P16INK4a بالا، نشانگر پیری سلولی، با آسیب کلیوی، اختلال و نتیجه در نفریت لوپوس مرتبط است

edmund.chen@wecistanche.com

سیستانچ بیماری کلیوی/کلیوی را بهبود می بخشد

مقدمهنفریت لوپوس (LN) یک عارضه شدید لوپوس اریتماتوز سیستمیک (SLE) است که با رسوب کمپلکس های ایمنی یا اتوآنتی بادی ها در غشای پایه گلومرولی و به دنبال آن جذب سلول های التهابی شروع می شود.آسیب کلیویمنجر به فیبروز غیرقابل برگشت و در نتیجه از دست دادن عملکرد کلیه می شود. LN با کورتیکواستروئیدهای با دوز بالا و سایر عوامل سرکوب کننده سیستم ایمنی درمان می شود. با این وجود، یک سوم بیماران کاهش یافته اندعملکرد کلیه، با 5 درصد -10 درصد در حال توسعه مرحله پایانیبیماری کلیویدر طی 10 سال." نشانگرهای پیش آگهی که امکان تشدید یا اصلاح به موقع درمان را فراهم می کند، مانند اهداف درمانی جدید مشتاقانه به دنبال هستند. پیری سلولی که توسط محرک هایی مانند فرسایش تلومر، استرس اکسیداتیو و التهاب مزمن ایجاد می شود، در نهایت منجر به رشد برگشت ناپذیر می شود. توقف از طریق تجمع مهارکننده‌های کیناز وابسته به سیکلین (CDK) از جمله پروتئین pl6Na (CDKN2A): یکی از مشخصه‌های اصلی علم سلولارسن‌ها سلول‌های پیر از نظر متابولیکی فعال باقی می‌مانند و تحت تعدادی تغییرات مورفولوژیکی و فیزیولوژیکی از جمله تنظیم مثبت فعالیت و اکتساب گالاکتوزیداز قرار می‌گیرند. از یک فنوتیپ ترشحی مرتبط با پیری پیش التهابی (SASP). در حالی که در ترمیم و بازسازی بافت ضروری است (به عنوان مثال، در طول جنین زایی)، پیری سلولی می تواند اثرات نامطلوبی در بیماری های مرتبط با پیری و مزمن و همچنین سرطان داشته باشد. سلول های مثبت pl6Nk یا -گالاکتوزیداز در مشاهده شده استکلیهافزایش سن و برخی بیماری های کلیوی، و با ضایعات بافتی وکلیهاختلال وجود سلول‌های مثبت گالاکتوزیداز با پروتئینوری در موش‌های مستعد MRL/lprlupus در ارتباط است. با این حال، پیری سلولی هنوز به وضوح LN مثبت نشان داده نشده است. در اینجا، ما وقوع pl6ka را گزارش می کنیم. سلول‌های بیوپسی کلیه از (n{4}}) بیماران مبتلا به LN فعال و ارتباط آن باآسیب کلیویو اختلال عملکردی

کلید واژه ها:عملکرد کلیه؛ بیماری های کلیوی؛ بیوپسی کلیه؛ آسیب کلیوی؛ کلیه

سیستانچ دیالیز کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مواد و روش ها:بیماران و بیوپسی کلیهبیماران در بخش روماتولوژی، Cliniques Universitaires Saint-Luc (بروکسل، بلژیک) استخدام شدند. همه آنها معیارهای طبقه بندی ACR اصلاح شده در سال 1982 را برای SLE برآورده کردند و LN اثبات شده با بیوپسی داشتند. نمونه‌برداری‌های کلیوی با پارافین ثابت (FFPE) مواد بدن باقی‌مانده برای اهداف تشخیصی بین ژانویه 1996 تا نوامبر 2019 جمع‌آوری شد. مقادیر تخمینی نرخ فیلتراسیون گلومرولی (eGFR) با استفاده از فرمول بیماری کولون مزمن کلیه (اپیدمیولوژی Epidemiology) محاسبه شد. مطابق با مقررات بلژیک در مورد مطالعات انسانی، رضایت بیمار برای استفاده از مواد بدن باقیمانده مورد نیاز نبود.

