شناسایی EST های پاسخگو به پراکسید هیدروژن در بیوسنتز گلیکوزید فنیل اتانوئید در کشت سلولی سالسا سیستانچ

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

J. CHEN و همکاران

خلاصه
پراکسید هیدروژن یک محرک غیرزیست موثر است که می تواند بیوسنتز متابولیت ثانویه را در گیاهان القا کند. ما نشان می دهیم که در کشت سوسپانسیون سلولی یک گیاه دارویی مقاوم به نمکسیستانچسالسا، تولید اجزای زیست فعالفنیل اتانوئیدگلیکوزیدها(PeGs) پس از درمان H2O2 افزایش یافت. برای شناسایی ژن های مرتبط با PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز تحت تأثیر H2O2، ما یک کتابخانه هیبریداسیون کاهشی سرکوب ژنهای پاسخگو به H2O2 با استفاده از یکسیستانچسالسارده سلولی و شناسایی 105 برچسب توالی بیان شده (ESTs) و 85 ژن. حاشیه نویسی عملکردی کتابخانه EST و تجزیه و تحلیل هستی شناسی ژن، ژن های مربوط به پاسخ های استرس مختلف، بیوسنتز متابولیت های ثانویه، و تنظیم رونویسی را نشان داد. در میان آنها، ما دو ژن مرتبط با PeGs را شناسایی کردیم(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)مسیر بیوسنتز (4-کومارات کوآنزیم A لیگاز و سینامات {{1}هیدروکسیلاز)، و دو عامل رونویسی نوع WRKY. بیان ژن‌های انتخاب شده پس از تیمار H2O2 با RT-qPCR آنالیز شد. افزایش رونویسی اولیه PeG(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)ژن های مسیر بیوسنتز پس از درمان نشان داد که H2O2 باعث القای PeGs می شود(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز از طریق افزایش تنظیم ژن های کلیدی آن
کلمات کلیدی اضافی: سینامات-4-هیدروکسیلاز، 4-کومارات کوآنزیم لیگاز A، هیبریداسیون کاهشی سرکوب کننده.سیستانچسالسا. فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها

مقدمه

سیستانچسالسایک انگل گیاهی چند ساله روی ریشه Haloxylos ammodendrun است و در منطقه بیابانی غرب چین رشد می کند. برای قرن ها،سیستانچگونه به عنوان داروی گیاهی سنتی مورد استفاده قرار گرفته است (وانگ و همکاران 2012). اجزای زیست فعال هستندفنیل اتانوئیدگلیکوزیدها(PeGs) که تأثیر قابل توجهی بر پاکسازی گونه های فعال اکسیژن (ROS)، محافظت در برابر تشعشع، تقویت ایمنی و ضد پیری دارند (Nan et al. 2013). PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز درسیستانچاز فنیل آلانین شروع می شود (شکل 1 مکمل) و اسید کافئیک سنتز شده بیشتر گلیکوزیله می شود تا PeG های مختلف را تشکیل دهد.(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)(وانگ و همکاران 2012). سه PeG اصلی(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)اکیناکوزید، آکتئوزید و 2'-استیلاکتئوزید به عنوان فعال ترین اجزای موجود درسیستانچ(کوبیاشی و همکاران 1984). به منظور افزایش محتوای خود درسیستانچکشت سلولی، محرک های مختلفی از جمله کیتوزان، پوترسین، Ag plus و استرس اسمزی مورد آزمایش قرار گرفته است (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu and Cheng 2008). با این حال، ژن های دخیل در PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز درسیستانچژن‌های مسیر متابولیسم فنیل آلانین، به ندرت شناسایی شده‌اند. فقط یک ژن کد کننده فنیل آلانین آمونیاک لیاز (PAL) اخیراً در Cistanche deserticola شناسایی شد (Hu et al. 2011). سایر ژن‌های کدکننده، برای مثال، سینامات{2}هیدروکسیلاز (C4H)، که می‌تواند تبدیل سینامات به اسید کوماریک را کاتالیز کند، و 4-کومارات کوآنزیم A لیگاز (4CL)، یک ژن ضروری برای لیگنین و فلاونوئیدها بیوسنتز، در آن یافت نشده استسیستانچ.
ما از کشت سلولی استفاده کردیمسیستانچسالسابرای مطالعه PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز و بیان ژن های مرتبط ما همچنین اثر یک محرک موثر H2O2 را بر روی PeGها بررسی کردیم(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز علاوه بر این، برای یافتن ژن‌های پاسخ‌دهنده اولیه درگیر در PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز، ما هیبریداسیون کاهشی سرکوب (SSH) را برای ساختن یک کتابخانه cDNA از ژن‌های پاسخ‌دهنده H2O{1} انجام دادیم.

