فعل و انفعالات بین آنتی اکسیدان های پلی فنولیک کوئرستین و نارینگنین رفتار شیمیایی و بیولوژیکی متمایز مربوط به ردوکس در مخلوط های آنها را دیکته می کند.

لطفا تماس بگیریدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

فعالیت آنتی اکسیدانی با آزمایش DPPH.

تعیین فعالیت آنتی اکسیدانی آنتی اکسیدان های مورد بررسی و مخلوط آنها توسطاسپکتروفتومتریسنجش با استفاده از رادیکال DPPH همانطور که قبلاً توضیح داده شد3،55. ابتدا محلول استوک رادیکال DPPH با متانول رقیق شد تا زمانی که جذب در طول موج 515 نانومتر به 0.9±{4}}.05 رسید. ثانیا، آنتی اکسیدان ها و مخلوط آنها به طور مناسب با 70 درصد اتانول رقیق شدند تا غلظت هایی در محدوده خطی assayi355 قرار گیرد. سپس محلول DPPH (1 میلی‌لیتر) با نمونه‌های رقیق شده (30 میکرولیتر) مخلوط شد و جذب پس از 10 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی‌گراد در طول موج 515 نانومتر اندازه‌گیری شد. همه واکنش‌ها در صفحات چاهک انجام شد. اندازه گیری جذب با کمک اسپکتروفتومتر TECAN Infinite M200 (Tecan Group Ltd., Switzerland) انجام شد. فعالیت آنتی اکسیدانی نمونه به ضریب استوکیومتری ng همانطور که قبلاً توضیح داده شد، با تغییرات 5 دوباره محاسبه شد. به طور خلاصه، تعداد رادیکال های پاک شده توسط نمونه های آزمایش شده بر اساس قانون Beer-Lambert و ضریب خاموشی مولی DPPH پس از اندازه گیری های انجام شده پس از 10 دقیقه واکنش بین محلول آنتی اکسیدان و رادیکال 55 محاسبه شد. مقدار n به عنوان مماس رابطه خطی بین تعداد مول های DPPH حذف شده توسط 1 میلی لیتر محاسبه می شود.آنتی اکسیدان (ها)محلول هایی در محدوده غلظت، که در آن محلول "ذخیره" دارای غلظت "100 درصد" است و سایر غلظت ها کسری از 100 درصد هستند که توسط فاکتورهای رقت تعریف می شود.

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

فعالیت آنتی اکسیدانی با تیتراسیون پتانسیومتری و ولتامتری پالس تفاضلی

پتانسیل کاهش استاندارد (E) برای Q و R با تیتراسیون پتانسیومتری (PT) همانطور که در جاهای دیگر توضیح داده شد اندازه گیری شد. به طور خلاصه، ترکیبات مورد مطالعه و تیترانت (K، [Fe(CN)]) در PBS حل شدند. غلظت ترکیبات خالص شده 0.3 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر بود، مخلوط‌ها حاوی 0} میلی‌گرم در میلی‌لیتر از هر ترکیب بودند. اندازه‌گیری‌ها با استفاده از تجهیزات کاهش اکسیداسیون میکرو اکسیداسیون C (ایالات متحده آمریکا) با استفاده از یک الکترود مرجع AglAgCl (RE) و یک الکترود اندازه‌گیری پلاتین انجام شد. PTs در 01/37±0 درجه انجام شد که عمدتاً توسط Ultra Thermostat (PolvScience، USA) حفظ می‌شد. حجم مساوی تیترانت به آنالیت اضافه شد و پتانسیل ثابت خوانده شد. در نتیجه، منحنی‌های تیتراسیون، E{11}}f(V..)، با کمک نرم‌افزار SigmaPlot Version 13.0 (Systat Software Inc., UK) با برازش پارامترهای سیگموئیدی،5-ریاضی تجزیه و تحلیل شدند. مدل به داده های تجربی 35. پتانسیل در نقطه هم ارزی (EP در مقابل RE) مستقیماً از این مدل بر اساس پارامتر a خوانده شد. برابر با حجم تیترانت اضافه شده در نقطه عطف است. در نهایت، مقادیر EP در مقابل SHE (پتانسیل کاهش استاندارد، EO) محاسبه شد. مدت تصحیح پتانسیل RE(c) با تیتراسیون زوج های ردوکس، FeCl.6H، O، و Na،S، O3.5H،O، مشخص شد که با پتانسیل های کاهش استاندارد شناخته شده مشخص می شود.

