بسیاری از مطالعات تأیید کرده‌اند که بیماری‌های آلرژیک نه تنها نتیجه فعال‌سازی سیستم ایمنی ذاتی هستند.

لطفا تماس بگیریدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

خلاصه:ماست سل ها نقش بسیار مهمی در حساسیت و التهاب پوست از جمله درماتیت آتوپیک و پسوریازیس دارند. در گذشته مشخص شد که مرجع دارای اثرات ضد التهابی و ضد پیری بر روی پوست است، اما اثر آن بر روی ماست سل ها هنوز به طور دقیق مورد مطالعه قرار نگرفته است. در این مطالعه، ماست سل ها (سلول های RBL-2H3) و مدل های موش را برای بررسی اثرات ضد حساسیت و التهابی مرجع استفاده کردیم. اول، ما دریافتیم که مرجع از دگرانولاسیون ماست سل ها و بیان سیتوکین ها جلوگیری می کند. علاوه بر این، ما مشاهده کردیم که وقتی ماست سل ها توسط A23187/فوربول 12-میریستات-13-استات (PMA) تحریک شدند، افزایش کلسیم داخل سلولی توسط مرجع مهار شد. فسفوریلاسیون مسیر MAPK/NF-KB نیز با پیش تیمار مرجع کاهش می یابد. نتایج مطالعات in vivo نشان می‌دهد که مرجع می‌تواند ظاهر درماتیت و نفوذ سلول‌های ماست ناشی از دینیتروکلروبنزن (DNCB) را بهبود بخشد. علاوه بر این، بیان پروتئین های سد کننده در پوست نیز بازسازی می شود.سیستانچدر نهایت، مشخص شد که مرجع می تواند رفتار خراش ناشی از ترکیب 48/80 را کاهش دهد. در مجموع، نتایج ما نشان می دهد که مرجع یک محصول طبیعی ضد حساسیت و ضد التهاب بسیار خوب است. اثر آن بر ماست سل ها به مکانیسم فارماکولوژیک آن کمک می کند.