بافت شناسی و ایمونوهیستوشیمیطبقه بندی ISN/RPS 2003 SLEکلیهنمونه‌برداری، نمرات اسکلروز نیمه کمی، و شاخص فعالیت مؤسسه ملی سلامت (NH) (AI) و شاخص مزمنی (C) از سوابق پزشکی بازیابی شد. آموزش ایمونوس با anti-CD8 (C8/144B، Dako) و anti-p16INK4 (E6H4، Roche Ventana CINtec Histology) و رنگ‌آمیزی Picrosirius Red (PSR) روی مقاطع سریال FFPE 5 میکرومتری انجام شد. اسلایدها روی یک اسکنر SCN400 (Leica Biosystems، آلمان) یا یک اسکنر اسلاید پانورامیک Confocal (3DHistech، مجارستان) با بزرگنمایی 20×20 دیجیتالی شدند. کمی سازی کل سطح مقاطع به کمک رایانه با استفاده از Author V2017.2 (Visi Biopharm، دانمارک) انجام شد. نتایج نشان داده شده تعداد سلول‌های pl6K یا CD{18}مثبت در هر میکرومتر مربع بافت است. نمرات نیمه کمی PSR (مقیاس:{20}}) نمرات میانه (گلومرولی به علاوه فیبروز بینابینی) از سه امتیاز دهنده (کور) است. جزئیات بیشتر در روش های مکمل ذهنی آنلاین 1، شکل تکمیلی آنلاین 1 ارائه شده است.تجزیه و تحلیل های آماریتجزیه و تحلیل‌های آماری بر روی GraphPad Prism V.9.1 انجام شد.{2}}: آزمون‌های من-ویتنی یا ویلکاکسون جفت همسان با رتبه علامت‌دار برای مقایسه‌های دو گروهی، کروسکال-والیس برای مقایسه‌های چند گروهی و ضریب همبستگی مرتبه رتبه اسپیرمن.

نتایج:سلول‌های مثبت p16k{{1} در بیوپسی کلیه از بیماران مبتلا به LN فعالما پروتئین p16Nk را با روش ایمونوهیستوشیمی بررسی کردیمکلیهبیوپسی‌هایی که در تشخیص 40 بیمار مبتلا به LN فعال، از جمله نفریت حادثه‌ای (n=31) و عود (n=9) گرفته شده است. اطلاعات دموگرافیک، بیولوژیکی و بالینی در جدول تکمیلی آنلاین 1.p16INkA خلاصه شده است. سلول‌های مثبت در همه، اما با تنوع قابل‌توجهی بین نمونه‌ها شناسایی شدند: از تقریباً هیچ تا سلول‌های پراکنده گاه به گاه، تا مناطق به شدت مثبت (شکل lA، شکل مکمل آنلاین 2A-D). کمی رنگ‌آمیزی pl6 ناهمگنی بیوپسی‌های LN را تأیید کرد (محدوده: 1.76×10~-260×10~، میانه: 14.7×10-سلول‌ها/μm） (شکل 1B,C). سلول‌های رنگ‌آمیزی شامل سلول‌های مزانژیال، سلول‌های اندوتلیال یا پادوسیت‌ها در گلومرول‌ها، سلول‌های اپیتلیال جداری در کپسول‌های بومن، سلول‌های لوله‌ای پروگزیمال یا دیستال، و سلول‌های بینابینی (شکل شناسه). اگرچه تراکم سلول‌های مثبت pl (در هر میکرومتر) در گلومرول‌ها به‌طور قابل‌توجهی بیشتر از در بینابینی (شکل 1C)، این مقادیر (به ازای هر نمونه) یک همبستگی مثبت معنادار را نشان دادند (r{19}}.7591, p<0.0001)(online supplemental="" figure="" 3).="" importantly,="" pl6ka="" accumulation="" was="" not="" associated="" with="" patient="" age,="" gender,="" or="" ethnicity="" (online="" supplemental="" figure="">