شکل 1. بیان ژن نسبی تعیین شده توسط RT-qPCR پس از درمان H2O2. فاکتور رونویسی CsWRKY1 - WRKY (Contig07)، CsC4H1 - سینامات 4-هیدروکسیلاز (Contig09)، Cs4CL1 - 4-کومارات: لیگاز (Contig03)، CsHSP{13}} پروتئین شوک حرارتی 70 کیلو دالتون (Contig 01) و CsSOD1 - سوپراکسید دیسموتاز (Contig16). سلول ها با 80 ug dm{19}} H2O2 در محیط مایع به مدت 2 ساعت تیمار شدند و عبارات با کنترل تیمار شده با آب مقایسه شدند. میانگین به علاوه - SD از سه تکرار بیولوژیکی. * - P <0.05، **="" -="" p=""><>

مواد و روش ها

رده سلولی CS2001 از گلبرگهای تشکیل شدسیستانچسالسا(CA Mey.) Beck در استان Neimenggu جمع آوری و خرده فرهنگ شد. روش کشت مشابه پروتکلی بود که قبلا منتشر شده بود (لیو و همکاران 2007). به طور کلی، یک محیط جامد Murashige و Skoog (1962؛ MS) برای خرده‌کشت و یک محیط مایع برای PeGs استفاده شد.(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز (محیط MS اصلاح شده با 30 گرم در dm-3 گلوکز و 2.0 mg dm-3 ایندول-3-اسید استیک تکمیل شده بود). برای تیمار H2O2، 0.2 ± 5 گرم سلول در یک دوره رشد سریع، معمولاً 20 تا 30 روز پس از کشت زیر کشت در محیط جامد، در محیط مایع 50 سانتی‌متر مکعبی در ارلن 250 سانتی‌متر مکعبی تلقیح شد. و در تاریکی با یا بدون غلظت های مختلف H2O2 کشت داده شد. PeG ها(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)محتوای پس از القای 10 روزه توسط H2O2 طبق روشی که قبلا منتشر شده بود (Liu et al. 2007) بر اساس کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا فاز معکوس با شستشوی گرادیان متانول تجزیه و تحلیل شد.

سلول‌ها 2 ساعت پس از تیمار H2O2 توسط کاغذ صافی با استفاده از قیف بوشنر از محیط جمع‌آوری شدند و سپس در نیتروژن مایع منجمد شدند و به پودر تبدیل شدند. هر 2 گرم پودر سلولی با استفاده از مخلوطی از 1 سانتی‌متر مکعب 2-مرکاپتواتانول، 1 سانتی‌متر مکعب از 200 گرم در dm{{10}} سارکوزیل، لیز شد. و 8 سانتی متر مکعب از یک بافر GTC (5 مولار گوانیدینیم ایزوتیوسیانات، 62.5 میلی مولار Tris-HCl، pH 8.0، 6.25 میلی مولار EDTA، pH 8.0، 5 میلی مولار تی اوره، و 10 میلی مولار دی تیوتریتول). سپس سلول ها به مدت 15 دقیقه روی یخ انکوبه شدند، سپس 1/3 حجم 8.5 مولار CH3COOK، pH 6.0 اضافه شد و سلول ها به مدت 15 دقیقه روی یخ انکوبه شدند و سپس در 15 000 گرم به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ شدند. . مایع رویی به حجم مساوی ایزوپروپانول اضافه شد تا RNA کل رسوب کند. RNA کل بیشتر توسط یک کیت کوچک RNeasy (Qiagen, Hilden, USA) طبق دستورالعمل سازنده خالص شد. RNA پیام رسان با استفاده از کیت midi mRNA Oligotex (Qiagen) از RNA کل جدا شد.