کلید واژه ها:مرجع؛ محصول طبیعی؛ ماست سل درماتیت؛ خارش

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

1. مقدمه

بسیاری از مطالعات تایید کرده‌اند که بیماری‌های آلرژیک نه تنها نتیجه فعال‌سازی سیستم ایمنی ذاتی، بلکه فعال‌سازی تطبیقی ​​نیز هستند. در این میان ماست سل ها نقش بسیار مهمی در انواع بیماری های آلرژیک مانند رینیت آلرژیک، آسم و درماتیت آلرژیک دارند. ماست سل ها گیرنده های IgE (FceRI) را بر روی غشای سلولی خود بیان می کنند و گیرنده های FceRI تمایل زیادی به آنتی بادی های IgE دارند [1،2]. هنگامی که IgE اختصاصی آنتی ژن به FceRI متصل می شود، یک تعامل رخ می دهد و یک واکنش آلرژیک رخ می دهد. تجمع FceRI می تواند تیروزین کینازهای گیرنده را فعال کند، واکنش های پایین دستی را آغاز کند، و فسفوریلاسیون پروتئین های کلیدی مختلف (مانند پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن، MAPKs) را افزایش دهد، که در نهایت منجر به هجوم یون های کلسیم (Ca2 plus) می شود. رویداد کلیدی در دگرانولاسیون ماست سل [3].cistanche استرالیاماست سل های فعال شده گرانوله می شوند و واسطه های شیمیایی آزاد می کنند. این واسطه‌های شیمیایی که در واکنش‌های آلرژیک استفاده می‌شوند می‌توانند باعث التهاب شوند [4]، بنابراین درمان علائم آلرژیک شامل مهارکننده‌های دگرانولاسیون ماست سل می‌شود. بنابراین، مهار دگرانولاسیون ماست سل با واسطه IgE اغلب برای شناسایی ترکیبات جدید برای پیشگیری و درمان بیماری های آلرژیک استفاده می شود. مشخص شده است که آنتی‌بادی‌ها و آنتی‌ژن‌های ضد دی‌نی‌تروفنیل (DNP) IgE می‌توانند واکنش‌های بیش‌حساسیت غیرفعال پوست (PCA) را به عنوان یک مدل معمولی in vivo حساسیت فوری و به‌عنوان یک داروی تحقیقاتی برای پتانسیل حساسیت‌های ضد آنتی‌ژنی القا کنند [5،6]. ]. علاوه بر این، دگرانولاسیون ماست سل می تواند توسط محرک های غیر ایمنی مانند ترکیبات 48/80 و A23187 نیز ایجاد شود. یونوفور کلسیم A23187 مدت‌هاست که به تحریک ترشح ماست سل با آزادسازی واسطه‌های از پیش ساخته‌شده مانند هیستامین از گرانول‌های آن‌ها، که به عنوان نمونه عمل می‌کند، شناخته شده است. پیوند متقابل توسط فرمالدئید، که به طور گسترده برای تحریک مستقل ماست سل ها استفاده می شود [7،8] بنابراین، مقادیر مناسبی از ترکیب 48/80 و A23187 معمولاً به عنوان معرف برای مطالعه مکانیسم واکنش های آلرژیک استفاده می شود. بر اساس ارزیابی های آماری، حدود 15-20 درصد از جمعیت از درماتیت آتوپیک رنج می برند. چه کودکان و چه بزرگسالان مبتلا به این بیماری باشند، بدون درمان مناسب، درماتیت آتوپیک می‌تواند باعث ناراحتی روانی بیماران شود و هزینه‌های بهداشتی خانوادگی و اجتماعی آنها را متحمل شود. متأسفانه هیچ روش درمانی مناسبی برای درمان درماتیت آلرژیک وجود ندارد. گزینه‌های درمانی فعلی هنوز از آلرژن‌های بیماری‌زا اجتناب می‌کنند و استفاده مداوم از استروئیدها استاندارد طلایی درمان است. آلرژن های اجتناب ناپذیر و عوارض جانبی داروها باعث ایجاد فوری داروهای جدید درمانی شده است. ترکیبات طبیعی جدا شده از گیاهان دارویی و گیاهان منابع بالقوه عوامل درمانی برای پیشگیری و درمان بیماری های التهابی و بهبود کیفیت زندگی بیماران مبتلا به اختلالات آلرژیک هستند.

سیستانچ می تواند ضد پیری باشد

مرجع از هسته نیلوفر آبی (جنین دانه) گیاه Nelumbo nucifera می آید و یک آلکالوئید اصلی بیس بنزیلیزوکینولین است. شواهدی وجود دارد که مرجع دارای طیف وسیعی از خواص دارویی مانند اثرات ضد سرطانی، آنتی اکسیدانی، ضد التهابی و محافظت کننده عصبی در بسیاری از بیماری ها است [10-15].مزایای سیستانچخان و همکاران دریافتیم که مرجع با مهار افزایش سطح ROS و مالون دی آلدئید (MDA) به واسطه اشعه ماوراء بنفش در کراتینوسیت‌ها و فیبروبلاست‌های انسانی، اثرات ضد پیری نوری ایجاد می‌کند. درماتیت یا سایر بیماری های التهابی مرتبط با پوست[18]. با این حال، اینکه آیا مرجع اثر ضد حساسیت پوستی در ماست سل ها دارد یا خیر، هنوز مشخص نیست. در این مطالعه، ما با استفاده از رده‌های ماست سل انسانی (RBL-2H3) و یک ترکیب 48/80-و آنافیلاکسی ناشی از DNCB بر روی بیماری‌های آلرژیک ناشی از ماست سل بررسی کردیم. مدل موش

