بررسی اثر پرکاری تیروئید بر استرس شبکه آندوپلاسمی و گیرنده انتقالی بالقوه کانال 1 کانونی در کلیه

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

نوریه ازگی BEKTUR AYKANAT^1,*,Erhan ŞAHİN²، Sedat KAÇAR²، Rıdvan BAĞCI³، شریفه کاراکایا²,Dilek BURUKOĞLU DÖNMEZ², Varol ŞAHİNTÜRK²

¹بخش بافت شناسی و جنین شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه آتلیم، آنکارا، ترکیه²گروه بافت شناسی و جنین شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه عثمانگازی، آنکارا، ترکیه ³بخش آزمایشگاه آندرولوژی واحد IVF، بیمارستان آموزشی و تحقیقاتی شهر آدانا، آدانا، ترکیه

زمینه/هدف:پرکاری تیروئیدبا افزایش سرعت فیلتراسیون گلومرولی و همچنین افزایش فعال سازی رنین-آنژیوتانسین-آلدوسترون همراه است. اختلال Ca2 به علاوه هموستاز در شبکه آندوپلاسمی (ER) با بسیاری از بیماری ها از جمله نفروپاتی دیابتی وپرکاری تیروئید. کانال متعارف 1 پتانسیل گیرنده گذرا (TRPC1) اولین پروتئین خانواده TRPC کلون شده است. اگرچه در بسیاری از جاها بیان شده استکلیه، عملکرد آن نامشخص است. TRPC1 در تنظیم هموستاز Ca2 به علاوه نقش دارد و تنظیم مثبت آن باعث افزایش سطح ER Ca2 Plus می شود و پاسخ پروتئین باز شده را فعال می کند که منجر به آسیب سلولی در بدن می شود.کلیه. این مطالعه به بررسی نقش TRPC1 درکلیه هاموش های پر تیروئید از نظر نشانگرهای استرس ER که پروتئین 78 تنظیم شده با گلوکز (GRP78)، فاکتور رونویسی فعال کننده 6 (ATF6)، (پروتئین کیناز R (PKR) مانند شبکه آندوپلاسمی کیناز) (PERK)، آنزیم نیاز به اینوزیتول 1 هستند. (IRE1).

مواد و روش‌ها: 20 موش صحرایی نر در دو گروه کنترل و پرکاری تیروئید (n=10) قرار گرفتند.پرکاری تیروئیدبا افزودن 12 میلی گرم در لیتر تیروکسین به آب آشامیدنی موش ها به مدت 4 هفته القا شد. سطوح T3 و T4 بدون سرم (fT3، fT4)، TSH، نیتروژن اوره خون (BUN) و سطوح کراتینین اندازه گیری شد. تجزیه و تحلیل هیستوشیمیاییکلیهبخش هایی برای تغییرات مورفولوژیکی و همچنین آنالیز ایمونوهیستوشیمی و وسترن بلات برش های کلیه برای آنتی بادی های GRP78، ATF6، PERK، IRE1، TRPC1 انجام شد.

یافته‌ها: سطوح TSH، BUN و کراتینین کاهش و سطوح fT3 و fT4 در موش‌های پرکاری تیروئید افزایش یافت. تجزیه و تحلیل مورفولوژیکی منجر به ضخیم شدن غشای پایه مویرگی در گلومرول ها و همچنین وسترن بلات شد و نتایج ایمونوهیستوشیمی افزایش TRPC1، GRP78 و ATF6 را در موش هیپرتیروئید نشان داد (05/0 <>

نتیجه گیری: در مطالعه ما برای اولین بار نشان دادیم که رابطه بین استرس ER و TRPC1 و افزایش بیان آنها باعث آسیب کلیوی در موش های صحرایی پرکاری تیروئید می شود.

کلید واژه ها:پرکاری تیروئید، استرس شبکه آندوپلاسمی (ER)، گیرنده گذرا پتانسیل متعارف 1 (TRPC1)،کلیه، موش صحرایی

1. مقدمه

تری یدوتیرونین (T3) و تیروکسین (T4) هورمون های تیروئیدی هستند که برای رشد طبیعی اندام ها و عملکردهای متابولیک ضروری هستند [1]. علاوه بر این، آنها سرعت رشد، عملکرد پمپ سدیم/پتاسیم، ضربان قلب، فشار خون، تنفس، مصرف اکسیژن، هضم، متابولیسم چربی، کربوهیدرات و پروتئین، عملکرد سیستم عصبی مرکزی، حرکات و عملکردهای متابولیک سایر غدد درون ریز را تنظیم می کنند. .

پرکاری تیروئیداثرات زیادی بر کلسترول، تری گلیسیرید، لیپید، اکسیداسیون، آنتی اکسیدان ها، مالون دی آلدئید (MDA)، آنزیم کاتالیزور کاتالاز (CAT)، آنزیم های کبدی، اسید اوریک، اوره، کراتینین و تغییرات هیستوپاتولوژیک در کبد و کلیه دارد [3]. اختلال عملکرد تیروئید بر فیزیولوژی و رشد کلیه تأثیر می گذارد. در مورد کم کاری تیروئید که غده تیروئید کمتر کار می کند، توده کلیوی (نسبت توده کلیه به بدن) کاهش می یابد، در حالی که در موردپرکاری تیروئیدکه در آن غده به شدت کار می کند، توده کلیوی افزایش می یابد [4]. با این حال، پرکاری تیروئید شدید منجر به تخریب پروتئین و در نهایت آتروفی کلیه می شود. پرکاری تیروئید باعث افزایش جریان خون کلیوی (RBF) و میزان فیلتراسیون گلومرولی (GFR) می شود [5]. با پرکاری تیروئید، بازجذب سدیم در لوله پروگزیمال، Na plus /K به اضافه ATPase [6] قاعده‌ای جانبی، Na plus /H پلاس اصلاح‌کننده [7] و Na plus/Pi فعال‌سازی هم‌ترانسپورتر [8] افزایش می‌یابد. همچنین، هورمون تیروئید اصلاح کننده Na + /Ca2 plus را احتمالاً از طریق مسیر مرتبط با cAMP فعال می کند و در نتیجه جذب کلسیم را در بدن افزایش می دهد.کلیه ها[9].

