بیان ژن مرتبط با ایمنی در کلیه ها و طحال غازغه های آلوده به آستروویروس نفریت غاز

مخاطبtina.xiang@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

چکیدهآستروویروس نفریت غاز (GNAstV) برای اولین بار در سال 2018 جدا شد و خسارات اقتصادی زیادی به صنعت غاز وارد کرد. با این حال، اطلاعات کمی در مورد میزبان وجود داردپاسخ ایمنیبه عفونت GNAstV در این مطالعه چهل غازغاز یک روزه به طور تصادفی به دو گروه عفونت و کنترل منفی تقسیم شدند. هر غاز غاز در گروه عفونت با 0.5 میلی لیتر GNAstV-JSHA عضلانی به چالش کشیده شد، در حالی که غازها در گروه کنترل منفی با همان مقدار PBS تلقیح شدند. تغییرات هیستوپاتولوژیک و مکان ویروس درطحالوکلیهبررسی شدند و بیان ژن‌های مرتبط با ایمنی توسط qPCR در 7 و 14 روز پس از عفونت تعیین شد. نتایج ما نشان داد که عفونت GNAstV باعث دژنراسیون و نکروز لنفوسیت‌های طحال و سلول‌های اپیتلیال کلیه می‌شود و این سلول‌ها برای ویروس مثبت بودند. علاوه بر این، عفونت GNAstV باعث فعال شدن گیرنده‌های تشخیص الگو (RIG-I، MDA{5}} و TLR3) و مولکول‌های آداپتور کلیدی شد.

(MyD88، MAVS و IRF7) در طحال و کلیه، و بیان ژن اینترفرون را در طحال و پروتئین های ضد ویروسی (MX1، OASL و IFITM3) در طحال و کلیه تنظیم می کند. علاوه بر این، سطح بیان بالای اینترلوکین(IL)-1 و IL-8 در طحال و iNOS در طحال و کلیه یافت شد. این نتایج نشان داد که عفونت GNAstV پاسخ ایمنی ذاتی میزبان را فعال می کند. علاوه بر این، عفونت GNAstV سطوح بیان CD8t، MHCI و MHCII را افزایش داد، که نشان می‌دهد یک پاسخ ایمنی تطبیقی ​​فعال شده است. علاوه بر این، TGF- به شدت در طحال و کلیه بیان شد، که ممکن است یک استراتژی فرار ایمنی از GNAstV برای ایجاد عفونت باشد. جالب توجه است که سطوح mRNA IL-1 و IL{10}} در کلیه کاهش یافته است که ممکن است به کاهش ضایعات کلیه کمک کند. این اولین مطالعه ای است که تغییرات بیان ژن مربوط به ایمنی را در پاسخ به عفونت GNAstV گزارش می کند و نتایج ما بینش هایی را در مورد پاتوژنز ویروسی ارائه می دهد.

کلید واژه ها: آستروویروس نفریت غاز، پاسخ ایمنی، طحال، کلیه، غاز

برای یادگیری فواید ساقه سیستانچ و داشتن تجربه سیستانچ کلیک کنید

مقدمه

از سال 2017، چندین گله غاز شیوع شدید نقرس را در غازغه‌های یک روزه {4- تا 16-در شرق چین تجربه کرده‌اند که منجر به خسارات اقتصادی عمده در صنعت غاز شده است. جوجه غازهای آلوده کاهش وزن بدن و کلیه های متورم و رنگ پریده، با اورات سفید در حالب ها و وضعیت اورات در سطح اندام های احشایی و حفره مفصلی را نشان دادند. در سال 2018، یک آستروویروس جدید غاز از جوجه غازهای آلوده جدا شد و آزمایشات تولید مثل حیوانات ثابت کرد که عامل اصلی بیماری نقرس غاز است. این ویروس از نظر ژنتیکی از آستروویروس های مام و آستروویروس های شناخته شده متمایز بود. این یک کلاد متمایز مطابق با توالی اسید آمینه پروتئین تمام قد ORF2 (پروتئین کپسید)، که متغیرترین ناحیه ژنوم است، تشکیل داد. از این رو باید به آسیب های ناشی از ویروس به جوجه ها توجه بیشتری شود. در مطالعه حاضر، آستروویروس جدید غاز به عنوان آستروویروس نفریت غاز (GNAstV) نامیده می شود.