به نوبه خود، قدرت آنتی اکسیدانی (AOP) ترکیبات مورد مطالعه و مخلوط آنها با ولتامتری پالس تفاضلی (DPV) همانطور که قبلا با تغییرات نشان داده شده بود اندازه گیری شد. به طور خلاصه، اندازه‌گیری‌ها با استفاده از پتانسیواستات مرجع Gamry 60{{1{0}} (Gamry Instruments، ایالات متحده آمریکا) حاوی یک سیستم سه الکترودی انجام شد. الکترود کربن شیشه ای (GC، با قطر 1.6 میلی متر)، سیم پلاتین و الکترود AgAgCl (Hydromet SC، لهستان) به ترتیب به عنوان الکترود کار (WE)، کمکی (AE) و الکترود مرجع (RE) استفاده شد. قبل از آزمایش، سطح WE با استفاده از سوسپانسیون آلومینا (0) پرداخت شد. سپس با آب مقطر و متانول تمیز می شود. ترکیبات مورد مطالعه در بافر DMSO و سدیم فسفات (pH=7.4±0.1) رقیق شدند، بنابراین غلظت نهایی بافر فسفات {{3{33}}}}} بود. M در نمونه. بافر به عنوان الکترولیت حمایت کننده عمل می کرد. غلظت ترکیبات خالص شده 3 میلی مولار بود. مخلوط ها حاوی 3 میلی مولار از هر ترکیب بودند. به منظور حذف اکسیژن فعال الکتروشیمیایی، محلول های مورد مطالعه قبل از اندازه گیری ها با نفوذ آرگون اکسید زدایی شدند. ولتاموگرام های DPV برای N-.N plus و مخلوط ها: ON-و RN plus در محدوده{18}}.2 تا مثبت 1.3 ولت، در حالی که برای Q و R در محدوده-0}.2 تا به علاوه 0.6 V در مقابل RE. نرخ اسکن پتانسیل 0.1 V.s، ارتفاع پالس 0.05 V و زمان پالس 0.1 ثانیه در 0.01±25 درجه تنظیم شد.

ولتاموگرافی DPV توسط نرم افزار SigmaPlot نسخه 13.{1}} (Systat Software Inc., UK) آنالیز شد. مقادیر AOP در دو مرحله محاسبه شد. محاسبات نه تنها پتانسیل و جریان پیک آندی (E،؛ I،)، بلکه پتانسیل تنظیم شده و جریان اندازه گیری شده در هر نقطه از منحنی ولتامتری را در نظر می گیرند. این اجازه می دهد تا مقادیر دقیق تری نسبت به مقادیر گزارش شده در کار قبلی ما به دست آید. ابتدا پارامتر انرژی آنتی اکسیدانی (AOE) مطابق معادله محاسبه شد. 1:

که در آن AwE مساحت سطح WE است (برابر با {{0}}.162±0.004 سانتی متر در مطالعه ما)، E یک مجموعه پتانسیل در مقابل RE [V] است، یک ضریب اصلاحی با در نظر گرفتن حضور محل اتصال مایع بین WE و RE (اینجا 0.103 V)، I جریان اندازه گیری شده در برابر جریان پس زمینه [A] است، آن زمان نمونه برداری بالقوه است [dt=0 .5 ثانیه].

در مرحله دوم، AOP بیان شده در واحد W cm² بر اساس معادله 2∶ محاسبه شد

که در آن tt؛ - تفاوت بین زمان شروع پیک اکسیداسیون (t) و پایان آن (t) است.

