فلاونوئیدها به عنوان عوامل ضد ویروسی امیدوارکننده در برابر عفونت SARS-CoV{1}}: یک بررسی مکانیکی

برای اطلاعات بیشتر. مخاطبtina.xiang@wecistanche.com

خلاصه: یک کروناویروس تازه تشخیص داده شده در سال 2019(کووید-19) از زمان کشف بر تمامی فعالیت های انسانی تأثیر گذاشته است.فلاونوئیدهابه طور معمول در رژیم غذایی انسان یافت می شود به دلیل فعالیت های بیولوژیکی قابل توجه آنها توجه زیادی را به خود جلب کرده است. این مقاله مروری جامع از مزایای فلاونوئیدها در بیماری کووید{0}} ارائه می‌کند. اثرات گزارش شده قبلی فلاونوئیدها بر روی پنج ویروس RNA با تظاهرات بالینی و/یا درمان های دارویی مشابه، از جمله آنفولانزا، ویروس نقص ایمنی انسانی (HIV)، سندرم حاد تنفسی (SARS)، سندرم تنفسی خاورمیانه (MERS) و ابولا، بود. در نظر گرفته شده. فلاونوئیدها از طریق مستقیم عمل می کنندضد ویروسخواص، جایی که آنها مراحل مختلف چرخه عفونی ویروس و اثرات غیر مستقیم را هنگامی که پاسخ میزبان به عفونت ویروسی و عوارض بعدی را تعدیل می کنند، مهار می کنند. فلاونوئیدها از طریق مهار پروتئاز ویروسی، RNA پلیمراز، mRNA، تکثیر ویروس و عفونت زایی، فعالیت ضد ویروسی نشان داده اند. این ترکیبات همچنین برای تنظیم اینترفرون‌ها، سیتوکین‌های پیش‌التهابی و مسیرهای التهابی زیر سلولی مانند فاکتور هسته‌ای-kB و کینازهای N-ترمینال ژوئن مؤثر بودند. بایکلین،کورستینو مشتقات آن، هسپریدین و کاتچین ها، فلاونوئیدهای مورد مطالعه در این زمینه هستند. در نتیجه، فلاونوئیدهای رژیمی گزینه‌های درمانی امیدوارکننده‌ای در برابر عفونت COVID-19 هستند. با این حال، تحقیقات آینده برای ارزیابی خواص ضد ویروسی این ترکیبات بر روی این بیماری توصیه می شود.

کلید واژه ها: التهاب;ریه; آسیب اکسیداتیو؛ ضد ویروس؛ پلی فنول

برای آشنایی با محصولات بیشتر اینجا را کلیک کنید

1. مقدمه

تا پایان سال 2019، ذات‌الریه غیرمعمول از چین گزارش شد که بیشتر به‌عنوان یک ویروس کرونای جدید (CoV) که باعث سندرم حاد تنفسی (SARS) می‌شود، تشخیص داده شد و COVID{1}}[1,2] نامیده شد. بعداً، ویروس (SARS-CoV-2) به کشورهای دیگر سرایت کرد و در 11 مارس 2020 توسط WHO یک بیماری همه گیر اعلام شد [3]. اینویروسبیشتر از طریق قطرات تنفسی منتقل می شود و شدت آن از علائم کشنده خفیف تا شدید متغیر است. تصور می شود که موارد بدون علامت در دوره کمون منبع مهمی از سرایت [4] باشد. در بیشتر موارد، رفع علائم خفیف 1-2 هفته طول می‌کشد، در حالی که موارد شدید می‌تواند منجر به مرگ شود [5].

SARS-CoV-2 بر سیستم تنفسی تأثیر می گذارد و باعث تب و سرفه خشک می شود [4]. با این حال، ویروس می تواند باعث نارسایی اندام ها، به طور عمده در قلب و کلیه ها، و همچنین ایجاد طوفان سیتوکین، که بیشتر مرگ و میر را افزایش می دهد. چرخه حیات ویروسی SARS-CoV-2 شامل

چسبندگی، نفوذ، بیوسنتز، بلوغ و رهاسازی. پس از اتصال، RNA ویروسی برای همانندسازی وارد هسته سلول می‌شود و mRNA ویروسی شروع به تولید پروتئین‌های ساختاری ویروسی، از جمله پروتئین‌های اسپایک (S)، غشاء (M)، پوشش (E) و نوکلئوکپسید (N) می‌کند [6]. گیرنده 2 (ACE2) آنزیم مبدل آنژیوتانسین، که به شدت در ریه ها بیان می شود، همچنین نشان داده شده است که به عنوان یک گیرنده کمکی برای SARS-CoV عمل می کند [7].

SARS، MERS، و SARS-CoV-2 همه RNA CoV هستند. ژنوم SARS-CoV{3} 88 درصد شبیه به سندرم‌های حاد تنفسی حاد (SARS) شبیه به سندرم‌های تنفسی حاد ناشی از خفاش، 79 درصد شبیه به SARS-CoV و 50 درصد شبیه به MERS-CoV است [8،9]. پروتئین های SARS-CoV{14}} 90 درصد -100 درصد همولوگ با SARS-CoV هستند. اگرچه، orf10 و orf8 بین SARS-CoV{21}} و SARS-CoV متفاوت هستند. Orf8 یک پروتئین کمکی برای CoVها است. این پروتئین شش رشته‌ای آلفا مارپیچ را تشکیل می‌دهد که توانایی انتشار ویروس را افزایش می‌دهد. SARS-CoV-2 orfla/b، سنبله، پاکت، غشاء، و نوکلئوپروتئین نیز ارتباط نزدیکی با SARS-CoV دارند [10] .

از آنجایی که هیچ عامل ضد ویروسی خاصی در برابر SARS-CoV-2 وجود ندارد، داروهای ضد ویروسی موجود در حال حاضر برای درمان COVID-19 در نظر گرفته می‌شوند. رمدسیویر یک داروی ضد ویروسی جدید است که به طور خاص برای ویروس ابولا در سال 2015 معرفی شد. این یک اثر مهاری بر روی RNA پلیمراز ویروسی دارد و اخیراً در برخی آزمایش‌ها برای درمان کووید{4}} استفاده شده است [11]. فاویپیراویر با همان مکانیسم اثر مهاری بر روی آنفولانزا و ویروس ابولا دارد و در SARS-CoV-2 [12-14] نیز ارزیابی می‌شود. لوپیناویر یک مهارکننده پروتئاز ویروسی است و ابتدا برای درمان HV ساخته شد. مطالعات آزمایشگاهی اثر مهاری لوپیناویر را در سلول‌های آلوده به CoV نشان داد [15،16]. با این حال، بررسی‌های سیستماتیک هیچ اثر مفیدی را علیه SARS-CoV نشان ندادند{13}} [17].

