خصوصیات متابولیت، فعالیت های آنتی اکسیدانی، ضد تکثیر و مهاری آنزیمی Lophira Lanceolata Tiegh. Ex Key Extracts

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

Kouadio Ibrahime Sinan a,1, Lara Safti´c Martinovi´cb,1, Zeljka ˇ Perˇsuri´cb, Sandra Kraljevi´c Paveli´cb, Petra Grbˇci´cb, Dario Matulja b, Ouattara Katinan Etienne c, Mohamadmoho Fawzi, ه، دوینا لوبینه، تاپان بهل ف، گوخان زنگین،*

چکیده

لوفیرا لانسولاتا تیه. کی سابقگیاه استوایی بومی غرب و مرکز آفریقا، گیاهی چند منظوره است که به عنوان الوار مورد استفاده قرار می گیرد و در طب سنتی آفریقا نیز مورد بهره برداری قرار می گیرد. مطالعه حاضر به ارائه خواص داروییلوفیرا لانسولاتاعصاره های پوست برگ و ساقه تهیه شده از روش های مختلف استخراج (انفوزیون، استخراج به کمک هموژنایزر، خیساندن، سوکسله). ترکیب دقیق فیتوشیمیایی، در شرایط آزمایشگاهیآنتی اکسیدانو سنجش ضد تکثیر، و همچنین کلیدآنزیمپتانسیل مهاری عصاره ها (کولین استراز، تیروزیناز، آمیلاز و گلوکوزیداز) مورد بررسی قرار گرفت. پروفایل شیمیایی وجود لانسئولاتین ها و لوفیرون ها را در تمام قسمت های گیاه مورد تجزیه و تحلیل تایید کرد. سطوح بالاتر فنولیک کل (156.42 میلی گرم معادل اسید گالیک (GAE) / گرم برای خیساندن آب)، اسیدهای فنولیک (165.84 میلی گرم معادل کافئیک اسید (CE) / گرم برای خیساندن در آب) و فلاوانول ها (101.51 میلی گرم معادل کاتچین (CAE) / گرم برای سوکسله متانول (MeOH)) در عصاره پوست ساقه مشاهده شد.آنتی اکسیدانآزمایش‌ها مهار قابل‌توجهی رادیکال‌های آزاد و فعالیت‌های کاهش‌دهنده قدرت را برای همه عصاره‌ها نشان دادند، که در میان آنها پوست ساقه بالاترین پتانسیل را نشان داد. عصاره پوست ساقه (مقادیر IC50: 57.55-93.10 ug/ml برای آدنوکارسینوم کولورکتال (HT29) و 78.18-89.58 ug/ml برای رده سلولی سرطان سینه متاستاتیک (MCF7)) نیز اثر ضد تکثیر بهتری نسبت به برگ (47901-47901) نشان داد. برای HT29 و 374.46-943.09 ug/ml برای MCF7) بر روی سلول های سرطانی در حالی که آنها تکثیر در رده های سلولی طبیعی انسان (فیبروبلاست های پوستی طبیعی (HFF)) را القا کردند. در روش مهاری آنزیمی، عصاره متانولی هر دو قسمت گیاه در برابر AChE، BChE (فقط عصاره پوست ساقه) و گلوکوزیداز مؤثر بود.آنزیم ها. با توجه به اثرات ضد تیروزیناز، عصاره برگ متانولی (122.21-131.17 میلی گرم کوجیک اسید معادل (KAE)/g) و تمام عصاره های پوست ساقه (94.58-153.21 mg KAE/g) اثرات بازدارندگی از خود نشان دادند. یافته‌های جمع‌آوری‌شده در اینجا تمایل دارند کاربردهای سنتی را تأیید کنندL. lanceolataو از توسعه داروهای گیاهی بر اساس عصاره های آن حمایت می کند.

گیاه سیستانچاستخراج کردنیک آنتی اکسیدان است

1. مقدمه

طب سنتی آفریقا یکی از قدیمی ترین و متنوع ترین سیستم های مراقبت های بهداشتی است (Mothibe و Sibanda، 2019). برای قرن ها، جمعیت آفریقا از تنوع زیستی منحصر به فرد و غنی گیاهی برای نیازهای مراقبت های بهداشتی خود بهره برداری کرده است. تنوع زیستی گیاهی آفریقا، همراه با دانش ریشه‌دار اتنوبوتانیکی آفریقایی، چندین ترکیب فعال بیولوژیکی جدید به دست آورده است که اکنون اجزای داروهای مدرن هستند. نمونه های قابل توجه عبارتند از وینبلاستین و وین کریستین عوامل ضد تومور مشتق شده از Catharanthus roseus (پروی ماداگاسکار)، یوهیمبین از Pausinystalia Yohimbe و فیزوستیگمین از لوبیا کالابار، دانه های Physostigma venosum (خالد، 20). بنابراین، با علاقه زیاد به داروهای مشتق شده از گیاهان، آفریقا منبع امیدوارکننده ای برای بازیابی موجودات شیمیایی جدید است که می تواند برای توسعه بیشتر داروهای جدید مورد بهره برداری قرار گیرد (نافیو و همکاران، 2017).

