بینش مکانیکی در مورد محافظت عصبی و بهبود حافظه ناشی از دیوسمین در مدل موش صحرایی داخل بطنی-کوئینولینیک اسید: احیای عملکردهای میتوکندری و آنتی اکسیدان ها قسمت 3

2. مواد و روش ها

2.1. حیوانات تجربی. تحقیقات توسط IAEC تحت پروتکل شماره مجاز است. ASCB/IAEC/14/20/145. موش های AlbinoWistar (در هر جنس، 200 گرم تا 250 گرم، سن 8 تا 9 ماه) در محفظه های مکعبی پلی پروپیلن با اندازه معمولی تحت تنظیمات مصنوعی دما (2 ± 23 درجه)، توالی های تاریک/روشن 12:12 ساعت، و نگهداری شدند. رطوبت (10 ± 40٪) در خانه حیوانات سازمانی. جوندگان با مواد غذایی مغذی استاندارد (سازندگان آشیرواد، پنجاب) و آب تصفیه شده به میل تغذیه شدند.

رابطه زن و مرد و حافظه همیشه توجه زیادی را به خود جلب کرده است. به خوبی شناخته شده است که هورمون های مردانه نقش مهمی در رشد جسمانی، حفظ سلامتی و ارتقای رشد جنسی و عملکرد جنسی دارند. علاوه بر این، مطالعات اخیر نشان داده است که هورمون های مردانه ارتباط نزدیکی با حافظه دارند.

مطالعات نشان داده است که مردان در برخی وظایف حافظه بهتر از زنان عمل می کنند. به عنوان مثال، معمولاً مردان در حافظه فضایی بهتر از زنان عمل می کنند و دلیل آن تأثیر هورمون های مردانه بر هیپوکامپ است. هیپوکامپ ناحیه ای در مغز است که حافظه فضایی را پردازش می کند. هورمون های مردانه می توانند عملکرد هیپوکامپ را تقویت کنند و در نتیجه توانایی حافظه فضایی مردان را بهبود بخشند.

با این حال، هورمون های زنانه نیز تأثیر مثبتی بر حافظه دارند. مطالعات نشان داده اند که هورمون های زنانه می توانند بیان ژن های مرتبط با حافظه را در مغز تقویت کنند و تعداد و عملکرد نورون ها را در هیپوکامپ افزایش دهند و در نتیجه حافظه زنان را بهبود بخشند. علاوه بر این، هورمون های زنانه می توانند استرس را از بین ببرند، مرگ سلول های عصبی را مهار کنند، از نورون های مغز محافظت کنند و حافظه زنان را بیشتر بهبود بخشند.

این نشان می دهد که هم هورمون های مردانه و هم هورمون های زنانه تأثیر مثبتی در بهبود حافظه دارند. عملکرد حافظه مردان و زنان متفاوت است که هر کدام مزایا و معایب خود را دارند، اما به این معنا نیست که مردان حافظه بهتری نسبت به زنان دارند یا زنان حافظه بهتری نسبت به مردان دارند. بنابراین، ما نباید از جنسیت به عنوان معیار حافظه استفاده کنیم. هر کس باید به نفع خود بازی کامل کند و حافظه خود را دائماً بهبود بخشد.

در نهایت چه زن و چه مرد باید به سلامت جسمی و وضعیت روحی خود توجه کنیم و راه درستی را برای بهبود حافظه خود انتخاب کنیم. به عنوان مثال، یادگیری مداوم چیزهای جدید، ایجاد عادات زندگی منظم و حفظ ثبات عاطفی می تواند تأثیر مثبتی بر بهبود حافظه داشته باشد. بیایید با هم کار کنیم تا به طور مداوم روش هایی را برای بهبود حافظه و ایجاد آینده ای بهتر برای خود کاوش و تمرین کنیم. مشاهده می شود که باید حافظه خود را تقویت کنیم. سیستانچ می تواند حافظه را به میزان قابل توجهی بهبود بخشد زیرا سیستانچ یک داروی سنتی چینی با اثرات منحصر به فرد بسیاری است که یکی از آنها بهبود حافظه است. اثر سیستانچ از ترکیبات فعال مختلفی که شامل تانیک اسید، پلی ساکاریدها، گلیکوزیدهای فلاونوئید و غیره است، ناشی می شود.

