عوامل تعدیل کننده ایمنی در سالسا سیستانچ

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

شینجیرو مارویاما، کوجی یامادا، هیروفومی تاچیبانا

سالسا سیستانچ(CAMever) G.Beck، Orobanchaceae یک گیاه انگلی است که به عنوان یک مقوی دارویی شرقی در ژاپن استفاده می شود. در مطالعه قبلی ما متوجه شدیم که عصاره C و سالسا تولید هر دو IgM و IgG را در لنفوسیت‌های گره Ivmph انسان افزایش می‌دهد. علاوه بر این، دیالیز C، سالسا (CSD) با استفاده از غشای دیالیز با a3 تهیه شد. علاوه بر این، تکثیر سلولی جزئی را القا کرد. با این حال، در مقابل، CSD باعث مهار رشد همراه با آپوپتوز در رده سلولی لنفوم بورکیت انسانی Namalwa شد. این نتایج حاکی از حضور احتمالی ترکیبات فعال در CSD است که مختص لنفوسیت‌ها هستند، تا کنون خواص شیمیایی این ترکیبات مشخص نشده است. در این مطالعه، ما خواص شیمیایی ترکیبات فعال در CSD را بررسی کردیم. هر دو فعالیت ذکر شده در رده های سلول B با درمان اتوکلاو CSD غیرفعال نشدند. با استفاده از کروماتوگرافی ستونی فیلتراسیون ژل، متوجه شدیم که پیک‌های فراکسیون‌های فعال در بخش‌های مختلف متمرکز شده‌اند. نتایج ما نشان می دهد که حداقل 2 نوع ترکیب فعال در CSD وجود دارد و ممکن است پلی ساکارید باشند زیرا مواد تشکیل دهنده با وزن مولکولی بالا محلول در آب و مقاوم در برابر حرارت هستند.

کلید واژه ها: سالسا سیستانچ، وزن مولکولی بالا، IgM، مهار رشد.

مقدمه

سالسا سیستانچ(CA Meyer) G.Beck، Orobanchaceae یک گیاه انگلی است که به عنوان یک مقوی دارویی شرقی در ژاپن استفاده می شود. در چین، این گیاه یک داروی سنتی مهم است که برای درمان کمبود کلیه و نوراستنی استفاده می شود. از طریق مطالعات آزمایشگاهی، ما قبلاً اثرات C. salsa را بر روی سیستم ایمنی گزارش کرده‌ایم. اولین. ما نشان دادیم که عصاره C. salsa تولید IgM و IgG را در لنفوسیت‌های غدد لنفاوی انسان افزایش می‌دهد. دوم، ما نشان دادیم که دیالیز سالسا (CSD) با استفاده از یک غشاء دیالیز با وزن مولکولی 3،{1}Da تولید IgM را در BALL خط سلول B انسانی افزایش داد-1 تهیه شد. علاوه بر این، تکثیر سلولی را تا حد کمی القا می کند. علاوه بر این، CSD اثر معکوس دارد که به موجب آن باعث مهار رشد همراه با آپوپتوز در رده سلولی لنفوم بورکیت انسانی، Namalwa می شود.3) این یافته ها نشان می دهد که این اثر CSD به فعال شدن سلول های B، در حالی که آپوپتوز ناشی از فقدان سیگنال های دیگری است که برای تمایز سلول های B مورد نیاز است، مانند سایتوکین ها و تماس سلولی. با این حال، خواص شیمیایی CSD در هیچ یک از مطالعات قبلی مشخص نشده است. بنابراین، در این مطالعه به بررسی خواص شیمیایی ترکیبات فعال در CSD پرداختیم.