Referencia proviene del núcleo de loto (el embrión de la semilla) de la planta Nelumbo nucifera y es un importante alcaloide de bisbencilisoquinolina. شواهدی وجود دارد که به عنوان یک مرجع تقویت شده است. Beneficios de la cistanche Khan و همکاران. Encontró que la Referencia produce efectos anti-fotoenvejecimiento al inhibir el aumento de los niveles de ROS y malondialdehído (MDA) mediado por UV en queratinocitos y fibroblastos humanos [16،17] درماتیت آتوپیکا و درماتیت آتوپیکا و التهاب‌های التهابی در ارتباط با پوست[18]. تحریم گناه، sigue siendo incierto si la referenceia tiene un efecto contra la alergia cutánea en los mastocitos. En este estudio, nuestro objetivo fue investigar los efectos de referenca en las enfermedades alérgicas mediadas por mastocitos, utilizando líneas de mastocitos humanos (células RBL-2H3) y un modelo de ratones induc pordaxi80 .

2. نتایج

2.1. آزمایش سمیت سلولی نفرین بر روی ماست سل های موش صحرایی (RBL{2}}H3)

از آنجایی که لوسمی بازوفیلیک موش صحرایی (RBL) -2سلول های H3، آنالوگ ماست سل آزاد کننده هیستامین، سلول های مناسبی برای بررسی اثرات التهاب ناشی از ماست سل هستند [19]، ما از این سلول ها برای بررسی ضد حساسیت استفاده کردیم. اثرات مرجع اول، ما آزمایش کردیم که آیا مرجع می تواند سمیت سلولی در ماست سل ها ایجاد کند یا خیر. هنگامی که سلول ها با مرجع از 1 تا 30 میکرومولار به مدت 24 ساعت پیش تیمار می شوند، زنده ماندن سلول ها تحت تأثیر تیمار مرجع قرار نمی گیرد (شکل 1).

2.2. Neferine اثر گرانولاسیون RBL{2}}H3 تحریک شده توسط فعال کننده های مختلف را کاهش می دهد.

سلول‌های RBL{0}}H3 معمولاً برای مطالعات آزمایشگاهی دگرانولاسیون [20-22]تحریک سلول‌های RBL-2H3 با آنتی‌دی‌نی‌تروفنول (DNP) IgE و آلبومین سرم انسانی کونژوگه با DNP استفاده می‌شوند. (HSA) باعث دگرانولاسیون می شود. علاوه بر این، ماست سل ها در پاسخ به ترکیبات مصنوعی، مانند ترکیب 48/80 و یونوفور کلسیم A23187، گرانوله می شوند و این ترکیبات به عنوان معرف های مناسب برای مطالعات مستقیم مکانیسم های پاسخ های آلرژی در شرایط آزمایشگاهی استفاده شده اند [23، 24]. نتایج نشان داد که سیتوپلاسم RBL-2H3 که توسط فعال‌کننده فعال نشده بود، حاوی گرانول‌های ترشحی محدودی بود.کلسترول سیستانچدرمان مرجع (10μM) به تنهایی بر فعالیت RBL-2H3 تأثیری نداشت (شکل 2A، B). با این حال، افزودن فعال‌کننده‌های مختلف، از جمله ترکیب 48/80، A23187، و anti-DNP/IgE به علاوه DNP/HSA، سیتوپلاسم را به وضوح با گرانول‌های ترشحی پر کرد. در زیر میکروسکوپ الکترونی می توان مشاهده کرد که تعداد زیادی گرانول ترشحی در سیتوپلاسم وجود دارد و برخی از گرانول های ترشحی حتی با غشای سلولی ترکیب می شوند که منجر به دگرانولاسیون می شود (شکل 2C-E). پس از پیش تیمار با مرجع 10 میکرومولار، گرانول های ترشحی در سیتوپلاسم به طور قابل توجهی کاهش یافت (شکل 2F-H). این نتایج نشان می‌دهد که مرجع می‌تواند به طور موثری از فعال‌سازی و کاهش دانه‌بندی RBL{13}}H3 تحریک‌شده توسط فعال‌کننده جلوگیری کند.