لوفیرا لانسولاتا تیه. کی سابق(خانواده Ochnaceae)، که معمولاً به عنوان چوب آهن یا بلوط قرمز شناخته می شود، درختی چند منظوره است که به طور گسترده در ساوانای چوبی مناطق گرمسیری آفریقا پراکنده شده است. این به دلیل ویژگی های دارویی آن در طب سنتی آفریقای غربی شهرت دارد (Dicko et al., 2{9}}17; Etuk and Muhammad, 2010; Mapongmetsem, 2007). این گیاه درختی کوچک تا متوسط ​​است که می‌تواند تا 12 متر ارتفاع داشته باشد، با برگ‌هایی متناوب، دراز و به اندازه 11 تا 45 سانتی‌متر × 2 تا 9 سانتی‌متر و در انتهای شاخه‌های کوتاه یا پیچ خورده قرار گرفته است. . پوست ساقه این گیاه به رنگ خاکستری چوب پنبه ای، خشن و به صورت تکه تکه می شود در حالی که پوسته داخلی آن زرد تا قرمز مایل به قهوه ای است. این گیاه از اکتبر تا ژانویه گل می دهد و میوه آن مخروطی شکل و نسبتاً چوبی به قطر 0.1 سانتی متر با یک دانه دراز است. میوه دهی بین فوریه تا آوریل رخ می دهد (اتوک و محمد، 2010؛ لئاندر و همکاران، 2013؛ Mapongmetsem، 2007).

دانه هایL. lanceolataعمدتاً توسط مردم غرب آفریقا مصرف می شود، جایی که عمدتاً به عنوان روغن خوراکی به نام «روغن منو» استفاده می شود. روغن منی برای اهداف دارویی یا در لوازم آرایشی استفاده می شود. به طور سنتی برای کاهش درماتوز، دندان درد و خستگی عضلانی استفاده می شود و در صابون سازی استفاده می شود. علاوه بر این، این روغن را می توان در فرنی گنجانید یا به عنوان یک مقوی برای تغذیه کودکان استفاده کرد (Mapongmetsem، 2007). در نیجریه، شاخه های جوان تزریق شده برای درمان تب، مشکلات تنفسی و اسهال خونی استفاده می شود (علی و همکاران، 2011). پودر ریشه را می توان با آرد مخلوط کرد و برای درمان یبوست مصرف کرد، در حالی که از معجون آن می توان برای درمان زخم های مزمن استفاده کرد (Onyeto, 2014). سایر کاربردهای قومی دارویی گیاه L. lanceolata شامل درمان درد شکم، اسهال، روماتیسم، بیماری های قلبی عروقی و بیماری های ریوی است (Ali et al., 2011; L´eandre et al., 2013; Mapongmetsem, 2007).

ویژگی های دارویی متنوع ازL. lanceolataتوجه بسیاری از محققین را به خود جلب کرده و از این رو این گونه مورد توجه چندین مطالعه فیتوشیمیایی و فارماکولوژیک قرار گرفته است. تحقیقات فیتوشیمیایی وجود فلاونوئیدها، آلکالوئیدها، گلیکوزیدها، تانن‌ها و ترپن‌ها فراوان را نشان داد (آدو و همکاران، 2007؛ گاربا و یارو، 2015؛ ایگبولی و همکاران، 2015). محققان ثابت کرده اند که L. lanceolata دارای خاصیت ضد مالاریا (Lopatriello et al., 2019)، ضد باکتری (Awachie and Ugwu، 1997)، ضد اسهال، ضد پلاسمودیال (Igboeli و همکاران، 2015)، ضد کرم ضد کرم است. (ندجونکا و همکاران، 2014؛ سامجه و همکاران، 2014)،آنتی اکسیدان(اونیتو، 2014؛ اوسو و همکاران، 2016)، اثرات ضد هیپرگلیسمی (کامیل و همکاران، 2017)، ضد تشنج (گاربا و یارو، 2015) و ضد سل (Nkot و همکاران، 2018). علاوه بر این، چندین مطالعه به منظور ارزیابی ایمنی استفاده از L. lanceolata انجام شده است (Igboeli و همکاران، 2015؛ Nkot و همکاران، 2018؛ Onyeto، 2014).

اگرچه تلاش قابل توجهی برای بررسی انجام شده استL. lanceolataاجزای فعال و فعالیت‌های بیولوژیکی آنها، تا آنجا که ما می‌دانیم، هیچ یک از آنها غربالگری دقیق فیتوشیمیایی انجام نداده‌اند و سعی در ارزیابی اثرات بازدارندگی در برابر کلید نکرده‌اند.آنزیم هاکه در پاتوژنز بیماری های مزمن نقش دارند. در این راستا، مطالعه حاضر به منظور بررسی ویژگی‌های دارویی و محتویات شیمیایی عصاره‌های برگ و پوست ساقه L. Lanceolata به‌دست‌آمده با روش‌های مختلف استخراج طراحی شد. بررسی‌های بیولوژیکی از روش سمیت سلولی MTT (3-(4،{2}}دی‌متیل تیازول{3}}یل)-2،5- دی‌فنیل تترازولیوم بروماید) تشکیل شد،آنتی اکسیدانو ارزیابی های مهاری آنزیم (کولین استرازها، تیروزیناز، آمیلاز و گلوکوزیداز). تزریق مستقیم چهار قطبی زمان پرواز (Q-TOF) و سنجش های غربالگری فیتوشیمیایی به منظور ارائه بینش به پروفایل های فیتوشیمیایی عصاره های مختلف از L. lanceolata انجام شد.

