008؛ 112: 2539-2545. [PubMed: 18523150]

14. Hanudel MR، Rappaport M، Gabayan V، و همکاران. افزایش هپسیدین سرم به کم خونی بیماری مزمن کلیوی در مدل موش کمک می کند. هماتولوژیک. 2017؛ 102: e85–e88. [PubMed: 27884972]

15. جیا تی، اولوسون اچ، لیندبرگ کی، و همکاران. مدل جدیدی از نفروپاتی توبولوینترستیشیال ناشی از آدنین در موش BMC Nephrol. 2013؛ 14:116. [PubMed: 23718816]

16. Tamura M, Aizawa R, Hori M, et al. اختلال پیشرونده کلیه و انفیلتراسیون ماکروفاژها در فیبروز بینابینی در مدل نفریت توبولواینترستیشیال موش ناشی از آدنین. هیستوکم سلول بیول. 2009؛ 131: 483-490. [PubMed: 19159945]

17. Klinkhammer BM, Djudjaj S, Kunter U, et al. مکانیسم های سلولی و مولکولی آسیب کلیه در نفروپاتی 2،8-دی هیدروکسی آدنین. جی ام سوک نفرول. 2020؛ 31:799–816. [PubMed: 32086278]

18. Diwan V, Small D, Kauter K, et al. تفاوت های جنسیتی در بیماری مزمن کلیوی ناشی از آدنین و عوارض قلبی عروقی در موش صحرایی Am J Physiol Renal Physiol. 2014؛ 307:F1169–F1178. [PubMed: 25209863]

19. Kim A, Fung E, Parikh SG, et al. مدل موشی کم خونی التهاب: پاتوژنز پیچیده با وابستگی جزئی به هپسیدین خون 2014؛ 123: 1129-1136. [PubMed: 24357728]

20. Finberg KE، Whittlesey RL، Fleming MD، و همکاران. تنظیم پایین سیگنالینگ Bmp/Smad توسط Tmprss6 برای حفظ هموستاز آهن سیستمیک مورد نیاز است. خون 2010؛ 115:3817-3826. [PubMed: 20200349]

21. Darshan D، Wilkins SJ، Frazer DM، و همکاران. کاهش بیان فروپورتین{1}} باعث واکنش کم موش های شیرده به محرک هایی می شود که جذب آهن را کاهش می دهند. گوارش. 2011؛ ​​141:300-309. [PubMed: 21570398]

22. گالی بی، فرینگ-اپل دی، بکر سی، و همکاران. پروتئین های تنظیم کننده آهن، بلوک مخاطی را برای جذب آهن در روده کنترل می کنند. Cell Rep. 2013؛ 3:844-857. [PubMed: 23523353]

23. Wilkinson N، Pantopoulos K. سیستم IRP/IRE in vivo: بینش‌هایی از مدل‌های موش. فارماکول جلو. 2014؛ 5:176. [PubMed: 25120486]

24. Meijers B, Farré R, Dejongh S, et al. عملکرد سد روده در بیماری مزمن کلیه سموم (بازل). 2018؛ 10:298.

25. Schiavi SC, Tang W, Bracken C, et al. حذف Npt2b هیپرفسفاتمی مرتبط با CKD را کاهش می دهد. جی ام سوک نفرول. 2012؛ 23:1691-1700. [PubMed: 22859851]

26. Donovan A, Lima CA, Pinkus JL, et al. صادرکننده آهن فروپورتین/Slc40a1 برای هموستاز آهن ضروری است. سلول متاب. 2005؛ 1:191-200. [PubMed: 16054062]

Mark R. Hanudel1، برایان Czaya2، Shirley Wong2، Maxime Rappaport1، Shweta Namjoshi1، Kristine Chua2، Grace Jung2، Victoria Gabayan2، Bo Qiao2، Elizabeta Nemeth2، Tomas Ganz2

1. گروه اطفال، دانشکده پزشکی دیوید گفن در UCLA، لس آنجلس، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا

2. گروه پزشکی، دانشکده پزشکی دیوید گفن در UCLA، لس آنجلس، کالیفرنیا، ایالات متحده آمریکا