2.3. Neferine PMA/A را مهار می‌کند23187-افزایش کلسیم داخل سلولی ناشی از RBL-2H3

یون های کلسیم نقش پیام رسان ثانویه را در فرآیند فعال سازی سلول ایفا می کنند. A23187 موثرترین راه برای افزایش نفوذ یون های کلسیم از طریق غشای سلولی و تحریک فعال شدن ماست سل ها است. فوربول میریستات استات (PMA) می‌تواند پروتئین کیناز Cand را فعال کند و یون‌های کلسیم داخل سلولی را برای افزایش اثر A23187 افزایش دهد. افزایش یون های کلسیم در ماست سل ها نیز عامل مهمی در القای فعال سازی ماست سل ها در نظر گرفته شده است به طوری که بر دگرانولاسیون ماست سل ها تأثیر می گذارد و سیتوکین ها و کموکاین های التهابی بیشتری آزاد می کند.عوارض جانبی cistanche deserticolaبنابراین، این مطالعه به دنبال بررسی اینکه آیا مرجع می‌تواند غلظت یون کلسیم در RBL{0}}H3 را هنگامی که التهاب را مهار می‌کند، مهار کند یا خیر. گروه آزمایش به مدت 20 دقیقه با یا بدون پیش تیمار مرجع تقسیم شد و 1 میلی مولار CaClz و PMA/A23187 برای تحریک و فعال کردن RBL-2H3 اضافه شد. نتایج تجربی نشان داد که تیمار RBL{7}}H3 با غلظت‌های مرجع مختلف به تنهایی بر افزایش غلظت یون کلسیم داخل سلولی تأثیری نداشت. در گروه هجوم Ca2t ناشی از PMA/A، غلظت یون کلسیم داخل سلولی به طور قابل توجهی افزایش یافت. سلول های RBL{11}}H3 به مدت 20 دقیقه با مرجع (3 میکرومولار و 10 میکرومولار) پیش تیمار شدند و غلظت یون کلسیم به طور قابل توجهی کاهش یافت (شکل 3).

2.4. Neferine بیان mRNA سیتوکین های التهابی در PMA/A23187 تحریک شده توسط RBL{4}}H3 را کاهش داد.

پاسخ ایمنی پوست باعث افزایش تعداد ماست سل ها در بدن می شود و سپس ماست سل ها سیتوکین های پیش التهابی تولید می کنند و پیشرفت بیماری را تسریع می کنند. سیتوکین های پیش التهابی، به ویژه TNF-a، IL-6، IL-1 و IL-8 نه تنها باعث التهاب می شوند بلکه باعث نفوذ لکوسیت، تشکیل گرانولوم و فیبروز بافتی می شوند. PMA/A23187 روی ماست سل ها تأثیر می گذارد و آنها را وادار به تولید IL-16، IL-6، TSLP و TNF- می کند و باعث التهاب مرتبط با آلرژی می شود. بنابراین، RBL{12}}H3 را با مرجع به مدت 20 دقیقه پیش درمان کردیم و با PMA/A23187 به مدت 6 ساعت تحریک شدیم تا تشخیص دهیم آیا مرجع می‌تواند بیان mRNA IL{18}}، IL{{{{ 19}}، TSLP و TNF-a. نتایج نشان داد که در گروهی که تنها با مرجع درمان شدند، بیان mRNA سیتوکین تحت تأثیر قرار نگرفت و بیان mRNA در گروهی که التهاب را با PMA/A23187 القا کرد، به طور قابل توجهی افزایش یافت. در گروهی که با مرجع درمان شدند، مشاهده شد که سطوح بیان mRNA IL{22}}، IL{23}}، TSLP و TNF-a به طور قابل توجهی سرکوب شد (شکل 4).