2. مواد و روش ها

2.1. مواد گیاهی و تهیه عصاره

L. lanceolataگیاه در ساحل عاج (منطقه Gbˆekˆe، روستای Prikro) جمع آوری شد و این گیاه توسط یکی از نویسندگان (دکتر Ouattara Katinan Etienne) تایید شد. نمونه کوپن در بخش زیست شناسی، دانشکده علوم، دانشگاه سلجوک (KIS{1}}- 1110) سپرده شد. پوست و برگ های منتخب ساقه گیاه در دمای اتاق خشک و با استفاده از آسیاب آزمایشگاهی پودر شدند. برای تهیه عصاره، انفوزیون، سوکسله (SOX)، خیساندن (MAC) و استخراج به کمک هموژنایزر (HAE) انجام شد. در روش های استخراج از متانول و آب به عنوان حلال استفاده شد. جزئیات استخراج در مواد تکمیلی آورده شده است. متانول با استفاده از اواپراتور چرخشی حذف شد، در حالی که انفوزیون لیوفیلیز شد. تمام عصاره های خشک شده تا زمان استفاده در یخچال (به اضافه 4 درجه سانتیگراد) نگهداری شدند.

2.2. پروفایل فیتوشیمیایی

2.2.1. غربالگری فیتوشیمیایی

غربالگری کیفی فیتوشیمیایی به منظور تعیین حضور متابولیت‌های فعال زیستی ثانویه با آزمایش‌های خاص انجام شد: ترکیبات فنلی (آزمون کلرید آهن)، ترپنوئیدها (آزمون سالکوفسکی)، آلکالوئیدها (آزمون مایر)، گلیکوزیدها (آزمون کلر کیلیانی)، استروئیدها آزمایش لیبرمن-بورچارد) و ساپونین ها (آزمایش کف) طبق Edeoga و همکاران. با تغییرات جزئی (ادئوگا و همکاران، 2005). تمام جزئیات در مواد تکمیلی آورده شده است. محتویات فنولیک، فنولیک اسید، فلاوانول و فلاونوئید کل عصاره ها اندازه گیری شد و روش های دقیق در مقاله قبلی ما توضیح داده شد (Vladimir-Kneˇzevi´c et al., 2011؛ ​​Zengin and Aktumsek, 2014). محتوای فنلی کل با استفاده از روش رنگ سنجی Folin-Ciocalteu تعیین و جذب در طول موج 765 نانومتر ثبت شد. محتوای فلاونوئید کل با روش AlCl3 اندازه گیری شد و جذب در طول موج 415 نانومتر قرائت شد. محتوای فلاوانول کل با استفاده از DMACA (p-dimethylaminocinnamaldehyde) شناسایی شد و جذب در 640 نانومتر خوانده شد. محتوای فنولیک اسید کل توسط معرف Arnow تعیین و جذب در 490 نانومتر ثبت شد. استانداردها، یعنی اسید گالیک (GAE) برای فنولیک، اسید کافئیک (CE) برای اسید فنولیک، کاتچین (CAE) برای فلاوانول و روتین (RE) برای فلاونوئیدها، برای توضیح نتایج استفاده شد. استانداردها از سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، میسوری، ایالات متحده آمریکا) خریداری شده است. جزئیات تجربی در مواد تکمیلی آورده شده است.

2.2.2. تجزیه و تحلیل زمان پرواز چهار قطبی تزریق مستقیم (Q-TOF).

عصاره‌های گیاهی در متانول به غلظت 5/7 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر حل شده، به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق (Sonorex digitec، Bandelin، آلمان) تحت سونیکاسیون قرار گرفتند و سپس 10 بار رقیق شدند. برای پروفایل فیتوشیمیایی، یک UPLC Agilent سری 1290 مجهز به گاززدا، پمپ باینری، نمونه‌بردار خودکار و اجاق ستونی همراه با طیف‌سنج جرمی زمان پرواز چهار قطبی Agilent 6550 iFunnel مجهز به منبع دوگانه AJS ESI (تکنولوژی‌های Agilent) استفاده شد. روش تزریق مستقیم چهار قطبی زمان پرواز (Q-TOF) قبلاً در کار قبلی ما منتشر شده بود (Safti´c و همکاران، 2019). شناسایی ترکیبات فنلی با استفاده از Mass Hunter PCDL Manager (نسخه B.04.{13}})، MassBank (MassBank، 2019)، mzCloud (mzCloud، 2019) و MassBank of North America (MoNA) (MassBank of North) انجام شد. آمریکا، 2020).

2.3. سنجش فعالیت بیولوژیکی

تشخیصآنتی اکسیدانخواص، ما از چندین سنجش شیمیایی از جمله مکانیسم‌های مختلف از جمله، مهار رادیکال، کاهش قدرت و کیلیت فلزی استفاده کردیم. Trolox (TE) و اتیلن دی آمین تترا استیک اسید (EDTA) به عنوان ترکیبات آنتی اکسیدانی استاندارد استفاده شد. نتایج به دست آمده به عنوان معادل این ترکیبات بیان شد (Bursal et al., 2019؛ Eruygur et al., 2019; Grochowski et al., 2017; Topalet. .، 2016). برای تشخیص اثرات بازدارنده برآنزیم هاما از سنجش های مهار آنزیم رنگ سنجی استفاده کردیم و این سنجش ها شامل تیروزیناز، گلوکوزیداز، آمیلاز و کولین استراز بود. برخی از مهارکننده های استاندارد (گالاتامین (GALAE)، کوجیک (KAE) اسید و آکاربوز (ACAE)) به عنوان کنترل مثبت استفاده شدند. جزئیات تجربی در مواد تکمیلی آورده شده است.