از آنجایی که GNAstV یک ویروس تازه در حال ظهور است، بیشتر مطالعات بر روی جداسازی، تجزیه و تحلیل ژنتیکی و ایجاد روش‌های تشخیصی آن متمرکز شده‌اند (Yuan et al., 2018; Wan et al., 2019; Yin et al., 2020). با این حال، اطلاعات کمی در مورد پاسخ ایمنی میزبان به عفونت GNAstV وجود دارد. آستروویروس نفریت غاز عمدتاً باعث آسیب به کلیه، کبد و طحال در جوجه غازها می شود و بار ویروسی بالاتری در کلیه و طحال در مقایسه با سایر اندام ها مشاهده شده است (Jin et al, 2018; Xu et al, 2019). ضایعات طحال و بار ویروسی بالا نشان می دهد که ویروس ممکن است به پاسخ ایمنی آسیب برساند. سیستم ایمنی ذاتی نقش مهمی را در طول عفونت ویروس ایفا می کند و به عنوان اولین خط دفاعی در برابر تهاجم ویروسی عمل می کند (چو جی و همکاران، 2015). گیرنده‌های تشخیص الگو (PRR) اسیدهای نوکلئیک ویروسی را شناسایی می‌کنند و یک پاسخ ذاتی از جمله تولید سیتوکین‌هایی مانند I-1، TNF-x و IFN و پروتئین‌های ضد ویروسی مانند OASL، IFITM3 و MX1 را ایجاد می‌کنند. گیرنده Toll مانند 3 (TLR3) متصل به غشاء و گیرنده های RIG-I مانند سیتوزولی که عمدتاً حاوی RIG-1 و MDA-5 هستند مهم ترین PRR هستند که RNA ویروسی را تشخیص می دهند. پاسخ ایمنی ذاتی باعث ایجاد سیگنال برای برانگیختن پاسخ ایمنی تطبیقی ​​می شود که عفونت ویروسی را در مرحله بعدی عفونت کنترل می کند. ایمنی تطبیقی ​​شامل پاسخ I با واسطه آنتی بادی/ سلول B و پاسخ با واسطه سلولی است که نیاز به دخالت مولکول های CD3 پلاس، CD4 پلاس، CD8 پلاس و MHC کلاس I و II دارند. در حال حاضر، مکانیسم‌هایی که توسط آن GNAstV بر پاسخ‌های ایمنی ذاتی و سازگار میزبان تأثیر می‌گذارد نامشخص است. چین خانه بالاترین جمعیت غاز در سراسر جهان است. بنابراین، بررسی پاسخ ایمنی غاز به عفونت GNAstV برای روشن کردن مکانیسم بیماری زایی و ایمنی GNAstV و کنترل گسترش آن مهم است. در این مطالعه، غازهای یک روزه 2- به GNAstV آلوده شدند. سپس تغییرات هیستوپاتولوژیک و مکان ویروس و همچنین بیان ژن مرتبط با ایمنی در طحال و کلیه مورد بررسی قرار گرفت.

مواد و روش ها

بیانیه اخلاق

تمام آزمایش‌های حیوانی مطابق با دستورالعمل‌های مربوط به حیوانات آزمایشی وزارت علوم و فناوری (پکن، چین) انجام شد و توسط کمیته مراقبت و استفاده از حیوانات سازمانی دانشگاه کشاورزی نانجینگ تأیید شد.

ویروس

جدایه GNAstV-JSHA (GenBank شماره پیوست MK125058) از غازغه های بیمار مبتلا به نقرس (استان جیانگ سو، چین) جدا شد و در آزمایشگاه ما نگهداری شد. تیتر GAstV-JSHA 1 × 104.{5}} درصد دوز عفونی کشت بافت (TCID50)/mL بود که با تیتراسیون سلول‌های اپیتلیال کلیه غاز مطابق با روش Reed & Muench تعیین شد.