کلسیم پیام رسان دومی است که اکثر عملکردهای سلولی را تنظیم می کند، از جمله بیان ژن و هموستاز سلولی [10]، آزادسازی انتقال دهنده های عصبی و عملکرد عصبی [11]، متابولیسم و ​​تعدیل زندگی سلولی [12]. خانواده کانال های گیرنده پتانسیل گذرا (TRP) یکی از بزرگترین خانواده های کانال های کاتیونی است. خانواده TRP به زیرگروه های TRPC (متعارف)، TRPM (ملاستاتین)، TRPP (پلی سیستین)، TRPV (وانیلوئید)، TRPML (بوکولیک)، TRPA (آنکیرین) و TRPN (شبه NOMPC) تقسیم می شوند. مشخص است که پروتئین‌های TRPC کانال‌های کاتیونی غیرانتخابی و نفوذپذیر Ca2 را تشکیل می‌دهند و بنابراین نقش مهمی در انتقال سیگنال Ca2 به علاوه دارند. خانواده TRPC پستانداران دارای هفت عضو به نام TRPC{6}}TRPC7 [13] است. اعضای خانواده TRPC در قسمت های مختلف بیان می شوندکلیه. TRPC1 که به‌ویژه در نفروپاتی دیابتی نقش دارد، تقریباً در همه جا، در سلول‌های مزانژیال کلیه، گلومرول‌ها، سلول‌های لوله پروگزیمال و در قسمت نازک نزولی حلقه Henle بیان می‌شود، اما عملکرد دقیق آن هنوز ناشناخته است [14].

اختلالات شدید Ca2 + ممکن است باعث آسیب سلولی ناشی از استرس شبکه آندوپلاسمی (ER) در پاسخ به شرایط پاتولوژیک مختلف شود [5،15]. اختلالات Ca2 به علاوه هموستاز در ER با بسیاری از بیماری ها مرتبط است [16]. ER یک اندامک درون سلولی است که برای تنظیم Ca2 به علاوه هموستاز و سنتز پروتئین و تاخوردگی مهم است. تعدیل بیان/عملکرد کانال‌های نفوذپذیر Ca2 به علاوه بر غلظت‌های Ca2 به علاوه داخل سلولی و در نتیجه Ca2 به علاوه فرآیندهای مرتبط مانند تکثیر سلولی، استرس ER، آپوپتوز و اتوفاژی تأثیر می‌گذارد. استرس ER وضعیتی است که تعادل اکسیداسیون و کاهش و هموستاز مجرای Ca2 را مختل می کند و باعث تجمع پروتئین های تا شده یا تا شده اشتباه می شود. فعال شدن پاسخ پروتئین بازشده (UPR) باعث افزایش پروتئین تنظیم‌شده با گلوکز 78 (GRP78)، چاپرون ER می‌شود که ظرفیت تا شدن پروتئین ER را افزایش می‌دهد [17]. فعال‌سازی استرس ER UPR حفظ‌شده تکاملی را توسط سه مبدل سیگنال اصلی غشای ER آغاز می‌کند: PERK، IRE1، و ATF6. اختلال عملکرد سلولی و مرگ سلولی در شرایطی رخ می دهد که استرس ER به طور مزمن طولانی شده و بار پروتئین در ER به طور قابل توجهی بیشتر از آن است. مشخص شده است که یکی از مسیرهای ایجاد مرگ سلولی که در بیماری های مزمن مانند هیپوکسی، آسیب ایسکمی/خونرسانی مجدد، تخریب عصبی، بیماری قلبی و دیابت مشاهده می شود، ناشی از استرس ER است [12].

با توجه به تمام این اطلاعات، هدف ما بررسی رابطه بین مسیرهای انتقال سیگنال TRPC1 و استرس ER درکلیه ها، که به طور کلی تحت تأثیر قرار می گیرندپرکاری تیروئید.

کلیک کنید تاسیستانچ برای علائم بیماری کلیوی استفاده می شود

2. مواد و روش ها

2.1. حیوانات

مطالعه ما توسط کمیته اخلاق حیوانات محلی دانشگاه اسکی شهیر عثمانگازی (تصمیم شماره 634 در جلسه شماره 117 در 2017/11/30) تأیید شد و از راهنمای مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی که توسط مؤسسه ملی بهداشت منتشر شد پیروی کرد. بیست موش صحرایی نر بالغ (7 تا 8 هفته) ویستار که از مرکز تحقیقات تجربی پزشکی و جراحی (TICAM) به دست آمده بودند، در دمای 2±24 درجه و رطوبت 5±55 درصد به مدت 12 ساعت در یک محیط روشن/تاریک نگهداری شدند. آزمایش. حیوانات به مدت 2 هفته قبل از آزمایش در قفس های پلی کربنات قرار گرفتند و اجازه داده شد تا با شرایط محیطی سازگار شوند و سپس به طور تصادفی به گروه های کنترل و پرکاری تیروئید تقسیم شدند. گروه کنترل (یوتیروئید) در طول آزمایش با غذای استاندارد موش و آب لوله کشی تغذیه شدند. گروه پرکاری تیروئید با تغذیه استاندارد موش به مدت 4 هفته و نوشیدن آب لوله کشی حاوی 12 میلی گرم در لیتر تیروکسین ایجاد شد [18]. در پایان هفته چهارم، موش‌ها با تزریق عضلانی کتامین (mg/kg 45) و زایلازین (mg/kg 5) کشته شدند. بلافاصله از تمام حیوانات نمونه خون داخل قلب گرفته شد. کلکلیه هابا فرآیند نفرکتومی برداشته شدند. سپس، سمت راست و چپکلیه هاموش ها به صورت طولی به دو قسمت تقسیم شدند. هر دو قطعه کلیه راست و چپ برای تجزیه و تحلیل وسترن بلات و میکروسکوپ نوری استفاده شد

2.2. تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی

نمونه های خون با سرعت 11، 000 دور در دقیقه به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شدند. سرم ها در لوله ها قرار گرفتند و تا روز آنالیز در درجه {3}} نگهداری شدند. سپس سطوح T3 بدون سرم (fT3)، T4 آزاد (fT4) و هورمون محرک تیروئید (TSH) با استفاده از روش الایزا مطابق پروتکل سازنده اندازه گیری شد. سطوح بیان چگالی نوری (OD) در 450 نانومتر توسط میکروپلیت خوان BioTek 800 (BioTek Instruments, Inc., Winooski, VT, USA) خوانده شد، سپس نتایج محاسبه شد. کیت های تجاری fT3 (YLA0127RA)، fT4 (YLA0239RA) و TSH (YLA0047RA) از شانگهای YL Biotech، چین خریداری شده است. همچنین سطوح سرمی نیتروژن اوره خون (BUN) و کراتینین با روش فتومتری جذب توسط Cobas Integra 400 Plus Roche (Roche Diagnostics Ltd., Switzerland) اندازه گیری شد.