مواد و روش ها

CSD با همان روش در مطالعه قبلی ما تهیه شد. CSD در سالین بافر فسفات (PBS) با غلظت 2 0 میلی گرم در میلی لیتر حل شد. محلول تهیه شده (0.8 میلی‌لیتر) قبل از استفاده از فیلتر ({9}}}.22 میکرومتر) عبور داده شد و سپس با همان محلول از طریق ستون‌های حاوی TOYOPEARL HW-40F شسته شد. (1.0×96.5 سانتی‌متر؛ شرکت توسو، ژاپن)، TOYOPEARL HW{12}}F(1.{16}} × 98.0 سانتی‌متر؛ Tosoh Corp.، ژاپن) و Sephacryl S-400HR(1.{21}}×98.0 cm; GE Healthcare UK Ltd.,.England); سپس 1 میلی لیتر (30 قطره) فراکسیون جمع آوری شد. برای تعیین حجم خالی ژل ها و وزن مولکولی تقریبی (MW) اجزای تکه تکه شده، دکستران آبی (BD) (سیگما آلدریچ ژاپن KK، ژاپن). و دکستران MW شناخته شده به‌دست‌آمده از گونه‌های Leuconostoc. و سیانوکوبالامین (VB12، MW: 1355.4) (Wako Pure Chemical Industries Ltd.، ژاپن) استفاده شد. مقدار کل قند و پروتئین هر فراکسیون به ترتیب با استفاده از روش فنل-سولفوریک اسید و روش Lowry با کیت سنجش پروتئین PIERCETM بیسینکونیک اسیدها (BCA) (Thermo Fisher Scientific Inc., USA) تعیین شد. گلوکز و آلبومین سرم گاوی به عنوان استانداردهای مربوطه استفاده شد. علاوه بر این، جذب در 320nm (A: 2o) از هر بخش اندازه گیری شد. پیک های خروجی دکستران آبی و سیانوکوبالامین با مقدار جذب آنها در طول موج 260 نانومتر تعیین شد و پیک های دکستران MW شناخته شده با استفاده از روش فنل-سولفوریک اسید تعیین شد. CSD در 120 درجه به مدت 20 دقیقه اتوکلاو شد تا پایداری حرارتی آن ارزیابی شود. در آزمایش‌های زیستی، کشت سلولی و اندازه‌گیری IgM با همان روش در مطالعه قبلی ما انجام شد.

