کمبود فاکتور A رونویسی میتوکندری هدفمند اپیتلیال کلیه منجر به تخلیه پیشرونده میتوکندری همراه با بیماری شدید کیستیک می شود

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

کن ایشی، هاناکو کوبایاشی، کنسی تاگوچی و همکاران.

مقدمه

اختلال عملکرد میتوکندری (mt) یک ویژگی پاتولوژیک شناخته شده بیماری های شایع کلیوی است و می تواند باعث آسیب سلولی، التهاب و فیبروز شود. در کلیه، سلول های اپیتلیال لوله ای به شدت به آدنوزین تری فسفات (ATP) تولید شده از فسفوریلاسیون اکسیداتیو (OXPHOS) وابسته هستند، زیرا آنها چندین عملکرد انتقال اپیتلیال مصرف کننده انرژی را انجام می دهند. بنابراین، تولید کارآمد Mt ATP برای عملکرد طبیعی کلیه و هموستاز الکترولیت سیستمیک ضروری است. علاوه بر این، شواهد اخیر نشان می‌دهد که میتوکندری‌ها نقش عمده‌ای در تنظیم ژن، سیگنال‌دهی سلولی و تمایز سلولی از طریق تولید متابولیت‌های واسطه و گونه‌های فعال اکسیژن (ROS) دارند. بیماری های شایع کلیوی به خوبی شناخته نشده است.

برای بررسی عملکرد mt در هموستاز و پاتوژنز کلیه، مافاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A(TFAM). TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)یک عامل رمزگذاری شده هسته ای برای عملکرد mt، حفظ تعداد کپی mt و پایداری ساختاری mt DNA ضروری است زیرا همانند سازی و رونویسی ژنوم mt را با خم کردن DNA پروموتور تنظیم می کند. زیرواحدهای پروتئینی مجموعه زنجیره تنفسی، 22 RNA انتقال و 2 RNA ریبوزومی را رمزگذاری می کنند. بدین ترتیب،TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)مستقیماً در تنظیم انتقال الکترون mt و سنتز ATP از طریق رونویسی ژنهایی مانند سیتوکروم b (MT-CYB) کدگذاری شده توسط میتوکندری، سیتوکروم c اکسیداز زیرواحد 1 (MT-CO1) و زیرواحد سیتوکروم c اکسیداز کدگذاری شده توسط میتوکندری، و زیرواحد سیتوکروم c اکسیداز کد شده توسط میتوکندری نقش دارد. 6 (MT-ATP6).3بدونTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)سلول ها توانایی خود را برای تولید ATP از طریق OXPHOS از دست می دهند، نمی توانند مقادیر قابل توجهی از mt ROS تولید کنند و به تدریج از میتوکندری تهی می شوند. - مطالعات ژنتیکی نشان داده است کهTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)برای جنین زایی طبیعی ضروری است زیرا هموزیگوت جهانی استTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیرفعال سازی منجر به مرگ داخل رحمی تا روز 10.5 جنینی شد، در حالی که کمبود هتروزیگوت، اگرچه تعداد کپی mt را تا -40 درصد کاهش داد و منجر به کمبود زنجیره تنفسی شد، اما منجر به مرگ جنینی نشد. بنابراین، هدف گیری ژنتیکی ازTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A) یک استراتژی تجربی مفید برای بررسی نقش اختلال عملکرد پیشرونده mt در تمایز سلولی و هموستاز بافتی است. غیرفعال سازی مشروط نوع سلولی خاصTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)پیشنهاد کرد که تولید OXPHOS و/یا mt ROS برای تمایز سلولی، عملکرد و فیزیولوژی طبیعی حیاتی است.-1o.

اختلالات اولیه mt ناشی از جهش‌های ژنی هسته‌ای یا mt ممکن است با بیماری کلیوی تظاهر کنند که معمولاً به صورت آسیب لوله بینابینی یا اختلال عملکرد لوله‌ای جدا شده ظاهر می‌شود.(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)ایجاد بیماری کلیوی گزارش نشده است. اخیراً کاهش یافته استTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)بیان با بیماری مزمن کلیه مرتبط است. از دست دادن یکپارچگی mt به دلیلTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیرفعال سازی باعث بیماری توبولو بینابینی و نارسایی کلیوی در موش ها می شود که تا حدودی به دلیل فعال شدن پاسخ های التهابی وابسته به ژن های اینترفرون (STING) GMP-AMP سنتاز حلقوی (cGAS) ناشی از استرس DNA بود.

در اینجا ما گزارش می دهیم که موش های با شرطیTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A) غیرفعال شدن در سلول‌های پیش‌ساز نفرون 2(SIX2) مرتبط با سینوس oculis که بیانگر نفرون هستند، بیماری کیستیک شدیدی را ایجاد می‌کند و به عنوان موش‌های جوان در اثر نارسایی کلیوی زودرس می‌میرند.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-موش‌ها با نقص در بلوغ نفرون مشخص شدند که با کاهش mt، کاهش OXPHOS و تغییر متابولیک به سمت گلیکولیز در ارتباط بود.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7-اپیتلیوم کلیه. با توجه به شدت بیماری کیستیک درTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7-موش‌ها، 2 مدل موش بیماری کلیه پلی کیستیک (PKD) را که از جهش در پلی سیستین-1 (Pkd1) یا سیستین-1 (Cys1) و همچنین انسان ناشی می‌شود، تجزیه و تحلیل کردیم. بافت های بیماران مبتلا به بیماری کلیه پلی کیستیک اتوزومال غالب (ADPKD). ما آن را برقرار می کنیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)در کیست های هر دو بافت PKD موش و انسان تنظیم نمی شود. روی هم رفته، مطالعات ما نشان می دهد که TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)بی نظمی و کاهش متراکم از ویژگی های بارز بیماری های کیستیک کلیه هستند و ممکن است در پاتوژنز آنها نقش داشته باشند.