سیستانچگیاهان امپراتوری از دست رفته درضد اکسیداسیون

2.4. کشت سلولی و ارزیابی اثرات ضد تکثیری و سیتوتوکسیک

رده های سلولی تومور انسانی: آدنوکارسینوم کولورکتال (HT29) و رده سلولی سرطان سینه متاستاتیک (MCF7) و همچنین فیبروبلاست های پوست طبیعی (HFF) به دست آمده از ATCC (مجموعه کشت نوع آمریکایی)، در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM) با مکمل کشت داده شدند. 10 درصد سرم جنین گاوی (FBS)، 2 میلی‌مولار ال-گلوتامین، 100 واحد در میلی‌لیتر پنی سیلین و 100 میکروگرم در میلی‌لیتر استرپتومایسین (Capricorn Scientific، آلمان) با 5 درصد CO2 در دمای 37 درجه سانتیگراد در یک فضای مرطوب. نمونه‌ها در محیط رشد سلولی با غلظت 10 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر آماده شدند و قبل از آزمایش به مدت 30 دقیقه در حمام اولتراسونیک حل شدند. برای آزمایش، رده‌های سلولی سرطان و رده‌های سلولی طبیعی انسان در 96-صفحه‌های میکروتیتر چاهی با تراکم 5000 سلول در هر چاه کاشته شدند. سپس ترکیبات آزمایشی در پنج رقت 10-برابر (0.0001-1 mg/ml) اضافه شدند که در روز آزمایش در محیط رشد تازه تهیه شده و برای 72 ساعت دیگر انکوبه شدند. سپس، از روش 3-(4،{21}}دی متیل تیازول-2-یل)-2،5- دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT) (سیگما آلدریچ، ایالات متحده آمریکا) استفاده شد. برای محاسبه سرعت رشد سلولی درصد رشد با تبدیل مقادیر جذب تجربی تعیین شده با استفاده از فرمول های پیشنهادی توسط مؤسسه ملی بهداشت (NIH) محاسبه شد و مقادیر IC50 محاسبه شد. اندازه گیری های تجربی در چهار تکرار در دو آزمایش بیولوژیکی انفرادی انجام شد.

2.5. تحلیل آماری

نتایج تمام تحلیل ها به صورت میانگین ± انحراف معیار بیان شد. ابتدا تجزیه و تحلیل آماری برای محاسبه تفاوت بین نمونه ها با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه و سپس آزمون تعقیبی توکی انجام شد. سپس داده‌ها به تحلیل چند متغیره مؤلفه اصلی اکتشافی (PCA) برای شناسایی عوامل متمایزکننده ارسال شدند. نقشه تصویر خوشه‌ای برای توصیف خوشه‌های به‌دست‌آمده از PCA انجام شد. تمام مراحل تحت نرم افزار R نسخه 3.6.2 انجام شد.

از کجا میتوانم بخرمسیستانچپارس کردن بهسفید کردنپوست

3. نتایج و بحث

3.1. ترکیبات فیتوشیمیایی

ترکیبات فعال بیولوژیکی متعددی به دلیل خواص دارویی خاص و قوی آنها ثبت و از گیاهان جدا شده است (Bursal and Gülçin, 2011؛ ​​Bursal et al., 2013; Gülçin et al., 2011; Kose ¨ et al., 2015). به طور خاص، ترکیبات فنلی دارای خواص دارویی متعددی مانند ضد میکروبی،آنتی اکسیدان ها، ضد التهاب، ضد تصلب شرایین، ضد پیری، محافظت کننده قلب، محافظت از کبد و ضد سرطان (عباس و همکاران، 2017؛ هان و همکاران، 2007؛ Quideau و همکاران، 2011). در این مطالعه، پوست برگ و ساقه L. lanceolata با استفاده از روش‌های مختلف استخراج شد. تزریق، خیساندن (MAC)، سوکسله (SOX) و استخراج به کمک هموژنایزر (HAE) با استفاده از آب و متانول به عنوان حلال. در ابتدا غربالگری فیتوشیمیایی اولیه ازL. lanceolataعصاره ها انجام شد و نتایج حضور ترکیبات فنلی، استروئیدها و ساپونین ها را در هر نمونه آزمایش شده نشان داد (جدول 1). عصاره پوست ساقه همچنین حاوی ترپنوئیدها و گلیکوزیدهایی بود که در همه عصاره های برگ مشاهده نشد. با این حال، تنها عصاره متانولی برگ برای حضور آلکالوئیدها مثبت بود.

بینش عمیق‌تری نسبت به ارتباط احتمالی بین فعالیت‌های دارویی و ترکیبات بیولوژیکی موجود در عصاره‌ها با ارزیابی ترکیب فیتوشیمیایی عصاره‌ها انجام شد.L. lanceolataعصاره برگ و پوست ساقه برای محتوای کل فنل (TPC)، محتوای فلاونوئید کل (TFC)، اسید فنولیک کل (TPAC) و محتوای فلاونول کل (TFlvC) و نتایج در جدول 2 ارائه شده است. برای عصاره برگ، عصاره HAE-MeOH (1.52 ± 92.13 mg GAE/g) و به دنبال آن عصاره SOX (81.{21}}7±1.64 mg GAE/g) دارای بالاترین TPC بودند، در حالی که عصاره به دست آمده با استفاده از Soxhlet روش (116.58 ± 2.78 mg RE/g)، به دنبال آن HAE-MeOH (3 ± 113.72.{18}} mg RE/g) بالاترین TFC را نشان داد. TPaC بین 13.42 ± 0.72-48.61 ± 3.58 میلی گرم CE/g و TFlvC از {{33}.08-17.77 ± 0.40 میلی گرم CAE/g متغیر بود. با بالاترین محتوای عصاره HAE-MeOH مشاهده شد.