روی 10 روش برای بهبود حافظه کلیک کنید

تمام روش های حیوانی به طور انحصاری طبق دستورالعمل های CPCSEA، GOI، دهلی نو انجام می شود. نگهبانان و نگهبانان حیوانات در مورد رژیم‌های درمانی مختلف که برای گروه‌های حیوانی تسهیل می‌شد کور شدند. کارآزمایی‌های تحقیقاتی بر روی حیوانات انجام شد، که حداقل یک دو هفته از مدت زمان آشنایی را با موفقیت انجام داد.

همه تحقیقات با استفاده از حیوانات بین 0900- و 1600-ساعت ساعت در روز انجام شد.2.2. داروها و مواد شیمیایی. دیوسمین (DSM: 520-27-4)، اسید کینولینیک (QA: 89-00-9)، و آنالیت‌های استاندارد از Merck (هند) به دست آمدند.

سدیم دی هیدروژن فسفات (NaH2PO4)، هیدروکسید سدیم (NaOH)، پتاسیم فسفات دی بازیک (K2HPO4)، نیتروبلوئترازولیوم (NBT)، فنازین متوسولفات (5- متیل فنازینیم متیل سولفات)، اتیلن دی آمین اسید، آلبومین اتیلن دیامینت ({SA) 5}[4-(2-هیدروکسی اتیل)پیپرازین-1-ایل]اتان سولفونیک اسید (HEPES)، 1،{10}}بیس[2-[bis(کربوکسی متیل) آمینو]اتوکسی]اتان (EGTA)، ریبوفلاوین، سیانید سدیم (NaCN)، ناتریومازید (NaN3)، تتراسدیم پیروفسفات، پراکسید هیدروژن (H2O2)، NADH دی سدیم (DPNH)، NADPH تترا سدیم (کوآنزیم II)، اسید تتراسدیم احیا شده، نمک تتراسدیم احیا شده فولین و فنل سیوکالتئو (FCR) و معرف اسید سولفوسالیسیلیک ({15}}SSA) (HiMedia Laboratories, Maharashtra, India)؛ دی گلیسین، اسید استیک یخچالی (CH3COOH)، معرف المان (3-کربوکسی-4-نیتروفنیل دی سولفید، DTNB)، آزابنزن (C5H5N)، و سدیم لوریل سولفات (SLS) (LobaChemie، بمبئی، هند)؛ 4،6-دی هیدروکسی{23}}مرکاپتوپیریمیدین (2-TBA)، کربنات دی سدیم (Na2CO3)، و (2-}مرکاپتواتیل) تری متیل آمونیوم یدید استات (مواد شیمیایی TCI، هند). سولفات روی (ZnSO4)، نمک راشل (سدیم پتاسیم L(+) - تارتارات)، 2-(1-نفتیلامین) اتیلامین دی هیدروکلراید، اسید نیتروژن سدیم (NaNO2) و p-aminobenzenesulfonamide (SiscoResearch Laboratories، ) بوتیل الکل (Fisher Scientific, India) استفاده شد.2.3. تزریق داخل بطنی کینولینیک اسید.

حیوانات با تزریق داخل صفاقی کتامین (90 میلی گرم بر کیلوگرم) و زایلازین (10 میلی گرم بر کیلوگرم) کوکتل با استفاده از آب استریل برای تزریق، تحت بیهوشی قرار گرفتند. اجسام در حالت خمیده بر روی یک بالشتک گرم کننده قرار داده شده بود و سر در قسمت یک ابزار جراحی استریوتاکسیک قرار داشت. .e اسکالپ در نقطه آنها ساژیتال برش داده شد و جمجمه با جمع کردن پوست از هم جدا شد.

هر یک از دو بطن جانبی به طور خودسرانه انتخاب شد، و در جمجمه، استخوان جداری منقطع شد (مختصات استریوتاکسی -0.8 میلی‌متر قدامی خلفی از برگما، 1.5 ± میلی‌متر مدیولترال از بخیه میانی ساژیتال، و 3.6 ± میلی‌متر پشتی اتسوونترال از بخیه‌های پاریتوکسیک. ) برای ایجاد سوراخ سوراخ [21].