2.3. ارزیابی بافت شناسی

کلیهقطعاتی که برای بررسی در سطح میکروسکوپ نوری گرفته شدند در 1{18}} درصد فرمالدئید به مدت 48 ساعت ثابت شدند. پس از پردازش معمول بافت، بلوک های پارافینی به دست آمد. سپس مقاطع سریال 5 میکرومتری تهیه و با تکنیک اسید پریودیک شیف (PAS) رنگ‌آمیزی شدند. ارزیابی میکروسکوپی برای گلومرول ها و توبول ها در زیر میکروسکوپ Olympus BX{3}} (Olympus America, Inc., New York, USA) انجام شد. بخش ها به صورت کور و نیمه کمی با استفاده از یک مقیاس امتیازدهی تعیین شده نمره گذاری شدند. برای هر موش در گروه ها، حداقل 10 میدان پرتوان (1000×) مورد بررسی قرار گرفت. درصد گلومرول‌هایی که ضخیم شدن غشای پایه گلومرولی را نشان می‌دهند به صورت زیر نمره‌گذاری شد: 0=هیچ، 1 کمتر یا مساوی 25 درصد، 2=25 درصد تا 50 درصد، 3 =50 درصد تا 75 درصد ، 4 بزرگتر یا مساوی 75 درصد [19]. ضخامت غشای پایه گلومرولی (μm) توسط نرم افزار میکروسکوپ ZEISS ZEN 3.0 (Carl Zeiss Microscopy GmbH ZEISS Group, München, Germany) اندازه گیری شد.

2.4. ارزیابی ایمونوهیستوشیمی

بخش های بلوک پارافین از هر کدامکلیهبافت بر روی اسلایدهای بار مثبت گرفته شد. پس از پارافین‌زدایی، لام‌ها از طریق سری اتانول تجزیه شده و سپس زایلول منتقل شدند. بخش ها با پراکسید هیدروژن 3 درصد انکوبه شدند تا از فعالیت پراکسیداز درون زا جلوگیری شود. پس از بازیابی آنتی ژن با بافر سیترات، مقاطع با قلم پاپ جدا شدند، 3 × 5 دقیقه با سالین بافر فسفات (PBS) شسته شدند و سپس با Ultra V-block به مدت 1 ساعت در دمای اتاق مسدود شدند. بخش ها با آنتی بادی پلی کلونال ATF6 خرگوش (ab203119، Abcam Inc.، کمبریج، ایالات متحده)، آنتی بادی پلی کلونال IRE1 خرگوش (YID5384، Shanghai YL Biotech Co., Ltd، چین)، آنتی بادی مونوکلونال PERK موش (sc37740)، انکوبه شدند. .، هایدلبرگ، آلمان) و آنتی بادی مونوکلونال TRPC1 موش (sc133076، Santa Cruz Biotechnology Inc.) یک شبه در دمای مثبت 4 درجه در شرایط مرطوب. پس از شستشوی 3×5 دقیقه با PBS، مقاطع با آنتی بادی های ثانویه مناسب (sc2359, sc2781, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) به مدت 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه شدند. سپس مجدداً به مدت 3×5 دقیقه با PBS شسته شده و با هماتوکسیلین ضد رنگ آمیزی شدند. اسلایدها با استفاده از محیط های مبتنی بر آب، لغزش پوشش داده شدند. معاینه میکروسکوپی با استفاده از میکروسکوپ Olympus BX51 و سیستم تصویربرداری به کمک کامپیوتر (Olympus America, Inc., New York, USA) انجام شد.

تمام مقاطع رنگ‌آمیزی شده به روشی کدگذاری شده توسط نویسنده اصلی، که نام گروه آزمایش‌ها را کور کرده بود، ارزیابی شد. عبارات TRPC1، ATF6، IRE1، و PERK عمدتاً در لوله‌ها و/یا گلومرول‌ها شناسایی شدند. عبارات با توجه به درصد مثبت به صورت نیمه کمی تعیین شدندکلیهبخش ها شدت رنگ‌آمیزی به چهار درجه هیچ ({0}})، ضعیف (1)، متوسط ​​(2) و قوی (3) طبقه‌بندی شد. درصد برش های بافتی کلیه مثبت به 4 درجه طبقه بندی شد: 0 (0 درصد)، 1 (1 درصد -10 درصد)، 2 (11 درصد -49 درصد) و 3 (50 درصد -100 درصد). نمره کل حاصل ضرب دو نمره و نمره نهایی یک نمونه میانگین 10 میدان میکروسکوپی بود. TRPC1، ATF6، IE1 و PERK بر اساس روش گزارش شده ارزیابی شدند [20].

عملکرد سیستانچ-کلیه

2.5. تجزیه و تحلیل وسترن بلات

برای تعیین تغییرات در مقدار پروتئین خاص درکلیهبافت هایپرکاری تیروئیدو گروه کنترل، کلیه ها به قطعات کوچک بریده شدند و با افزودن بافر لیز RIPA به لوله های مهره دار 2 میلی لیتری همگن سازی انجام شد. پس از همگن سازی، لوله ها در دمای 4 درجه به مدت حداقل 3{8}} دقیقه انکوبه شدند و سپس لیزهای بافتی به مدت 20 دقیقه در دمای 4 درجه و 15 و {5}} گرم سانتریفیوژ شدند. مایع رویی حاوی پروتئین کل به یک لوله جدید منتقل شد. تعیین پروتئین از مایع رویی با دستگاه Qubit 2.0 (Invitrogen Inc., Waltham, MA, USA) انجام شد. 50 میکروگرم پروتئین در هر چاه بارگذاری شد، با SDS-PAGE Bio-Rad MiniTrans Blot (Bio-Rad Laboratories, Inc., California, USA) الکتروفورز شد و سپس با دستگاه Bio-Rad Trans Turbo به غشای PVDF منتقل شد. غشاها با 5 درصد آلبومین سرم گاوی (BSA) به مدت 1 ساعت در دمای اتاق مسدود شدند و سپس با آنتی بادی مونوکلونال GRP78 موش (sc166490، Santa Cruz Biotechnology Inc.)، آنتی بادی پلی کلونال ATF6 خرگوش (ab203119، Abcam Inc.، Cam) انکوبه شدند. بریج، ایالات متحده)، آنتی بادی پلی کلونال IRE1 خرگوش (YID5384، Shanghai YL Biotech Co. Ltd., China)، آنتی بادی مونوکلونال PERK موش (sc377400، Santa Cruz Biotechnology Inc.)، آنتی بادی مونوکلونال TRPC1 موش (sc133076 Biotech Biotech, C. ) و آنتی بادی مونوکلونال اکتین موش (sc47778, Santa Cruz Biotechnology, Inc.) (برای کنترل بارگذاری) یک شبه در دمای 4 درجه. پس از آن، غشاها به مدت 3 × 10 دقیقه با محلول شستشو (TBST) شسته شدند و سپس با آنتی بادی های ثانویه مناسب (sc2005، sc2030، Santa Cruz Biotechnology Inc.) انکوباسیون شدند. پس از شستشوی غشاها به مدت 3 × 10 دقیقه با TBST، سطح بیان پروتئین ها در باندهای واکنش ایمنی توسط سیستم تصویربرداری (C-Digit، Licor، Cambridge، UK) بررسی شد. نتایج تصویر با برنامه Image J 1.49v تجزیه و تحلیل شد.