سیستانچ برای کلیه

نتایج

TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیر فعال شدن سلول های دودمان SIX2 باعث بیماری کیستیک شدید و در نتیجه نارسایی کلیه می شود

به منظور بررسی عملکرد MT در اپیتلیوم کلیه، ما غیر فعال کردیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)در شش2-سلولهای پیش ساز بیانگر، که همه بخشهای نفرون را ایجاد می کنند، به جز مجرای جمع کننده (CD).TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)آلل لخته شده با موش های تراریخته کروموزوم مصنوعی باکتریایی که یک پروتئین فیوژن پروتئین فلورسنت سبز/Cre recombinase (eGFP/Cre) را تحت کنترل رونویسی پروموتر Six2 بیان می کنند (شکل la). "موش های هموزیگوت برایTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)آلل لخته شده و هتروزیگوت برای ژن ترانس eGFP/Cre (Six2-eGFP/Cre plus؛ T fam) از اینجا به بعد به عنوان جهش شش2-Tfam-/- شناخته می‌شوند. شش2-موش Tfam-/- با نسبت های مندلی مورد انتظار متولد شدند و با بازرسی بصری در بدو تولد از کنترل های Cre-littermate قابل تشخیص نبودند. با این حال، تفاوت در وزن بدن بین شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A){{0}}جهش‌یافته‌ها و کنترل‌های Cre- littermate در روز پس از تولد آشکار شد(P)14(5.7±0.3g for mutants vs.7.5±0.3g for controls,n{11} } هر کدام، P{12}}.004؛ جدول تکمیلی S1). شش{15}}TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A) موش‌های جهش یافته با کلیه‌های بزرگ شده در مقایسه با گروه کنترل مشخص شدند (نسبت کلیه به وزن بدن 1.45 ± 0.19 درصد برای جهش‌یافته در مقابل 0.02 ±0.6{6}} درصد برای کنترل , n=4 هر کدام، P<0.001; figure="" lb,="" supplementary="" table="" s1)and="" died="" between="" age="" p20="" and="" p30(figure="" lb).="" juvenile="" lethality="" in="" the="" mutant="" cohort="" was="" associated="" with="" renal="" failure="" from="" severe="" cystic="" disease="" with="" blood="" urea="" nitrogen="" levels="" of="" 68.40±5.32="" mg/dl="" for="" mutant="" mice="" versus="" 16.8±2.0mg="" dl="" for="" controls(n="6" and="" 7,="" respectively;=""><0.0001; figure="" lb="" and="" c).="" furthermore,="">TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7- جهش‌یافته‌ها آلبومینوری قابل‌توجهی داشتند (نسبت آلبومین/کراتینین ادرار=362.4 ± 75.18 میلی‌گرم بر گرم در شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)--جهش در مقابل 43.58±3.39 میلی گرم در گرم در گروه شاهد به ترتیب در P14، n=6 و 10؛ P<0.0001). this="" is="" consistent="" with="" the="" expression="" pattern="" of="" cre="" recombinase="" in="" six2="" nephron="" progenitor="" cells,="" which="" give="" rise="" to="" cap="" mesenchyme-derived="" renal="" tubules="" and="" podocytes.="" in="" contrast="" to="">TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)جهش یافته، موش با هتروزیگوتTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)کمبود در سلول های پیش ساز SIX2 که به طور طبیعی ایجاد شده بودند، بارور بودند و بیماری کلیوی آشکار را ایجاد نکردند (شکل S1 تکمیلی).

شکل 1|غیرفعال شدن Tfam در سلول های دودمان SIX2 منجر به بیماری شدید کیستیک و نارسایی کلیوی می شود.(الف) شماتیکی که رویکرد آزمایشی و مکان توالی های هدف را در آلل فلکس شده Tfam نشان می دهد. تجزیه و تحلیل واکنش زنجیره ای پلیمراز DNA کل ژنومی کلیه جدا شده از کنترل همزاد (Cre ) و Six{0}}Tfammice در سن روز پس از تولد (P) 7. آلل غیرترکیب Tfam floxed با 2-lox (2) نشان داده می شود. آلل بازترکیب شده توسط 1-lox، آلل نوع وحشی با wt; þ یا - وجود یا عدم وجود ترانس ژن Six2-eGFP/Cre را نشان می دهد. (ب) پانل سمت چپ، عکس‌های کلیه‌ها از Cre control و شش{7}}موش Tfam در سن 20 سالگی. وزن کلیه (KWs) به عنوان درصد وزن بدن (BW) بیان می شود (n ¼ 4-14). پانل‌های سمت راست، سطوح نیتروژن اوره خون (BUN) در Cre littermate control (co) و شش2-موش Tfam در سن ۷ P (به ترتیب n ¼ 7 و 6) و منحنی‌های بقا Kaplan-Meier برای Cre control و Six{11} {16}}موش‌های Tfam در مقایسه با آزمون log-rank (n ¼ 10-13). (ج) تصاویری از مقاطع کلیه تثبیت شده با فرمالین و پارافین از Cre control و شش موش Tfam در سنین P7 و P29 رنگ‌آمیزی شده با هماتوکسیلین و ائوزین (H&E) و آنالیز ایمونوهیستوشیمی برای اکتین ماهیچه صاف آنتی ژن (ACTA2) و تمایز خوشه ای (CD) 31. علائم عددی ساختارهای کیستیک و ستاره ها گلومرول ها را نشان می دهند. میله‌ها ¼ 1 میلی‌متر برای تمام مقاطع کلیه، 100 میلی‌متر برای تصاویر H&E با قدرت بالا و 50 میلی‌متر برای تصاویر IHC. داده‌ها به صورت میانگین SEM بیان می‌شوند و با استفاده از آزمون t-test Student تجزیه و تحلیل شدند. ***P <0.001. برای="" مشاهده="" بهینه="" این="" تصویر،="" لطفاً="" نسخه="" آنلاین="" این="" مقاله="" را="">www.kidney-international.org.