2.5.نفرین PMA/A را مهار می‌کند23187-فسفوریلاسیون القایی مسیر MAPK در RBL{3}}H3

مطالعات قبلی اشاره کرده اند که ماست سل ها برای فعال کردن MAPK نیاز به آزاد کردن یون های کلسیم درون سلولی دارند. علاوه بر این، مسیر سیگنالینگ MAPK بیان مونوسیت ها، لنفوسیت های T، لنفوسیت های B، سیتوکین ها و کموکاین ها را تنظیم می کند و باعث ایجاد خودایمنی می شود. این مکانیسم شبیه مسیر فعال سازی PMA/A23187 است. در این مطالعه، بررسی کردیم که آیا مرجع می‌تواند در تنظیم مسیرهای MAPK شرکت کند یا خیر. غلظت‌های مختلف مرجع (1،3 و 10 میکرومولار) به RBL{4}}H3 را به مدت 20 دقیقه درمان کردیم و سپس با PMA/A23187 به مدت 30 دقیقه برای القای التهاب تحریک شد. نتایج نشان داد که وقتی RBL{9}}H3 با غلظت‌های مختلف مرجع به تنهایی درمان شد، فعال‌سازی پروتئین‌های p38، JNK و ERK تحت تأثیر قرار نگرفت. در گروهی که تنها با PMA/A23187 درمان شدند، متوجه شدیم که پروتئین‌های p38، JNK و ERK فعال شده‌اند و فسفوریلاسیون قابل‌توجهی دارند. در گروه پیش تیمار شده با مرجع، مشاهده شد که برای غلظت های بالاتر مرجع، فسفوریلاسیون پروتئین های p38، JNK و ERK به طور قابل توجهی کاهش یافت (شکل 5A-C).

2.6.نفرین PMA/A را مهار می‌کند23187-فسفوریلاسیون ناشی از مسیر NF-B در RBL{4}}H3

بیان سایتوکاین های پیش التهابی به فعال شدن فاکتور رونویسی NF-kB در ماست سل ها بستگی دارد. هنگامی که پروتئین IKB فسفریله و تجزیه شد، NF-kB آزاد شد و به هسته مهاجرت کرد و با عناصر پاسخگو به DNA مربوطه متصل شد و رونویسی واسطه های پیش التهابی را ترویج کرد. بسیاری از سیتوکین ها و کموکاین ها تولید شدند که پاسخ ایمنی، تمایز و التهاب را تنظیم می کنند. بنابراین، ما بررسی کردیم که آیا پیش تیمار با مرجع بر فسفوریلاسیون پروتئین ناشی از PMA/A23187 تأثیر می‌گذارد یا خیر. ما غلظت های مختلف مرجع (1،3، و 10 میکرومولار) را به RBL-2H3 درمان کردیم. پس از 20 دقیقه، PMA/A23187 RBL{12}}H3 را برای 1 ساعت یا 2 ساعت تحریک کرد تا التهاب ایجاد کند. نتایج نشان داد که تیمار RBL{16}}H3 با غلظت‌های مرجع مختلف به تنهایی بر فسفوریلاسیون IKBa و NF-KB تأثیری نداشت. هنگامی که PMA/A23187 برای تحریک استفاده شد، افزایش قابل توجهی در فسفوریلاسیون IkBo و NF-KB مشاهده شد. در گروه پیش تیمار شده با مرجع، مشخص شد که فسفوریلاسیون IkBa (شکل 6A) و NF-KB (شکل 6B) به طور قابل توجهی کاهش یافته است.

2.7. اثر Neferine بر 2،{3}}درماتیت آتوپیک ناشی از Dinitrochlorobenzen (DNCB)