به منظور تعیین Awp، ولتامتری حلقوی برای محلول 1.10-3MK,[Fe(CN).] در 0.1 M KCl انجام شد. این مقدار بر اساس معادله Randles-Sevcik 82 از شیب پیک جریان آندی به عنوان تابعی از جذر سرعت اسکن، I, =f(pi/2) محاسبه شد. شما به همان روشی که در تیتراسیون پتانسیومتری اندازه گیری شد. علاوه بر این، در کار حاضر، پارامتر ترمودینامیکی فرآیند اکسیداسیون پتانسیل پیک آندی بود که توسط اتصال مایع بین WE و RE (E.,{8}}E.. به علاوه e) تصحیح شد، در حالی که پارامترهای جنبشی بار منتقل شده را در بر می‌گرفت. Q) و جریان آندی (I,).

سیستانچ می تواند ایمنی را بهبود بخشد

کشت سلولی در مطالعه ارائه شده، رده سلولی HT29 (کولون انسانیآدنوکارسینوماز ATCC به عنوان مدلی از روده انسان استفاده شد، سلول ها در محیط McCoy حاوی مکمل نگهداری شدند.آنتی بیوتیک ها(100 واحد در میلی لیتر استرپتومایسین و 100 گرم در لیتر پنی سیلین) و سرم جنین گاو (100 میلی لیتر در لیتر) 13. رده سلولی HT29 در 37Cunder 5 درصد CO، اتمسفر در یک انکوباتور سلولی (Heal Force)3 نگهداری شد. رده سلولی بین پاساژهای 6 و l1 به کار گرفته شد. سلول های کشت شده برای آلودگی مایکوپلاسما با استفاده از کیت جهانی تشخیص مایکوپلاسما از ATCC (ایالات متحده آمریکا) مورد آزمایش قرار گرفتند.

ارزیابی سمیت سلولی برای تعیین تاثیر خالصآنتی اکسیدان ها(Q، N پلاس، R، N-) و مخلوط های آنها (QN-، RN به علاوه) بر روی رشد سلول های HT29، آزمون MTT همانطور که قبلا توضیح داده شد اعمال شد. به طور خلاصه، سلول‌های با رشد تصاعدی در 96-صفحه‌های کشت بافت چاهی (5×10 سلول در هر چاهک در 0}.18 میلی‌لیتر محیط کشت) کاشته شدند و به مدت 24 ساعت ته نشین شدند. در دمای 37 درجه زیر 5 درصد CO، سپس سلول ها به مدت 6،24 یا 72 ساعت با 0 تیمار شدند.{39}}2 میلی لیتر غلظت های مختلف آنتی اکسیدان خالص یا مخلوط آنها3،5. آنتی‌اکسیدان‌ها و مخلوط‌های آنها در اتانول (نارینگنین، نارینگین و مخلوط‌ها - 3{46}} درصد (v/v)، کوئرستین-40 درصد (v/v)، روتین – 20 درصد (v/v) حل شدند. )). غلظت نهایی ترکیبات خالص شده از 10 نانومولار تا 100 میکرومولار متغیر بود. مخلوط‌ها حاوی غلظت‌های معادل هر ترکیب (10 نانومولار{26}} میکرومولار) بودند. غلظت نهایی اتانول در محیط کشت 2 درصد (v/v) در مورد روتین، 3 درصد (v/v) naringenin، naringin و مخلوط و همچنین 4 درصد (v/v) quercetin بود. پس از قرار گرفتن در معرض 6 و 24 ساعت، محیط از چاه ها آسپیره شد و با 0.2 میلی لیتر محیط تازه جایگزین شد. سلول ها در دمای 37 درجه تا 72 ساعت از کل زمان انکوباسیون 13،55 انکوبه شدند. پس از 72 ساعت انکوباسیون، 0.05 میلی لیتر محلول MTT (4 گرم در لیتر) به همه چاه ها اضافه شد و سلول ها برای 4 ساعت دیگر در دمای 37 درجه C13،5 نگهداری شدند. سپس محیط از چاهک ها آسپیره شد و کریستال های فورمازان در 05/0 میلی لیتر DMSO حل شدند. جذب محلول های به دست آمده در طول موج 540 نانومتر با کمک صفحه خوان TECAN Infinite M200 (Tecan Group Ltd, Switzerland) 15 اندازه گیری شد. تیمارها به صورت چهار تکرار فنی انجام شد. سه تکرار مستقل از هر درمان انجام شد. تأثیر نمونه‌های بررسی‌شده بر رشد سلول‌های HT29 به‌عنوان درصد مهار رشد سلول‌های در معرض آنتی‌اکسیدان‌های فردی و مخلوط‌های آنها در مقایسه با سلول‌های کنترل تیمار شده با حلال بیان شد که رشد آن‌ها 100 درصد 13،55 در نظر گرفته شد.