فنیل اتانوئیدگلیکوزیدهاکه درسیستانچسالسا

یک کتابخانه SSH از شاهد تولید شد و 30 درصد نمونه‌های سلولی H2O2-2 ساعت پس از استخراج با استفاده از کیت تفریق cDNA انتخابی PCR (Clontech، Mountain View، ایالات متحده) استخراج شد. برای ساخت کتابخانه، محصولات به طور جداگانه با استفاده از یک کیت تصفیه ژل (Qiagen) خالص شدند و با استفاده از یک کیت شبیه سازی TA (تیانگن، پکن، چین) در یک وکتور pGEM کلون شدند. پلاسمیدها از کلون های مستقل جداسازی و با استفاده از پرایمر T7 توالی یابی شدند. تمام توالی‌های نشان‌دهنده توالی بیان شده (EST) از کتابخانه (با توالی‌های برداری حذف شده) برای مونتاژ contig با CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3) استفاده شد. EST ها به contigs و singletons گروه بندی شدند. آنها برای جستجوی همسانی با استفاده از برنامه BLASTx در NCBI (http://blast.ncbi. nlm.nih.gov) استفاده شدند. سپس توالی ها با استفاده از Blast2GO (http://www.blast2go.com) حاشیه نویسی، تجزیه و تحلیل و طبقه بندی شدند.
واکنش زنجیره ای پلیمراز کمی در زمان واقعی (RT-qPCR) طبق Bustin و همکاران انجام شد. (2{3}}09). نمونه‌های cDNA با استفاده از کیت معرف PrimeScript RT (Takara، Dalian، چین) از 0.5 میکروگرم RNA کل سنتز شدند. RT-qPCR با استفاده از کیت های SYBR Premix Ex Taq II و ROX plus (Takara) روی یک سیستم PCR بلادرنگ ABI 7300 (Applied Biosystems، Foster City، ایالات متحده آمریکا) با سه تکرار فنی انجام شد. پرایمرها با استفاده از نرم افزار آنلاین Primer3 مطابق دستورالعمل ارائه شده توسط تاکارا طراحی شدند. آغازگرهای مورد استفاده در این مطالعه در جدول 1 فهرست شده اند. بیان ژن به RNA 18S نرمال شد که بیان آن در تمام نمونه ها پایدار بود.

نتایج با استفاده از نسخه R 3.1.1 مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت و معنی‌داری تفاوت‌ها با استفاده از آزمون t-student تأیید شد.