آزمایش حیوانات

نمونه‌های طحال و کلیه از آزمایش حیوانی قبلی ما که در مطالعه Xu توضیح داده شده بود جمع‌آوری شد (Xuet al.,2{4}}19). به طور خلاصه، 2-چهل غازغاز یک روزه بدون عفونت GNAstV به طور تصادفی به 2 گروه: عفونت و گروه کنترل منفی تقسیم شدند. هر غاز غازی در گروه عفونت با 0.5 میلی لیتر GNAstV-JSHA توسط تلقیح عضلانی به چالش کشیده شد، در حالی که غازها در گروه کنترل منفی با همان مقدار PBS تلقیح شدند.

همه غازها روزانه از نظر علائم بالینی تحت نظر قرار گرفتند. در 7 روز پس از عفونت (dpi)، 10 جوجه غاز از هر گروه کشته شدند و تغییرات فاحش بررسی شد و سپس کلیه و طحال جمع آوری شد. بخشی از این مشکلات در فرمالدئید 10 درصد برای بررسی هیستوپاتولوژیک رفع شد، بقیه در درجه{4}} برای آزمایش‌های بعدی ذخیره شدند. در 14 نقطه در اینچ، جوجه غازهای زنده مانده کشته شدند و بافت ها جمع آوری و همانطور که در بالا ذکر شد ذخیره شدند.

بررسی هیستوپاتولوژیک

نمونه‌های ثابت توسط یک سری الکل‌ها آب‌گیری شدند، در زایلن شفاف‌سازی شدند و در پارافین جاسازی شدند. سپس نمونه‌ها به‌صورت متوالی به برش‌های 4 میکرومتری بریده و با روش‌های معمول با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ‌آمیزی شدند. مقاطع رنگ آمیزی شده با میکروسکوپ نوری مورد بررسی قرار گرفتند.

تشخیص مکان ویروس توسط هیبریداسیون درجا

روش هیبریداسیون درجا (FISH) طبق دستورالعمل کیت تجاری ISH (Boster، چین)، با برخی تغییرات انجام شد. قبل از انجام ISH، حساسیت و ویژگی نمونه مورد آزمایش قرار گرفت و از طریق یک سری پیش تیمار بهینه شد. به طور خلاصه، مقاطع بافت پارافین شده با HCl ({1}}.2 M، 15 دقیقه) و پروتئیناز K (4{9}} ug/mL، 20 دقیقه، 37 درجه) از قبل تیمار شدند. پروتئاز K با تثبیت در 4 درصد پارافورمالدئید به مدت 5 دقیقه مهار شد. سپس مراحل هیبریداسیون و پس هیبریداسیون انجام شد. پروب ها با غلظت 0 به بافر هیبریداسیون اضافه شدند. بافر حاوی پروب ها در دمای 98 درجه به مدت 10 دقیقه دناتوره شد و بلافاصله روی یخ خنک شد. تقریباً 20 میکرولیتر از مخلوط هیبریداسیون روی بخش‌های بافتی پیپت شد، با پوشش‌های تحت درمان با دی‌اتیل پیروکربنات پوشانده شد و به مدت 16 تا 20 ساعت در دمای 42 درجه انکوبه شد. پروب هایی که با RNA ویروسی هیبرید شده بودند با استفاده از یک آنتی بادی ضد DIG کونژوگه به ​​3،{20}}N-دیامینوبنزیدین تتراهیدروکلراید شناسایی شدند. لام ها با متیل گرین ضد رنگ آمیزی شدند و با صمغ خنثی مهر و موم شدند. برای بهبود حساسیت، پروتئیناز K برای افزایش نفوذپذیری بافت برای تسهیل ورود پروب ها به بافت استفاده شد.

تجزیه و تحلیل ژن های ایمنی با روش کمی PCR Real-Time

RNA کل با استفاده از Trizol (Invitrogen، CA) استخراج شد و رونویسی معکوس RNA با استفاده از کیت HiScript Q RT SuperMix (Vazyme، چین) انجام شد. یک ترموسایکلر (AB7300؛ Life Technologies) برای PCR کمی استفاده شد. همانطور که در جدول 1 نشان داده شده است، از نرم افزار Primer 5.0 برای تعیین ژن های مرتبط با ایمنی استفاده شد. بیان اسید ریبونوکلئیک با تعیین کمیت GAPDH به عنوان یک ژن خانه دار نرمال شد. سطوح رونوشت نسبی با استفاده از روش 2-AACT تجزیه و تحلیل شد