سنجش CAA (فعالیت آنتی اکسیدانی سلولی). سنجش CAA (The OxiSelect Cell Biolabs, Inc. USA) برای ارزیابی فعالیت آنتی اکسیدانی سلولی ترکیبات به تنهایی (O, N plus, R, N-) و مخلوط ها (ON-, RN plus) در سلول های HT29 همانطور که قبلاً توضیح داده شد استفاده شد. سلول های در حال رشد نمایی در 96-صفحه سیاه کشت بافت چاهی با کف شفاف برای اندازه گیری فلورسانس (3×104 سلول در هر چاه در 0.2 میلی لیتر محیط کشت) کاشته شدند و به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه زیر 5 درصد CO، i3.55 باقی می ماند. همه آنتی اکسیدان ها در 10 درصد اتانول حل شدند. سپس سلولها با محلول رقیق شده 5{48}}{{50}} برابر 2'،7'-دی کلروفلورسئین دی استات (0) تحت درمان قرار گرفتند.05 میلی لیتر) ارائه شد. با کیت، و همان حجم از نمونه های آنتی اکسیدانی با غلظت های مختلف برای 1، 3، یا 6 ساعت. غلظت نهایی ترکیبات خالص شده از 1 تا 1{85}}0 میکرومولار متغیر بود. مخلوط‌ها حاوی غلظت‌های معادل هر ترکیب ({26}} uM) بودند. سلول‌های کنترل فقط با 1{99}} درصد اتانول (V/V) تیمار شدند. غلظت نهایی اتانول در محیط کشت 5 درصد (v/v) بود. تمامی تیمارها در سه تکرار فنی و سه آزمایش مستقل انجام شد. مراحل بعدی طبق توصیه های سازنده (https://www.cellbiolabs.com) انجام شد. محاسبات همانطور که قبلا توضیح داده شد، اثرات ژنوتوکسیک انجام شد. برای تعیین اثرات ژنوتوکسیک نشان داده شده توسط آنتی اکسیدان های فردی (O، N به علاوه، RN-) و مخلوط آنها (ON-، RN پلاس) در سلول های HT29، یک روش سنجش دنباله دار همانطور که قبلا توضیح داده شد استفاده شد. سلول‌های HT29 در حال رشد نمایی در 24-صفحه‌های کشت بافت چاهک (10 سلول در هر چاهک در 1.8 میلی‌لیتر محیط کشت) کاشته شدند و به مدت 24 ساعت در دمای 37 درجه تحت 5 درصد CO ته نشین شدند. 55، سپس سلول ها به مدت 24 ساعت با 0.2 میلی لیتر از غلظت های مختلف آنتی اکسیدان به تنهایی یا در مخلوط تیمار شدند. غلظت نهایی ترکیبات خالص شده از 1 تا 100 میکرومولار متغیر بود. مخلوط‌ها حاوی غلظت‌های معادل هر ترکیب ({46}} میکرومولار) بودند. غلظت نهایی اتانول در محیط کشت 3 درصد (v/v) بود. سلول های مورد استفاده به عنوان کنترل