نتایج

هیدروژن پراکسید بیوسنتز هر سه PeG اصلی را القا کرد(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)که درسیستانچسالساسلول های تعلیق (جدول 1) اما بدون اثر آشکار بر رشد سلول (شکل S2). محتوای اکیناکوزید قبلاً پس از 1{6}} ug dm-3 H2O2 (P < 0.05)="" افزایش="" یافته="" است،="" افزایش="" بالاتری="" پس="" از="" 20="" ug="" dm="" ثبت="" شد.="" -3="" تیمار="" h2o2="" (p=""><0.01) و="" بیشترین="" افزایش="" پس="" از="" تیمارهای="" 40،="" 80="" و="" 160="" ug="" dm{17}}="" h2o2="" بود.="" نتایج="" مشابهی="" برای="" اکتئوزید="" نشان="" داده="" شده="" است،="" اما="" محتوای="" آن="" پس="" از="" درمان="" 80="" ug="" dm{21}}="" h2o2="" به="" اوج="" خود="" رسید.="" بیوسنتز="" 2'-acetylakteoside="" به="" درمان="" h2o2="" حساسیت="" کمتری="" داشت.="" افزایش="" معنی‌دار="" محتوای="" آن="" (05/0=""> P) در غلظت‌های H2O2 بیش از 40 میکروگرم در دسی‌متر{33}} بود. پس از درمان H2O2 80 ug dm{35}}، مقدار هر سه PeG اصلی(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)به طور قابل توجهی (P < 0.01)="" نسبت="" به="" کنترل="" افزایش="" یافت.="" بنابراین="" از="" این="" غلظت="" در="" آزمایشات="" بعدی="" استفاده="">
برای تولید یک کتابخانه غنی‌شده برای ژن‌های پاسخ‌دهنده اولیه که توسط H2O2 تنظیم می‌شوند، از cDNA استفاده کردیم.سیستانچسالساسلول های سوسپانسیون با 80 ug dm-3 H2O2 به مدت 2 ساعت تیمار شدند. توالی یابی تک گذری 129 کلون نوترکیب در کتابخانه SSH 105 EST تمیز را پس از طرد توالی بردار به همراه داشت. این EST های شفاف برای مونتاژ توسط CAP3 استفاده شد و 18 contig و 67 singleton تولید شد (جدول 2). بدین ترتیب 85 ژن در این کتابخانه جداسازی شد. میانگین طول 105 EST تمیز 527 جفت باز بود که برای طبقه‌بندی عملکردی مبتنی بر شباهت توالی کافی است.

فنیل اتانوئیدگلیکوزیدهاکه درسیستانچسالسا

همه 85 ژن به‌دست‌آمده در کتابخانه توسط BLASTx در برابر پایگاه‌داده پروتئین غیر زائد GenBank برای تشابه توالی (ارزش E کمتر یا برابر با 0.001) بازیابی شدند. بیست و یک ژن هیچ ضربه ای در پایگاه داده نشان ندادند، آنها ممکن است خاص باشندسیستانچسالسا. نتایج با BLASThits برای تحلیل‌های بیشتر غنی‌سازی مسیر GO و KEGG به نرم‌افزار Blast2GO وارد شدند. از 64 ژن با BLAST بازدید، 50 با توجه به شرح ژن های همولوگ از گونه های دیگر حاشیه نویسی شد. ژن های حاشیه نویسی شده با توجه به توضیحات BLAST بازدید نامگذاری شدند. تجزیه و تحلیل GO (شکل 3 Suppl.) نشان می دهد که در بین این 50 ژن، 14 ژن در پاسخ به محرک ها و بیش از 30 ژن مربوط به فرآیندهای متابولیک وجود دارد (جدول 1 و 2). در میان این ژن‌ها، دو همولوگ ژن مسیر بیوسنتز PeG همانطور که انتظار می‌رفت جدا شدند: 4-کومارات کوآنزیم A لیگاز (به نام Cs4CL1: Contig03) و سینامات 4-هیدروکسیلاز (به نام CsC4H1: Contig14). علاوه بر این، RT-qPCR برای تأیید بیان القایی ژن‌ها از کتابخانه پس از درمان H2O2 انجام شد.