یک مدل حیوانی برای تحقیقات بیماری، DNCB یک محرک نماینده است که باعث درماتیت آتوپیک می شود[25]. آزمایش ما از 1 درصد دینیتروکلروبنزن (DNCB) حل شده در 75 درصد الکل برای القای مرحله اول واکنش حساس استفاده می کند. مرجع (3mg/kg و 10 mg/kg) و دگزامتازون (Dexa,{{1{15}}}}.2 mg/kg) محلول در DMSO در روز پنجم به مدت ده روز به صورت داخل صفاقی تجویز شد. . در روزهای 8، 1 و 14، 0.5 درصد DNCB به عنوان مرحله دوم القای التهاب اعمال شد. موش ها به چهار گروه تقسیم شدند - گروه کنترل، گروه DNCB، گروه تحت درمان با مرجع و گروه تحت درمان با دگزامتازون - و سپس، پس از مقایسه بین گروه ها، تفاوت ها مشخص شد. ما مشاهده کردیم که DNCB یک واکنش التهاب پوستی آتوپیک را در پوست موش ایجاد می کند. پس از استفاده از DNCB، مشخص شد که پوست موش ها قرمزی و پوسته پوسته شدن را افزایش می دهد. همه اینها به دلیل تکثیر غیر طبیعی کراتینوسیت، نفوذ و تجمع سلول های ایمنی است. گروهی که با mg/kg 3 مرجع و دگزامتازون 0.2mg/kg به مدت چهار روز درمان شدند قرمزی را کاهش دادند. ما تا روز 15 به مشاهده وضعیت پوست پشتی موش ها ادامه دادیم. در مقایسه با گروه کنترل، گروه DNCB دارای شرایط پوستی شدید قرمز و متورم بود و شوره و زخم هایی وجود داشت که به نظر می رسید ناشی از خارش و درد باشد. . ما می توانیم روند کاهشی را پس از درمان های مرجع و دگزامتازون پیدا کنیم (شکل 7A). از رنگ آمیزی آبی تولویدین برای مشاهده تعداد ماست سل های تجمع یافته استفاده شد. هنگامی که ماست سل ها در زیر میکروسکوپ مشاهده شدند، بنفش ظاهر شدند. از نظر کمی می توان نشان داد که بسیاری از ماست سل های نفوذ و تجمع در درم در گروه تجربی DNCB نسبت به گروه کنترل به طور قابل توجهی افزایش یافته است. در گروه تحت درمان با مرجع و دگزامتازون، نفوذ، تجمع و تعداد ماست سل ها کاهش یافت (شکل 7B، C).

2.8. Neferine بیان mRNA مولکول های مرتبط با سد را پس از درمان DNCB بهبود می بخشد.

التهاب مرتبط با پوست ناشی از AD می تواند باعث عملکرد غیر طبیعی سد پوستی شود. اگر سد پوستی معیوب باشد، آنتی ژن ها یا محرک ها راحت تر به اپیدرم پوست نفوذ کرده و وارد بدن می شوند تا واکنش های مربوط به ایمنی را القا کنند. در عین حال، تولید پروتئین های تمایز شامل فیلاگرین، لوریکین و اینولوکرین سرکوب خواهد شد. بنابراین، بازگرداندن سد پوستی آسیب دیده برای پیشگیری و درمان AD بسیار مهم است [26]. در مطالعه خود، از مراجع برای مداخله در مدل حیوانی درماتیت آتوپیک ناشی از DNCB استفاده کردیم. پس از قربانی کردن موش ها، بافت پوست پشتی برای تجزیه و تحلیل RI-qPCR به منظور ارزیابی اینکه آیا مرجع می تواند کاهش بیان mRNA در فیلاگرین، لوریکین و اینولوکرین را پس از درمان DNCB بهبود بخشد، پایه گذاری شد. نتایج نشان داد که گروه آزمایشی DNCB بیان mRNA فیلاگرین، لوریکین و اینولوکرین را به طور قابل توجهی نسبت به گروه کنترل کاهش داد. بیان mRNA فیلاگرین، لوریکین و اینولوکرین در گروهی که با مرجع و دگزامتازون درمان شده بودند در مقایسه با گروه DNCB به طور قابل توجهی افزایش یافت (شکل 8).

ما همچنین ثابت کردیم که مرجع دارای اثر خراش ضد حساسیت است. ما از یک عامل دگرانولاسیون ماست سل، ترکیب 48/80، برای القای رفتار خاراندن در موش BALB/c استفاده کردیم. همانطور که در شکل 9 نشان داده شده است، ما دریافتیم که درمان مرجع رفتار خراش ناشی از ترکیب 48/80 (50 ug/site) را مهار می کند. تجویز مکرر دوزهای مرجع کمتر و بالاتر (3 و 10 میلی گرم بر کیلوگرم) به مدت 5 روز متوالی تعداد خراش های ناشی از ترکیب 80/48 را کاهش داد.