مورین با مهار آزادسازی تله‌های خارج سلولی هتروفیل، استرس اکسیداتیو و پاسخ‌های التهابی در جوجه‌ها، آسیب‌های کبد و کلیه ناشی از آفلاتوکسین B1- را کاهش می‌دهد.

برای اطلاعات بیشتر تماس بگیریدtina.xiang@wecistanche.com

چکیدهآفلاتوکسین B1 (AFB1) یک متابولیت ثانویه تولید شده توسط آسپرژیلوس فاووس و آسپرژیلوس انگلی است که عمدتاً در غلات، بادام زمینی، ذرت و سایر محصولات موجود است که به طور جدی طیور، سلامت انسان و محیط زیست را به خطر می اندازد. مورین، یک ترکیب فلاونوئیدی استخراج شده از گیاهان موراسه، دارای آنتی اکسیدان، ضد باکتری وضد التهاباثرات با این حال، آیا مورین اثر محافظتی بر AFB1- القا شده دارد یا خیرکبدوآسیب کلیهدر جوجه ها به طور خاص گزارش نشده است. در این مطالعه، ما عمدتاً اثر محافظتی مورین را بر آسیب کبدی و کلیوی ناشی از AFB در جوجه‌ها تأیید کردیم و مکانیسم آن را روشن کردیم. مشخص شد که مورین می تواند به طور قابل توجهی شاخص های بیوشیمیایی کبدی آلانین آمینوترانسفراز (ALT)، آسپارتات آمینوترانسفراز (AST) و شاخص های کلیه سطوح کراتینین (CRE) و نیتروژن اوره (BUN) را کاهش دهد. در همین حال، بررسی هیستوپاتولوژیک نشان داد که مورین به طور موثر AFB را تسکین می‌دهد1- باعث آسیب کبدی، از جمله اختلال در سلول‌های کبدی، تورم، و نفوذ سلول‌های التهابی می‌شود، و به طور موثر آسیب کلیه، از جمله نکروز سلولی کلیوی، لایه‌برداری، و واکوئولیزاسیون را تسکین می‌دهد. بررسی بیشتر مکانیسم آن نشان داد که مورین به طور قابل‌توجهی از انتشار تله‌های خارج سلولی هتروفیل (HETs) AFB جلوگیری می‌کند و سطح مالون دی‌آلدئید (MDA) را کاهش می‌دهد، اما سطوح سوپراکسید دیسموتاز (SOD)، گلوتاتیون پراکسیداز (GSH-) را افزایش می‌دهد. Px)، و کاتالاز (CAT) در داخل بدن. علاوه بر این، تجزیه و تحلیل کمی PCR (qRT-PCR) در زمان واقعی نشان داد که مورین همچنین بیان‌های mRNA ناشی از AFB را در فاکتور نکروز تومور (TNF-)، اینترلوکین{9}}(I }) و اینترلوکین-1 (IL{12}})، نیتریک اکسید سنتاز القایی (iNOS)، سیکلواکسیژناز-2 (COX-2)، کاسپاز-1، کاسپاز{ {16}} و کاسپاز{17}}. در نتیجه، همه نتایج تأیید کردند که مورین می‌تواند از AFB محافظت کند{18}}با مهار آزادسازی HETs، تنظیم استرس اکسیداتیو و مهار پاسخ التهابی باعث آسیب کبد و کلیه می‌شود، و این نشان می‌دهد که مورین می تواند به عنوان یک داروی بالقوه برای پیشگیری و درمان آفلاتوکسیکوز در صنعت پرورش طیور مورد استفاده قرار گیرد.

کلید واژه هامورین، آفلاتوکسین B1، تله های خارج سلولی هتروفیل، پاسخ التهابی، استرس اکسیداتیو