برای تایید اینکه ژن های ضروری شناسایی شده از کتابخانه SSH به درمان H2O2 پاسخ می دهند، بیان دو PeG(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)ژن‌های مرتبط با مسیر بیوسنتز (Cs4CL1، CsC4H1)، دو ژن القایی ROS (CsSOD1: Contig 16، CsHSP1: CISTH099)، و یک ژن فاکتور رونویسی خانواده WRKY (CsWRKY1: Contig 07-qPCR) پس از درمان اندازه‌گیری شدند. با H2O2 (شکل 1). عبارات CsC4H1، Cs4CL1، CsSOD1 و CsWRKY1 به ترتیب 2 ساعت پس از H2O2 بیش از 15- برابر، 3- برابر، 45- برابر و 4- برابر تنظیم شدند. رفتار. بیان CsHSP1 تنها 1.8 برابر پس از درمان H2O2 تغییر یافت.
دوره زمانی عبارات CsWRKY1، CsC4H1، و Cs4CL1 پس از تیمار H2O2 بیشتر توسط RT-qPCR تجزیه و تحلیل شد (شکل 2). عبارات CsC4H1 و Cs4CL1 به شدت افزایش یافت (به ترتیب بیش از {{14} برابر و 50- برابر) پس از درمان 16- ساعت و سپس پس از 32 ساعت کاهش یافت. بیان CsWRKY1 در 4 ساعت بیش از 20-برابر تنظیم شد و سپس از 8 ساعت پس از آن کاهش یافت (شکل 2).

شکل 2. بیان نسبی CsWRKY1 (A)، CsC4H1 (B)، و Cs4CL1 (C) در زمان‌های مختلف پس از درمان با 80 ug dm-3 H2O2. عبارات به یک کنترل عادی شدند. (با آب درمان می شود). میانگین به علاوه - SD از سه تکرار بیولوژیکی. * - P < 0.05،="" **="" -="" p=""><>

بحث

پراکسید هیدروژن یک محرک گیاهی شناخته شده است که اثرات مختلفی بر روی گیاهان نشان می دهد. مانند ROS، می تواند سیستم مهار ROS متشکل از سوپراکسید دیسموتاز، کاتالاز، پراکسیدازها و غیره را القا کند و به عنوان سیگنال پایین دست نمک، اسمزی و کم آبی عمل می کند.

تاکید می کند (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). پیشنهاد شد که تولید H2O2 در گیاهان با بیوسنتز متابولیت ثانویه القایی در گیاهان همراه است.سیستانچسالساکشت سلولی همانطور که انتظار می رفت، نتایج ما نشان می دهد که PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز درسالسا سیستانچکشت سلولی پس از تیمار H2O2 القا شد (جدول 1). محتوای سه PeG اصلی(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)پس از تیمار H2O2 افزایش یافت که نشان دهنده نقش محوری آن در بیوسنتز PeGs است. ژن‌های غنی‌شده در کتابخانه SSH بیشتر تأثیر آن را بر PeGs پیشنهاد می‌کنند(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)القای بیوسنتز درسالسا سیستانچ.

بسیاری از ژن‌های پاسخ‌دهنده H2O{1}، مانند آسکوربات پراکسیداز (CISTH069، Karyotou and Donaldson 2005)، h-quinone oxidoreductase (CISTH125، Bello، و همکاران 2001)، CsSOD1، CsHSP1 (Baruah et al.) و ژن های پاسخ مقاومت به بیماری (Contig10، Nanda، و همکاران 2010)، در کتابخانه SSH غنی شدند (جدول 3، جدول 2 تکمیلی). برخی از این ژن‌های معمولی پاسخ‌دهنده ROS با بیان القا شده پس از درمان H2O2 توسط RT-qPCR (شکل‌های 1 و 2) تأیید شدند که نشان می‌دهد یک کتابخانه SSH واجد شرایط در اینجا ساخته شده است. دو ژن مسیر بیوسنتز PeG، CsC4H1 و Cs4CL1، نیز در این کتابخانه یافت شدند و این دو بیان ژن توسط تیمار H2O2 به روشی وابسته به زمان القا شدند (شکل 2). این نشان می دهد که درمان H2O2 باعث ایجاد PeGs می شود(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز در سطح ژنتیکی از طریق تنظیم ژن های مسیر PAL. با این حال، PAL و دیگر ژن های بیوسنتز PeGs پایین دست (وانگ و همکاران 2012) در کتابخانه SSH شناسایی نشدند. ممکن است به این دلیل باشد که کتابخانه به اندازه کافی توالی یابی نشده است. رابطه بین عبارات ناشی از CsC4H1 و Cs4CL1 و افزایش بیوسنتز PeGs پس از درمان H2O2 باید با تجزیه و تحلیل بیشتر روشن شود.