2.6. تحلیل آماری

تمام تجزیه و تحلیل های آماری با برنامه بسته آماری IBM SPSS 21.{1}} (IBM Corp., Armonk, NY, USA) انجام شد. آزمایش وسترن بلات سه بار برای هر گروه تکرار شد. سطح معنی داری به صورت p < 0.05="" پذیرفته="" شد.="" برای="" تعیین="" توزیع="" نرمال="" داده="" ها="" از="" آزمون="" shapiro-wilk="" استفاده="" شد.="" از="" آزمون="" همگنی="" واریانس="" (آزمون="" لون)="" برای="" ارزیابی="" اینکه="" آیا="" گروه="" ها="" دارای="" واریانس="" مساوی="" هستند="" یا="" خیر="" استفاده="" شد.="" برای="" توزیع="" نرمال="" داده="" ها="" از="" آزمون="" t="" مستقل="" نمونه="" ها="" استفاده="" شد.="" آزمون="" mann-whitney="" u="" برای="" داده="" هایی="" که="" توزیع="" غیر="" نرمال="" را="" نشان="" می="" دهد="" انجام="">

3. نتایج

3.1. نتایج بیوشیمیایی

سطوح سرمی fT3، fT4 و TSH، سطوح سرمی BUN و کراتینین گروه‌های موش در شکل 1 نشان داده شده است. }}.05). علاوه بر این، کاهش معنی‌داری در سطح TSH در گروه پرکاری تیروئید در مقایسه با گروه کنترل مشاهده شد (05/0p < 0)="" (شکل="" 1a).="" سطوح="" سرمی="" bun="" (شکل="" 1b)="" و="" کراتینین="" (شکل="" 1c)="" در="" گروه="" پرکاری="" تیروئید="" نسبت="" به="" گروه="" کنترل="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" کاهش="" یافت="" (هر="" دو="" p=""><>

3.2. نتایج هیستوشیمیایی

تغییرات بافتیکلیه هااز گروه های موش در شکل 2 نشان داده شده است. بافت شناسی کلیه (گلومرول ها، لوله ها و ساختارهای عروقی) در گروه کنترل معمول بود (شکل 2A). با این حال،پرکاری تیروئیدباعث ضخیم شدن غشای پایه مویرگی در گلومرول شد (شکل 2B). ضخامت غشای پایه گلومرولی در گروه پرکاری تیروئید نسبت به گروه کنترل به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 3-4)، (05/0p < 0).="" هیچ="" تفاوت="" آشکاری="" بین="" گروه="" کنترل="" و="" پرکاری="" تیروئید="" از="" نظر="" بافت="" شناسی="" لوله="" ای="" وجود="">

شکل 1. سطوح تری یدوتیرونین آزاد (fT3)، تیروکسین آزاد (fT4) و هورمون محرک تیروئید (TSH) در گروه موش (a). * متفاوت از گروه کنترل (p < 0.05).="" سطوح="" سرمی="" bun="" (b)="" و="" کراتینین="" (c)="" گروه="" های="" موش="" صحرایی.="" *متفاوت="" از="" گروه="" کنترل=""><)، آزمون="" t="" نمونه="" های="" مستقل="" انجام="">

شکل 2. میکروگراف هایکلیهبافت های گروه کنترل (A) و پرکاری تیروئید (B). در گروه کنترل، بافت شناسی کلیوی معمولی دیده می شود (A). در گروه پرکاری تیروئید،پرکاری تیروئیدباعث ضخیم شدن غشای پایه مویرگی در گلومرول شد. ضخیم شدن غشای پایه مویرگی در گلومرول (پیکان) مشاهده شد (B). هیچ تفاوت آشکاری در بصل النخاع کلیه در هر دو گروه موش وجود ندارد. (رنگ آمیزی اسید پریودیک شیف (PAS)). میله ها 20 میکرومتر و 50 میکرومتر هستند.

3.3. نتایج ایمونوهیستوشیمی

واکنش های ایمونوهیستوشیمی TRPC1، GRP78، ATF6، IRE1، PERK و بیان آنها به صورت نیمه کمی با توجه به درصد مثبت تعیین می شود.کلیه هااز گروه های موش (شکل 5-9). همچنین میانگین تغییرات آنها در جدول نشان داده شده است. در مقایسه با گروه کنترل، بیان پروتئین های TRPC1، GRP78، ATF6، IRE1 و PERK به طور قابل توجهی در گروه پرکاری تیروئید در گلومرول ها و لوله ها افزایش یافت (شکل 5-9) (p < 0،000).="" نتایج="" نشان="" داد="" که="" trpc1="" در="" هر="" دو="" ساختار="" گلومرولی="" و="" لوله‌ای="" در="" گروه="" کنترل="" (شکل="" ab)="" و="" بیان="" آن="" در="" گروه="" پرکاری="" تیروئید="" افزایش="" یافته="" است="" (شکل="" {13}}ab).="" grp78="" در="" گروه="" کنترل="" بیان="" نشد="" (شکل="" {16}}="" ab)="" و="" واکنش="" مثبت="" آن="" در="" هر="" دو="" توبول="" و="" گلومرول="" در="" گروه="" پرکاری="" تیروئید="" مشاهده="" شد="" (شکل="" 6-2="" ab).="" در="" حالی="" که،="" atf6="" در="" گروه="" کنترل="" بیان="" نشد="" (شکل="" {21}}="" ab)،="" عبارات="" آن="" در="" هر="" دو="" لوله="" و="" گلومرول="" در="" گروه="" پرکاری="" تیروئید="" واکنش="" مثبت="" نشان="" داد="" (شکل="" 7-2}="" ab).="" ire1="" در="" گروه="" کنترل="" بیان="" نشد="" (شکل="" {26}}="" ab)="" و="" واکنش="" مثبت="" آن="" در="" هر="" دو="" توبول="" و="" گلومرول="" در="" گروه="" پرکاری="" تیروئید="" مشاهده="" شد="" (شکل="" 8-2}="" ab).="" در="" حالی="" که="" perk="" در="" گروه="" کنترل="" بیان="" نشد="" (شکل="" {30}}ab)،="" بیان="" perk="" در="" گروه="" پرکاری="" تیروئید="" محدود="" به="" توبول‌ها="" بود="" (شکل="">