تجزیه و تحلیل آماری

تفاوت بین گروه کنترل و گروه آزمایش با استفاده از آزمون t-test مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نتایج به صورت میانگین ± انحراف معیار بیان می شود. پ<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistical="" significance="" compared="" with="" the="" control="" group,="" and="">< 0.01="" was="" considered="" to="" indicate="" a="" high="" degree="" of="" significance="" compared="" with="" the="" control="">

نتایج

تغییرات بالینی

هیچ مرگ یا علائم بالینی واضحی در گروه شاهد تلقیح نشده مشاهده نشد. با این حال، 5 غازه از 20 غازه آلوده در طول آزمایش مردند و کاهش وزن بدن در غازهای آلوده به GNAstV مشاهده شد. در کالبد شکافی، اندام‌های گروه کنترل منفی طبیعی به نظر می‌رسیدند، اما وضعیت اورات در سطح اندام‌ها (کبد، قلب و کلیه)، کیسه‌های صفراوی و حفره مفصلی در جوجه‌غازهای مرده مشاهده شد. علاوه بر این، کلیه‌های متورم و رنگ پریده با اورات سفید در حالب‌ها در تمام غازغه‌های آلوده مشاهده شد. تغییرات پاتولوژیک در مطالعه قبلی ما نشان داده شد (Xu et al..2019). این نتایج نشان داد که ما با موفقیت مدل حیوانی عفونت GNAstV را در جوجه‌غازها ایجاد کردیم.

تغییرات هیستوپاتولوژیک در کلیه و طحال

در معاینه هیستوپاتولوژیک، کلیه ها و طحال غازهای کنترل منفی از نظر بافت شناسی طبیعی به نظر می رسید (شکل 1A و 1B). با این حال، دژنراسیون و نکروز سلول های اپیتلیال کلیه والتهابیانفیلتراسیون سلولی در کلیه غازهای آلوده مشاهده شد (شکل 1C). علاوه بر این، نکروز طحاللنفوسیت هاو نفوذ سلولهای التهابی نیز در طحال یافت شد (شکل 1D).

محل قرارگیری ویروس در کلیه و طحال

محل آستروویروس نفریت غاز در کلیه ها و طحال با استفاده از ISH مورد بررسی قرار گرفت. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، چندین ذره قهوه ای در سیتوپلاسم سلول های اپیتلیال لوله های کلیوی مشاهده شد، اما هیچ ذره قهوه ای در گلومرول کلیه مشاهده نشد. تعداد کمی ذرات قهوه ای در لنفوسیت های طحال و سلول های ماکروفاژ طحال شناسایی شد. این نتایج نشان می دهد که GNAstV می تواند سلول های اپیتلیال لوله های کلیوی و لنفوسیت های طحال را آلوده کند.

بیان مولکول‌های PRR و آداپتور در طحال و کلیه غازغه‌های آلوده به GNAstV بیان PRR(RIG{1}}، MDA-5 و TLR3) و مولکول‌های آداپتور کلیدی (MAVS، MyD88، وهمانطور که در شکل 3 نشان داده شده است IRF7) در طحال و کلیه با qPCR تعیین شد. سطح mRNA 3 PRR در طحال در گروه آلوده در 7 و 14 نقطه در اینچ در مقایسه با گروه کنترل منفی به طور قابل توجهی افزایش یافت (P<0.05). the="" rig-1="" and="" tlr3="" mrna="" levels="" in="" the="" kidneys="" were="" also="" increased="" in="" the="" infected="" group="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" compared="" with="" that="" in="" the="" negative="" control="">< 0.01).="" the="" mda-5="" mrna="" level="" was="" higher="" in="" the="" infected="" group="" at="" 14="" dpi,="" but="" no="" difference="" in="" mda-5="" mrna="" expression="" was="" observed="" between="" the="" infected="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). بر این اساس، بیان مولکول‌های آداپتور در گروه آلوده در 7 و 14 نقطه در اینچ به‌طور معنی‌داری بیشتر از گروه کنترل بود (P<0.05). these="" results="" indicate="" that="" gnastv="" infection="" activates="" the="" host's="" innate="" immune="">