علاوه بر ژن های مسیر PAL القا شده توسط تیمار H2O2، دو فاکتور رونویسی خانواده WRKY (CsWRKY1، CsWRKY2) در کتابخانه SSH (جدول 3 و جدول 2 تکمیلی) یافت شد، و بیان القا شده با CsWRKY1 توسط RT-qPCR تأیید شد. . بیان آن زودتر از بیان دو ژن مسیر PAL، Cs4CL1 و CsC4H1 به درمان H2O2 پاسخ می داد (شکل 2). از مطالعات قبلی، بیان همزمان برخی از فاکتورهای رونویسی WRKY و ژن های مسیر PAL در برنج مشاهده شده است (گوپتا و همکاران 2012). علاوه بر این، بیان ژن PAL در یک جهش یافته با بیان بیش از حد OsWRKY03 تنظیم می شود (Liu et al. 2005). دو فاکتور رونویسی خانواده WRKY که در بالا ذکر شد ممکن است در PeGs نیز دخیل باشند(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز درسیستانچسالسا. جالب توجه است، EST های مرتبط با کم آبی (CISTH067، CISTH064) در کتابخانه SSH یافت شد، که ممکن است نشان دهد که درمان H2O2 با بیان ژن های پاسخگو به کم آبی در ارتباط است.سیستانچسالساهمانطور که در گیاهان دیگر مشاهده شد (اشمیت و همکاران 2013، ژو و همکاران 2013). یک ژن مرتبط با سیگنال دهی جیبرلین (GA)، گیرنده جیبرلین شبیه gid1b (CISTH092)، در کتابخانه SSH شناسایی شد که دلالت بر ارتباط سیگنالینگ GA و درمان H2O2 درسیستانچسالسا، که در جو نیز گزارش شده است (بهین و همکاران 2011). با این حال، مطالعات بیشتری برای تایید اینکه آیا این ژن ها با PeGs مرتبط هستند مورد نیاز است(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز به غیر از ژن های ذکر شده در بالا، کتابخانه SSH ساخته شده در اینجا نیز ژن هایی را با یا بدون ضربه BLAST ارائه می دهد. درک ما از اثر H2O2 بر C. salsa را بهبود می بخشد و ابتدا اطلاعات ژن های آن را که در بیوسنتز PeG دخیل هستند، ارائه می کند.

در نتیجه، ما اثر H2O2 را بر روی PeGs ارزیابی کردیم(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)القاء درسیستانچسالساکشت سلولی کتابخانه SSH پس از تیمار H2O2 ساخته شد و بیان ژن های انتخاب شده توسط RT-qPCR تایید شد. دو ژن مرتبط با مسیر بیوسنتز PeG و سایر ژن‌های پاسخ‌دهنده H2O شناسایی شدند. این یافته‌ها درک ما را از PeGهای القایی H2O2- گسترش می‌دهد(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)بیوسنتز درسیستانچسالسابه سطح مولکولی، ارائه اطلاعات برای دستکاری ژنسیستانچسالساکشت سلولی برای بهبود PeGs(فنیل اتانوئیدگلیکوزیدها)تولید

از: "شناسایی EST های پاسخگو به پراکسید هیدروژن که در بیوسنتز گلیکوزید فنیل اتانوئید در کشت سلولی سالسا Cistanche" توسطJ. CHEN و همکاران.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700، 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/s10535-015-0541- سال