شکل 3. مقایسه ضخامت غشای پایه گلومرولی بین گروه کنترل و پرکاری تیروئید. *متفاوت از گروه کنترل (05/0p < 0)،="" آزمون="" t-test="" نمونه‌های="" مستقل="" انجام="">

شکل 4. مقایسه امتیازدهی ضخامت غشای پایه گلومرولی بین گروه کنترل و پرکاری تیروئید. *متفاوت از گروه کنترل (p < 0.05)،="" آزمون="" u="" mann-whitney="" انجام="">

3.4. نتایج وسترن بلات

نتایج وسترن بلات (شکل 1{4}}) افزایش معنی‌داری را در عبارات TRPC1، PERK، ATF6 و GRP78 در گروه پرکاری تیروئید در مقایسه با گروه کنترل نشان داد (05/0p < 0).="" افزایش="" ire1="" از="" نظر="" آماری="" معنی‌دار="" بود،="" اگرچه="" نه="" به="" اندازه="" سایر="" سطوح="" پروتئین=""><>پرکاری تیروئیدباعث افزایش بیان GRP78 (2.16 برابر)، ATF6 (2.82 برابر)، PERK (1.95 برابر)، IRE1 (1.60 برابر)، و TRPC1 (1.53 برابر) در مقایسه با گروه کنترل شد.

4. بحث

در این مطالعه برای اولین بار نحوه تأثیر بافت کلیه را پیشنهاد کردیمپرکاری تیروئیداز نظر نقش استرس ER و کانال TRPC1 در این فرآیند. در مطالعه ما، افزایش بیان TRPC1 باعث افزایش غلظت Ca2 به علاوه در سلول، به ویژه، ضخیم شدن غشای پایه مویرگی و افزایش بیان GRP78 در لوله ها، به ویژه در گلومرول ها شد. ما فکر می‌کنیم که استرس ER نقش فعالی در این فرآیند آسیب سلولی دارد، به‌ویژه از طریق مبدل سیگنال ATF6 و PERK در مسیر UPR (پاسخ پروتئین بازشده).

همانطور که در بسیاری از مطالعات مانند مطالعه ما [18] مشاهده می شود، مقادیر fT3 و fT4 در مورد پرکاری تیروئید افزایش می یابد، در حالی که سطح TSH کاهش می یابد. هر گونه اختلال در عملکرد تیروئید می تواند بر تولید fT3 و fT4 تأثیر بگذارد که می تواند با آسیب شناسی های مختلف در سراسر بدن مرتبط باشد [21]. راکلیه هانقش حیاتی در دفع مواد زائد و سمومی مانند اوره، کراتینین و اسید اوریک دارند. ارزیابی عملکرد کلیه در مدیریت بیماران مبتلا به بیماری کلیوی یا آسیب شناسی موثر بر عملکرد کلیه مهم است. تست های عملکرد کلیوی در شناسایی وجود بیماری کلیوی، نظارت بر پاسخ کلیه ها به درمان و تعیین پیشرفت بیماری کلیوی مفید هستند. سطح کراتینین سرم در پرکاری تیروئید کاهش می یابد، نه تنها به دلیل افزایش GFR بلکه به دلیل افزایش تخریب عضلانی است. همچنین کاهش غلظت BUN درپرکاری تیروئیدتصور می شود که به دلیل کاهش بیان آکواپورین 1 و 2 باشد. بنابراین، سطوح BUN و کراتینین در بسیاری از مطالعات [22] مانند مطالعه ما کاهش یافت. تحت شرایط پاتولوژیک، سلول‌ها ممکن است پروتئوستاز را از دست بدهند که منجر به تجمع پروتئین‌های باز شده و تا نشده در ER می‌شود که باعث استرس UPR یا ER می‌شود [23].

شکل 5. رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی برای TRPC1 در گروه کنترل (1A-B) و پرکاری تیروئید (2A-B) درکلیهبافت. بیان TRPC در گروه پرکاری تیروئید نسبت به گروه کنترل افزایش یافت (فلش). میله‌ها 50 میکرومتر هستند. *متفاوت از گروه کنترل (p <0.{2}})، آزمون="" من="" ویتنی="" u="" انجام="">

شکل 6. رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمی برای GRP78 در گروه کنترل (1A-B) و پرکاری تیروئید (2A-B) درکلیهبافت. بیان GRP78 در گروه پرکاری تیروئید افزایش یافته است (فلش). میله‌ها 50 میکرومتر هستند. *متفاوت از گروه کنترل (p<0.{3}})، آزمون="" من="" ویتنی="" u="" انجام="">

شکل 7. رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمیایی برای ATF6 در گروه کنترل (1A-B) و پرکاری تیروئید (2A-B) درکلیهبافت. بیان ATF6 در گروه پرکاری تیروئید افزایش می یابد (فلش). میله‌ها 50 میکرومتر هستند. *متفاوت از گروه کنترل (p<0.{3}})، آزمون="" mann-whit="" ney="" u="" انجام="">

شکل 8. رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمیایی برای IRE1 در گروه کنترل (1A-B) و پرکاری تیروئید (2A-B) درکلیهبافت. بیان IRE1 در گروه پرکاری تیروئید افزایش می یابد (فلش). میله‌ها 50 میکرومتر هستند. *متفاوت از گروه کنترل (p<0.{3}})، آزمون="" من="" ویتنی="" u="" انجام="">

شکل 9. رنگ آمیزی ایمونوهیستوشیمیایی برای PERK در گروه کنترل (1A-B) و پرکاری تیروئید (2A-B) درکلیهبافت. بیان PERK در گروه پرکاری تیروئید (فلش) افزایش می یابد. میله‌ها 50 میکرومتر هستند. *متفاوت از گروه کنترل (p <0.{2}})، آزمون="" من="" ویتنی="" u="" انجام="">

اختلالات در ER و سیتوزولی Ca2 به علاوه هموستاز با بسیاری از بیماری ها، از جملهکلیه. اختلال در ER Ca2 به علاوه هموستاز UPR را تحریک می کند که از تجمع بیشتر پروتئین های تازه سنتز شده در ER جلوگیری می کند. بنابراین، با کاهش بار ER یک مکانیسم دفاعی برای بقا را نشان می دهد [24].