فواید سیستانچ برای مردان

تجزیه و تحلیل شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-موش‌هایی که آلل گزارشگر ROSA{26-ACTB-tdTomato،-eGFP Cre را نیز بیان می‌کنند، که در اینجا به عنوان Six2-mT/mG نامیده می‌شود.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7 موش، نشان می دهد که اکثریت قریب به اتفاق ساختارهای کیستیک درTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/- کلیه ها (شکل تکمیلی S3). این یافته ها با افزایش فسفریله کیناز سیگنال تنظیم شده خارج سلولی (p-ERK) و سطوح -کاتنین در شش مطابقت دارد{6}}TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/- بافت کلیه (شکل تکمیلی S3). روی هم، داده های ما نشان می دهد که شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/ کلیه ها ویژگی های مولکولی را نشان می دهند که اغلب با بیماری های کیستیک کلیوی مرتبط است.

بلوغ نفرون در شش معیوب است2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/موش زیرا ممکن است چندین هفته طول بکشد تا موش‌هایی که بافت خاص دارندTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیرفعال سازی توسعه آسیب شناسی، ما در مرحله بعدی دوره زمانی توسعه بیماری کلیوی را در شش بررسی کردیم2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A){{0}}موش. ما کلیه‌ها را از موش‌های کنترل و جهش یافته در سنین P{6}}، P7 و P14 جمع‌آوری کردیم و از روش‌های بافت‌شناسی، رنگ‌آمیزی ایمونوفلورسانس (IF) و تجزیه و تحلیل بیان ژن در عصاره کل کلیه برای ارزیابی استفاده کردیم. رنگ‌آمیزی IF برای SIX2 و E-cadherin در سن P0 نشان داد که کلیه‌ها از کنترل و Sic{7}}TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-از نظر بافت شناسی مشابه بودند. تشکیل ساختارهای ناحیه نفروژنیک کورتیکال مانند مزانشیم کلاهک SIX2 پلاس، نوک حالب بیانگر E-cadherin و ساختارهای نفرون در حال تولد مانند وزیکول‌های کلیوی و اجسام کاما و S شکل در شش مسدود نشد{7} }TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7- کلیه ها (شکل 2a). این یافته‌های بافت‌شناسی با سطوح بیان ژن‌های کدکننده نشانگرهای نفروژنیک سازگار بود. سطوح Six2، جعبه جفت 2 (Pax2)، LIM homeobox protein 1 (Lhx1) و سطوح mRNA فاکتور رونویسی splt مانند 1 (Sall) بین شاهد و شش تفاوت معنی داری نداشتند{9}}TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/موش در کل کلیه از کلیه P{1}} همگن می شود (شکل 2b). این نشان می دهد کهTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیرفعال‌سازی در پیش‌سازهای نفرون SIX2 تأثیر قابل‌توجهی بر تشکیل ساختارهای نفروژنیک نداشت.

شکل 2|بلوغ نفرون در شش2-Tfam-7موش معیوب است.(الف) تصاویری از بخش‌های تثبیت‌شده با فرمالین و بخش‌های جاسازی‌شده در پارافین از Cre~ control و Six{2}}Tfam-/Kidneys در سن روز پس از تولد (P) 0. مقاطع کلیه با تولویدین آبی رنگ آمیزی شدند و با ایمونوفلورسانس برای بیان هوموباکس 2 (SIX2) و E-cadherin (ECAD) مربوط به سینوس oculis مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفتند. درختان حالب با خطوط سفید بریده مشخص شده اند. مزانشیم کلاهک (CM)، بدن کاما شکل (CSB)، بدن S شکل (SSB) و نوک حالب (UT) حاشیه نویسی شده است. (ب) پانل سمت چپ، سطوح بیان mRNA نسبی نشانگرهای رشدی توسط یک واکنش زنجیره‌ای پلیمراز کمی در هموژنه‌های کلیوی از شش2-Tfam-/جهش در سن PO در مقایسه با گروه‌های کنترل همزاد Cre (n =6 هر کدام) ). پانل سمت راست، بیان ژن گلومرولی نسبی (گلوم) و بخش نفرون در کل هموژنه‌های کلیه از شش2-جهش Tfam7 در سن P7 در مقایسه با گروه کنترل Cre-littermate (n =4 هر کدام). PT، لوله پروگزیمال؛ mTAL، اندام صعودی ضخیم هنله. DT، توبول دیستال؛ سی دی، مجرای جمع آوری. (ج) مقاطع کلیه رنگ‌آمیزی آلسیان بلو/اسید پریودیک شیف (AB-PAS) در سنین P{22}}، P7 و P14. پیکان‌ها نشان‌دهنده لوله‌های PAS مثبت با حاشیه قلم مو، ستاره‌ها گلومرول‌ها، و علامت‌های عددی توبول‌های کیستیک، میله‌های=100 um برای تصاویر AB-PAS و 50 um برای تصاویر رنگ‌آمیزی آبی تولویدین و تصاویر IF را نشان می‌دهند. داده ها به صورت میانگین ± SEM بیان می شوند؛{30}}آزمون تی دانشجویی دنباله دار؛*P<><><0.001.agp1,aquaporin 1;agp2,aquaporin="" 2;lhx1,lim="" homeobox1;napi2a,="" sodium-phosphate="" cotransporter="" 2a;="" ncc,="" thiazide-sensitive="" sodium-chloride="" cotransporter;="" nkcc2,="" sodium-potassium-chloride="" cotransporter="" 2;pax2,="" paired="" box="" 2;="" sall1,="" spalt="" like="" transcription="" factor="" 1;="" scnn1a,="" epithelial="" sodium="" channel="" 1="" alpha="" subunit;="" trpv5,="" transient="" receptor="" potential="" cation="" channel="" subfamily="" v="" member="" 5;="" umod,="" uromodulin.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">www.kidney-international.org.