The stem bark extracts showed notable TPC, with MAC-water extract, followed by SOX extract displaying the highest content (Table 2). The TFC varied from 1.65 ± 0.40 (MAC-Water) and 33.73 ± 1.35 mg RE/g (MAC-MeOH). A significant amount of TPaC was observed in all the stem bark extracts in the following order: MAC-Water > infusion > SOX > HAE-MeOH > MAC-MeOH >HAE-Water. برای TFlvC، SOX-MeOH (1{14}}1.51 ± 2.56 میلی گرم CAE/g)، HAE-MeOH (92.12 ± 1.03 میلی گرم CAE/g) و MAC-MeOH (88.33 ± 0.69 میلی گرم CAE/g) دارند. TFlvC قابل توجهی را در مقایسه با سایر عصاره های پوست ساقه مورد مطالعه نشان داد. به طور کلی، عصاره پوست ساقه دارای سطح بالاتری از ترکیبات فنلی است.

واضح است که نتایج به‌دست‌آمده نشان می‌دهد که مقدار کل ترکیبات زیست فعال به روش‌های استخراج و حلال‌های مورد استفاده بستگی دارد. به طور کلی، روش استخراج به کمک هموژنایزر می تواند به عنوان بهترین تکنیک برای تهیه عصاره ها در نظر گرفته شودL. lanceolata. با توجه به یافته‌های ما، چندین نویسنده گزارش کردند که تکنیک به کمک هموژنایزر مؤثرترین تکنیک با زمان‌های استخراج کوتاه بود (Dall'Acqua و همکاران، 2020؛ Rocchetti و همکاران، 2019؛ Sinan و همکاران، 2020؛ Zheleva-Dimitrova. و همکاران، 2020). علاوه بر این، متانول در تکنیک های استخراج مورد استفاده فعال تر از آب بود. این واقعیت توسط چندین محقق نیز تأیید شد که متانول را به عنوان بهترین حلال استخراج ذکر کردند (Barbouchi et al., 2020; Sarikurkcu et al., 2020). تا آنجا که بررسی ادبیات ما می تواند مشخص کند، ما مطالعات کمی را در مورد کل ترکیبات فعال زیستی عصاره L. lanceolata مشاهده کردیم. در میان مطالعات انجام شده، سطح فنلی کل عصاره اتانولی برگ هایL. lanceolataتوسط Kalmob´e و همکارانش 414.07 میلی گرم عصاره GAE/g یافت شد. (2017). سطح فنولیک بالاتر از یافته های ما بود. این تفاوت را می توان با تفاوت های محیطی و اقلیمی توضیح داد. علاوه بر این، در زمان‌های اخیر، روش‌های اسپکتروفتومتری برای کل ترکیبات فعال زیستی با تردیدهای متعددی روبرو بوده است. به عنوان مثال، معرف Folin-Ciocalteu می تواند با پپتیدها یا سایر مواد شیمیایی و همچنین فنولیک ها واکنش نشان دهد (Sanchez-Rangel ´et al., 2013). بنابراین، سنجش نمی تواند سطوح دقیق فنولیک ها را در عصاره های آزمایش شده منعکس کند. بنابراین، مطالعات فیتوشیمیایی باید شامل حداقل یک روش کروماتوگرافی برای تعیین کیفیت و کمیت ترکیبات زیست فعال باشد.

پس از آن، فیتوکمیکال های منفرد در عصاره ها با استفاده از آنالیز QTOF انفوزیون مستقیم شناسایی شدند (جدول 3). بر اساس داده های تجربی، 23 ترکیب ظاهراً شناسایی شدند که اکثر آنها فلاونوئیدها و بیوفلاونوئیدها بودند. مشتقات اورینتین، ایزوویتکسین، ساپورانین، اسکوپارین (یک فلاون)، ویتکسین و مشتقات آن تنها در عصاره برگ شناسایی شدند. Lanceolatin A تنها در عصاره برگ MAC-آب و عصاره دم کرده و پوست ساقه MAC-MeOH شناسایی شد، در حالی که بیفلاونوئید Lanceolatin A فقط در عصاره پوست ساقه SOX-MeOH و در تمام عصاره های برگ (به جز HAE-MeOH) ارائه شد. وجود لانسئولاتین B در تمام عصاره های هر دو قسمت گیاه به جز در عصاره برگ تزریق شده و HAE-MeOH مشاهده شد. بیوفلاونوئید lanceolatin B در تمام عصاره ها به جز در عصاره پوست ساقه خیسانده شده شناسایی شد. تمام عصاره‌ها به جز عصاره‌های برگ HAE-MeOH و HAE-Water حاوی لانسئولاتین C بودند. داده‌های به‌دست‌آمده نیز نشان داد که عصاره‌ها سرشار از لوفیرون هستند. لوفیرون‌های A، D، E، I، J و L در اکثر عصاره‌های هر دو قسمت گیاه شناسایی شدند. نتایج ما مطابق با ادبیاتی است که در آن وقوع بیفلاوانوئیدهای لوفیرون در آن وجود داردL. lanceolataقبلا توسط Lopatriello و همکاران گزارش شده بود. (لوپاتریلو و همکاران، 2019). لوفیرون‌های بیفلاوانوئیدها به‌طور بیوژنتیکی از دیمریزاسیون چالکون‌ها با ژیوشیمی متفاوت تولید می‌شوند (Ghogomu و همکاران، 1987؛ Lopatriello و همکاران، 2019؛ Tih و همکاران، 1989، 1994). وجود فلاونوئیدها مانند مشتقات اورینتین و ویتکسین تنها در عصاره برگ با سطح بالاتری از محتوای فلاونوئید کل مرتبط است.