عوامل مختلفی برای القای استرس و محرک ER شناخته شده استکلیهخسارت. استرس ER در کلیه ممکن است باعث تمایز سلول های اپیتلیال لوله ای با انتقال مزانشیمی از اپیتلیوم، از بین رفتن سلول های اپیتلیال لوله کلیوی در اثر آپوپتوز و در نهایت آسیب شناسی کلیوی از جمله از دست دادن نفرون شود که ظرفیت فیلتراسیون کلیه را کاهش می دهد. در مطالعه Dickhout و همکاران، فرآیند انتقال اپیتلیال- مزانشیمی ناشی از استرس ER در رده سلولی لوله پروگزیمال کلیه HK-2 برای بیماری مزمن کلیوی نشان داده شد [25]. علاوه بر بسیاری از مطالعات [9] همانطور که در مطالعه ما مشاهده شد،پرکاری تیروئیدباعث ضخیم شدن غشای پایه مویرگی در گلومرول شد. پیشنهاد شد که افزایش ضخیم شدن غشای پایه مویرگی در گلومرول ها در نتیجه فرآیند انتقال اپیتلیال-مزانشیمی به دلیل افزایش بیان GRP78 و مبدل های سیگنال استرس ER شکل گرفته است. اهمیت استرس ER در مزمن نشان داده شده استکلیهبیماری در بسیاری از شرایط پاتولوژیک. در مدل دیابت ناشی از استرپتوزوتوسین در موش‌های C57BL/6، استرس ER ایجاد شد و نفروپاتی شدید در ماه بیست و دوم با تنظیم CHOP/GADD153، یکی از اجزای مسیر آپوپتوز با واسطه استرس ER همراه بود [26] ]. در بیماران مبتلا به سندرم نفروتیک، نفروپاتی IgA، گلومرولونفریت پرولیفراتیو مزانژیال اولیه، و نفروپاتی غشایی، از جمله بیماران با حداقل علامت، GRP78 و یک مولکول چاپرون شبکه آندوپلاسمی القایی (ER) افزایش یافته است. بیان CHOP/GADD153 نیز افزایش یافت و محلی سازی هسته ای در اپیتلیوم لوله پروگزیمال بیماران نفروتیک مشاهده شد. در سلول های کلیه انسان که در معرض سطوح بالای آلبومین سرم قرار داشتند، القای استرس ER مشاهده شد و نشان داد که از طریق مسیر CHOP/GADD153 باعث آپوپتوز می شود [25]. پاسخ استرس ER توبولو بینابینی در بیماری های گلومرولی با آپوپتوز سلولی لوله ای مرتبط با نفروز آمینو نوکلئوزیدی پورومایسین، اضافه بار پروتئین و پروتئینوری مرتبط با نفروپاتی دیابتی تجربی یا انسانی یافت شد [27]. لورز و همکاران گزارش داد که پاراستامول، یک عامل ضد درد و تب بر، باعث آسیب لوله های کلیوی و آپوپتوز ناشی از استرس ER می شود [28]. پاراستامول یک پاسخ استرس ER از جمله القای CHOP و برش کاسپاز را القا می کند{16}}. تجمع بیش از حد پروتئین های ترشحی استرس ER را القا می کند و باعث آسیب پودوسیت می شود [29]. حمله کمپلمان همچنین استرس ER را القا می کند و مسیر PERK را فعال می کند که منجر به آسیب سلول های اپیتلیال گلومرولی می شود. همه این یافته ها نشان می دهد که استرس ER یکی از دلایل اصلی آسیب کلیه است و پاسخ استرس ER یک مکانیسم دفاعی در برابرکلیهآسیب [30]. در مطالعه ما، ما فکر می کنیم که پرکاری تیروئید ناشی از 12 میلی گرم در لیتر تیروکسین باعث استرس ER در بافت کلیه و آسیب ناشی از آن می شود.پرکاری تیروئیددر بافت کلیه با تنظیم به خصوص ATF6 و PERK همراه است.

اولین کانال TRP پستانداران کلون شده، کانال یونی TRPC1، در سلول درون ER، غشای پلاسمایی، وزیکول های داخل سلولی و مژگانی اولیه یافت می شود. تقریباً در همه جا در بافت انسان و جوندگان بیان می شود. TRPC1 با گروه‌های پروتئینی مختلف، از جمله زیرواحدهای کانال یونی، گیرنده‌ها و پروتئین‌های سیتوزولی تعامل می‌کند تا اثر آن بر سیگنال‌های Ca2 پلاس را واسطه‌ای کند. این به عنوان یک کانال کاتیونی غیرانتخابی در مسیرهایی عمل می کند که هجوم Ca2 به علاوه در پاسخ به فعال شدن گیرنده سطح سلول را کنترل می کند. از طریق این عملکرد، تکثیر، بقا، تمایز، ترشح و مهاجرت سلولی و همچنین ویژگی‌هایی مانند مخروط‌های رشد عصبی و همجوشی میوبلاست عملکردهای اختصاصی سلول‌های کموتروپیک نیز در دسترس هستند [12].

مطالعات زیادی در مورد تغییر بیان TRPC1 در بسیاری از شرایط پاتولوژیک ایجاد کننده استرس ER وجود دارد. سوکوماران و همکاران نشان داد که بین استرس ER و بیان TRPC1 همبستگی وجود دارد که می تواند بقای سلولی را در غده بزاقی تغییر دهد. آنها بیان کردند که بیان TRPC1 تحت شرایط استرس ER کاهش می یابد و همچنین مرگ سلولی به دلیل استرس ER وابسته به بیان CHOP است. افزایش استرس ER و نفوذ در سلول های غدد بزاقی موش های TRPC{3}}/- ناک اوت مشاهده شد [16].

شکل 10کلیهسطوح بیان پروتئین GRP78، ATF6، TRPC1، IRE1 و PERK و نمودار تغییر برابری. افزایش تمامی پروتئین ها از نظر آماری معنی دار بود (05/0p < 0)،="" آزمون="" t-test="" نمونه="" های="" مستقل="" انجام="">

چه زمانیکلیه هااز مدل‌های موش‌های دیابتی مورد بررسی قرار گرفت، گزارش شد که بیان mRNA TRPC1 کاهش یافته است [31]. در بیماران مبتلا به نفروپاتی دیابتی یا موش های دیابتی زوکر در مقایسه با گروه شاهد، کاهش بیان TRPC1 نشان داد که TRPC1 بر ایجاد نفروپاتی دیابتی تأثیر می گذارد [32]. TRPC1 نقش حیاتی در حفظ ER Ca2 به همراه هموستاز دارد و کاهش عملکرد منجر به فعال شدن طولانی‌مدت مسیر UPR می‌شود و فعال‌سازی AKT را مختل می‌کند که سپس منجر به تخریب عصبی می‌شود. کاهش بیان TRPC1 در مدل بیماری پارکینسون موش ناشی از نوروتوکسین مشاهده شد. افزایش بیان TRPC1 با تنظیم مسیر AKT/mTOR، با وجود استرس ER و UPR ناشی از نوروتوکسین، بقای نورون ها را افزایش می دهد [33]. لی و همکاران گزارش داد که بیان TRPC1 بسته به زمان در هیپرتروفی کاردیومیوسیت ناشی از Namptin نیز افزایش یافته است. هنگامی که ژن TRPC1 خاموش شد، منجر به مهار هیپرتروفی قلبی ناشی از نیکوتین آمید فسفریبوزیل ترانسفراز شد. با این حال، با بیان بیش از حد TRPC1، فسفریبوزیل ترانسفراز نیکوتین آمید تصور می شد که هیپرتروفی قلب را توسط یک مسیر ناشی از استرس ER القاء می کند. از این منظر، خاموش کردن ژن TRPC1 ممکن است نقش محافظتی در پیشگیری از هیپرتروفی قلبی داشته باشد [34]. در مطالعه ما، استرس ER و TRPC1 نیز به طور قابل توجهی افزایش یافت. این نشان می دهد که ضخیم شدن غشای پایه مویرگی ناشی از افزایش استرس ER در بافت کلیه به دلیلپرکاری تیروئیدبه دلیل افزایش بیان TRPC1 است.