بیان سیتوکین در طحال و کلیه غازهای آلوده به GNAstV

بیان سیتوکین، IL-1، I-6، IL-8، Ⅱ-10، TGF-B و iNOS همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است توسط qPCR تعیین شد. در طحال، سطوح mRNA IL-1B و TGF-B در گروه عفونت در 7 و 14dpi آشکارا بیشتر از گروه کنترل منفی بود (P<0.01). furthermore,="" the="" i-8="" and="" inos="" mrna="" levels="" in="" the="" infection="" group="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="">< 0.05).="" but="" no="" differences="" in="" the="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" groups="" at="" 7="" dpi(p=""> 0.05). Moreover, no difference in I-6 mRNA expression at 7 and 14 dpi was observed between the infection and control groups(P>0.05). در کلیه، سطوح mRNA I-1 در 7 و 14 dpi و I{5}} در 7 dpi در گروه عفونت کمتر از گروه کنترل منفی بود (P< 0.05),="" whereas="" the="" tgf-b="" and="" inos="" mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" and="" the="" i-8="" mrna="" level="" at="" 14="" dpi="" were="" higher="" in="" the="" infection="" group="" than="" those="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05). no="" difference="" in="" i-10="" expression="" was="" detected="" between="" the="" infection="" and="" control="" groups(p="">0.05).

بیان پروتئین های ضد ویروسی در طحال و کلیه غازغه های آلوده به GNAstV

سطح mRNA IFN-d. در طحال و بیان پروتئین های ضد ویروسی (OASL، IFITM3. و MIX1) در کلیه و طحال همانطور که در شکل 5 نشان داده شده است، تعیین شد. در طحال، سطوح mRNAIFN-2. OASL، IFITM3 و MX1 در 7 و 14 نقطه در اینچ در گروه آلوده به طور قابل توجهی بالاتر از گروه کنترل منفی بود (P< 0.05).="" in="" the="" kidney,="" the="" mrna="" levels="" of="" oasl,="" ifitm3,="" and="" mx1="" at="" 14="" dpi="" were="" obviously="" higher="" in="" the="" infected="" group="" than="" in="" the="" negative="" control="" group=""><0.05); however,="" no="" significant="" differences="" in="" levels="" were="" observed="" between="" the="" infection="" and="" negative="" control="" group="" at="" 7="" dpi(p="">0.05).

بیان مولکول های CD4t، CD8 پلاس و MHC کلاس و I در طحال غازغه های آلوده به GNAstV

بیان ژن های مرتبط با ارائه آنتی ژن (مولکول های CD4'، CD8'، MHC کلاس I و II) در طحال با qPCR همانطور که در شکل 6 نشان داده شده است تعیین شد. سطوح بیان MHC I در 7 و 14dpi در گروه آلوده به طور قابل توجهی بالاتر از گروه کنترل منفی بود (05/0.0 < 0).="" سطح="" بیان="" mhc="" ii="" در="" dpi="" 14="" به="" وضوح="" در="" گروه="" آلوده="" بیشتر="" از="" گروه="" کنترل="" منفی="" بود=""><0.05); however,="" no="" difference="" in="" levels="" was="" observed="" between="" the="" 2="" groups="" at="" 7="" dpi(p="">0.05). سطح CD8 به علاوه mRNA در 7 و 14 dpi در گروه آلوده به طور قابل توجهی بالاتر از گروه کنترل منفی بود (P< 0.05).="" but="" no="" changes="" in="" cd4+mrna="" levels="" at="" 7="" and="" 14="" dpi="" were="" found="" between="" the="" 2="" groups="" (p="">0.05).

بحث

آستروویروس نفریت غاز یک ویروس تازه جدا شده است که می‌تواند باعث نقرس احشایی و مرگ جوجه‌غازها شود و منجر به آسیب‌های زیادی به غازها شود. تا به امروز هیچ واکسن و عوامل درمانی برای درمان آن وجود ندارد. از این رو، بررسی پاسخ ایمنی میزبان به ویروس برای درک پاتوژنز آن و توسعه واکسن ها و روش های درمانی ضروری است. در این مطالعه، ما با تلقیح عضلانی با GNAst V-JSHA یک مدل حیوانی را در جوجه‌غازها با موفقیت ایجاد کردیم. محل قرارگیری ویروس در لنفوسیت ها و ماکروفاژهای طحال و نکروز لنفوسیت های طحال نشان می دهد که GNAstV می تواند طحال را آلوده کرده و به سیستم ایمنی میزبان آسیب برساند. با این حال، تا کنون، هیچ گزارشی در مورد پاسخ ایمنی جوجه غازهای آلوده به GNAstV گزارش نشده است. علاوه بر این، یک تیتر ویروسی بالا در سلول های اپیتلیال کلیه مشاهده شد. و این ممکن است به آسیب کلیه و اختلال دفع اسید اوریک کمک کند.