بررسی های cistanche

اگرچه تشکیل ساختار نفرون نوپا مهار نشد، اما رنگ آمیزی با آلسین بلو/اسید پریودیک-شیف و لکتین تتراگونولوبوس نیلوفر آبی نشان دهنده بلوغ نفرون انتهایی معیوب در شش بود2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A){{0}}موش‌های سن P0. آلسیان بلو/اسید دوره‌ای-شیف، که غشای پایه لوله‌ای و مرز قلم مو را رنگ می‌کند، و لکتین تتراگونولوبوس نیلوفر آبی، که الیگوساکاریدهای خاص را در مرز برس سلول‌های لوله پروگزیمال شناسایی می‌کند، هر دو در کلیه‌های جهش یافته کاهش یافتند. شکل 2c رنگ آمیزی آلسیان آبی/اسید دوره ای-شیف را در نقاط زمانی P{9}}، P7 و P14 نشان می دهد. هیستوشیمی لکتین لوتوس تتراگونولوبوس و رنگ آمیزی IF برای پروتئین ویلمز تومور 1 در نقاط زمانی P{15}}، P7 و P14 در شکل تکمیلی S4 نشان داده شده است. در سن PO، ناحیه نسبی که با لکتین تتراگونولوبوس نیلوفر آبی رنگ‌آمیزی مثبت داشت 2.1 درصد ±0.51 درصد و 0}.39 درصد ± 0.1 درصد بود. سن P7 در مقابل 6.25 ± 0.28 درصد و 6.2 ± 1.1 درصد برای گروه کنترل، به ترتیب (n=3-4، P=0.0004 و 0.0007، به ترتیب؛ شکل تکمیلی S4). مطابق با این یافته‌های بافت‌شناسی، کاهش قابل‌توجه در بیان ژن‌های کدکننده نشانگرهای گلومرولی و قطعه نفرون اختصاصی پودوسین، نفرین، آکواپورین 1 (Agp1)، انتقال‌دهنده سدیم-فسفات 2a (NaPi2a)، اورومودولین، کوترانسپورت‌لرورید سدیم-پتاسیم-2 است. (Nkcc2) و هم انتقال دهنده کلرید سدیم حساس به تیازید (Ncc) در شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/ موش ها (شکل 2b). در مجموع، این داده ها نشان می دهد که شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/- کلیه ها کاهش تدریجی تعداد بخش های نفرون پروگزیمال بالغ و گلومرول ها را نشان می دهند.

زیرا شش2-فعالیت eGFP/Cre نتیجه می‌دهدTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-کمبود بخش‌های نفرون مشتق از مزانشیم کلاهک، ما پیش‌بینی کردیم بلوغ سلول‌های اپیتلیال CD که مشتق از جوانه حالب هستند، در Six تحت تأثیر قرار نخواهند گرفت2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/ کلیه ها. مطابق با این تصور این است که رنگ‌آمیزی با آگلوتینین Dolichos biflorus، که با N-استیل-D-گالاکتوز در توبول دیستال و CD واکنش می‌دهد، نشان‌دهنده وجود بیش از حد نسبی ساختارهای آگلوتینین مثبت Dolichos biflorus در Six است2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/- کلیه ها. در سن 7 P، نواحی رنگ‌آمیزی مثبت برای آگلوتینین Dolichos biflorus 13.91 درصد ±0.9 درصد از کل منطقه برای جهش‌یافته‌ها در مقابل 1.93 درصد ± 0.1 درصد برای کنترل را تشکیل می‌دهد (n {{11} }, P=0.0002؛ شکل تکمیلی S4. بیان mRNA زیرواحد آلفا 1 اپیتلیال کانال سدیم (Scnnla) یا آکواپورین 2 (Agp2) که هر دو در سلول های اپیتلیال CD بیان می شوند، در مقایسه با کنترل (شکل 2b).در مقابل شش{19}}TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-کلیه ها،TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیرفعال شدن در سلول‌های پیش‌ساز هومئوباکس B7(HOXB7)، که باعث ایجاد سلول‌های اپیتلیال CD می‌شود، که منجر به از بین رفتن بیان نشانگر نفرون CD و اتساع خفیف لوله‌ای می‌شود، اما سیستوژنز انجام نمی‌شود (شکل S5 تکمیلی). در مجموع، داده های ما نشان می دهد که از دست دادنTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)عملکرد در سلول های پیش ساز SIX2 مانع از توسعه ساختارهای نفرون در حال تولد نمی شود، اما بلوغ نفرون نهایی را مهار می کند.

TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-کیست ها در مارکرهای قطعه نفرون مشترک کمبود دارند

برای مشخص کردن منشا هیستوژنتیکیTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7کیست‌های کلیوی، ما آنالیز IF را انجام دادیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/kidneys at age P14 and examined the expression of nephron segment markers megalin (proximal tubule), uromodulin (medullary thick ascending limb of Henle), thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter(distal tubule), and aquaporin 2(CD). The majority of cysts with a maximal diameter of>50 um did not express these segment-specific markers, indicating a lack of cellular differentiation(Figure 3a, Supplementary Figure S6). Furthermore, approximately 50% of cysts with a maximal diameter of >50 میکرومتر با رسوبات داخل مجرای uromodulin مشخص شد که نشان می دهد منشاء بخش های نفرون دیستال به لوله پروگزیمال و حلقه نزولی هنله است (شکل 3b).

شکل 3ITfam-/کیست‌ها نشانگرهای مشترک بخش نفرون را بیان نمی‌کنند.(a)Representative images of formalin-fixed, paraffin-embedded kidney sections from Six2-mT/mG; Tfam-mice at age postnatal day (P) 14 stained for enhanced green fluorescent protein (eGFP), megalin, uromodulin, thiazide-sensitive sodium chloride cotransporter (NCC), and aquaporin 2(AQP2)by immunofluorescence (IF). 4'6-diamidino-2-phenylindole was used for nuclear staining (blue fluorescence). Arrows depict tubular structures expressing respective nephron segment-specific markers. Nephron segment marker expression was assessed in cysts with a maximal diameter of >50 ام (ب) تصاویری از بخش‌های کلیه فیکس شده با فرمالین و پارافین از Six2-mT/mG. موش‌های Tfam-7 در سن P14 برای eGFP و uromodulin توسط IF رنگ‌آمیزی شدند. ستاره ها کیست هایی را با uromodulin داخل مجرا نشان می دهند. وجود uromodulin داخل مجرا در کیست‌هایی با حداکثر قطر 50-100 um یا در کیست‌های بزرگ‌تر از 100 میکرومتر در حداکثر قطر مورد بررسی قرار گرفت. میله‌ها =(a,b)100 um. برای مشاهده بهینه این تصویر، لطفاً نسخه آنلاین این مقاله را در www kinder-international.org مشاهده کنید.