3.2. خاصیت آنتی اکسیدانی

در مطالعه حاضر،آنتی اکسیدانپتانسیل عصاره های مختلفL. lanceolataپوست برگ و ساقه با استفاده از فسفومولیبدن، مهار رادیکال آزاد (DPPH و ABTS)، قدرت کاهنده (CUPRAC و FRAP)، و سنجش کیلیت یون آهن مورد ارزیابی قرار گرفت. بر اساس یافته های تجربی (جدول 3)، تمام عصاره های مورد مطالعه قدرت مهار و کاهش قابل توجهی رادیکال های آزاد را نشان داده اند. برای عصاره برگ، بیشترین فعالیت مهاری آزاد در HAE MeOH (DPPH: 93.82 ± 0.23 و ABTS: 132.25 ± 0 مشاهده شد.09 میلی گرم TE/g) و به دنبال آن عصاره های تزریق شده (برای DPPH: 93.81 ± 0}.43 mg TE/g) و SOX-MeOH (برای ABTS: 132.{26}}9 ± 0.07 mg TE/g). عصاره HAE-MeOH به ترتیب با مقادیر 21.98 ± 287.73 و 0.57 ± 231.21 میلی گرم TE / g، بالاترین قدرت کاهش مس و آهن را نشان داده است.

در میان عصاره‌های پوست ساقه، بالاترین فعالیت خاموش کردن رادیکال‌های آزاد توسط SOX-MeOH (DPPH: 195.18 ± 0.55 و 265.04 ± 0.99 mg TE نشان داده شد. / گرم)، به دنبال عصاره HAE-MeOH (DPPH: 194.83 ± 0.21 و 0.13 ± 264.43 mg TE / g). ظرفیت کاهش قابل توجهی توسط تمام عصاره‌های پوست ساقه آزمایش‌شده با عصاره‌های آبی به‌دست‌آمده با استفاده از خیساندن (CUPRAC: 13.27 ± 853.99 و FRAP: 13.27 ± 853.99 میلی‌گرم TE/g) و کمک هموژنایزر (CUPRAC: 0.3 ± 0.39: 641 ± 0.3 0.3 و FRAP: 641 ± 0.3. ± 3. روش‌های 86 mg TE/g) منابع برتر عوامل کاهنده در هر دو روش CUPRAC و FRAP هستند. مجموع متوسطآنتی اکسیدانظرفیت توسط عصاره های آزمایش شده برگ و پوست ساقه نمایش داده شد. با توجه به خواص کیلیت فلز، فعالیت بین 1.76 ± 6.76 (HAE-Water) و 22.68 ± 0.74 (HAE-MeOH) mg EDTAE/g و 2 متغیر بود.{12}}9 ± 0.45 ( MAC-MeOH) و 1.12 ± 6.15 میلی گرم EDTAE/g برای عصاره برگ و پوست ساقه به ترتیب.

تا آنجا که ادبیات می تواند توجیه کند، مطالعات کمی در مورد خواص آنتی اکسیدانی وجود داردL. lanceolata(اونیتو، 2014؛ اوسو و همکاران، 2016). واضح است که نتایج آنتی اکسیدانی به دست آمده با کل محتوای فنلی مشاهده شده از عصاره ها مطابقت دارد. این واقعیت نشان داد که ترکیبات فنلی می توانند به عنوان عوامل اصلی در خواص آنتی اکسیدانی مشاهده شده در نظر گرفته شوند. این واقعیت نیز با تجزیه و تحلیل همبستگی پیرسون به دست آمد و نتایج در شکل 1 آورده شده است. مطابق با یافته های ما، چندین محقق یک همبستگی مثبت بین محتوای فنلی کل وآنتی اکسیدانخواص (چو و همکاران، 2020؛ ریبیرو و همکاران، 2020؛ توماجیتساکول و همکاران، 2020). علاوه بر تجزیه و تحلیل همبستگی، وجود فلاونوئید (مشتقات لانسئولاتین) و بیوفلاونوئیدها (مشتقات لوفیرون) در عصاره های مورد آزمایش را می توان به خواص آنتی اکسیدانی نسبت داد. به طور مشابه، Ajiboye و همکاران. (2014) گزارش داد که لوفیرون B و C خواص آنتی اکسیدانی قابل توجهی در DPPH نشان دادند و سنجش توان را کاهش دادند.