منابع

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: تلاقی بین گونه های فعال اکسیژن و مسیرهای سیگنال دهی هورمونی خواب دانه را در جو تنظیم می کند. - محیط سلول گیاهی 34: 980-993، 2011.
Baruah, K., Norouzitallab, P., Linayati, L., Sorgeloos, P., Bossie,r P.: گونه های واکنشی اکسیژن تولید شده توسط محصول القای پروتئین شوک حرارتی (Hsp) به تولید Hsp70 و Hsp کمک می کند{{1} }ایمنی محافظ واسطه در آرتمیا فرانسیسکانا در برابر ویبریوهای بیماری زا. - توسعه دهنده Comp. ایمونول. 46: 470-479، 2014.
Bello, RI, Gomez-Diaz, C., Navarro, F., Alcain, FJ, Villalba, JM: بیان NAD(P)H: کینون اکسیدوردوکتاز 1 در سلولهای HeLa - نقش پراکسید هیدروژن و فاز رشد. - جی بیول. شیمی. 276: 44379-44384، 2001.
Bustin، SA، Vandesompele، J.، Pfaffl، MW: استانداردسازی qPCR و RT-qPCR. - ژنت مهندس بیوتکنول. خبر 29: 40-43، 2009.
Cheng، XY، Wei، T.، Guo، B.، N، I W.، Liu، CZ:سیستانچکشت سوسپانسیون سلولی deserticola:فنیل اتانوئیدگلیکوزیدهابیوسنتز و فعالیت آنتی اکسیدانی - بیوشیمی فرآیند. 40: 3119-3124، 2005.
Cheng، XY، Zhou، HY، Cui، X.، Ni، W.، Liu، CZ بهبودفنیل اتانوئیدگلیکوزیدهابیوسنتز درسیستانچکشت سوسپانسیون سلولی deserticola توسط الیسیتور کیتوزان. - جی بیوتکنول. 121: 253-260، 2006.
Furlan, A., Llanes, A., Luna, V., Castro, S.: اسید آبسیزیک واسطه تولید پراکسید هیدروژن در بادام زمینی ناشی از تنش آبی است. - بیول. گیاه. 57: 555-558، 2013.
Gupta, SK, Ra,i AK, Kanwar, SS, Chand, D., Singh, NK, Sharma, TR: ژن مقاومت به انفجار تک عملکردی Pi54 یک مکانیسم دفاعی پیچیده را در برنج فعال می کند. - J. Exp. ربات 63: 757-772، 2012.
Hu، GS، Jia، JM، Hur، YJ، Chung، YS، Lee، JH، Yun، DJ، Chung، WS، Yi، GH، Kim، TH، Kim، DH: خصوصیات مولکولی ژن فنیل آلانین آمونیاک لیاز ازسیستانچدسرتیکولا - مول. Biol. نسخه 38: 3741-3750، 2011.
کار، RK: پاسخ گیاه به تنش آبی: نقش گونه های اکسیژن فعال. - رفتار سیگنال گیاهی 6: 1741-1745، 2011.
Karyotou، K.، Donaldson، RP: آسکوربات پراکسیداز، یک جاذب پراکسید هیدروژن در غشاهای گلیوکسیزومی. - قوس h. بیوشیمی. بیوفیز. 434: 248-257، 2005.
Kobayashi, H., Karasawa, H., Miyase, T., Fukushima, S.: مطالعات بر روی اجزای تشکیل دهندهسیستانچگیاهی است 4. جداسازی و ساختار 2 گلیکوزید فنیل پروپانوئید جدید، سیستانوزید-C و سیستانوزید-D. - شیمی فارم. گاو نر 32: 3880-3885، 1984.