ناهنجاری های پیشرونده در عملکرد mt و مورفولوژی درTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7-سلول های اپیتلیال

برای توصیف دوره زمانی عواقب متابولیکTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)حذف، ابتدا سطوح mRNA را بررسی کردیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)وTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)تنظیم mt-Col، mt-Cyb و mt-Atp6 درTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-کلیه ها در سنین PO، P7 و P14. همانطور که انتظار میرفت،TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)سطوح mt-Col، mt-Cyb و nt-Atp6 mRNA به طور قابل توجهی کاهش یافت (شکل 4a). سلول های اپیتلیال T fam{5}} برچسب گذاری شده با eGFP (شش2-mT/mG؛ Tfam-7موش) کاهش قابل توجهی در بیان پروتئین MT-CO1 نشان دادند (شکل تکمیلی S7). تعداد کپی DNA mt تا 63 درصد کاهش یافت که با کاهش mt مطابقت دارد.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)کمبود (شکل 4 الف). در مقابل، بیان ژن‌های هسته‌ای کدکننده نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید: یوبی‌کینون اکسیدوردوکتاز زیرواحد هسته 3 (Ndufs3) و سوکسینات دهیدروژناز کمپلکس زیرواحد فلاوپروتئین A (Sdha) در سن P{3}} تحت تأثیر قرار نگرفت اما در سن P7 و P1 کاهش یافت. (شکل 4 الف). این یافته ها از تجزیه و تحلیل ژن و پروتئین mt با از دست دادن تدریجی تعداد کپی mt در Tfam-/-اپیتلیوم سازگار است.

ما بعداً اثرات متابولیک را بررسی کردیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)غیر فعال سازی در سلول های اپیتلیال لوله پروگزیمال اولیه (PTECs) جدا شده در سن P7.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7 PTECها کاهش قابل توجهی در میزان مصرف اکسیژن پایه نشان دادند (40.77 ± 4.10 برای جهش یافته ها در مقابل 5.18 pmol/min/10 ± 61.75 سلول برای کنترل، n=3 هر کدام، P{11}}.034 تنفس مرتبط با ATP (3.91 ± 33.11 برای جهش یافته ها در مقابل 4.91 ± 46.92 pmol/min/10* سلول برای گروه شاهد، n=3 هر کدام، P=0.093)، حداکثر تنفس (116.8 ± 14.19 برای جهش یافته ها در مقابل 13.55 ± 225.5 pmol/min/10* سلول ها برای گروه شاهد، n{35}} هر کدام، P{36}}.005) و ظرفیت تنفسی اضافی (76.05 ± 10.18 برای جهش یافته ها در مقابل 163 ± 163). 8.61 pmol/min/10* سلول برای کنترل، n=3 هر کدام، P{48}}.003؛ شکل 4b).

سیستانچ ردیت

برای توصیف بیشتر درجه کاهش و آسیب mt، ما بررسی کردیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/- کلیه ها با میکروسکوپ الکترونی عبوری و 3-میکروسکوپ روشنایی ساختاری بعدی (سیم کارت سه بعدی). در سن 7 P، میتوکندری ها شکل های نامنظم و بادکنکی از خود نشان دادند که با یافته های قبلی مطابقت دارد.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)موش های حذفی تجزیه و تحلیل میکروسکوپی الکترونی عبوری نشان داد که ناهنجاری‌های ساختاری میتوکندری، مانند افزایش اندازه و کریستای غیر طبیعی، پس از زایمان پیشرفت می‌کنند زیرا تفاوت‌های مورفولوژیکی بین جهش‌یافته و گروه کنترل در سن P{0}} کمتر آشکار بوده و با افزایش سن شدیدتر می‌شوند (شکل 4c). سیم کارت سه بعدی برای بررسی حجم mt و اندازه شبکه در Six2-mT/mG;TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/ جهش در مقایسه با شش2-موش‌های کنترل mT/mG در سن 7 سالگی؛ حجم mt در مقاطع 5 تا 8 توبول در هر بخش اندازه‌گیری شد و 25 تا 40 سلول‌های اپیتلیال قشری eGFP مثبت رنگ‌آمیزی شده برای کانال انتخابی آنیون وابسته به ولتاژ 1 توسط رنگ‌آمیزی IF مورد بررسی قرار گرفت. ما دریافتیم که حجم کل mt در هر سلول مثبت eGFP به طور قابل توجهی کاهش یافته است (62.66 ± 16.46 um/cell برای جهش‌یافته در مقابل 177.4±30.17 میکرومتر در سلول برای کنترل، n=3 هر سلول , P{22}}.0289) و با تغییر نسبت حجم کل mt به ازای کل حجم سلول از 0}.0.01 ± 0.016 در کنترل به 0.089 ± 0.016 در شش همراه بود. 2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7 جهش یافته (n= 3 هر کدام، P{2}}.0017؛ شکل 4c). حداکثر اندازه شبکه mt که بزرگترین شبکه mt را که در تمام سلول‌های eGFP مثبت بررسی شده اندازه‌گیری می‌کند، در شش کاهش یافت2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/ کلیه ها (23.2 ± 143.2 میکرومتر مربع برای جهش یافته ها در مقابل 318.3 ± 49.45 میکرومتر مربع برای کنترل ها، n{9}} هر کدام، P{10}}.0327). در مجموع، یافته های فراساختاری و سیم کارت و یافته های حاصل از تجزیه و تحلیل ژن و پروتئین mt با کاهش تدریجی تعداد کپی mt درTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-7-اپیتلیوم.