3.2.1. خواص بازدارندگی آنزیم

اینآنزیمخواص بازدارندگی ازL. lanceolataعصاره برگ و پوست ساقه به سمت کولین استرازها (AchE و BChE)، آمیلاز، گلوکوزیداز و تیروزیناز مورد بررسی قرار گرفت و داده های تجربی در جدول 4 نشان داده شده است. در بین عصاره های برگ، فقط عصاره متانولی (HAE-MeOH: 4.4{{{ 6}} ± 0.10، SOX-MeOH: 4.22 ± {{2{0}}.21 و MAC-MeOH: 4.01 ± { {63}}.30 میلی گرم GALAE/g) مهارکننده های قوی AChE بودند، در حالی که هیچ یک از عصاره ها علیه BChE فعال نبودند. تمام عصاره‌های پوست ساقه فعالیت مهاری در برابر AChE با مقادیر متغیر از 19/1 ± 93/1 0 (انفوزیون) تا 03/0 ± 18/5 (HAE-MeOH) میلی‌گرم GALAE/g نشان داده‌اند، در حالی که فقط عصاره‌های متانولی (HAE-MeOH: 7.87) 1.68 ±، SOX-MeOH: 1.75 ± 8.66 و MAC-MeOH: 1.33 ± 7.31 mg GALAE/g) در برابر BChE قوی بودند. اثرات ضد تیروزیناز قابل‌توجهی برای عصاره‌های برگ متانولی نشان داده شد و بیشترین فعالیت برای عصاره به‌دست‌آمده با استفاده از روش استخراج سوکسله (1.96 ± 131.17 میلی‌گرم KAE/g) ثبت شد. عصاره های HAE-Water و MAC-Water هیچ فعالیت مهاری در برابر تیروزیناز نشان ندادند. همه عصاره های پوست ساقه قدرت مهاری قابل توجهی در برابر تیروزیناز به ترتیب زیر نشان دادند: MAC-MeOH > SOX-MeOH > HAE-MeOH > Infusion > MAC -Water > HAE-Water. با توجه به اثرات ضد دیابتی، تمام عصاره‌های برگ و پوست ساقه آزمایش‌شده فعالیت متوسطی در برابر آنزیم آمیلاز نشان دادند و تنها عصاره‌های متانولی هر دو قسمت گیاه در مهار گلوکوزیداز با مقادیری از 01/0 ± 77/2 تا 2 مؤثر بودند.{62 }} ± 0.16 mmol ACAE/g برای عصاره برگ و 2.74 ± 0.01-2.76 ± 0.01 mmol ACAE/g برای عصاره پوست ساقه.

تا جایی که من می دانم، ادعا شده استآنزیمنتایج بازدارنده اولین گزارش برایL. lanceolata. در این مرحله، نتایج حاصل از این مطالعه می‌تواند تاریخ پایه ارزشمندی را برای تحقیقات آینده فراهم کند. همانطور که در شکل 1 مشاهده می شود، ما یک همبستگی قابل توجه (R > 0.5) بین فنول کل و سنجش مهاری آنزیم (به جز گلوکوزیداز) مشاهده کردیم. علاوه بر این، مقادیر ضریب همبستگی بالایی بین فلاوانول کل و سنجش مهار آنزیم پیدا شد. این یافته ها نشان داد که فعالیت های بیولوژیکی عصاره های آزمایش شده به شدت با پروفایل های شیمیایی آنها مرتبط است. یافته های ما با مقالات قبلی انجام شده توسط چندین محقق که رابطه خطی بین کل ترکیبات زیست فعال وآنزیماثرات بازدارنده (علی رضا و همکاران، 2018؛ کائونارین و همکاران، 2016؛ Llorent-Martínez و همکاران، 2020؛ Muddathir و همکاران، 2017؛ وو و همکاران، 2020). گرفته شده با هم،L. lanceolataمی تواند به عنوان منبع بالقوه مهارکننده های آنزیم طبیعی در نظر گرفته شود (جدول 5).

3.3. ارزیابی فعالیت های ضد تکثیری و سیتوتوکسیک

فعالیت ضد تکثیری و سیتوتوکسیک پوست برگ و ساقهL. lanceolataعصاره ها بر روی دو رده سلولی کارسینوم HT29 و MCF7 و روی یک رده سلولی فیبروبلاست انسانی تغییر نیافته (HFF{3}}) مورد ارزیابی قرار گرفتند. عصاره برگ تزریقی و خیساندن آب فعالیت ضد تکثیر متوسطی را نشان داد و در تمام رده های سلولی آزمایش شده مؤثرترین بود (جدول 6). سایر عصاره ها فعالیت متوسط ​​مشابهی را فقط روی رده های سلولی سرطان نشان دادند در حالی که باعث تکثیر فیبروبلاست ها می شدند (شکل S1). قوی ترین اثرات ضد تکثیری در تمام عصاره های پوست ساقه مشاهده شد که بدون در نظر گرفتن روش استخراج مورد استفاده، همان اثر ضد تکثیری غیرانتخابی را روی رده های سلولی سرطان نشان داد (جدول 6). جالب توجه است که این اثر ضد تکثیری بارزتر با یک فعالیت تکثیری قوی مشاهده شده در رده سلولی فیبروبلاست تغییر شکل نیافته همراه بود (شکل S2). هر دو عصاره برگ و پوست ساقه روی رده های سلولی آزمایش شده سیتوتوکسیک نبودند. این نتایج نشان دهنده پتانسیل توسعه بیشتر عوامل ضد تکثیر با سمیت سلولی سیستمیک کم بر اساس گیاه L. lanceolata است که ممکن است در زمینه توسعه داروهای سرطان جالب باشد.

در مطالعه قبلی انجام شده توسط Ajiboye و همکاران. (2014)، اثرات سیتوتوکسیک L. alata و لوفیرون B و C بر روی سلول‌های کارسینومای آسیت ارلیخ مورد بررسی قرار گرفت که به موجب آن خواص ضد سرطانی قابل توجهی ثبت شد. نویسندگان همچنین گزارش دادند که حضور لوفیرون های B و C به شدت با اثر سیتوتوکسیک عصاره آزمایش شده مرتبط است. با توجه به این اطلاعات، بیوفلاونوئیدها (مشتقات لوفیرون) ممکن است مسئول توانایی های ضد سرطانی مشاهده شده باشند.L. lanceolataدر مقاله ارائه شده