سیستانچ عفونت کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

p16 "K4 با نارسایی کلیوی در ابتدا و 5 سال پس از درمان مرتبط است.p16INKEa مثبت به طور قابل توجهی با اختلال همراه بودعملکرد کلیه: بیوپسی از بیماران مبتلا به eGFR<60 at="" the="" time="" of="" sampling="" had="" significantly="" higher="" pl6inf-positive="" cells/μm²,="" and="" conversely,="" samples="" with="" high(="">صدک 75 p16a با eGFR پایه به طور قابل توجهی پایین تر همراه بود (شکل 2AB). ارتباط با eGFR برای pl6a گلومرولی و بینابینی صادق بود (شکل مکمل آنلاین 5A,B). جالب توجه است، در حالی که p16 گلومرولی بالا نیز با پروتئینوری به طور قابل توجهی بالاتر (نسبت پروتئین ادراری به کراتینین) همراه بود که عمدتاً نشان دهنده زرق و برق نبود (آسیب لثه آنلاین، شکل ذهنی pl6ka بینابینی 5C,D). در مقابل ارتباط آن با فقیر همراه نبودعملکرد کلیهپارامترهای pl6NK4a بیماری سیستمیک مانند آنتی بادی ضد DNA دو رشته ای سرم یا سطوح C3 یا با طبقه بندی ISN/RPS (شکل مکمل آنلاین 6A-D). pl6k کمی (غیر قابل توجهی) بالاتر در بیوپسی از بیماران با مدت زمان طولانی‌تر بین تشخیص SLE و LN، و در عود در مقایسه با نفریت اتفاقی (شکل مکمل آنلاین 7A,B) مشاهده شد. نکته مهم این است که تجزیه و تحلیل تنها موارد حادثه LN ارتباط بین pl6 و eGFR (شکل مکمل ذهنی آنلاین 7C) را تایید کرد، که نشان می‌دهد این تنها به مدت زمان بیماری کلیوی وابسته نیست. در نهایت، p16Nkia بالا در بیوپسی‌های پایه نیز با کاهش eGFR در 5 سال پس از درمان (اما نه در سال) همراه بود، که نشان می‌دهد ممکن است پیش‌بینی‌کننده درازمدت ضعیف باشد.کلیهتکامل (شکل 2C,D).

شکل 1 سلول‌های مثبت p16NK{2} در بیوپسی‌های کلیه از بیماران مبتلا به LN فعال. رنگ‌آمیزی p16، CD8 و PSR (A) بخش‌های سریال FFPE از بیوپسی پایه کلیه LN. نمای کلی (پانل‌های سمت چپ)، نمای نزدیک (راست) سلول‌های مثبت p16 را در گلومرول، سلول‌های CD{7}مثبت اطراف گلومرولی و رسوبات کلاژن در داخل و اطراف کپسول بومن همان گلومرول را نشان می‌دهد. (B) کمی سازی p16xa (سلول های مثبت/μm² که درجه ناهمگنی را در بین نمونه ها نشان می دهد. （C） کمیت p16< （positive="" cells/um²）="" in="" glomerular="" vs="" interstitial="" areas="" of="" the="" same="" samples.p-value:="" wilcoxon="" matched-pair="" signed-rank="" test.="" (d)="" representative="" image="" from="" a="" sample="" showing="" p16-positive="" cells="" within="" glomeruli="" (#),="" in="" bowman's="" capsules="" (filled="" star),="" proximal="" tubules(filled="" arrow),="" distal="" tubules(arrow)="" and="" dispersed="" in="" the="" interstitium="" (arrowhead).ffpe,="" formalin-fixed="" paraffin-embedded;="" ln,="" lupus="" nephritis;="" psr,="" picrosirius="">

p16NK43 با انفیلتراسیون سلولهای T CD8* و فیبروز p16Ma مرتبط است.نشان داده شده است که CD8tTlymphocytes نوع سلول ایمنی غالب هستند که به کلیه LN نفوذ می کنند و حضور آنها بابیماری کلیویشدت ما دریافتیم که pl{0}}بیوپسی های بالا نفوذ سلول های T CD8t به طور قابل توجهی بالاتر را نشان می دهند (شکل 3A). آنها همچنین به طور قابل توجهی با افزایش فیبروز مرتبط بودند: کلاژن

رسوب که توسط نمرات نیمه کمی رنگ آمیزی PSR، و اسکلروز و نمرات NH CI ارائه شده توسط یک نوروپاتولوژیست منعکس شده است (شکل 3B-D). در مقابل، امتیازات هوش مصنوعی NIH بین گروه‌های p16INK4a تفاوت معنی‌داری نداشت (داده‌ها نشان داده نشده است). به طور جالب توجهی، در بررسی بخش‌های بافت، متوجه شدیم که به نظر می‌رسد یک توزیع فضایی مشترک بین رنگ‌آمیزی قوی pl6k (که تمایل به گلومرولی دارد) و سلول‌های CD{7}مثبت خوشه‌ای (اغلب پری گلومرولی) در نمونه‌برداری‌های خاص LN باشد (شکل IA، شکل تکمیلی آنلاین 2). بنابراین ما تعداد سلول‌های CD8* T واقع در شعاع 30 میکرومتر در اطراف هر گلومرول، ضخامت کپسول بومن و تعداد سلول‌های pl6k مثبت درون آن را تعیین کرد (شکل تکمیلی آنلاین 1). این کار روی همه گلومرول‌های قابل مشاهده در سه بخش سریال، در تمام نمونه‌ها انجام شد. گلومرول‌های با تجمع سلولی مثبت pl6K بالا، سلول‌های CD8 T پریگو ماکولا را به‌طور قابل‌توجهی بالاتر نشان می‌دهند (شکل 3E)، و همچنین ضخامت کپسول‌های بومن را افزایش می‌دهند که فیبروز گلومرولی را منعکس می‌کند (شکل 3F).