شکل 4| اپیتلیوم Tfam-/کلیه با کاهش تدریجی میتوکندری مشخص می شود.(الف) بیان ژن میتوکندری (mt) توسط واکنش زنجیره ای پلیمراز کمی در سن روز پس از تولد (P){0}}، P7 و P14 (تغییر برابری نسبت به کنترل، n =6 هر کدام) و محتوای mt DNA (P7) در کل کلیه از گروه شاهد (co) و شش{5}}Tfam-/موش همگن می‌شود. (ب) میزان مصرف اکسیژن (OCR) در سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای پروگزیمال (PTECs) جدا شده از کنترل همزاد Cre و شش{7}}کلیه خانواده در سن 7 P بر روی سکوی Seahorse XFe24. اندازه‌گیری‌های نماینده OCR در گروه کنترل و Tfam{11}}PTEC‌های تیمار شده با الیگومایسین A (الیگو A، مهار آدنوزین تری فسفات [ATP] سنتاز)، کربونیل سیانید-p-تری فلوئورو متوکسی فنیل هیدرازون (FCCP، uncoupler)، و مهارکننده‌های روفرونفوترون اکسیداتیو و آنتی‌مایسین A(AA). همچنین تنفس پایه و حداکثر محاسبه شده، تنفس مرتبط با ATP، و ظرفیت تنفسی اضافی (n =3 هر کدام) نشان داده شده است. ج) آنالیز فراساختاری میتوکندری توسط میکروسکوپ الکترونی عبوری. تصاویر میکروسکوپی الکترونی عبوری از بخش‌های کلیه از موش‌های Cre- control و Six{17}}Tfam{18}}در سن P0 و P7، فلش‌های قرمز میتوکندری را نشان می‌دهند. نوار=500 نانومتر. (د) تصاویر میکروسکوپ روشنایی ساختار یافته سه بعدی از بخش های کلیه از Six2-mT/mG (co) و Six2-mT/mG. موش Tfam-/- در سن 7 P. پروتئین فلورسنت سبز تقویت شده (eGFP)، زیرواحد سیتوکروم c اکسیداز 4 (COXⅣ) و کانال انتخابی آنیون وابسته به ولتاژ 1 (VDAC) توسط ایمونوفلورسانس شناسایی شدند. ) برای رنگ آمیزی هسته ای (فلورسانس آبی) استفاده شد.خطوط بریده بریده سفید توبول کلیوی در کنترل و لومن کیست در کلیه جهش یافته را نشان می دهد و علائم عددی لومن لوله ای در کنترل یا لومن کیست در کلیه جهش یافته را نشان می دهد. ناحیه mt با Imaris اندازه گیری شد. نرم افزار (Oxford Instruments، Abingdon، UK; n =3 هر کدام). مجموع (tot) mt حجم (vol) در هر سلول eGFP-positive (25-40 سلول/نمونه تجزیه و تحلیل شده)، نسبت حجم کل mt در هر حجم کل سلول، و حداکثر (حداکثر) اندازه شبکه mt در هر سلول. اندازه شبکه mt در یک مقطع لوله‌ای با 5 سلول در هر مقطع تعیین شد. میله‌ها =4 um. داده‌ها نشان داده می‌شوند. میانگین ± SEM و با استفاده از آزمون t-test مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت<><><0.001, mt-atp6,="" mitochondrially="" encoded="" atp="" synthase="" membrane="" subunit="" 6;="" mt-co1,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" c="" oxidase="" 1;="" mt-cytb,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" b;="" ndufs3,="" nadh:="" ubiquinone="" oxidoreductase="" core="" subunit="" s3;="" sdha,="" succinate="" dehydrogenase="" complex="" flavoprotein="" subunit="" a;="" tfam,="" mitochondrial="" transcription="" factor="" a.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)کمبود متابولیسم اپیتلیال کلیه را به سمت گلیکولیز سوق می دهد

PTECها در کلیه از اکسیداسیون اسیدهای چرب و OXPHOS برای تولید ATP استفاده می کنند و گلوکونئوژنتیک هستند. درجه برای به دست آوردن بینش اضافی در مورد تغییرات متابولیک مرتبط با غیرفعال کردن تام، ما تجزیه و تحلیل توالی RNA کلیه‌ها را از شش انجام دادیم2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/-و Cre~ موش های کنترل کننده همزاد در سن 7 سالگی. ما دریافتیم که ژن‌های تنظیم‌کننده کلیدی درگیر در گلیکولیز، مانند هگزوکیناز 2 (Hk2) و انولاز 2 (Eno2)، تنظیم مثبت شدند. در مقابل، بیان بیشتر ژن‌های درگیر در چرخه اسید تری کربوکسیلیک کاهش یافت (به عنوان مثال، ایزوسیترات دهیدروژناز 1[Idh1)، و همچنین بیان ژن‌های دخیل در اکسیداسیون اسیدهای چرب، مانند استیل کوآنزیم A آسیل ترانسفراز 1B (Acaalb) کاهش یافت. آسیل کوآنزیم A دهیدروژناز با زنجیره متوسط ​​(Acadm) (شکل 5a و b، شکل تکمیلی S8). مطابق با کاهش بیان ژن های دخیل در کنترل چرخه اسید تری کربوکسیلیک و کلیه های جهش یافته در سن P7 با استفاده از پلت فرم Seahorse XFe24 (Agilent, Santa Clara, CA). PTECهای جهش یافته با افزایش قابل توجهی در گلیکولیز پایه مشخص شدند (نرخ جریان پروتون=117} 12 ± 0.4. }}، P=0.{{30}}032) و کاهش نسبت نرخ مصرف اکسیژن Mt نسبت به سرعت جریان پروتون گلیکولیتیک از 0.08 ± 0.73 در کنترل به 0.02 ± 0.34 در PTEC های جهش یافته (n=3, P=0.0074). در مجموع، این داده ها نشان می دهد کهTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/- سلول های اپیتلیال یک تغییر متابولیک از OXPHOS و اکسیداسیون اسیدهای چرب به سمت گلیکولیز را تجربه کرده بودند (شکل 5d).