در روز اول، محلول کینولینیکاسید (QA) به تازگی (240 نانومول) در PBS (Na{1}}K+ [PO4]{4}} بافر سالین، pH 7.4) ساخته شد و به تدریج با استفاده از میکروسرنگ همیلتون با سرعت جریان خون تزریق شد. 1 میکرولیتر در دقیقه در بطن مغزی چپ یا راست بطن مغز در مدت زمان 5 تا 6 دقیقه با حجم تزریق 5 میکرولیتر ICV-vehicle [22].

پس از تلقیح کل دارو، میکروسوزن به مدت 4 تا 5 دقیقه از جای خود خارج نشد تا امکان انتشار دارو در مایع مغزی نخاعی فراهم شود و از برگشت آن جلوگیری شود. حجم معادل .e (10 میکرولیتر) از وسیله نقلیه PBS در شمرات هایی که به طور یکسان عمل می کردند، ICV تجویز شد، اما QA تزریق نشد.

پس از تزریق دارو، سوراخ ها با استفاده از ماده لوتینگ (روی فسفات، PYRAX®) ترمیم شدند و دوخت پوست انجام شد. برای جلوگیری از آلودگی (رشد باکتری)، Neosporin® به طور پیش فرض استفاده شد.

سپسیس پس از عمل توخالی، Orizolin (Zydus Cadila)، دوز 3{2}} میلی‌گرم بر کیلوگرم (IP)، تجویز شد. برای جلوگیری از هیپوترمی پس از جراحی، برای هر موش محیطی گرم (5/0 ± 37 درجه) فراهم شد. به هر موش پس از عمل جراحی به مدت هفت روز، غذای نیمه جامد (داخل قفس) و آب رایگان داده شد و به طور مجزا در یک قفس مجزا (30 × 23 × 14 سانتی متر مکعب) قرار گرفتند.

2.4. پروتکل آزمایشی DSM با دوزهای 5{4}}و 100 میلی‌گرم بر کیلوگرم به ازای هر وزن بدن (وزن وزن) در موش‌ها از طریق مسیر داخل صفاقی (IP) با استفاده از 0.5 درصد دی متیل سولفوکسیدیوکل در نرمال سالین (دوز-حجم 5 میلی‌لیتر/کیلوگرم) [17] تزریق شد.

حیوانات به طور تصادفی در 5 خوشه در حالت تک سوکور (n � 5) قرار گرفتند: (i) شم (S)، (2) QA، (iii) QA + DSM50، (iv)QA + DSM100، و (v) QA + DNP. موش ها در روز اول تحت تزریق داخل بطن مغزی QA (QA-ICV) یا جراحی ساختگی قرار گرفتند.

DSM برای 21 روز متوالی روزانه 120 دقیقه پس از QA-ICV از روز اول به بعد اجرا شد. دونپزیل (DNP) به عنوان یک داروی استاندارد در این مطالعه مورد استفاده قرار گرفت و به مدت 21 روز متوالی (دوز 3 میلی گرم بر کیلوگرم، داخل صفاقی) به موش های صحرایی تزریق شد.

حیوانات در گروه شاهد و کنترل QA از روز 1 تا 21 با وسیله نقلیه (دی متیل سولفوکسید استریل 0.5 درصد در نرمال سالین در دوز-حجم 5 میلی لیتر بر کیلوگرم) از روز 1 تا 21 استفاده شدند. شکل 1.2.5. فعالیت حرکتی

در تمام خوشه های موش، میانگین فعالیت حرکتی با استفاده از دستگاه اکتوفوتومتر به مدت 5 دقیقه ثبت شد. یک حیوان جداگانه به مدت 3 دقیقه در اکتوفوتومتر قرار گرفت. سپس به موش‌های .e 5 دقیقه داده شد و نتایج به‌صورت شمارش در هر 5 دقیقه بیان شد [11].2.6. تست روتارود.

In rodents, the rotarod test typically evaluates the equilibrium and muscle synchronization facets of sensorimotor functions. .e rats were presented to acquisition trials until their ability to run reached >60 ثانیه در چرخش میله با 9 دور در دقیقه (دور در دقیقه).