مقدمه

آفلاتوکسین نوعی متابولیت ثانویه با سمیت بالا و وزن مولکولی کم است که توسط قارچ هایی مانند آسپرژیلوس فلاووس، آسپرژیلوس انگلی و آسپرژیلوس اختصاصی تولید می شود که دارای سمیت، جهش زایی و سرطان زایی قوی هستند که در این میان آفلاتوکسین B1 (AFB1) قوی ترین سمیت را دارد. (Rawal et al, 2010). آلودگی AFB1 با ایمنی تغذیه، تولید حیوانات و ایمنی غذا مرتبط بود و حتی سلامت انسان را تهدید می کند. از این رو، حل آلودگی AFB1 در خوراک و مشکلات باقیمانده در حیوانات و محصولات دامی مهم است. قرار گرفتن در معرض آفلاتوکسین در دوران بارداری تهدیدی برای سلامت جنین است که می تواند از طریق خون بند ناف و شیر مادر از مادر به جنین منتقل شود (دنینگ و همکاران، 1990). گزارش شده است که سطح AFB1 در سرم یرقان همراه با کمبود {7}فسفوگلوکز دهیدروژناز در نوزادان، و مشخص شد که آزمایش 58 درصد نوزادان و 75 درصد از مادران مثبت بوده است (Raafat et al, 2021). به عنوان مهم‌ترین عامل سرطان‌زای سلول‌های کبدی، AFB1 عامل اصلی سرطان کبد (HCC) در جهان است و مطالعات نشان داده‌اند که AFB1 و ویروس هپاتیت B (HBV) در ارتباط با افزایش بیشتر بروز HCC کار می‌کنند (راشینگ و سلیم، 2019). ).AFB1-القا شده استاسترس اکسیداتیویکی از راه های مهم اعمال سمیت آن است (عبدالوهاب و علی، 2003). اما مکانیسم‌های عمیق‌تر زیربنای آفلاتوکسیکوز و داروهای کارآمدتر برای پیشگیری و درمان هنوز باید مورد بررسی قرار گیرند.

مورین (ساختار شیمیایی در شکل 1 نشان داده شده است)، نوعی رنگدانه طبیعی است که از گیاهان Moraceae استخراج می شود که متعلق به فلاونوئیدها است و دارای خواص بیولوژیکی از جمله ضد التهابی است (Wei et al) (Li et al,2020). و آنتی اکسیدان 2015)، ضد باکتری (وی و همکاران، 2015)، ضد آترواسکلروز (ژو و همکاران، 2017)، کاهش قند خون و ضد استرس، و به طور گسترده در درمان بالینی بیماری عروق کرونر قلب، دیابت و سرطان استفاده شده است. گزارش شده است که مورین می تواند با تداخل در سنتز DNA باکتریایی و مهار فعالیت آدنوزین تری فسفات (ATPase) اثرات ضد باکتریایی بر استافیلوکوکوس اورئوس، باسیلوس و میکروکوکوس فلاووس داشته باشد (Xu et al.2001). برخی از مطالعات نشان می‌دهند که مورین می‌تواند TLR4/NF-xB را مهار کرده و مسیرهای سیگنالینگ Nrf2 و HO را برای محافظت از حاد ناشی از LPS فعال کند.آسیب کبدیدر موش ها (تیان و همکاران، 2017). مورین همچنین می تواند به طور موثر فیبروز کبدی ناشی از نیترات دی اتیل آمونیوم را در موش ها با تعدیل انتقال سیگنال Hippo/YAP و TGF{2}}/Smad بهبود بخشد (Perumal et al, 2017). در حال حاضر، گزارش شده است که انواع ترکیبات مانند ویتامین A، Cand E (Alpsoy and Yalvac, 2011) و اوژنول می توانند در مقابلاسترس اکسیداتیوپاسخ AFB1. با این حال، به عنوان یک داروی آنتی اکسیدانی سنتی، آیا مورین می تواند نقش محافظتی در کبد وآسیب کلیهدر جوجه های مبتلا به آفلاتوکسیکوز گزارش نشده است.

تله های خارج سلولی نوتروفیل (NETs) اولین خط دفاعی بدن در برابر پاتوژن های خارجی هستند که در سال های اخیر یافت شده اند. NET ها یک ساختار شبکه ای با DNA به عنوان اسکلت و اصلاح شده توسط هیستون سیترولینه 3 (citH3) و الاستاز (Wei et al.,

2019b)، با اثرات ضد باکتری (Brinkmann et al., 2004)، ضد ویروسی (Saitoh et al, 2012) و ضد انگلی (Wei et al., 2016). تله های خارج سلولی هتروفیل (HETs) عملکردی مشابه با NET ها دارند، با این تفاوت که HET ها بیان میلوپراکسیداز (MPO) را ندارند (Chuammitri et al., 2009). نشان داده شده است که N. canine می تواند آزادسازی NET های سگ را در شرایط آزمایشگاهی برای مقاومت در برابر عفونت القا کند (Wei et al, 2016). همچنین مطالعه ای تایید شده است که می تواند انفجارهای تنفسی در ماهی کپور آبامکتین (AVM) را با مهار فعال شدن مسیر سیگنالینگ PI3K-ERK کاهش دهد، بنابراین از انتشار NETs در کپور جلوگیری می کند (Zheng et al, 2020). مورین مانند آبامکتین یک داروی درمانی شناخته شده است، آیا اثر درمانی آن به انتشار NET ها مربوط می شود، این ما را ملزم به بررسی بیشتر می کند.