منفی تنها با حلال تیمار شدند. پس از گذشت زمان تیمار، محیط از چاهک ها آسپیره شد و سلول ها با 0.5 میلی لیتر PBS شسته شدند. سپس سلول ها با استفاده از 0.2 میلی لیتر محلول تریپسین (0.5 گرم در لیتر) جدا شدند. 55 فعالیت تریپسین با افزودن 1.8 میلی لیتر محیط رشد کامل به هر چاهک متوقف شد. سلول ها مجدداً معلق شدند، شمارش شدند و در لوله های 1.5 میلی لیتری (30×1033 سلول در هر لوله) تقسیم شدند. سوسپانسیون سلولی (100×g، 5 دقیقه، 4 درجه) سانتریفیوژ شد. گلوله های سلولی با l میلی لیتر PBS شسته و مجدداً سانتریفیوژ شدند (100×g، 5 دقیقه، 4 درجه ）5). سپس PBS دور ریخته شد و سلول ها مجدداً در 150 میکرولیتر آگارز 0.5 درصد LMP در آب قبل از قبل معلق شدند. تا دمای 42 درجه سانتیگراد گرم شده و 40 میکرولیتر از این مخلوط به صورت دو نقطه بر روی لام میکروسکوپی که از قبل با آگارز با نقطه ذوب 1 درصد معمولی (NMP آگارز) پوشانده شده بود قرار داده شد. قرار دادن اسلایدهای میکروسکوپ بر روی یک سینی یخ به مدت حداقل 5 دقیقه 3 لام با دو تکرار برای هر غلظت از مواد آزمایش شده تهیه شد. 0.01 مولار تریس، 1 درصد Triton X100، pH10)، اسلایدها در یک پلت فرم الکتروفورز Bio-Rad Sub-Cell GT (UK)، پوشیده شده با بافر الکتروفورز سرد (0.3 M NaOH، 1 میلی مولار EDTA، pH 13) قرار گرفتند و کروماتین قبل از الکتروفورز به مدت 25 دقیقه اجازه داده شد تا باز شود.الکتروفورز در 26 انجام شد. V و 300 میلی آمپر (0.75 V/cm) به مدت 30 دقیقه در تاریکی در 4-8 درجه. پس از این مرحله، لام ها ابتدا با استفاده از PBS و سپس آب شسته شدند. پس از آن، DNA با SybrGreen در بافر TE (0.1 M Trizma-Base، 1 mM EDTA، pH 7.5) به مدت 20 دقیقه رنگ‌آمیزی شد. پس از رنگ آمیزی، لام ها به مدت 5 دقیقه با آب مقطر شسته شدند. DNA "دنباله دارها" تحت یک میکروسکوپ فلورسانس (Zeiss ImagerZ2، ایالات متحده آمریکا) همراه با یک سیستم اسکن کامپیوتری اسلاید (Metafer4، آلمان) تجزیه و تحلیل شد. تجزیه و تحلیل دنباله دار شامل شمارش 200 هسته متوالی در هر نمونه 5 بود. سمیت ژنتیکی نمونه های آنالیز شده به صورت درصد DNA در دم دنباله دار بیان شد. سه تکرار مستقل از هر تیمار انجام شد.