پس از آزمایش‌های اکتسابی، یک موش جداگانه روی شفت استوانه‌ای قرار گرفت و سرعت چرخش با یک فاصله ثابت 10 ثانیه‌ای از 6 دور در دقیقه (سرعت اولیه) به 30 دور در دقیقه (سرعت پایانی) افزایش یافت که بیش از 50 ثانیه بود. .e میانگین تأخیر سقوط (بر حسب ثانیه) از شفت استوانه ای گردان در نتایج بیان شد.2.7.

تحلیل ردپای اصل پشت انجام آنالیز ردپا در موش ها، ارزیابی ناهنجاری های راه رفتن است.

برای رد پا، پای موش در چهار رنگ متنوع غذایی غیرسمی غوطه ور شد و اجازه داده شد در مسیر پیاده روی شیب دار (70 سانتی متر × 10 سانتی متر × 8 سانتی متر) اجرا شود. پایه باند با ورقه سلولزی رنگ سفید محصور شده بود. موش‌های صحرایی برای به دست آوردن ردپاهای واضح به سمت یک بخش کم نور در سربالایی در انتهای باند حرکت کردند. پس از انجام آزمایشات، رنگ .e به آرامی با استفاده از آب ولرم از هر حیوان جدا شد. ردپاهای .e اسکن شدند و "طول گام" با استفاده از یک خط کش استاندارد اندازه گیری شد. طول گام با محاسبه فاصله بین قرارگیری متوالی پنجه موش یکسان [11] تعیین شد.

2.8. وظیفه تشخیص شی جدید (NORT). پروتکل استاندارد همانطور که توسط کومار و بانسال [23] ارائه شد، دنبال شد.

ORT یک کهن الگوی برونگرای غیرسودآور و غیر خصمانه است که برای ارزیابی حافظه جمعی نوع کاری مورد استفاده از طریق هدایت کاوشگر تکانشی جوندگان استفاده می شود. بررسی .e در یک ظرف مکعبی روی پشت بام (80 سانتی‌متر × 42 سانتی‌متر × 62 سانتی‌متر) انجام می‌شود، که در منطقه‌ای ساکت قرار دارد، که توسط یک LED 60 واتی برای مدیریت روشنایی ثابت در ظرف روشن می‌شود.

اقلام چوبی استوانه ای (سفید)، هرمی (قرمز)- و مکعبی (سیاه) شکل (به ارتفاع 12 سانتی متر) (در سه قلوهای یکسان) جامد و وزن کافی برای بی حرکت کردن آنها توسط جوندگان بود. NORT در روز شانزدهم در 3 مرحله (S) انجام شد: سازگاری (S1)، اکتساب (S2)، و مرحله معاینه تشخیص شی جدید (احتباس) (S3).

در طول S1، سه روز متوالی قبل از آزمایش برای کشف پایه کف خالی کشتی (5 دقیقه) توسط موش‌ها صادر شد. پس از تکمیل S1، حیوان منفرد به هر مجموعه ای از اقلام جامد در مرحله یادگیری (S2) عادت کرد.

چیزهای دوقلو در 2 زوایای متضاد رگ‌ها قرار گرفتند (9 سانتی‌متر تا 11 سانتی‌متر فاصله از باروهای جانبی). به طور جداگانه، یک جونده در مرکز رگ قرار گرفت و روبروی دو جسم جامد قرار گرفت و به مدت 5 دقیقه مجاز به کشف دو مورد مشابه بود. هدایت پوزه در نزدیکی جسم در فاصله کمتر یا مساوی 2 تا 3 سانتی متر یا تماس فیزیکی با اقلام با پوزه به عنوان یک رفتار تحقیقی در نظر گرفته شد.

پس از S2، جونده در خانه ای قرار گرفت که توسط یک فرورفتگی بین آزمایشی (ITR) 60 دقیقه ای محصور شده بود.