گیاهان دارویی از زمان های قدیم منبع قابل اعتماد داروهای طبیعی از جمله عوامل ضد ویروسی بوده اند. مطالعات طب سنتی و قوم‌فارماکولوژیک کشورهای مختلف در سراسر جهان همواره راه‌های جدیدی را برای کشف دارو باز کرده است [18-22]. Oseltamivir که یک عامل ضد ویروسی معمولی است، مشتقی از اسید شیکمیک، متابولیت ثانویه بادیان ستاره ای (Illicium verum Hook.f.) است. در مورد SARS-CoV-2، در مطالعات سیلیکونی خواص ضد ویروسی احتمالی ترکیبات گیاهی [23-25] آشکار شده است. فلاونوئیدها دسته بزرگی از فیتوکمیکال‌ها هستند که معمولاً در چندین غذا و سبزیجات در رژیم غذایی انسان یافت می‌شوند و دارای فعالیت‌های دارویی ارزشمند متعدد از جمله خواص ضد ویروسی هستند. نشان داده شده است که این ترکیبات می توانند با هدف قرار دادن مراحل ضروری چرخه حیات ویروسی، پاتوژنز ویروسی را مهار کنند [26]. کوئرستین، کاتچین، کامفرول و بایکالئین نمونه هایی از مهم ترین فلاونوئیدهایی هستند که خواص ضد ویروسی از خود نشان می دهند [18،27،28]. هدف این مطالعه بررسی شواهد ضد ویروسی موجود در مورد فلاونوئیدها به عنوان یک درمان احتمالی علیه SARS-CoV{9}} با توجه به اثرات گزارش شده قبلی این ترکیبات بر روی پنج ویروس RNA با تظاهرات بالینی مشابه و/یا درمان‌های دارویی، از جمله آنفولانزا، ویروس نقص ایمنی انسانی (HIV)، سندرم حاد تنفسی شدید (SARS)، سندرم تنفسی خاورمیانه (MERS) و ابولا.

2. نتایج

فعالیت ضد ویروسیفلاونوئیدها را می توان به اثرات ضد ویروسی مستقیم که در آن ویروس مستقیماً تحت تأثیر فلاونوئیدها قرار می گیرد و اثرات غیرمستقیم جایی که فلاونوئید مکانیسم های دفاعی میزبان را در برابر عفونت ویروسی بهبود می بخشد طبقه بندی کرد. در اینجا، مکانیسم‌های ضد ویروسی فلاونوئیدها با اشاره به مهم‌ترین فلاونوئیدهایی که این مکانیسم‌ها را نشان می‌دهند، مورد بحث قرار می‌گیرند.

2.1. مکانیسم ضد ویروسی مستقیم

2.1.1. مهار پروتئاز ویروسی

پروتئازهای ویروسی برای جدا کردن پیش سازهای پلی پروتئینی ویروسی در مکان های خاص برای آزادسازی پروتئین های عملکردی استفاده می شوند. همچنین نشان داده شده است که پروتئازهای ویروسی خاص پروتئین های سلول میزبان، از جمله فاکتورهای شروع ترجمه (eF4 و elF3d) را در HIV می شکافند تا از ترجمه پروتئین میزبان جلوگیری کنند [29،30]. کروناویروس‌ها سه نوع پروتئاز ویروسی تولید می‌کنند، از جمله 3-سیستئین شبه کیموتریپسین (3CLpro)، پروتئاز شبه پاپائین (PLpro) و پروتئاز اصلی (M pro)[31].3CLpro برای زندگی SARS-CoV مهم است. چرخه، PLpro در تکثیر SARS-CoV{12}} نقش دارد و Mopar مسئول بلوغ پروتئین های عملکردی در SARS-CoV-2 [32،33] است. در نتیجه، این مولکول ها اهداف دارویی مناسبی در تحقیقات ضد ویروسی و کشف دارو هستند [34].

Kaempferol که یک فلاونوئید فراوان در چندین غذا است CPE را در سلول های Vero E6 آلوده به ایزوله های بالینی SARS-CoV{2}} با حدود 88 درصد مهار در غلظت 125 میکرومولار کاهش داد. یک تحقیق همراه در سیلیکون نشان می دهد که مهار آنزیم SARS-CoV{6}}CLpro مکانیسم اصلی اثر است [35]. افزودن کامفرول به 3CLpro و PLpro SARS-CoV و MERS-CoV بیان شده در E.coli باعث اثرات ضد ویروسی از طریق مهار این آنزیم ها شد [36]. پارک و همکاران (2{43}}17) نشان دادند که حضور گروه هیدروکسیل در کامفرول از طریق مهار 3CLpro و PLpro [37] باعث فعالیت ضد ویروسی قوی‌تری می‌شود. اپی گالوکاتچین گالات (EGCG) یک فلاونوئید موجود در چای (Camellia sinensis L.) با خواص ضد قارچی، ضد باکتریایی و ضد ویروسی است [38.39]. مطالعات نشان داد که EGCG از فعالیت رونوشت معکوس (RT)، فعالیت پروتئاز، p24، ورود ویروس و تولید ویروس در سلول‌های THP{18}} و H9 آلوده به HIV{20}} جلوگیری می‌کند و اصلاح لیپوزوم EGCG مهارکننده آن را تقویت می‌کند. اثرات مطالعات بدون سلول نیز کاهش قابل توجهی در سینتیک پروتئاز پس از درمان با EGCG نشان داد. گروه گالویل در EGCG مسئول فعالیت های ضد باکتریایی و ضد ویروسی آن در نظر گرفته می شود [40]. Isoliquiritigenin، یک چالکون، می تواند به عنوان یک عامل درمانی در عفونت های باکتریایی و ویروسی استفاده شود [41]. این ترکیب اثر مهاری بر SARS-CoV، و MERS-CoV 3CLpro و PLpro نشان داده است که در E.coli بیان می‌شود. وجود یک گروه عاملی پرنیل در حلقه رزورسینول باعث ایجاد برهم‌کنش‌های آبگریز با پروتئازها می‌شود [37]. تیافلاوین ها پلی فنول هایی هستند که در انواع مختلف چای یافت می شوند [42]. آزمایشات روی پروتئاز نوترکیب SARS-CoV کاهش قابل توجهی در فعالیت 3CLpro پس از درمان با تافلاوین{31}}،3'-digallate با مقدار IC50 9.5 میکرومولار نشان داد. گروه گالات متصل به موقعیت 3 در برخی از تیافلاوین ها ممکن است برای تعامل با سایت فعال 3CL ضروری باشد [43]. Prenylisoflavonoids استخراج شده از Erythrina senegalensis DC. برای ارزیابی فعالیت ضد پروتئاز در برابر پروتئاز HIV{41} نوترکیب استفاده شد. نتایج نشان داد که این ترکیبات می توانند پروتئاز نوترکیب HIV را در شرایط آزمایشگاهی با مقادیر 0.5 تا 30 μMIC50 مهار کنند. گروه های هیدروکسی و پرنیل ممکن است مسئول مهار پروتئاز HIV باشند [44]. کوئرستین و کورستین{48}گالاکتوزید فعالیت PLpro، 3CLpro، deubiquitination و DelSGylation را در SARS-CoV، MERS-CoV و HIV کاهش دادند{52}}. موقعیت گروه های هیدروکسیل ممکن است در فعالیت ضد پروتئاز موثر باشد. کوئرستین با پنج گروه هیدروکسیل در موقعیت‌های 3،5،7،3 و 4 اثر مهاری قوی بر پروتئازهای ویروسی نشان داد. در حالی که حضور گروه گلیکوزیل در موقعیت های 3،7A' اثر مهاری را کاهش داد [37،45].