این مطالعه محدودیت هایی دارد. موش های اصلاح شده ژنتیکی ممکن است به جای مدل موش پرکاری تیروئید ناشی از تیروکسین استفاده شده باشد. با ادرار جمع آوری شده با استفاده از قفس های متابولیک، برخیکلیهتست های عملکردی ممکن است در ادرار نیز اندازه گیری شده باشد. تغییر در سطح استرس ER را می توان با استفاده از بازدارنده TRPC1 بررسی کرد.

در نتیجه بررسی ادبیات ما، تأثیر پرکاری تیروئید بر رابطه بین استرس ER و کانال TRPC1 در بافت کلیه برای اولین بار در این مطالعه نشان داده شد. مشخص شد کهپرکاری تیروئیدباعث افزایش بیان TRPC1 می شود که استرس ER را القا می کند. ما پیشنهاد می کنیم که کاهش بیان TRPC1 ممکن است یک استراتژی درمانی بالقوه برای ناشی از پرکاری تیروئید باشد.کلیهو شاید آسیب اندام های دیگر.

منابع

1. Kim D، Kim W، Joo SK، Bae JM، Kim JH و همکاران. کم کاری تیروئید تحت بالینی و عملکرد کم تیروئید با استئاتوهپاتیت غیرالکلی و فیبروز همراه است. بالینی گوارش و کبد 2018; 16 (1): 123-131. DOI: 10.1016/j.cgh.2017.08.014

2. Bolkiny Y، Toulson E، El-Atrsh A، Akela M، Farg E. عصاره ریشه Costus اختلالات بیوشیمیایی خون هیپو و ناشی از تجربی را کاهش می دهد.پرکاری تیروئیددر موش ها تحقیق و بررسی سالانه در زیست شناسی 2019؛ 31 (5): 1-10. DOI: 10.9734/arb/2019/v31i530063

3. سکر س، عبدالغفار فری، ابوالیزید س.م. سلنیوم سمیت کبدی و استرس اکسیداتیو ناشی از کاربیمازول را در موش های صحرایی آلبینو بهبود می بخشد. مجله پزشکی زندگی ساحلی 2015; 3 (2): 930-936. DOI: 10.1016/j.jtemb.2010.07.002

4. وارگاس اف، مورنو جی ام، رودریگز-گومز آی، وانگنستین آر، اوسونا آ، و همکاران. عملکرد عروقی و کلیوی در اختلالات تجربی تیروئید مجله اروپایی غدد درون ریز 2006; 154 (2): 197-212. DOI: 10.1530/tee.1.02093

5. ری سی ام. تعامل بین تیروئید وکلیهبیماری: مروری بر شواهد دیدگاه فعلی در غدد درون ریز 2016; 23 (5): 407-415. DOI: 10.1097/Med.0000000000000275

6. Wijkhuisen A، Djouadi F، Vilar J، Merlet-Benichou C، Bastin J. هورمون های تیروئید توسعه آنزیم های متابولیسم انرژی را در لوله پیچیده پروگزیمال موش تنظیم می کنند. مجله آمریکایی فیزیولوژی-فیزیولوژی کلیه 1995; 268 (4): 634-642. DOI: 10.1152/ajprenal.1995.268.4.F634

7. Baum M، Dwarakanath V، Alpern RJ، Moe OW. اثرات هورمون تیروئید بر سدیم به علاوه / H پلاس ضد پورتر قشر کلیه نوزادان. Kidney International 1998; 53 (5): 1254-1258. DOI: 10.1046/j.1523-1755.1998.00879.x

8. Alcalde AI، Sarasa M، Raldúa D، Aramayona J، Morales R et al. نقش هورمون تیروئید در تنظیم انتقال فسفات کلیه در موش های صحرایی جوان و مسن غدد درون ریز 1378; 140 (4): 1544-1551. DOI: 10.1210/endo.140.4.6658

9. Iglesias P، Bajo MA، Selgas R، Díez JJ. اختلال عملکرد تیروئید و بیماری کلیوی: یک به روز رسانی مروری بر اختلالات غدد درون ریز و متابولیک 2017; 18 (1): 131-144. DOI:

10.1007/s11154-016-9395-710. سلواراج اس، وات جی، سینگ بی بی. TRPC1 انحطاط سلولی آپوپتوز ناشی از نوروتوکسین دوپامینرژیک MPTP/MPP پلاس را مهار می کند. سلول کلسیم 2009; 46 (3): 209-218. DOI: 10.1016/j.ceca.2009.07.008

11. Goda Y، Südhof TC. تنظیم کلسیم انتشار ناقل عصبی: به طور قابل اعتماد غیر قابل اعتماد؟ دیدگاه فعلی در زیست شناسی سلولی 1997; 9 (4): 513-518. DOI: 10.1016/s0955-0674(97)80027-0

12. Sukumaran P، Schaar A، Sun Y، Singh BB. نقش عملکردی کانال های TRP در تعدیل استرس ER و اتوفاژی سلول کلسیم 2016; 60 (2): 123-132. DOI: 10.1016/j.ceca.2016.02.012

13. Goel M، Sinkins WG، Zuo CD، Estacion M، Schilling WP. شناسایی و محلی سازی کانال های TRPC در موش صحراییکلیه. مجله آمریکایی فیزیولوژی-فیزیولوژی کلیه 2006; 290 (5): 1241-1252. DOI: 10.1152/ajprenal.00376.2005

14. چوبانوف وی، کوبانک اس، فیدلر اس، میترمایر ال، گودرمن تی و همکاران. عملکرد کلیوی کانال های TRP در سلامت و بیماری در: Emir TLR (ویرایشگر). نوروبیولوژی کانال های TRP. ویرایش 1 بوکا راتون، فلوریدا، ایالات متحده: CRC Press/Taylor & Francis; 2017. ص. 187-212.