سیستانچ می تواند ایمنی را بهبود بخشد

متیلاسیون DNA جهانی

For the determination of global methylation of DNA, a modified comet assay procedure was developed. Methylation sensitive comet assay was performed according to Wentzel's procedure with significant modifications. The cells were seeded in 6-well tissue culture plates(4×105 cells per well in 3.6 mL of medium) and were allowed to settle for 24 h at 37°C under 5%CO,Then, the cells were treated with 0.4 mL, of different concentrations of the tested antioxidants or their mixtures for 24 h at 37C. The final concentrations of individual compounds and solvents were the same as used for genotoxic effect assessment. After incubation time, the medium was aspirated from the wells and the cells were washed with 2 mL of PBS. The cells were detached using 0.4 mL of trypsin solution (0.5 g/L). Then,3.6 mL of medium was added to each well. The cells were re-suspended, counted, and aliquoted into 1.5 mL tubes(30×10 cells per tube). The cell suspension was centrifuged (100×g,5 min, 4°C). The cell pellets were washed with 1 mL of PBS and centrifuged again(100×g 5 min,4℃C）.PBS was discarded and the cell pellet was re-suspended in 100μL of 1%LMP agarose in water pre-warmed to 45 °C. Then,40 μL of this mixture was placed as two spots on a microscope slide pre-coated with 1%normal melting point agarose(NMP agarose)5. The slides were then covered with coverslips and left to set on an ice-cold tray for at least 5 min to solidify agarose5. Each treatment embraced a set of 3 microscope slides. After overnight lysis in a high salt alkaline buffer(2.5 M NaCl, 0.1 M EDTA, 0.01 M Tris,1% Triton X100, pH 10), the slides were washed twice with water>5. کروماتین محکم بسته بندی شده با تیمار هسته ها با محلول 1.5 میلی مولار پروتئیناز K ({3}}.2 میلی لیتر در هر لام)3 باز شد. اسلایدها با پارافیلم پوشانده شدند، در یک ظرف پلاستیکی پوشانده شده با دستمال مرطوب قرار داده شدند، به مدت 1{14}} دقیقه در دمای 37 درجه قرار گرفتند، سپس با آب 3 شسته شدند. به این ترتیب نوکلوئیدها با اندونوکلئازهای محدود کننده (Hall و MspI) برای هضم آماده شدند. هر دو آنزیم توالی محدود یکسانی را تشخیص می دهند (5'-CCGG-3') اما حساسیت متفاوتی نسبت به سیتوزین متیله نشان می دهند. فرض بر این است که HpalI فقط توالی های غیر متیله را هضم می کند. MspI می تواند توالی های غیر متیله و همچنین توالی های کاملا متیله را شکافت. بنابراین، سطوح نسبی متیلاسیون DNA توالی CpG به عنوان تفاوت بین مقدار کلی DNA در دم دنباله دار مشاهده شده با هضم MspI و نوکلوئیدهای هضم شده HpalI منعکس می شود. برای ایجاد شرایط مناسب برای هضم آنزیمی. 2 میلی لیتر بافر تانگو رقیق شده با آب درجه مولکولی به نسبت 1:9 (v/v) روی هر لام در مجموعه اعمال شد. اسلایدها با پارافیلم پوشانده شدند، در یک ظرف پلاستیکی پوشانده شده با دستمال مرطوب قرار داده شدند و به مدت 1{24}} دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار گرفتند. سپس، مازاد بافر حذف شد. هر یک از سه اسلاید موجود در مجموعه به طور متفاوتی رفتار می شد. روی اسلاید اول (شاهد)، فقط 0.15 میلی لیتر بافر رقیق شده تانگو اعمال شد. هسته‌های تعبیه‌شده آگارز در لام دوم با 0.15 میلی‌لیتر آنزیم هال (0.37 میکرو واحد) تیمار شدند، در حالی که به لام سوم همان حجم MspI (0.26 میکرو واحد) اضافه شد. محلول های آنزیمی با استفاده از بافر رقیق تانگو تهیه شد. اسلایدها با یک پارافیلم پوشانده شدند و در یک ظرف پلاستیکی مرطوب قرار گرفتند. هضم آنزیمی به مدت 45 دقیقه در دمای 37 درجه انجام شد. پس از هضم، لام ها دو بار با آب شسته شدند. مراحل بعدی سنجش دنباله دار، مانند الکتروفورز و رنگ آمیزی DNA، همانطور که در بخش "متیلاسیون DNA جهانی" توضیح داده شد، انجام شد. دنباله دارهای DNA تحت یک میکروسکوپ فلورسانس (Zeiss ImagerZ2، ایالات متحده آمریکا) همراه با یک سیستم اسکن کامپیوتری اسلاید (Metafer4، آلمان) تجزیه و تحلیل شدند. تجزیه و تحلیل دنباله دار با کمک نرم افزار Comet score (USA) انجام شد و شامل شمارش 100 هسته در هر نمونه بود. میانگین درصد DNA در دم دنباله دار معیاری برای تکه تکه شدن DNA بود. برای محاسبه DNA جهانیمتیلاسیون(درصد متیلاسیون CpG)، از معادله زیر استفاده شد: درصد متیلاسیون CpG=100—Hpal/MspI×100، که در آن Hpal/MspI نسبت درصد DNA در دنباله دنباله دار نوکلوئیدی است که با HpalII و DNA هضم شده است. درصد در دنباله دنباله دار نوکلوئید هضم شده با Mspl85. مصنوعات آسیب DNA با کم کردن درصد DNA در دم نمونه شاهد از مقادیر به دست آمده برای نمونه های هضم شده با آنزیم های محدود کننده محاسبه شدند. سه تکرار مستقل از هر آزمایش انجام شد.