2.1.2. مهار RNA پلیمراز ویروسی و mRNA ویروسی

RNA پلیمراز وابسته به RNA (RdRp) یک آنزیم مهم است که تکثیر RNA از یک توالی RNA را کاتالیز می کند [46]. این آنزیم در تمام ویروس‌های RNA و همچنین برخی یوکاریوت‌ها کدگذاری می‌شود [47]. ویروس ها انگل های داخل سلولی اجباری هستند، یعنی نمی توانند به طور مستقل از سلول ها زنده بمانند. آنها باید از تجهیزات انتقال سلولی برای ترجمه mRNA ها برای تولید پروتئین استفاده کنند که برای همانندسازی لازم است. بنابراین، هرگونه تداخل با ترجمه mRNA، تکثیر، گسترش و تکامل ویروس را مهار می کند [48].

تحقیقات اخیر توسط زندی و همکاران. اثر ضد ویروسی in vitro بایکالین و بایکالئین در برابر عفونت SARS-CoV-2 در رده سلولی Vero CCL-81 را از طریق مهار RdRp، با قدرت بالاتر بایکالئین، نشان داد. بیشتر در ارزیابی‌های سیلیکونی نشان داد که این دو ترکیب میل ترکیبی بیشتری با RdRp در مقایسه با تحویل مجدد دارند: به نظر می‌رسد محل اتصال بایکالین و بایکالئین با رمدسیویر متفاوت است. بنابراین، این فلاونوئیدها می توانند به عنوان یک درمان کمکی همراه با رمدسیویر استفاده شوند [49]. اثرات کوئرستین{4}O-گلوکوزید (Q7G) در یک مطالعه آزمایشگاهی بر روی سلول‌های MDCK آلوده به ویروس‌های آنفولانزای A و B در مقایسه با عامل ضد ویروسی استاندارد اوسلتامیویر ارزیابی شد. Oseltamivir به عنوان یک داروی کنترل شده استفاده شد و فعالیت ضد ویروسی متوسطی با مقادیر IC50 از 25.4 تا 42.2 ug/mL نشان داد. در حالی که Q7G ویروس آنفولانزای A و B را با مقادیر IC50 3.10 میکروگرم در میلی لیتر تا 8.19 میکروگرم در میلی لیتر مهار کرد. Oseltamivir همچنین فعالیت ضعیف تری در برابر آنفولانزای B نسبت به آنفولانزای A نشان داد. در حالی که Q7G فعالیت قوی در برابر همه ویروس های آنفولانزا نشان داد. علاوه بر این، سنجش‌های کمی PCR کاهش بیشتری را در سنتز RNA ویروسی پس از درمان Q7G در مقایسه با اوسلتامیویر گزارش کردند که نشان‌دهنده اثر مهاری Q7G بر روی RNA پلیمراز ویروسی است. تجزیه و تحلیل اتصال مولکولی نشان داد که این تعامل به دلیل اتصال Q7G به زیر واحد PB2 RNA پلیمراز ویروسی است [50].

Oroxylin A (OA) یک فلاونوئید است که در Oroxylum Indicum (L.) Kurz یافت می شود. نشان داده شده است که OA می تواند چندین سویه آنفولانزای A را در سلول های MDCK به روشی وابسته به دوز مهار کند. درمان خوراکی موش‌های آلوده به ویروس آنفولانزا H1N1 با استئوآرتریت همچنین مرگ ناشی از ویروس، کاهش وزن بدن و آسیب ریه را با نرخ بقای 6{5}.0 درصد در دوز mg/kg 100 در روز کاهش داد. اثرات ضد ویروسی OA به دلیل کاهش رونویسی mRNA ماتریکس 1(M1) H1N1 و سنتز پروتئین گزارش شده است (در و همکاران 2018). پروتئین M1 پروتئینی در پوشش ویروسی است که به RNA ویروسی متصل می‌شود و می‌تواند واسطه قرار دادن هسته‌های نوکلئوپروتئین RNA در پوشش غشایی شود [51]. اگرچه OA می تواند سنتز پروتئین را مهار کند، نمی تواند ورود ویروس به سلول میزبان یا ورود نوکلئوپروتئین (NP) به هسته سلول میزبان را مسدود کند [52]. Baicalin و biochanin A می توانند عفونت آنفولانزا H5N1 را در سلول های A549 با مقادیر IC50 به ترتیب 18.79 و 8.92 میکرومولار مهار کنند. این اثر با سرکوب صادرات ریبونوکلئوپروتئین ویروسی هسته ای (RNP) واسطه شد [53]. مطالعات دیگر همچنین نشان داده اند که بایکلین می تواند بیان پروتئین M1 آنفولانزا را کاهش دهد [54،55].