هر اقلام تک جامد ارائه شده در S2 با یک ماده جامد متفاوت تعویض شد و جوندگان دوباره به آیتم‌های دوقلو ارائه شدند، به عنوان مثال، یک کپی از آیتم آشنا و آیتم مختلف.. کل ادغام‌ها و موقعیت‌های اقلام به انحراف رسیدند. تعصب احتمالی ناشی از تمایل به تنظیمات یا موارد خاص را کاهش دهید. ظرف و اقلام جامد پس از هر بررسی به دقت پاک می شوند (الکل اتیلیک 15 درصد و پارچه خشک) تا علائم بو را مهار کنند. .e periodexpended کشف هر آیتم در S2 و S3 با استفاده از کرونومتر ثبت شد. .e مدت زمان صرف شده برای بررسی دو مورد منطبق در S2 (I1 � Ii{1 + Ii2) و مدت زمان صرف شده برای بررسی دو مورد غیرمشابه، یعنی آشنا و متفاوت، در S3 (I2 � Ii3 + Ib) ثبت شد. واریانس در مدت زمان صرف شده برای بررسی آیتم های مختلف و مدت زمان بررسی آیتم آشنا (Ib-Ii3 � DI) حفظ حافظه جمعی را آشکار می کند.

DI (شاخص تمایز)/ مدت(های) S3 بررسی هر دو مورد آشنا و جدید (DI اصلاح شده) جزئی‌ها را با واریانس در بررسی کامل بهبود می‌بخشد و تمایل به موارد مختلف را در مقایسه با موارد آشنا نشان می‌دهد {DI � (Ib-Ii3). )/(Ii3 + Ib)}. حافظه جمعی با کمی کردن مهارت جوندگان برای جدا کردن چیزهای آشنا/جدید در S3 ارزیابی شد و به عنوان DI (اصلاح شده برای دوره کلی تحقیق در S3) بیان شد [24].

2.9. موریس واتر ماز (MWM). پروتکل استاندارد .e همانطور که توسط کومار و بانسال ارائه شده است [25] دنبال شد. MWM حافظه فضایی را با آزمایش‌های شنا قضاوت می‌کند، که در آن جوندگان راهی برای فرار به یک سکوی مخفی پیدا می‌کنند.

یک مخزن دایره ای سیاه رنگ (قطر 2 متر، ارتفاع 0.6 متر) دارای آب (1 ± 25 درجه) تا عمق 0.3 متر بود. مخزن آب در جهت عقربه های ساعت به 4 ناحیه مشابه (R1، R2، R3، و R4) با استفاده از دو الیاف نایلونی که به صورت عمود بر محیط بالایی مخزن محکم شده بودند، جدا شد.

یک گلدان (10.5 × 10.5 سانتی متر) در زیر آب (1 سانتی متر زیر آب) در منطقه مخزن R4 قرار گرفت. نقطه .e از دیس دست نخورده در تمام طول دوره کسب باقی ماند.

هر موش با چهار دور اکتساب سریال (5 دقیقه ITR) هر روز ارائه شد. جونده .e به آرامی در مخزن آبی که روی دیواره مخزن قرار داشت رها شد، با هر آزمایش از R1-R4، R{3}}R1، R3-R2، و R{{{ 7}}R3 در روزهای 1 تا 4 به ترتیب، و 120 ثانیه برای شناسایی سکوی زیر آب مجاز بود. جوندگان .e به مدت 20 ثانیه روی سکو استراحت کردند.

عدم شناسایی سکو در عرض 120 ثانیه نشان دهنده قرار دادن دستی رتسون روی سکو بود و سپس به مدت 20 ثانیه روی سکو مجاز بود. زمان تأخیر فرار (ELT) مدت زمان (های) کشف دیس پنهان در مخزن آب است.

یادگیری فضایی با روز اول در مقابل روز چهارم ELT مشخص شد. در آزمایش پروب (روز پنجم)، جوندگان مخزن را به مدت 120 ثانیه بررسی کردند، اما از سکو محروم شدند. میانگین مدت زمان صرف شده در کل مخزن (4 منطقه) ثبت شد. میانگین مدت زمان صرف شده در R4 (TSTQ:زمان صرف شده در ربع هدف) کاوش برای سکوی پنهان به عنوان شاخص حافظه مرجع در نظر گرفته شد. تنظیم مقایسه ای مخزن نسبت به اقلام موجود در آزمایشگاه که به عنوان علائم بصری عمل می کنند و موقعیت محقق دست نخورده باقی می ماند [26].