تجزیه و تحلیل ریزآرایه.

آنالیز ژنومی همانطور که قبلا نشان داده شد انجام شده است، سلول‌های HT29 در 24-صفحه‌های کشت بافت چاهی (105 سلول در هر چاه در 1.8 میلی‌لیتر محیط) کاشته شدند و به مدت 24 ساعت در 37 ساعت ته نشین شدند. درجه کمتر از 5 درصد CO، سپس سلول ها به مدت 24 ساعت با 0.2 میلی لیتر غلظت های مختلف آنتی اکسیدان به تنهایی (Q, N-) یا در مخلوط (QN-) تیمار شدند. غلظت نهایی ترکیبات مورد بررسی از 1 تا 10 میکرومولار متغیر بود. مخلوط حاوی غلظت های معادل هر ترکیب بود. سلول های مورد استفاده به عنوان کنترل منفی تنها با حلال تیمار شدند. غلظت نهایی اتانول در محیط کشت 3 درصد (v/y) بود. جداسازی RNA. رونویسی معکوس و PCR بلادرنگ آرایه متشکل از 84 ژن درگیر در پاسخ آنتی اکسیدانی و همچنین تجزیه و تحلیل داده ها همانطور که قبلا توضیح داده شد انجام شد. سه تکرار مستقل از هر تیمار سلولی انجام شد.

تحلیل آماری.

همه مقادیر به صورت میانگین ± انحراف معیار سه آزمایش مستقل بیان می شوند، مگر اینکه خلاف آن ذکر شود. اهمیت آماری تعیین فعالیت آنتی اکسیدانی در یک سیستم بدون سلول با استفاده از سنجش DPV و DPPH و همچنین در مدل‌های سلولی به‌دست‌آمده با آزمون CAA با آزمون توکی جفت نشده (p کمتر یا مساوی 0) مورد بررسی قرار گرفت. 6}}5). نتایج سمیت ژنتیکی و متیلاسیون DNA جهانی که توسط سنجش های دنباله دار مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت، با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه با آزمون تعقیبی Dunnett مورد بررسی قرار گرفت. این تجزیه و تحلیل های آماری با استفاده از بسته نرم افزاری Prism 4.{8}} (GraphPad Software, Inc., USA) انجام شد. اهمیت آماری تغییرات در بیان ژن بین نمونه ها و کنترل ها نیز با استفاده از آزمون t-paired Student برای هر ژن مورد نظر با استفاده از مرکز تجزیه و تحلیل داده های GenGlobe (Qiagen، ایالات متحده) مورد ارزیابی قرار گرفت. سطح معنی داری آماری کمتر یا مساوی 0.05 تعیین شد.

این مقاله استخراج شده استwww.nature.com/scientificreports