میزبان cdc2-مانند کیناز 1 (CLK1) نقش کلیدی در پیوند ژن M2 ویروس آنفولانزا H1N1 دارد و یک هدف مهم ضد آنفلوانزا است. M2 یک کانال پروتونی در پوشش ویروسی ویروس آنفولانزای A است [56،57]. نشان داده شد که گالوکاتچین{10}}گالات جدا شده از Pithecellobium clypearia یک مهارکننده cdc میزبان مانند کیناز 1 (CLK1)، یک هدف ضد آنفلوانزا به دلیل نقشش در پیوند جایگزین mRNA M2 ویروسی است. بررسی‌ها بر روی اثر گالوکاتچین{16}گالات با دوز روزانه 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم روی موش‌های ICR آلوده به ویروس H1N1، بقای قابل‌توجهی بالاتری را تا 8 روز نشان داد. همچنین از آسیب حاد ریوی ناشی از ویروس و کاهش وزن جلوگیری کرد. علاوه بر این، ارزیابی‌ها بر روی سلول‌های A549 آلوده به H1N، کاهش قابل‌توجهی در mRNA‌های NP و M2 ویروسی را نشان داد. علاوه بر این، فسفوریلاسیون فاکتورهای پیرایشی SF2/ASF و SC35، عوامل کلیدی برای پیرایش جایگزین ژن M2 ویروس، پس از درمان با گالوکاتچین{29}}گالات [58] به طور قابل توجهی کاهش یافت. Cirsimaritin (CST)، فلاونوئیدی از درمنه scoparia Waldst. و Kitam با توجه به اثرات ضد ویروسی in vitro آن بر روی سلول‌های MDCK و THP{31} آلوده به سه سویه ویروس آنفولانزا که مقادیر IC50 را از 5.8 تا 11.1 میکروگرم در میلی‌لیتر نشان دادند، در مقایسه با 3.4 تا 8.9 میکروگرم در میلی‌لیتر برای ریباویرین مورد ارزیابی قرار گرفت. داده ها نشان داد که CST می تواند به طور موثر بیان M2 و پروتئین آنفولانزا را به روشی وابسته به دوز کاهش دهد، به طوری که قدرت CST در 20 میکروگرم بر میلی لیتر بالاتر از 10 میکرومولار ریباویرین استاندارد ضد ویروسی بود [59]. لوتئولین یک فلاونوئید دیگر با اثر مهاری بر بیان M2mRNA است. در سلول‌های MDCK آلوده به سویه‌های مختلف آنفلوانزا، 15 میکرومولار لوتئولین مؤثرتر از 10 میکرومولار اوسلتامیویر در سلول‌های آلوده به H1N1 و H2N3 بود. لوتئولین همچنین بیان پروتئین پوششی I (COPI) ویروس آنفولانزا را کاهش داد که واسطه ورود ویروس و مسیر اندوسیتی در سلول‌های آلوده است [60]. سنتین یک فلاونوئید استخراج شده از درمنه rupestris L. است که همچنین پیشنهاد شده است که دارای اثرات ضد ویروس آنفولانزا از طریق سرکوب بیان mRNA M2 به روشی وابسته به دوز باشد [61].

نشان داده شد که کورستین می تواند یک عامل درمانی احتمالی در برابر عفونت آنفولانزا در مراحل اولیه عفونت باشد، به طوری که می توان از آن برای پیشگیری از ویروس آنفولانزا استفاده کرد. بررسی‌ها بر روی اثرات کورستین بر روی سلول‌های MDCK و A549 آلوده به سویه‌های ویروس آنفولانزای A نشان داد که می‌تواند mRNA ژن NP ویروسی را به شیوه‌ای وابسته به دوز، با بالاترین فعالیت در غلظت 50 میکرومولار 【62】 مهار کند.

تحقیقات نشان داده است که تریسین (4'5,{2}}تری هیدروکسی-3',5'-dimethoxyflavone) فعالیت ضد ویروسی در برابر سویه‌های آنفلوانزای A و B نشان می‌دهد. آزمایش‌های RT-PCR نشان داد که تریسین می‌تواند سنتز mRNA پروتئین M را در سلول‌های MDCK آلوده به ویروس آنفلوانزا سرکوب کند. بدون تاثیر قابل توجهی بر روی بیوسنتز نورآمینیداز و هماگلوتینین. غلظت موثر 50 درصد تریسین که می تواند سنتز mRNA ویروسی را مهار کند، 3.{9}} uM بود.

برای سویه های ویروس آنفولانزای A و 4.9 میکرومولار برای ویروس آنفلوانزای B. در موش های آلوده به ویروس آنفلوانزا، تریسین با دوز 20 میکروگرم بر کیلوگرم کاهش وزن بدن و زمان بقا را بهبود بخشید [63].

2.1.3. ورود ویروس، تکثیر و عفونت

ویروس های RNA پروتئین هایی را با استفاده از ماشین سلولی میزبان برای چرخه زندگی خود کد می کنند. درک این نیازهای سلول میزبان نه تنها ما را از مسیرهای مولکولی استفاده شده توسط ویروس آگاه می کند، بلکه اهداف بیشتری را برای توسعه دارو ارائه می دهد [64].

یک مطالعه آزمایشگاهی اثر کوئرستین و ایزورامنتین را بر روی SARS-CoV{1}در ورود به سلول‌های ACE2h ارزیابی کرد. ACE2 بیان شده روی سلول های ریه یک گیرنده مشترک پروتئین اسپایک ویروسی است و از این رو هدف اصلی عوامل ضد ویروسی علیه SARS-CoV است. مشاهده شد که این دو فلاونوئید میل پیوندی بالایی با ACE2 دارند و متعاقباً از طریق مهار اتصال پروتئین اسپایک به این گیرنده، ورود ویروس را کاهش می‌دهند [65]. مطالعه دیگری تأثیر بایکالئین بر عفونت SARS-CoV{11}} را در سلول‌های Vero E6 و موش‌های تراریخته hACE2 ارزیابی کرد. کاهش قابل توجهی در تکثیر ویروسی in vitro و in vivo و همچنین کاهش وزن بدن و آسیب ریه در حیوانات مشاهده شد [66]. دی هیدروکسی-6'-methoxy-3', 5'-dimethylcalcone، و myricetin-3'5'-dimethyl ether 3-O- -D-galactopyranoside فلاونوئیدها هستند مشتق شده از Cleistocalyx operculate(Roxb.) Merry. و ال ام پری. سنجش کاهش اثر سیتوپاتیک (CPE) نشان داد که این فلاونوئیدها از تکثیر ویروسی ویروس آنفولانزا H1N1 در سلول‌های MDCK جلوگیری می‌کنند. مطالعات رابطه ساختار-فعالیت (SAR) نشان داد که گروه های OH در C{29}} و C{30}}، یک پیوند دوگانه بین C-2 و C-3، و به ویژه یک گروه کربونیل در موقعیت C{33}}، ​​گروه های عاملی حیاتی هستند که به طور قابل توجهی خواص ضد ویروسی فلاونوئیدها را بهبود می بخشند. مهار بیان NP ویروسی در سلول های MDCK آلوده به ویروس H1N1 در غلظت مساوی (30 میکرومولار)، هم ریباویرین و هم 3DSC مهار قابل توجهی از بیان NP را نشان دادند، اگرچه ریباویرین اثر قوی تری داشت [68]. مطالعات نشان داده‌اند که بیوکانین A و بایکالئین از فعال‌سازی کاسپاز، آنزیمی که در تکثیر ویروس نقش دارد، مهار می‌کنند [53،69]. این ترکیبات همچنین می‌توانند صادرات هسته‌ای کمپلکس‌های RNP ویروسی را که در تکثیر ویروسی حیاتی است، مهار کنند [53]. Biochanin A یک اثر بازدارنده در برابر p38 فعال شده با میتوژن و NF-kB نشان داد که نشان داده شده است که در تکثیر ویروسی نقش دارند. NF kB و p38 به دلیل استرس اکسیداتیو فعال می شوند و بر تکثیر ویروس آنفولانزای A و آسیب شناسی تأثیر می گذارند [53،70]. تحقیقات روی کشت سلولی سلول‌های MDCK و سلول‌های A549 آلوده به ویروس آنفولانزا نشان داد که بایکالئین می‌تواند تکثیر ویروس را در غلظت‌های {53}} ug/mL مهار کند. جالب توجه است که بایکالین فعالیت ضد ویروسی مشابهی با ریباویرین و اسلتامیویر به ترتیب در غلظت‌های ug/mL 40 و ug/mL 60 نشان داد. Baicalin همچنین تکثیر ویروسی را در ریه‌های موش در داخل بدن مهار کرد[71]. نشان داده شد که CST پروتئین NF-kB و فسفوریلاسیون NF-KB را در هسته کاهش می دهد [59]. از قبل مشخص شده است که NF-KB نقش مهمی در این زمینه داردالتهاب, استرس اکسیداتیو، و سرکوب ایمنی میزبان [72]. کاهش NF-kB همچنین از تکثیر در انواع مختلف ویروس ها، از جمله ویروس آنفولانزا جلوگیری می کند [73].