سیستم ایمنی ذاتی اولین خط دفاعی در برابر یک پاتوژن مهاجم است. در مطالعه ما، عفونت GNAstV باعث افزایش TLR3 شد. بیان mRNA RIG-1 و MIDA-5 در طحال و کلیه، نشان می‌دهد که سیستم ایمنی ذاتی فعال شده است که ممکن است به مهار تهاجم ویروسی کمک کند، تنظیم مثبت مولکول‌های آداپتور کلیدی (MyD88 و IRF7). ) این نتایج را بیشتر تایید کرد. IFN پس از فعال‌سازی PRR تولید می‌شود که نقش مهمی در سرکوب ویروس از طریق القای چندین ژن تحریک‌شده با IFN که محصولات آن‌ها فعالیت ضد ویروسی مستقیم دارند، بازی می‌کند. در مطالعه ما، بیان IFN-z در طحال و بیان پروتئین های ضد ویروسی (OASL، MX1 و IFITM3) در طحال و کلیه پس از عفونت GNAstrV افزایش یافت. افزایش تولید پروتئین های ضد ویروسی ممکن است برای مهار تهاجم ویروس مفید باشد. مطابق با این، نتایج ما نشان داد که TLR3.RIG{10}}. MDA{11}} و IRF7 در طول عفونت GNAstV فعال شدند. مطالعه قبلی همچنین نشان داد که نوع سیستم تکثیر آستروویروس انسانی را در شرایط in vitro و in vivo محدود می‌کند و از نفوذپذیری مانع ناشی از آستروویروس محافظت می‌کند (Marvin et al.. 2015). با این حال، یافته‌های TLR3 و OASL با سایر پروتئین‌های PRR و ضد ویروسی در طحال متفاوت بود، زیرا بیان هر دو TLR3 و OASL در dpi 14 در مقایسه با 7 dpi کاهش یافت. این ممکن است به تنظیم بازخورد منفی یا کاهش بار ویروس مربوط باشد. بر این اساس، lL{19}}B در dpi 14 ممکن است نتیجه مکانیسم های تنظیمی بدن در برابر تولید بیش از حد سیتوکین های پیش التهابی باشد. جالب توجه است که سطح mRNA I-1 در کلیه در گروه آلوده کاهش یافته بود. سطح پایین این سیتوکین پیش التهابی ممکن است به کاهش آسیب کلیه کمک کند. مطالعات قبلی گزارش کردند که عفونت‌های آستروویروس انسانی و آستروویروس بوقلمون نوع 2 (TAST V{23}}) با التهاب همراه نبوده و باعث ایجاد ضایعات کمی در پرزهای روده می‌شود (Koci et al..2003; Sebire et al.2004). که این ممکن است یکی از مشخصه های عفونت آستروویروس در سلول های اپیتلیال باشد. I{26}} همچنین یک سایتوکین التهابی است که از طریق یک پاسخ ایمنی کارآمد اثرات ضد ویروسی را القا می کند، اما در فرآیندهایی که منجر به آسیب عروقی می شود نیز دخیل است.التهابدیواره عروقی و ترومبوز. در مطالعه ما، هیچ تغییر قابل توجهی در IL{0}} پس از عفونت GNAstV در طحال یافت نشد. این ممکن است به تفاوت های بزرگ بین جوجه غازها مربوط باشد. با این حال، بیان I-6 در کلیه کاهش یافته بود، مشابه مشاهده برای -1B; این همچنین ممکن است به کاهش آسیب کلیه کمک کند. I-8 واسطه ای است که مسئول جذب نوتروفیل هایی است که در نفوذ التهابی موضعی شرکت می کنند. در این مطالعه، من{4}} در طحال و کلیه تنظیم شده بودم، و بنابراین ممکن است در التهاب نقش داشته باشد. IL{5}} یک سایتوکین ضد التهابی است که می تواند تولید سیتوکین های پیش التهابی را مهار کند. در این مطالعه، GNAstV باعث کاهش آشکار سطح IL{7}} در طحال شد. این ممکن است نشانه ای از التهاب شدید در طحال و یکی از علل آسیب طحال باشد. نشان داده شده است که عفونت با سایر عفونت‌های ویروسی، مانند ویروس آنسفالیت ژاپنی و ویروس زیکا، منجر به کاهش بیان I-10 می‌شود (Swarup et al.2007; Abreu 2019)، اما مکانیسم دقیق GNAstr Vinfection زمینه ای نیاز به مطالعه بیشتر دارد. TGF- یک سایتوکین سرکوب کننده سیستم ایمنی است. بنابراین، افزایش سطح TGF-B در طحال و کلیه نشان می دهد که عفونت GNAstV ممکن است باعث سرکوب سیستم ایمنی شود. علاوه بر این، گزارش شد که عفونت T AStV{14}} سطح سرمی TGF- را در بوقلمون ها افزایش داد (Koci et al.2003). افزایش تولید TGF نشان داده شده است که پاسخ ایمنی را سرکوب می کند و تکثیر ویروسی را تقویت می کند (Letterio and Roberts, 1998). از این رو، افزایش تولید TGF- ممکن است با مهار پاسخ ایمنی میزبان به تکثیر GNAstV کمک کند. در مطالعه ما، یافته ها نشان داد که عفونت GNAstV