Liu، CZ، Cheng، XY: افزایشفنیل اتانوئیدگلیکوزیدهابیوسنتز در کشت سلولیسیستانچdeserticola توسط استرس اسمزی. - Plant Cell Rep. 27: 357-362، 2008.
Liu، JY، Guo، ZG، Zeng، ZL: انباشت بهبود یافته ازفنیل اتانوئیدگلیکوزیدهابا تغذیه پیش ساز به کشت سوسپانسیونسیستانچسالسا. - بیوشیمی مهندس J. 33: 88-93، 2007.
Liu، XQ، Bai، XQ، Qian، Q.، Wang، XJ، Chen، MS، Chu، CC: OsWRKY03، یک فعال کننده رونویسی برنج که در مسیر سیگنالینگ دفاعی بالادست OsNPR1 عمل می کند. - Cell Res. 15: 593-603، 2005.
Murashige، T.، Skoog، F.: یک محیط بازبینی شده برای رشد سریع و سنجش زیستی با کشت بافت تنباکو. - فیزیول گیاه. 15: 473-497، 1962.
Nan، ZD، Zeng، KW، Shi، SP، Zhao، MB، Jiang، Y.، Tu، PF:فنیل اتانوئیدگلیکوزیدهابا فعالیت های ضد التهابی از ساقه هایسیستانچdeserticola کشت شده در کویر تاریم. - فیتوتراپیا 89: 167-174، 2013.
Nanda, AK, Andrio, E., Marino, D., Pauly, N., Dunand, C.: گونه های اکسیژن فعال در طول برهمکنش های اولیه گیاه و میکروارگانیسم. - جی. اینتگر. گیاه بیول. 52: 195-204، 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: تولید پیشرفتهفنیل اتانوئید گلیکوزیدهابا تغذیه پیش ساز به کشت سلولیسیستانچدسرتیکولا - بیوشیمی فرآیند. 40: 3480-3484، 2005a.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: تولید بهبود یافتهفنیل اتانوئیدگلیکوزیدهاتوسطسیستانچسلول‌های deserticola در یک بیوراکتور داخلی حلقه داخلی با رایزر غربال‌کننده کشت شدند. - آنزیم میکروبیول فنی 36: 982-988، 2005b.
Salcedo-Morales، G.، Jimenez-Aparicio، AR، Cruz-Sosa، F.، Trejo-Tapia، G.: خصوصیات تشریحی و هیستوشیمیایی haustorium in vitro از ریشه های Castilleja tenuiflora. - بیول. گیاه. 58: 164-168، 2014.
Sathiyaraj, G., Srinivasan, S., Kim, YJ, Lee, OR, Provin, S., Balusamy, SR, Khorolragchaa, A., Yang, DC: سازگاری پراکسید هیدروژن تحمل نمک را با فعال کردن پروتئین های مرتبط با دفاع در Panax ginseng CA Meyer. - مول. Biol. نسخه 41: 3761-3771، 2014.
اشمیت، آر.، میولت، دی.، هوبرتن، اچ ام، اوباتا، تی، هوفگن، آر.، فرنی، آر، فیسان، جی.، سگوندو، BS، گایدردونی، ای.، شیپرز، JHM، مولر-روبر، ب.: SALTRESPONSIVE ERF1 سیگنال‌های وابسته به گونه‌های اکسیژن فعال را در طول پاسخ اولیه به تنش شوری تنظیم می‌کند.
در برنج - سلول گیاهی 25: 2115-2131، 2013.
وانگ، تی، ژانگ، XY، Xie، WY:سیستانچdeserticola YC Ma، "Desert Ginseng": یک بررسی. - عامر جی. چانه. پزشکی 40: 1123-1141، 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS الگوی رسوب پراکسید هیدروژن در غلاف برگ برنج تحت تنش شوری. - بیول. گیاه. 50: 469-472، 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 پاسخهای تنش خشکی و باز شدن روزنه ناشی از نور آبی را تنظیم می کند. مهار تجمع گونه های اکسیژن فعال در آرابیدوپسیس - فیزیول گیاهی 162: 1030-1041، 2013.