در سلول‌های Vero E6 آلوده به SARS-CoV-2، نارینژنین می‌تواند CPE را به روشی وابسته به زمان و غلظت مهار کند. این اثر از طریق مهار کانال‌های دو منفذی آندولیزوزومی (TPCs) انجام شد، مسیری که در عفونی‌بودن SARS-CoV{8}}، ابولا و MERS از طریق تسهیل ورود ویروس انجام می‌شود [74]. EGCG یک اثر مهاری وابسته به دوز (25،50 میکرومولار) بر تکثیر HIV در سلول‌های T نشان داده است. با این حال، مهار تکثیر ویروس مستقیماً تحت تأثیر مهار RT قرار نگرفت. فاسینا و همکاران آنزیم p24 را که در بسته بندی ذرات ویروسی نقش دارد، تجزیه و تحلیل کردند. نتایج نشان داد که غلظت P24 و فعالیت RT در لنفوبلاست های T آلوده به HIV کاهش می یابد. بر اساس نتایج زیر، مشخص شد که EGCG از طریق کاهش عفونت ویروسی، تکثیر ویروسی را مهار می کند. هنوز هیچ قطعیتی در مورد اثر دقیق عفونت ویروسی EGCGon وجود ندارد [75]. سیگنال دهی gp120 معمولاً با افزایش تکثیر HIV در سلول های قبلاً آلوده شده مرتبط است[75]. مطالعات اثر مهاری جنیستئین بر gp120 و متعاقباً تکثیر ویروس HV{22}} را نشان می‌دهد. هیچ تغییری در تکثیر ویروس بعد از تزریق مشاهده نشد.

ژنستئین با غلظت {0}}.5 میکروگرم در میلی لیتر، اما در محدوده 5-10 میکروگرم در میلی لیتر، جنیستئین می تواند تکثیر ویروسی را سرکوب کند [76]. هرباسیترین یک فلاونوئید است که از Drosera peltata Thunb مشتق شده است. و قبلا به عنوان یک عامل ضد ویروسی شناخته می شد. نشان داده شد که هرباسیترین هر دو RT و اینتگراز را در کشت های سلولی MT-4 و MT{6}} آلوده به HIV مهار می کند، که منجر به مسدود شدن تکثیر ویروسی در مراحل مختلف می شود. در غلظت 21.5 میکروگرم بر مولار، هرباسیترین می تواند فعالیت R را سرکوب کند، در حالی که می تواند اینتگراز را در غلظت کمتر، 2.15 میکرومولار مهار کند [77]. Scutellarin خالص شده از Erigeron breviscapus یک فلاونوئید با فعالیت ضد HIV{13}} است. این فلاونوئید فعالیت RT و همجوشی سلولی HIV را به عنوان شرکت کنندگان اصلی تکثیر ویروس [Z8] مهار کرد. هسپریدین و لینارین فلاونوئیدهایی با روتینوز در حلقه A و جایگزینی متوکسی (-OCH3) در حلقه B هستند. نشان داده شده است که ایزوکورستین از تکثیر ویروس آنفولانزای A و B در سلول های MDCK آلوده جلوگیری می کند. ترکیب ایزوکورستین با آمانتادین همچنین اثر هم افزایی بر تکثیر ویروسی در سلول های MDCK آلوده به ویروس آنفولانزای A تنها در دوزهای پایین (0.5 میکرومولار برای ایزوکورستین و 1 میکرومولار برای آمانتادین) نشان داد. مقدار تیتر ویروس پس از تجویز ایزوکورستین و آمانتادین حدود 7.5 بود. افزایش غلظت ایزوکورستین و آمانتادین اثر هم افزایی بر تیترهای ویروس را به مقدار 5 کاهش داد [79]. Q3R مشتق شده از Houttuynia cordata اثرات ضد ویروس آنفولانزا را اعمال می کند. اثرات Q3R بر سلول‌های MDCK آلوده به ویروس آنفولانزای A با اوسلتامیویر مقایسه شد. ضایعات ریوی و ادم توسط Q3R بیشتر از اسلتامیویر مهار شد. Q3R نیز در مقایسه با اسلتامیویر اثربخشی بالاتری داشت. اثر مهاری Q3R بر تکثیر ویروس آنفلوانزا غیرمستقیم و از طریق تعامل با ذرات ویروسی بود. Oseltamivir فعالیت ضد ویروسی متوسطی داشت، حدود 58 درصد در برابر ویروس آنفولانزای A، و فعالیت ضد ویروسی ضعیف کمتر از 49 درصد با دوزهای کمتر از 10 ug/mL. در حالی که Q3R 86 درصد مهار ویروسی را در 100 ug/mL و 66 درصد مهار را در غلظت‌های 10 ug/mL نشان داد [80]. نشان داده شد که کوئرستین 3- -OD-Glucoside (Q3G) از تکثیر ویروس ابولا در شرایط آزمایشگاهی جلوگیری می کند. تجویز پیشگیرانه Q3G 30 دقیقه قبل از عفونت، پیشگیری قابل توجهی از ویروس ابولا را نشان داد. Q3G همچنین می تواند ورود ویروس را در مراحل اولیه مهار کند. بنابراین O3G می تواند یک فلاونوئید موثر برای پیشگیری از ویروس ابولا باشد [81].