3.4. تحلیل چند متغیره

تجزیه و تحلیل آماری تک متغیره تفاوت در محتوای فیتوشیمیایی را تایید کرد،آنتی اکسیدانفعالیت ها و در شرایط آزمایشگاهیآنزیمفعالیت های بازدارنده ازL. lanceolataنمونه ها. به طور دقیق‌تر، این تفاوت‌ها بین هر دو بخش گیاه مورد مطالعه و همچنین بین تکنیک-حلال مختلف مورد استفاده برای استخراج مشاهده شد. این دانش عمومی است که توزیع مولکول ها در گیاه از یک قسمت گیاه به قسمت دیگر تغییر می کند و در نتیجه بر فعالیت های بیولوژیکی تأثیر می گذارد. علاوه بر این، چندین مطالعه تأثیر تکنیک حلال مورد استفاده برای استخراج را بر حضور و غلظت نهایی ترکیبات فیتوشیمیایی مورد علاقه برجسته کردند. بر اساس این اطلاعات، برآورد سطح تأثیر هر دو عامل بر فعالیت‌های بیولوژیکی مورد تجزیه و تحلیل مهم بود. در این راستا، تحلیل چند متغیره اکتشافی یعنی تحلیل مؤلفه‌های اصلی برای این منظور مناسب به نظر می‌رسد.

PCA توصیفگرها را به دو رایانه اصلی تبدیل کرد که 90.1 درصد از تنوع را در بر می گرفت (شکل 2A). PC1، برجسته‌ترین مؤلفه با 66.7 درصد تنوع توضیحی، با آنتی اکسیدان (فسفومولیبدن (PPBD)، 2،2'-azino-bis ({10}}اتیل بنزوتیازولین{11}} سولفونیک اسید (ABTS) ارتباط مثبت داشت. آنتی اکسیدان کاهنده مس (CUPRAC)، 2،{13}} دی فنیل-1-پیکریل هیدرازیل (DPPH) و کاهش دهنده آهنآنتی اکسیدانسنجش قدرت (FRAP) و آمیلاز. مشخص شد که PC2 به طور مثبت به سنجش توانایی کیلاسیون -گلوکوزیداز و آهن متصل است (شکل 2B). دو خوشه اصلی تمایز به نمایندگی از هر بخش گیاه مورد مطالعه در امتداد PC1 مشاهده شد. علاوه بر این، نمونه‌هایی از هر بخش گیاه در امتداد PC2، در رابطه با حلال مورد استفاده در فرآیند استخراج، جدا شدند (شکل 3A).

عصاره پوست ساقه با قوی ترین مشخص شدآنتی اکسیدانخواص، در حالی که عصاره برگ توانایی کیلاسیون آهنی بالاتری داشت (شکل 3B). علاوه بر این، تنها چند عصاره پوست ساقه اثر مهاری بر بوتیریل کولین استراز (BChE) دارند.آنزیمفعالیت. بیوسنتز متابولیت های ثانویه در گیاهان فرآیندی است تحت تأثیر عوامل متعددی که برخی از آنها مربوط به خود گیاه و برخی تحت تأثیر محیط هستند. برای عوامل مرتبط با خود گیاه، نشان داده شده است که توزیع و غلظت ترکیبات گیاهی در گیاهان بسته به رشد انتوژنتیک و بخش گیاهی آنها بسیار متفاوت است (Feduraev et al., 2019).

علاوه بر این، تاثیر حلال استخراج بر فعالیت های بیولوژیکی L. lanceolata تاکید شده است. این اثر روی برگها بیشتر محسوس است (شکل 4B). علاوه بر این، نتایج ما نشان داد که متانول حلال مناسب تری برای استخراج ترکیبات فعال زیستی است زیرا عصاره های کمی و کیفی غنی تری ارائه می دهد. این یافته را می توان به حلالیت بالاتر ترکیبات فیتوشیمیایی نسبت دادL. lanceolataدر متانول، نشان دهنده ماهیت چربی دوست آنها است. در مجموع، این یافته ها پوست ساقه L. lanceolata را به عنوان غنی ترین بخش گیاه از نظر فیتونوترینت ها و متانول به عنوان حلال مناسب برای استخراج آن تشخیص دادند.

4. نتیجه گیری

این مطالعه مشخصات فیتوشیمیایی را گزارش می کندL. lanceolataعصاره برگ و ساقه و ارزیابی اثرات آنتی اکسیدانی، مهاری آنزیم و ضد تکثیر/سیتوتوکسیک. لانسئولاتین ها و لوفیرون ها در تمام قسمت های گیاه مورد تجزیه و تحلیل یافت شدند، در حالی که چندین گلوکوزید آپیژنین و لوتئولین فقط در عصاره برگ یافت شدند. به طور کلی، عصاره نیز جالب نشان دادآنتی اکسیدانفعالیت‌هایی که به موجب آن عصاره‌های پوست ساقه بهترین اثر ضد تکثیری را نسبت به رده‌های سلولی سرطان نشان دادند، در نتیجه از مطالعات بیشتر برای نشان دادن پتانسیل آن در مدیریت سرطان حمایت کردند. مهار کلیدی بالینیآنزیم هاهمچنین پتانسیل عصاره ها را در مدیریت آلزایمر، هایپرپیگمانتاسیون و دیابت نشان داد. این یافته ها گواه آن بودL. lanceolataمنبعی امیدوارکننده از ترکیبات زیست فعال با کاربرد بالقوه در فرمولاسیون رنگ پوست است. با این حال، مطالعات بیشتر (اثربخشی، سمیت، فراهمی زیستی و غیره) روی L. lanceolata باید با هدف توسعه جدید انجام شود.آنتی اکسیدان هاو مهارکننده های آنزیم با خواص بهبود یافته نسبت به داروهای مصنوعی.

اینها هستندگیاه سیستانچبرش ها. روی عکس کلیک کنید و جزئیات را دریافت کنید.