بحثاین اولین نمایش در یک سری بزرگ از بیماران است که نشان می دهد pl6Na، یک نشانه اصلی پیری سلولی، با شدت بیماری در LN مرتبط است. IHC برای پروتئین pl16 به طور گسترده برای ارزیابی پیری ex vivo استفاده می شود و با شدت سایر موارد مرتبط است.کلیهبیماری‌ها. «حذف انتخابی سلول‌های مثبت pl6- در مدل‌های موشی پیری و نفروپاتی القایی نشان داده شده است که ضایعات فیبروتیک را تسکین داده و بهبود می‌بخشد.عملکرد کلیه، نقش کلیدی را درکلیهپاتوژنز اینکه چرا پیری سلولی ممکن است در LN رخ دهد ناشناخته است. محیط التهابی و اکسیداتیو کلیه LN ممکن است منبع استرس سلولی باشد. چندین عامل پیش التهابی در القای پیری دخیل بوده اند، اینترفرون B3 که با فنوتیپ پیر سلول های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان بیماران مبتلا به SLE15 مرتبط است.در حالی که مطالعه ما ارتباط قابل توجهی بین فراوانی سلول‌های pl6-مثبت و شدت LN را برجسته می‌کند، استفاده از نشانگرهای اضافی پیری سلولی، در یک گروه بزرگ‌تر، برای تأیید ارتباط آن در LN ضروری است. اینکه آیا و چگونه پیری سلولی به پیشرفت بیماری کمک می کند (یا اینکه آیا صرفاً آسیب بافتی را منعکس می کند) هنوز باید بررسی شود. یک اثر مضر ممکن است از طریق ترشحات پروفیبروتیک و التهابی (SASP) معمول سلول های پیر اعمال شود. مطابق با این فرضیه، ما یک توزیع مشترک فضایی بین سلول‌های مثبت pl6Nk، فیبروز و نفوذ سلول‌های CD8* T در کلیه‌های LN را توصیف می‌کنیم. یکی دیگر از مکانیسم‌های بیماری‌زا ممکن است شامل تجمع سلول‌های ناتوان از نظر عملکردی باشد، برای مثال،کلیهسلول های پیش ساز (RPC، زیرمجموعه ای از سلول های اپیتلیال جداری واقع در کپسول گلومرول های بومن)." در حالی که RPC های سالم ساختارهای گلومرولی و لوله ای را به لطف ظرفیت خود برای تکثیر و تغییر شکل می دهند.کلیهزیرمجموعه‌های سلولی، RPCهای پیر می‌توانند ترمیم بافت را مختل کنند. در نهایت، در حالی که SASP مخصوصاً برای درگیر کردن سیستم ایمنی (شامل لنفوسیت‌های T CD8t) برای پاکسازی سلول‌های پیر مناسب است، دومی می‌تواند فرآیند را با مهار کند. cyto lyic celk." پیشنهاد شده است که تداوم سلول های پیر (به دلیل غلبه یا مهار پاسخ ایمنی) تعادل را از تأثیر مثبت به منفی هدایت می کند. نقش سلول های pl6Nk مثبت در پاتوژنز LN - سایپرز، باشگاه دانش این ممکن است پیامدهای مهمی برای درمان داشته باشد، اولین مطالعه آزمایشی برچسب باز با استفاده از داروهای senolytic dasatinib به علاوه کورستین (DQ) که نتایج امیدوارکننده‌ای را در فیبروز ریوی ایدیوپاتیک و بیماری کلیوی دیابتی نشان داده است.در نهایت ارتباط pl6INk4 خط پایه بالا با اختلالعملکرد کلیهشروع 5 سال پس از درمان نشان می دهد که ممکن است یک پیش بینی کننده امیدوارکننده برای شدت بیماری باشد. ارزیابی pl6 و نشانگرهای مرتبط با آن (فیبروز و نفوذ سلول‌های T CD8) در بیوپسی‌های پیگیری 1- ساله و همچنین در یک گروه بزرگ‌تر، به عنوان تکامل این نشانگرها از پایه تا lyear ممکن است بهتر از هر نقطه زمانی به تنهایی منعکس کننده پاسخ درمانی باشد.