2.2. اثرات ضد ویروسی غیر مستقیم

2.2.1. تاثیر بر اینترفرون ها

اینترفرون ها (IFNs) شامل گروهی از پروتئین ها هستند که توسط چندین سلول ایمنی در پاسخ به بسیاری از پاتوژن ها مانند ویروس ها، انگل ها، باکتری ها و سلول های تومور تولید می شوند. سه دسته اصلی از IFN ها وجود دارد، از جمله اینترفرون های نوع I یا پایدار به اسید (زیرگروه های IFN، IFN-، IFN-K، IFN-e، IFN-w، و IFN-t)، نوع II (IFN-y)، و IFN های نوع III که با نام IFN-λ 【82-84】 شناخته می شوند. آنها طیف گسترده ای از فعالیت های بیولوژیکی مانند فعال سازی پاسخ ایمنی ذاتی، افزایش بیان مولکول های اصلی مجتمع سازگاری بافتی (MHC) و سرکوب رگزایی را نشان می دهند. مهمترین نقش آنها تداخل با عفونت های ویروسی است [84،85].

در مراحل اولیه عفونت ویروسی، IFN ها ذاتی را فعال می کنندسیستم ایمنی. مطالعات اخیر کاهش در القاء و سیگنال دهی IFN نوع I و نوع I در بیماران COVID-19 [86] گزارش کرده است. این نوع IFN با کاهش مهاجرت نوتروفیل ها به محل التهاب، افزایش تظاهر آنتی ژن، سرکوب التهاب ناشی از ماکروفاژهای تک هسته ای و فعال کردن ایمنی اکتسابی برای پیشرفت پاسخ های سلول های B و T اختصاصی آنتی ژن، اثرات ضد ویروسی نشان داده اند. 86-90]. بنابراین، استفاده از IFN در مرحله اولیه بیماری می‌تواند با کاهش تکثیر ویروس، علائم کووید-19 را کاهش دهد. محققان همچنین گزارش دادند که سطح IFN- می تواند در بیماران COVID{9} مبتلا به ARDS افزایش یابد. افزایش سریع سطح IFN ها می تواند سیتوکین های پیش التهابی را به داخل بافت آلوئولی دعوت کند و منجر به التهاب ریوی و آسیب ریه شود[90،91]. بنابراین، به نظر می‌رسد که افزایش یا عدم تنظیم IFN و سایر پاسخ‌های سیتوکین‌های پیش التهابی یا هر دو می‌توانند نقش مهمی در پیشرفت و ویژگی‌های پاتولوژیک SARS-CoV داشته باشند.

اجازه دهید آل. اثرات ضد آنفولانزای بایکالین، یک گلیکوزیلوکسی فلاون که 7-O-گلوکورونید بایکالئین است را در مدل in vitro و in vivo عفونت ویروس آنفولانزای A بررسی کنید. فاکتور 6 مرتبط با گیرنده TNF (TRAF6) یک واسطه موثر در مسیر سیگنالینگ تولید IFN است. بیان بیش از حد TRAF6 منجر به افزایش تولید IFN نوع I می شود [54]. MicroRNA ها (miRNAs) مولکول های کوچکی هستند که تنظیم ژن را پس از رونویسی کنترل می کنند [92]. نشان داده شده است که miR{11}}a نقش تنظیمی در التهاب دارد [93]. miR{13}}a می‌تواند تکثیر H1N1 و H3N2 را از طریق کاهش TRAF6 افزایش دهد. بایکالین (20 میکروگرم در میلی لیتر) کاهش قابل توجهی در بیان miR، سطح پروتئین Ml، NP ویروسی، تیتر ویروس و همچنین افزایش نرخ بقای موش ها را نشان داد [54]. در مطالعه دیگری، نایاک و همکارانش فعالیت ضد ویروس آنفولانزا (H1N1-pdm09) بایکلین را از طریق تنظیم پروتئین ویروسی NS1 نشان دادند، که منجر به افزایش تنظیم فاکتور تنظیمی اینترفرون 3 (IRF-3)، IFN شد. - و IFN- . این تنظیم افزایشی IFN تکثیر ویروسی را کاهش داد که می‌تواند رونوشت‌های ویروسی و بیان سیتوکین‌های پیش‌التهابی از جمله IL{35}} و TNF-x [55] را کاهش دهد.

دینگ و همکاران مطالعه ای را برای بررسی اثرات هسپریدین، یک گلیکوزید فلاوانون، در آسیب ریه ناشی از ویروس آنفولانزای A (H1N1) در موش های صحرایی نر طراحی کرد. نتایج نشان داد که هسپریدین از طریق کاهش تولید سیتوکین های پیش التهابی، از جمله IFN-، TNF-x و IL{6}}، با سرکوب مسیرهای سیگنالینگ MAPK، آسیب ریه را کاهش داد. هسپریدین همچنین IFN- را در سلول های اندوتلیال میکروواسکولار ریوی آلوده به H1N1 کاهش داد [94]. در مطالعه دیگری توسط کیم و همکاران. ایزوکورستین به طور موثری آسیب ریه ناشی از ویروس H1N1 را در موش از طریق کاهش IFN-، iNOS، RANTES، تیتر ویروس، برونشیت ویروسی و برونشیولیت کاهش داد [79].

Oroxylin A (OA) از Oroxylum Indicum (L.)Kurz از آسیب ریوی ناشی از ویروس آنفولانزای A H1NI در موش ها از طریق افزایش تنظیم IFN- و IFN- 【52】 جلوگیری کرد. ووگونین، فلاونوئید دیگر جدا شده از Scutellaria baicalensis Georgi، با تنظیم مسیرهای AMPK فعالیت ضد آنفلوانزای قابل توجهی از خود نشان داد. ووگونین همچنین تنظیم مولکول های پایین دستی IFN-، IFN-λl و IFN، از جمله ژن مقاومت به میکسوویروس A (MxA) و 2-5' oligoadenylate synthetase (OAS) را در سلول های آلوده به MDCK و A549 افزایش داد [95].