2.10. تخمین پارامترهای بیوشیمیایی. پس از تکمیل معاینات رفتاری، مغز کامل ترات‌ها جمع‌آوری و بر روی تکه‌های یخ پودر شده قرار داده شد و سپس با حمام کردن با نمک استریل انجماد (ایزوتونیک308 mOsmol/l NaCl) بقایای و خون خارج شد.

همگن سازی کل مغز فوراً در یک بافر جداسازی انجماد (pH 7.4) با ترکیب 215 میلی مولار D-مانیتول، 2{14}} میلی مولار 2-[4-(2-هیدروکسی اتیل) انجام شد. )پیپرازین-1-ایل]اتان سولفونیک اسید، 1 میلی‌مولار 1،2-بیس[2-[بیس(کربوکسی متیل) آمینو]اتوکسی]اتان، 75 میلی‌مولار ساکاروز و 0.1 درصد BSA. هموژنه .e در 4 درجه با نیروی 13000 × گرم به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ شد. پلت .e رد شد و مایع رویی به دو قسمت جدا شد و مجدداً (4 درجه) با نیروی 13000 × گرم به مدت 5 دقیقه تریفیوژ شد. گلوله میتوکندری خام جدا شد و دوباره در بافر جداسازی با 1،{23}}bis[{{24}bis(کربوکسی متیل) آمینو]اتوکسی] اتان در 12500 × گرم به مدت 11 دقیقه (4 درجه) سانتریفیوژ شد. رسوب نیمه جامد به دست آمده از میتوکندری های غیرآلوده در بافر جداسازی (pH 7.4) حاوی 75 میلی مولار ساکاروز، 20 میلی مولار 2-[4-({{35}هیدروکسی اتیل)پیپرازین{36} مجدداً معلق شد. yl]اتان سولفونیکاسید و 215 میلی مولار D-مانیتول [27].

بعداً برای تعیین نشانگرهای بیوشیمیایی با استفاده از روش‌های استاندارد از کسر میتوکندری هموژنه کل مغز استفاده شد. 2.11. تخمین کمپلکس میتوکندری.

2.11.1. NADH: فعالیت Ubiquinone Oxidoreductase. میزان فعالیت کمپلکس I (NADH دهیدروژناز) (nmol NADH اکسید شده/ دقیقه/میلی گرم پروتئین) با پیروی از تکنیک کینگ و هوارد [28] تعیین شد. تولید اکسیداتیو NAD+ از NADH با کاهش سیتوکروم c همراه است. ترکیب سنجش .e شامل سیتوکروم c (10.5 میلی مولار)، 6 میلی مولار -نیکوتین آمید آدنین دی نوکلئوتید (DPNH) حل شده با استفاده از بافر 2 میلی مولار دی گلیسین و بافر دی گلیسین (0.2 M، pH 8.5) بود.

یک کسر میتوکندری قابل حل به معجون سنجش برای تحریک واکنش اضافه شد. تغییرات .e در چگالی نوری (OD) در λmax 550 نانومتر به مدت 120 ثانیه دنبال شد.

2.11.2. سوکسینات: میزان فعالیت سوکسینات دهیدروژناز (کمپلکس II) Ubiquinone Oxidoreductase با پیروی از تکنیک کینگ [29] اندازه‌گیری شد.

اکسیداسیون سوکسینیک توسط یک گیرنده الکترونی ساختگی، پتاسیم سیانوفرات (K3Fe(CN)6) تحریک می شود. ترکیب سنجش .e شامل اسید سوکسینیک (0.63 M)، 1% BSA، K3Fe(CN)6 (0.036 M)، و Na+-K+ [PO4]{12}} بافر (0.23 M، pH 7.6). یک کسر میتوکندری قابل حل به معجون سنجش برای تحریک واکنش اضافه شد. تغییرات .e در OD در حداکثر 420 نانومتر به مدت 120 ثانیه دنبال شد. 2.12. تعیین بیومارکرهای استرس اکسیداتیو2.12.1. مواد واکنش دهنده اسید یوباربیتوریک (TBARS).