15. Jeschke MG، Gauglitz GG، Song J، Kulp GA، Finnerty CC و همکاران. کلسیم و استرس ER واسطه آپوپتوز کبدی پس از آسیب سوختگی هستند. مجله پزشکی سلولی و مولکولی 2009; 13 (8b): 1857-1865. DOI: 10.1111/j.1582-4934.2009.00644.x

16. Sukumaran P، Sun Y، Zangbede FQ، Nascimento da Conceicao V، Mishra B و همکاران. بیان و عملکرد TRPC1 استرس ER و مرگ سلولی را در سلول های غدد بزاقی مهار می کند. FASEB BioAdvanc es 2019؛ 1 (1): 40-50. DOI: 10.1096/fab.1021

17. Zhao Y، Yan Y، Zhao Z، Li S، Yin J. تغییرات دینامیکی نشانگرهای مسیر استرس شبکه آندوپلاسمی GRP78 و CHOP در هیپوکامپ موش‌های دیابتی. بولتن تحقیقات مغز 2015; 111: 27-35. DOI: 10.1016/j.brainresbull.2014.12.00618. Araujo A، Schenkel P، Enzveiler A، Fernandes T، Partita W و همکاران. نقش سیگنالینگ ردوکس در هیپرتروفی قلبی ناشی از تجربیپرکاری تیروئید. مجله غدد درون ریز مولکولی 1387; 41 (6): 423-430. DOI: 10.1677/JME-08-002419. Wang Z، do Carmo JM، Aberdein N، Zhou X، Williams JM و همکاران. تعامل هم افزایی فشار خون و دیابت در ترویج آسیب کلیه و نقش استرس شبکه آندوپلاسمی فشار خون بالا 2017; 69 (5): 879-891. DOI: 10.1161/hyper tensionaha.116.08560

20. Zhang LY، Zhang YQ، Zeng YZ، Zhu JL، Chen H و همکاران. TRPC1 از تکثیر و مهاجرت سرطان پستان مثبت گیرنده استروژن جلوگیری می کند و با مهار مسیر PI3K/AKT پیش آگهی بهتری ارائه می دهد. تحقیق و درمان سرطان سینه 2020؛ 182 (1): 21-33. DOI: 10.1007/s{10}}

21. آلدوبایان م.ال. پروآنتوسیانیدین هسته انگور استرس اکسیداتیو و آپوپتوز درگیر در کبد موش هایپرتیروئید را کاهش می دهد. تحقیق و بررسی سالانه در زیست شناسی 2019: 1-11. DOI: 10.9734/arb/2019/v33i630138

22. Sonmez E, Bulur O, Ertugrul DT, Sahin K, Beyan E et al.پرکاری تیروئیدبر عملکرد کلیه تأثیر می گذارد. غدد درون ریز 2019; 65 (1): 144-148. DOI: 10.1007/s12020-019-01903-2

23. Yan M، Shu S، Guo C، Tang C، Dong Z. استرس شبکه آندوپلاسمی در ایسکمیک و نفروتوکسیک حادکلیهصدمه. Annals of Medicine 2018; 50 (5): 381-390. DOI: 10.1080/07853890.2018.1489142

24. Bezprozvanny I، Mattson MP. سوء استفاده از کلسیم عصبی و پاتوژنز بیماری آلزایمر روند در علوم اعصاب 2008; 31 (9): 454-463. DOI: 10.1016/j.tins.2008.06.005

25. Dickhout JG، Carlisle RE، Austin RC. رابطه متقابل بین هیپرتروفی قلبی، نارسایی قلبی و بیماری مزمن کلیوی: استرس شبکه آندوپلاسمی به عنوان واسطه پاتوژنز. تیراژ پژوهش 1390; 108 (5): 629-642. DOI: 10.1161/circresaha.110.226803

26. Wu J، Zhang R، Torreggiani M، Ting A، Xiong H و همکاران. القای دیابت در موش های مسن C57B6 منجر به نفروپاتی شدید می شود: ارتباط با استرس اکسیداتیو، استرس شبکه آندوپلاسمی و التهاب. مجله آمریکایی آسیب شناسی 2010; 176 (5): 2163-2176. DOI: 10.2353/ajpath.2010.090386

27. Cybulsky AV. استرس شبکه آندوپلاسمی در بیماری کلیه پروتئینوریکلیهبین المللی 2010; 77 (3): 187-193. DOI: 10.1038/ki.2009.389

28. Lorz C, Justo P, Sanz A, Subirá D, Egido J et al. آسیب لوله های کلیوی ناشی از پاراستامولین: نقشی در استرس ER مجله انجمن نفرولوژی آمریکا 2004; 15 (2): 380-389. DOI: 10.1097/01.asn.0000111289.91206.b0

29. Inagi R، Nangaku M، Onogi H، Ueyama H، Kitao Y و همکاران. دخالت استرس شبکه آندوپلاسمی (ER) در آسیب سلولی ناشی از تجمع بیش از حد پروتئین.کلیهبین المللی 2005; 68 (6): 2639-2650. DOI: 10.1111/j.1523-1755.2005.00736.x

30. استرس و بیماری یوشیدا H. ER. مجله FEBS 2007; 274 (3): 630-658. DOI: 10.1111/j.1742-4658.2007.05639.x

31. Nesin V, Tsiokas L. TRPC1. در: Nilius B, Flockerzi V (ویراستاران). کانال های کاتیونی پتانسیل گیرنده گذرای پستانداران (TRP). ویرایش 24 برلین، هایدلبرگ، آلمان: Springer; 2014. ص. 15-51.

32. He F، Peng F، Xia X، Zhao C، Luo Q و همکاران. MiR{1}a با تنظیم TRPC1 فیبروز کلیه را در نفروپاتی دیابتی ترویج می کند. دیابت 2014; 57 (8): 1726-1736. DOI: 10.1007/s{9}}

33. Selvaraj S, Sun Y, Watt JA, Wang S, Lei S et al. استرس ER ناشی از نوروتوکسین در نورون‌های دوپامینرژیک موش شامل کاهش TRPC1 و مهار سیگنال‌دهی AKT/mTOR است. مجله تحقیقات بالینی 2012; 122 (4): 1354-1367. DOI: 10.1172/JCI61332

34. Li J، Wu W، Zhao M، Liu X. دخالت TRPC1 در هیپرتروفی قلب ناشی از Nampt از طریق فعال شدن استرس ER. زیست شناسی سلولی و مولکولی 2017; 63 (4): 33-37. DOI: 10.14715/CMB/2017.63.4.6