آشکارا بیان INOS تنظیم مثبت شده است. تولید بالای iNOS ممکن است میزبان را قادر به مقاومت در برابر عفونت ویروسی کند. نتایج ما مطابق با مطالعات قبلی بود که نشان داد عفونت TAStV{0}} باعث تولید iNOS می‌شود، که تکثیر آستروویروس را محدود می‌کند (Qureshi و همکاران، 200l؛ Koci و همکاران، 2004؛ Meyerhoff و همکاران، 2012). ).

سیستم ایمنی سازگار نقش کلیدی در کنترل عفونت های ویروسی دارد. در مطالعه ما، GNAstVinfection سطح mRNA MHC Ia، MHC Iix و CD8 plus را افزایش داد و این نشان می‌دهد که پاسخ‌های ایمنی هومورال و سلولی فعال شده‌اند. قبلاً گزارش شده بود که عفونت آستروویروس انسانی تولید آنتی بادی را برمی انگیزد که می تواند ویروس را خنثی کند (Kurtzand Lee, 1978). با این حال، هیچ تغییر قابل توجهی در بیان CD4 به علاوه mRNA در مطالعه مشاهده نشد. با توجه به اینکه سلول های CD4"T برای بلوغ سلول های B و اختصاصیت آنتی بادی ضروری هستند، ممکن است GNAst V نتواند پاسخ ایمنی هومورال قوی را القا کند. این ممکن است توضیح دهد که چرا هیچ افزایش آشکاری در بیان MHC Ⅱa در 7 dpi مشاهده نشد. سطوح mRNA CD8 و MHCIa در dpi 14 در مقایسه با 7 dpi کاهش یافته است. همانطور که در بالا ذکر شد، این ممکن است مربوط به کاهش بار ویروس باشد. در این مطالعه، آنتی بادی GNAst V شناسایی نشد زیرا کیت تجاری در دسترس نیست. نقش آنتی بادی ها در GNAstVinfection نیاز به بررسی بیشتر دارد.

در نتیجه، داده های ما الگوهای پاسخ ایمنی را در طحال و کلیه غازهای آلوده به GNAst V نشان داد. در عفونت GNAst V، ژن های مربوط به ایمنی ذاتی و تطبیقی ​​فعال شدند. با این حال، تولید سیتوکین ها و پروتئین های ضد ویروسی از غازها در برابر این بیماری محافظت نکرد. این اولین مطالعه ای است که تغییرات در بیان ژن های مرتبط با ایمنی را در پاسخ به GNAst Vinfection گزارش می کند، که ممکن است به روشن شدن مکانیسم های مولکولی برهمکنش های GNAstV میزبان کمک کند.