برای ارزیابی TBARS (nmol در هر میلی گرم پروتئین) [30]، ترکیب تجزیه و تحلیل (مقدار نهایی ~4 میلی لیتر) شامل0.1{19}} میلی لیتر مغز همگن، 1.51 میلی لیتر 4،{{ 7}}دی هیدروکسی{8}} مرکاپتوپیریمیدین (0.8٪)، 200 میکرولیتر SLS (8.18٪)، 1.49 میلی لیتر اسید گلاسیال استیک (21٪، pH 3.51)، و 0.71 میلی لیتر آب دییونیزه شده در دمای 96 درجه تحت حرارت حمام آب قرار گرفتند. 60 دقیقه.

نسبت 15:1 بوتیل الکل/آزابنزن (1/5 میلی‌لیتر) در یک ترکیب آنالیز که در 4،{5}} × Gpower (10 دقیقه) سانتریفیوژ شد، تکمیل شد و مایع رویی جدا شد.

با اسپکتروفتومتر دو پرتوی UV1700 (شیمادزو، ژاپن)، کروموفور مالون دی آلدئید{2}}، {3}}دی هیدروکسی-2- مرکاپتوپیریمیدین OD در طول موج (λmax ± 532 nm × 5.5 nm) و 5 ε × 532 ارزیابی شد. 105/M/cm (ضریب خاموشی مولی) برای محاسبه 4،{10}}دی هیدروکسی{11}}مرکاپتوپیریمیدین ترکیبات اضافی اعمال شد.

2.12.2. کاهش سطح گلوتاتیون (Lc-Glutamyl-L-Cysteinyl-glycine). روش المن [31] برای ارزیابی محتوای ال-گلوتاتیون (GSH) اجرا شد. مخلوط آزمایشی شامل هموژن (1.1 میلی‌لیتر) و 1 میلی‌لیتر 2-هیدروکسی-5-سولفوبنزوئیک اسید 4 درصد ({16}}SSA) به مدت 11 دقیقه با توان 2500 × گرم سانتریفیوژ شد (4 درجه) .

بعداً، 2.8 میلی‌لیتر Na{2}}K+[PO4]{5}} بافر (51.2 میلی‌مولار، pH 7.77) و {{1{14}}}}.21 میلی‌لیتر 3-کربوکسی{13 }}نیتروفنیل دی سولفید ({19}}.12 میلی مولار، pH 7.89) با مایع رویی جدا شده در بالا (0.12 میلی لیتر) مخلوط شد.

تری پپتید (µmolGSH در هر میلی‌گرم پروتئین) با اسپکتروفتومتر دو پرتو UV1700 (λmax 412 نانومتر) اندازه‌گیری شد. اعمال � 1.36 × 104/M/cm.2.12.3.

فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز فعالیت گلوتاتیون پراکسیداز (GPx) (EC 1.11.1.9) با اجرای تکنیک Mohandas و همکاران ارزیابی شد. [32]. مخلوط تجزیه و تحلیل شامل 100 میکرولیتر از 10 درصد هموژنات، ۱۰۰ میکرولیتر آزید سدیم (1.11 میلی‌مولار)، 100 میکرولیتر EDTA (1.13 میلی‌مولار)، 40 میکرولیتر گلوتاتیون دی سولفید ردوکتاز (GSR، 1 IU/ml) (EC1.8.1.7)، 10 میکرولیتر H2O2 (0.28 میلی مولار)، 40 میکرولیتر Lc-گلوتامیل-L-سیستینیل-گلیسین (1.2 میلی مولار)، 100 میکرولیتر کوآنزیم II نمک تترا سدیم کاهش یافته (0.22 میلی مولار) و 0.12 M 1.49 میلی لیتر Na{40}}K+ [PO4]{43}}بافر (pH 7.4) در یک مقدار کامل 2000 میکرولیتر. اتلاف تترا سدیم کاهش‌یافته با کوآنزیم II در حداکثر 340 نانومتر در دمای 25 درجه ثبت شد. نرخ GPx به عنوان nmol NADPH اکسید شده/دقیقه/میلی گرم پروتئین با استفاده از ε 22/6/103/M/cm محاسبه شد.

For more information:1950477648nn@gmail.com