شکل 5] کمبود فاکتور A رونویسی میتوکندری اپیتلیال کلیه (TFAM) با افزایش گلیکولیز و متابولیسم غیر طبیعی اسیدهای چرب مرتبط است.(الف) تجزیه و تحلیل بیان ژن متابولیک با تعیین توالی RNA قشر کل کلیه جدا شده از شش2-Tfam-/- و کنترل Cre-littermate (co) موش در سن روز پس از تولد (P) 7 (n {{6) }} هر یک). ژن های متابولیک با تنظیم متفاوتی که در گلیکولیز و چرخه اسید تری کربوکسیلیک دخیل هستند نشان داده شده است. ژن‌هایی که از نظر آماری افزایش معنی‌داری در بیان mRNA دارند با رنگ قرمز نشان داده می‌شوند و ژن‌هایی با بیان کاهش یافته با رنگ سبز نشان داده می‌شوند. (ج) متابولیسم اسید چرب تغییر یافته در شش2-7Tfam-7موش جهش یافته. تصاویری از بخش‌های کلیه با رنگ قرمز O رنگ‌شده با روغن از موش‌های شش{10}}Tfam-7و Cre-littermate در سن ۱۴ سالگی. فلش‌ها به سلول‌های O مثبت قرمز روغن اشاره می‌کنند و عدد سیان هزینه را نشان می‌دهد. نوار=10 um.(d) تجزیه و تحلیل شار گلیکولیتیک سلول های اپیتلیال لوله پروگزیمال اولیه (PTECs) جدا شده از کنترل همزاد Cre و شش2-Tfam-/کلیه در سن 7 P (n=4 هر کدام) ) روی پلت فرم Seahorse XFe24. اندازه‌گیری‌های نماینده نرخ جریان پروتون گلیکولیتیک (گلیکو PER) در کنترل و Tfam{21}PTEC‌های تیمار شده با 2-دئوکسی گلوکز (2-DG) و مهارکننده‌های فسفوریلاسیون اکسیداتیو روتنون و آنتی‌مایسین A(AA) نشان داده شده است. . همچنین میانگین گلیکو PER در ابتدا و نسبت میزان مصرف اکسیژن میتوکندری (MT) نسبت به گلیکو PER نشان داده شده است. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شده و با استفاده از آزمون t-student تجزیه و تحلیل شدند. (ادامه دارد)

کاهشTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)بیان در بافت PKD موش و انسان با کاهش Mt همراه است

چون شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/ کلیه ها شباهت زیادی به کلیه های PKD داشتند، ما بعداً ارزیابی کردیم که آیاTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)در بافت های PKD بی نظم بود. ابتدا بررسی کردیمTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)و بیان ژن تنظیم شده با TFAM در 2 مدل موش PKD ژنتیکی به خوبی تثبیت شده است.TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)سطوح mRNA به طور قابل‌توجهی در هموژنه‌های کل کلیه موش‌های Pkd1-/- و Cyspk/pk که حامل جهش در Pkd1 یا Cys1 هستند، کاهش یافت. این با کاهش بیان ژن‌های mt از طریق میتوکندری و کدگذاری هسته‌ای و همچنین بیان ژن گلیکولیتیک بی‌نظم همراه بود. مشابه شش2-TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)-/کلیه‌ها، کلیه‌های Pkd1-7 و CysPkpk با افزایش Eno2 و Hk2 و کاهش قابل‌توجه فسفوگلیسرات کیناز (Pkg)1، پیروات دهیدروژناز کیناز (Pdk)1، و سطوح رونوشت Pdk4 مشخص شدند (شکل 6a).TFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)بیان پروتئین، همانطور که با رنگ آمیزی IF ارزیابی شد، در سلول های اپیتلیال پوشش کیست در مقایسه با سلول های اپیتلیال از لوله های غیر کیستیک مجاور کاهش یافت (شکل 6b). این با کاهش بیان mt-Co1 و mt-Atp6 توسط هیبریداسیون درجا فلورسانس RNA همراه بود (شکل 6b، شکل تکمیلی S9). حجم mt، همانطور که توسط سیم کارت سه بعدی تعیین شد، در مقایسه با سلول‌های اپیتلیال از لوله‌های مجاور، غیر کیستیک یا PTEC از کلیه‌های کنترل طبیعی، 55 درصد کاهش یافت. تفاوت در حجم mt بین PTECهای کنترل معمولی و PTECها از توبولهای غیر کیستیک یافت نشد (شکل 6c).