2.2.2. اثر بر سیتوکین های التهابی (TNF، IL و MCP)

CoV ها حاوی برخی فریم های خواندن باز هستند که چند پروتئین جانبی را رمزگذاری می کنند. نشان داده شده است که این پروتئین های کمکی مسیرهای التهابی مانند سیگنال دهی IFN و سیتوکین های پیش التهابی را تعدیل می کنند [96]. مشخص شده است که پیش‌آگهی کووید{2}} می‌تواند با ترشح سیتوکین‌های پیش‌التهابی، از جمله اینترلوکین‌ها، IFNy و TNF- [97] بدتر شود. Blanco-Mello و همکاران نشان دادند که پاسخ ایمنی نامناسب ممکن است به تکثیر ویروس و عوارض ناشی از انواع شدید کووید کمک کند-19 [98]. Ruan و همکارانش همچنین نشان دادند که افزایش سیتوکین های التهابی مانند IL{9}} با ARDS، نارسایی تنفسی و پیامدهای بالینی نامطلوب مرتبط است [99]. نارسایی تنفسی ناشی از آسیب ریه در نتیجه تولید بیش از حد سیتوکین های پیش التهابی پس از نفوذ سلول های ایمنی به ریه است [100]. طوفان سیتوکین یک پاسخ التهابی سیستمیک است که با طیف وسیعی از عوامل مانند عفونت ها و داروهای خاص مرتبط است. چندین مطالعه ارتباط معنی‌داری بین طوفان سیتوکین، التهاب شدید و نارسایی اندام‌های متعدد در بیماران مبتلا به کووید را نشان داد [101-103]. شناسایی ویروس SARS-CoV{16} با سیستم ایمنی ذاتی و سازگار می‌تواند منجر به فعال‌سازی و تولید سایتوکاین‌های التهابی شود. طبق مطالعات اخیر، سطوح پلاسمایی سیتوکین های پیش التهابی در بیماران کووید{18}} افزایش یافته است. این سیتوکین های التهابی مانند TNF-، IL6، IL 2، IL-1، IL7، IL 10 و IL{25}}، و همچنین پروتئین جذب کننده شیمیایی مونوسیت-1(MCP{27}} ) از طریق افزایش بار ویروسی، ذات الریه، آسیب ریه، اختلالات عصبی و مرگ و میر نقش اساسی در پیشرفت پاتولوژیک و شدت COVID{28}} دارند [97,101].

این رویدادها می تواند منجر به نارسایی چند عضوی و آسیب ریه به عنوان عارضه اصلی SARS-CoV شود-2. بنابراین، تعدیل سیتوکین های پیش التهابی را می توان یک هدف درمانی معقول در COVID{4}} در نظر گرفت. علاوه بر این، اثرات ضد التهابی قابل توجهی از فلاونوئیدها در بسیاری از مطالعات نشان داده شده است. بنابراین، آنها ممکن است ترکیبات امیدوار کننده ای در مبارزه با عوارض ناشی از التهاب کووید-19 [97] باشند.

یانگ و همکاران با کاهش سطوح IL-1 و IL-6، اثر محافظتی 3-دئوکسی‌پانکالکون (30 میکرومولار) را بر التهاب و آپوپتوز ناشی از ویروس آنفلوانزای H1N1 در شرایط آزمایشگاهی ثابت کرد [68]. بایکالئین، یک فلاون، و بیوکانین A، یک ایزوفلاون متیله O، بیان سیتوکین های پیش التهابی را در سلول های A549 و ماکروفاژهای اولیه مشتق از مونوسیت انسانی (MDM) آلوده به سویه های ویروس آنفولانزا H5N1 کاهش داد که می تواند از فعال شدن مسیر التهابی و آسیب های بافتی جلوگیری کند. [53]. در سلول‌های A549 و MDCK آلوده به آنفلوآنزا، بایکالین، شکل گلیکوزیله بایکالئین (بایکالئین{17}گلوکورونید)، می‌تواند سطوح IFN را افزایش دهد و در نتیجه تولید سیتوکین‌های پیش‌التهابی را کاهش دهد. بنابراین، IL{19}} و TNF- به طور قابل توجهی در سلول های تیمار شده با بایکالین در مقایسه با سلول های کنترل درمان نشده کمتر بودند [55].

یک مطالعه آزمایشگاهی نشان داده است که غلظت‌های 2.5، 5 و 10 میکروگرم در میلی‌لیتر CST، یک دی متوکسی فلاون، تأثیر قابل‌توجهی بر تضعیف مسیر انتقال سیگنال NF-kB در سلول‌های THP-1 آلوده به آنفولانزای A دارد. ویروس (H1N1) به دنبال مهار NF-kB، تولید سیتوکین های پیش التهابی شامل I{10}}، IL{11}}، IL{12}} و TNF- و همچنین پروتئین مرتبط با التهاب COX{{ 15}}، توسط CST به روشی وابسته به دوز سرکوب شدند[59]. در یک مطالعه آزمایشگاهی توسط Yonekawa و همکاران در مورد خواص ضد ویروسی هسپریدین و لینارین، این گلیکوزیدهای فلاونوئیدی R{18}}HIV{19}}NL(AD8) تکثیر ویروسی را در سلول‌های CD4 به علاوه NKT با افزایش تولید مهار کردند. سیتوکین های ضد التهابی شامل IL-2، IL-5 و IL-13. مشاهده شد که اثر تحریکی این دو فلاونوئید به شدت به نصف قند وابسته است زیرا آگلیکون ها (هسپرتین و آکاستین) نتوانستند چنین فعالیتی را نشان دهند. علاوه بر این، جایگزینی متوکسی (-OCH3) در حلقه B برای فعالیت تحریکی هسپریدین و لینارین روی سلول‌های CD4 به علاوه NKT ضروری است. آنها همچنین می‌توانند ترشح RANTES، MIP{29}} و MIP{30} را از گیرنده‌های سلول T بیان‌کننده V61 به‌علاوه تحریک کنند که متعاقباً تکثیر ویروسی را در سلول‌های CD4 به علاوه NKT سرکوب کردند[104]. کانگ و همکاران اثرات ضد آنفلوانزای فلاونوئیدهای خالص شده از Pithecellobium clypearia Benth بر روی مدل in vitro عفونت ویروس آنفولانزای A را گزارش کرد. این فلاونوئیدهای خالص شده تولید IL-6 و MCP-1 در سلول‌های ریه A549 انسان آلوده به H1N را سرکوب کردند[105]. مهربد و همکاران اثر ضد التهابی کوئرستین-3-O{43}}ال-رامنوپیرانوزید (Q3R)، یک فلاون گلیکوزیله، بر روی سلول‌های MDCK آلوده به ویروس آنفولانزا H1N1 را بررسی کرد. Q3R در غلظت 150 میکروگرم بر میلی‌لیتر به طور قابل‌توجهی تیتر ویروس را کاهش داد و تولید IL را افزایش داد، که می‌تواند ترشح IL{52}} را توسط سلول‌های CD4 به علاوه T افزایش دهد و فعالیت ضد ویروسی آنها را افزایش دهد. از سوی دیگر، O3R تولید TNF- را به عنوان یکی از واسطه‌های التهابی مهم که باعث تب و راه‌اندازی مسیر پیش‌التهابی NF-kB می‌شود، سرکوب می‌کند و وضعیت بیماران را بیشتر بدتر می‌کند [106]. تری متوکسی فلاون Santin فعالیت ضد آنفولانزا را در سلول‌های THP-1 و MDCK در غلظت 60 میکرومولار نشان داده است. ویروس آنفولانزا A (H3N2) تولید سیتوکین های پیش التهابی را در سلول های THP-1 القا می کند که منجر به التهاب و آسیب ریه می شود [61]. سیتوکین های ضد التهابی نیز ممکن است در طول عفونت ویروس آنفولانزا تغییر کنند. IL{70}} سلول‌های T کشنده طبیعی ثابت را با کاهش تولید IL{71}} توسط سلول‌های دندریتیک مشتق از مونوسیت ریوی مهار می‌کند[107]. سطوح IL{74}}، IL-8، IL-10، IL-1 و TNF- به طور قابل توجهی در گروه تحت درمان با Santin از طریق کاهش MAPKها و NF- کاهش یافت. مسیرهای سیگنال دهی kB [61].