عصاره سیستانچ سالسا

نتایج و بحث

شکل 1 کروماتوگرام های ستون فیلتراسیون ژل CSD روی HW-40F را نشان می دهد. از شکل la، MW اجزای فعال بر اساس نشانگر دکستران D4 بیش از 6 کیلو دالتون برآورد شد. علاوه بر این، هر دو فعالیت CSD، یعنی افزایش تولید IgM و القای مهار رشد، با درمان اتوکلاو غیرفعال نشدند (شکل 2)، اگرچه برخی از ترکیبات پس از عبور CSD از 0 جمع شدند و از بین رفتند.{{6} }ام فیلتر. الگوهای شستشوی CSD و CSD اتوکلاو شده تقریباً یکسان بودند، با این حال، فعالیت نسبی افزایش تولید IgM در CSD اتوکلاو شده کمتر از CSD درمان نشده بود. برخی از دلایل به نظر می‌رسد که انباشته‌ها اجزای فعال را نگه داشته یا برخی از اجزای فعال غیرفعال شده‌اند. نتایج کروماتوگرافی بر روی HW{8}}F حضور احتمالی 2 نوع فاکتور تعدیل کننده ایمنی را نشان داد: اولی، متمرکز در fr. شماره 32. یک ماده فعال با وزن مولکولی بالا (HCS) بود که می‌توانست تولید IgM را افزایش دهد، در حالی که دومی، در fr متمرکز شده بود. شماره 50، یک ماده فعال با وزن مولکولی متوسط ​​(MCS) بود که می توانست از تکثیر سلولی جلوگیری کند (شکل 3). با این حال، پیک‌های به‌دست‌آمده برای HCS و MCS (به‌ترتیب fr.no.32 و 50) به اندازه دکستران‌های MW شناخته‌شده (داده‌ها نشان داده نشده) تیز نبودند. این مشاهدات احتمال وجود محصولات جانبی به طور مصنوعی در طی آماده‌سازی CSD، پلیمرهای اجزای فعال که به راحتی از بین می‌روند و واحدهای متعددی را تشکیل می‌دهند، یا اجزای فعال مختلفی که دارای مگاوات اصلی متفاوت هستند را نشان می‌دهد. الگوهای شستشو در کروماتوگرام ها نشان می دهد که بدست آوردن ترکیبات خالص از HCS و MCS آسان نیست زیرا به نظر می رسد اجزای مختلفی وجود دارند که MWs کمی متفاوت دارند همانطور که در بالا ذکر شد. اگرچه هر دو مخلوطی از اجزای فعال هستند، به نظر می رسد که HCS شامل اجزای MW بیش از 70 کیلو دالتون است، در حالی که MCS شامل مواردی از MW بیش از 6 کیلو دالتون است. HCS روی HW{22}}F در کسری که فراتر از محدوده جداسازی بود، شسته شد. در Sephacryl-S400. بخشی از HCS (fr.no.36) در همان کسر نشانگر D1 شسته شد که MW 2،{28}} کیلو دالتون است (شکل 4). به طور کلی، پلی ساکاریدها و پروتئین ها به عنوان ترکیبات با MW بالا محلول در آب در عصاره های گیاهی در نظر گرفته می شوند. از آنجایی که تقریباً تمام پروتئین های کاربردی با عملیات حرارتی غیرفعال می شوند، به نظر می رسد که پلی ساکارید هستند. با این حال، پارک و. al. پروتئین کوچک سیتوتوکسیک مقاوم در برابر حرارت به نام ویسکوتوکسین را گزارش کرده اند که از عصاره دارواش (Viscum album L., Viscaceae) تهیه شده است. مگاوات کمتری دارد و محتوای پروتئین بیشتری را نشان می دهد. با در نظر گرفتن این حقایق، MCS ممکن است پلی ساکارید 8 متصل به پروتئین باشد یا ممکن است یک پروتئین مقاوم در برابر حرارت مانند ویسکوتوکسین ها باشد. این نتایج نشان می دهد که 2 ترکیب فعال ممکن است پلی ساکارید باشند. در غیر این صورت، MCS ممکن است پروتئین های مقاوم در برابر حرارت باشد.

منابع

1) Deng, M., Zhao, JY, Ju, XD, Tu, PF, Jiang, Y., Li, ZB: اثر محافظتی توبولوزید B بر آپوپتوز ناشی از TNF آلفا در سلول های عصبی.Acta Pharmacol. Sin.,25, 1276-1284,2004.

2) Maruyama، S.، Yamada، K.، Tachibana، H.:عصاره سیستانچ سالساافزایش تولید IgM در رده سلولی B انسان، BALL-1.J. تجارت Med.,24,209-211,2007.

3) Maruyama، S.، Yamada، K.، Tachibana، H:سالسا سیستانچعصاره آپوپتوز را در رده سلولی لنفوم بورکیت انسانی Namalwa القا کرد. جی.تراد. Med.,25,24-27,2008.

4) پارک JH,Hyun,CK,Shin HK: اثرات سیتوتوکسیک اجزاء در دارواش حرارت دیده (آلبوم Viscum). Cancer Let, 139, 207-213,1999.

5) Tabasco, J., Pont, F, Fournic, JJ, Vercellone, A.: ویسکوتوکسین های دارواش سمیت سلولی با واسطه سلول های کشنده طبیعی را افزایش می دهند. Eur.J. Biochem.,269,{3}}, 2002.

6) فیشر، ام.، یانگ، LX: اثرات ضد سرطانی و مکانیسم های پلی ساکارید-K (PSK): پیامدهای ایمونوتراپی سرطان. Anticancer Res.,22,{3}},2002.

مکمل های سیستانچ