شکل 6| بیان فاکتور رونویسی میتوکندری A (TFAM) در کیست های کلیوی Pkd{{1} و CysPkepk کاهش می یابد.(الف) سطوح بیان mRNA نسبی (تغییر برابری نسبت به کنترل همزاد Cre) ژن‌های میتوکندری و گلیکولیتیک کدگذاری شده با میتوکندری و هسته در Pkd1-7 و Cyskidneys (n=3-5). (ب) تصاویر نماینده کلیه بخش‌هایی از Pkd1-7و موش‌های کنترل همزاد در سن روز پس از تولد (P)22 تجزیه و تحلیل شدند. رنگ آمیزی ایمونوفلورسانس (IF) برای هیبریداسیون درجا TFAM و RNA فلورسنت (RNA-FISH) برای سیتوکروم c اکسیداز 1 (mt-Co1) کدگذاری شده با میتوکندری و کدگذاری میتوکندری ATP سنتاز غشاء و فرآیندهای غشایی زیرواحد اسکریپت (mScript6p6). فلش های سفید سلول های اپیتلیال پوشش کیست را با بیان TFAM، mt-Co1 یا mt-Atp6 به شدت کاهش می دهد. گلومرول ها با gl مشخص می شوند. ساختارهای لوله ای بیانگر TFAM با فلورسانس قرمز مشخص می شوند. ستاره‌ها سلول‌های اپیتلیال لوله‌ای را با رونوشت‌های mt-Co1 و mt-Atp6 قابل تشخیص نشان می‌دهند. میله‌های=25 um برای تصاویر IF و 10 میکرومتر برای تصاویر RNA-FISH. (ج) میکروسکوپ روشنایی ساختار یافته سه بعدی. تصاویری از برش‌های کلیه از کلیه‌های Pkd{28} نشان داده شده است که با هیستوشیمی با لکتین تتراگونولوبوس نیلوفر آبی (LTL) و IF برای زیرواحد سیتوکروم c اکسیداز 4 (COXIV) و کانال 1 انتخابی آنیون وابسته به ولتاژ (VDAC) تجزیه و تحلیل شده‌اند. حجم میتوکندری (mt) با نرم افزار Imaris بر اساس رنگ آمیزی COXIV اندازه گیری شد. فلش ها سلول های اپیتلیال پوشش کیست، علائم عددی لومینای کیست و ستاره ها توبول های غیر کیستیک را نشان می دهند. سلول های اپیتلیال پوشش کیست با خطوط بریده مشخص می شوند. میله‌های=10 میکرومتر برای پانل سمت چپ و 3 میکرومتر برای پانل سمت راست. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شده و با استفاده از آزمون t-student *P تجزیه و تحلیل شدند<><0.01, and=""><0.001.eno2, enolase="" 2;="" hk2,="" hexokinase="" 2;="" mt-cytb,="" mitochondrially="" encoded="" cytochrome="" b:="" ndufs3.="" nadhubiguinone="" oxidoreductase="" core="" subunit="" s3;="" pdk1,="" pyruvate="" dehydrogenase="" kinase="" 1;="" pdk4.pyruvate="" dehydrogenase="" kinase="" 4;="" ppargc1a,="" peroxisome="" proliferator-activated="" receptor="" gamma="" coactivator="" 1-alpha:="" pgk1,="" phosphoglycerate="" kinase="" 1:="" ptec,="" proximal="" tubule="" epithelial="" cell;="" sudha,="" succinate="" dehydrogenase="" complex="" flavoprotein="" subunit="" a.="" to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

برای بررسی اینکه آیا از دست دادنTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)بیان یک ویژگی مولکولی مشترک PKD انسان است، ما نمونه‌های نفرکتومی از 5 بیمار ADPKD را با روش ایمونوهیستوشیمی، رنگ‌آمیزی IF، هیبریداسیون فلورسانس RNA در محل، و SIM 3 بعدی تجزیه و تحلیل کردیم. کاهشTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)بیان در 7.5 ± 75.2 درصد از کیست های کلیه که توسط ایمونوهیستوشیمی آنالیز شده بودند مشاهده شد. این با کاهش بیان MT-CO1 و MT-ATP6 توسط هیبریداسیون درجا فلورسانس RNA همراه بود (شکل 7a، شکل تکمیلی S10). حجم mt در سلول های اپیتلیال پوشش کیست تقریباً 70 درصد کاهش یافت که توسط سیم کارت سه بعدی ارزیابی شد (شکل 7b). روی هم رفته، تجزیه و تحلیل 2 مدل موش PKD و بافت ADPKD انسان نشان داد کهTFAM(فاکتور رونویسی میتوکندری هدفمند A)کمبود و کاهش mt یافته‌های رایج در بافت‌های PKD هستند و احتمالاً بر پاتوژنز بیماری کیستیک کلیه تأثیر می‌گذارند.

شکل 7| بیان فاکتور رونویسی میتوکندری A (TFAM) در کیست های کلیه بیماران مبتلا به بیماری کلیه پلی کیستیک کاهش می یابد.(الف) تصاویری از مقاطع جاسازی شده با پارافین ثابت شده با فرمالین از کلیه های طبیعی انسان و کلیه های بیماران مبتلا به بیماری کلیه پلی کیستیک (PKD) که توسط ایمونوهیستوشیمی برای بیان TFAM، توسط ایمونوفلورسانس (IF) برای کانال انتخابی آنیون وابسته به ولتاژ 1 (VDAC) تجزیه و تحلیل شد. بیان، و با هیبریداسیون فلورسنت RNA در محل برای سیتوکروم c اکسیداز 1 (MT-CO1) کدگذاری شده با میتوکندری و زیرواحد 6 (MT-ATP6) غشای ATP سنتاز کدگذاری شده با میتوکندری، بیان mRNA ژن، پیکان ها، سلول های اپیتلیال علامت پوشش کیست را شناسایی می کنند. و ستاره ها گلومرول ها را نشان می دهند. نوار=100 میکرومتر برای تصاویر با بزرگنمایی کم و 10 میکرومتر برای تصاویر با بزرگنمایی بالا (ب) 3-تصاویر میکروسکوپی روشنایی ساختاری بعدی از مقاطع کلیه PKD انسان تجزیه و تحلیل شده با IF برای بیان VDAC.4'،{ {17}}دیامیدینو{18}} فنیلندول (DAPl) برای رنگ‌آمیزی هسته‌ای (فلورسانس آبی) استفاده شد. خطوط بریده توبول ها را نشان می دهد و علائم عددی لومینای لوله ای یا کیست را نشان می دهد. حجم میتوکندری (mt) با استفاده از نرم افزار Imaris (n=5) اندازه گیری شد. نوار {20}} میکرومتر. داده ها به صورت میانگین ± SEM نشان داده شده و با استفاده از آزمون t Student آنالیز شدند.*P<0.05. to="" optimize="" viewing="" of="" this="" image,="" please="" see="" the="" online="" version="" of="" this="" article="" at="">

برای قسمت Ⅱ اینجا را کلیک کنید