علاوه بر موارد فوق، گالوکاتچین-7-گالات، جنیستئین و تافلاوین ها دیگر فلاونوئیدها هستند که اثرات تعدیل کنندگی بر تولید سایتوکین های پیش التهابی دارند [58,76,108]. بنابراین، به نظر می رسد این مولکول ها دارای اثر ضد التهابی مطلوبی هستند که در کنترل التهاب مرتبط با عفونت ویروسی مفید است.

2.2.3. تأثیر بر مسیرهای التهابی زیر سلولی (NF-kB، PI3K/Akt، و MAPK/JNK)

هنگامی که یک ویروس وارد سلول میزبان می شود، سلول میزبان همانندسازی آن را از طریق گیرنده های تشخیص الگو (PRRs) تشخیص می دهد[109]. ساختار RNA ویروس در الیگومریزاسیون PRR ها و فعال سازی فاکتورهای رونویسی پایین دست، به ویژه عوامل تنظیم کننده اینترفرون (IRF) و NF-kB نقش دارد. فعال شدن NF-kB و IRFs منجر به درگیر شدن دفاع ضد ویروسی سلولی با القای اینترفرون های نوع I و I و ترشح کموکاین می شود [110].

Chiou و همکارانش اثرات 8-prenylkaempferol(8-PK) در سلول‌های A549 آلوده به ویروس آنفولانزای A (H1N1) را بررسی کردند. نتایج نشان داد که تداخل با مسیر PI3K-Akt مکانیسم اصلی 8-PK است که منجر به اثرات محافظتی در برابر ویروس آنفولانزای A می‌شود.{8}}PK کاهش انتقال NF-kB و IRF{10}} از طریق تضعیف فسفوریلاسیون Akt و فعالیت PI3K. در نهایت، با کاهش تولید فعال‌سازی تنظیم‌شده، سلول‌های T طبیعی (RANTES) از طریق سلول‌های A549 آلوده به H1N بیان و ترشح می‌شوند [111]. زو و همکاران نشان داد که اتوفاژی ناشی از آنفولانزای A (H3N2) در سلول‌های A549 و Ana{20}} از طریق سرکوب مسیر سیگنالینگ mTOR. بایکالین می تواند فسفوریلاسیون mTOR را افزایش دهد و اثرات ویروس H3N2 را به روشی وابسته به دوز نجات دهد [112]. در مطالعه دیگری، بایکالین با کاهش مسیر PI3k/Akt ناشی از تعدیل بیان پروتئین ویروسی NS1 55، فعالیت ضد ویروس آنفولانزا (H1N1-pdm09) را اعمال می‌کند. علاوه بر این، بیوکانین A، یک ایزوفلاون O-متیله، اثرات محافظتی بر سلول های آلوده به ویروس آنفلوانزای A H5N1 از طریق کاهش فسفوریلاسیون AKT، ERK1/2، JNK و p38 نشان داد. همچنین می تواند مسیرهای سیگنال دهی سلولی را تعدیل کند، IL{39}}، IL{40}}، CXCL10(IP-10)، TNF- و سطوح IkB را بهبود بخشد [53].

CST نشان دهنده اثرات بازدارنده در مدل آزمایشگاهی عفونت ویروس آنفولانزا A از طریق مهار مسیر سیگنال NF-kB/p65 است که منجر به کاهش سیتوکین های پیش التهابی می شود. CST همچنین سطوح MAPK فسفو-p38 و فسفو-JNK را کاهش داد [59]. در مطالعه دیگری توسط دینگ و همکاران، تجویز هسپریدین در دوزهای روزانه 200 و 500 میلی گرم بر کیلوگرم به مدت پنج روز می تواند التهاب ریوی را در آسیب ریه ناشی از ویروس آنفولانزای A (H1N1) در موش ها مهار کند. این اثر از طریق کاهش تولید سیتوکین های پیش التهابی، از جمله IL{13}} و TNF- انجام شد. هسپریدین همچنین بیان IL{16}} و TNF- را در سلولهای اندوتلیال میکروواسکولار ریوی آلوده به H1N1 از طریق مهار مسیرهای سیگنالینگ MAPK کاهش داد [94]. علاوه بر این، مطالعات مسیر سیگنالینگ ERK را به عنوان تعدیل کننده اصلی مسیر سیگنالینگ MAPK پیشنهاد کردند. ایزورهام-نتین (50 میکرومولار)، یک مونومتوکسی فلاون، فسفوریلاسیون ERK را در سلول های MDCK پس از عفونت ویروس آنفولانزای A(H1N1) کاهش داد [113]. Jeong و همکارانش اثرات سیتوتوکسیک پیروکسیلین A و tectorigenin را در سلول‌های CHME5 و ماکروفاژهای اولیه انسانی آلوده به HIV{27}}D3 بررسی کردند. این فلاونوئیدها اثرات خود را از طریق کاهش فسفوریلاسیون PI3K، Akt، mTOR، PDK1، GSK{31}} و Bad در سلول های تیمار شده با لیپوپلی ساکارید/سیکلوهگزیمید اعمال می کنند. سلول های آلوده [114]. در غلظت 60 میکرومولار، سنتین فسفوریلاسیون p38 MAPK، ERK، JNK/SAPK و NF-kB را کاهش داد[61].