بنابراین، مکانیسم مورین در آسیب کبدی و کلیوی ناشی از AFB در جوجه‌ها در مطالعه ما مورد بررسی قرار گرفت و اثرات محافظتی آن مورد بررسی قرار گرفت. انتظار می‌رود که پایه‌ای آزمایشی برای اجرای بالینی دامپزشکی مورین فراهم کند و داده‌های تجربی و منابعی را برای پیشگیری و کنترل مسمومیت با مایکوتوکسین ارائه کند.

مواد و روشها معرفها و مواد

AFB1 (A6636، خلوص بیشتر یا مساوی 98 درصد، Sigma-Aldrich [شرکت بازرگانی Shang-hail، آموزشی ویبولیتین، شانگهای، چین). مورین (خلوص بیش از یا برابر با 98 درصد) از شرکت بیولوژیکی چنگدو پوسی، آموزشی ویبولیتین (چنگدو، چین) خریداری شد. کیت سنجش dsDNA Pico Green (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA). کیت AST، ALT، BUN، و CRE از موسسه مهندسی بیولوژیکی نانجینگ جیانچنگ (نانجینگ، چین) به دست آمد. کیت GSH-Px SOD، CAT، و MDA از موسسه مهندسی بیولوژیکی نانجینگ جیانچنگ (نانجینگ، چین) به دست آمد. کیت سنتز cDNA رشته اول RevertAid از ترکیب اصلی Thermo.qPCR از Roche (Mannheim، آلمان) تهیه شد.

ایجاد مدل های حیوانی

بیست و پنج جوجه یک روزه از مزرعه پرورش فوشان (فوشان، گوانگدونگ) خریداری شد و جوجه ها به مدت یک روز به صورت تطبیقی ​​تغذیه شدند. استقرار مدل جوجه آلوده از روز دوم آغاز شد. جوجه های مورد آزمایش به طور تصادفی در 5 گروه: گروه شاهد، گروه AFB1 (5 میلی گرم بر کیلوگرم)، گروه تیمار مورین (20 میلی گرم بر کیلوگرم، 40 میلی گرم بر کیلوگرم، 80 میلی گرم بر کیلوگرم) قرار گرفتند. در روز اول مدل سازی، تیمار به گروه برای پیشگیری، مورین به صورت داخل صفاقی تزریق شد و 16 ساعت بعد مجدداً تزریق شد. 24 ساعت بعد خون گرفته شد، جوجه ها کشته شدند و بافت کبد و کلیه گرفته شد. تمام اجرای آزمایش با رعایت دستورالعمل‌های کمیته اخلاق تحقیقات حیوانات دانشگاه فوشان (FSUeae2019112501) انجام شد.

تشخیص HET ها در سرم

خون جمع‌آوری‌شده ساکن بود، به مدت 10 دقیقه با سرعت 12، 000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شد، و سرم بالایی استخراج شد، با رنگ TE رقیق شد و سپس به همان مقدار پیکو گرین اضافه شد. در نهایت، نتایج تجربی با یک میکروپلیت خوان فلورسانس مشاهده شد.

تشخیص ALT و AST در سرم

اندازه گیری سطوح ALT و AST در سرم با کیت و نتایج تجربی در طول موج 510 نانومتر توسط میکروپلیت خوان تشخیص داده شد.

تشخیص BUN و CRE در سرم

سطوح CRE و BUN در سرم با کیت های مربوطه مورد بررسی قرار گرفت و نتایج تجربی در طول موج 510 نانومتر توسط میکروپلیت خوان شناسایی شد.

ارزیابی هیستوپاتولوژیک بافت کبد و کلیه

نمونه های بافت کبد و کلیه جمع آوری شده در فرمالین 10 درصد تثبیت شد. سپس، بافت خشک شد، جاسازی شد و با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ آمیزی شد (Wet al, 2021). در نهایت از میکروسکوپ هیبریدی رول برای مشاهده تغییرات پاتولوژیک استفاده شد.

تشخیص فعالیت اکسیداز و فعالیت آنزیم آنتی اکسیدانی

سطوح اکسیداز MDA و آنتی اکسیدان اکسیداز GSH-Px، SOD و CAT با کیت های مربوطه مورد بررسی قرار گرفتند (Guo et al, 2021). در میان، SOD و CAT با سرم و MDA و GSH-Px با بافت کبد اندازه‌گیری شدند. علاوه بر این، ما باید از معرف های TBD برای تجزیه و تحلیل کمی غلظت پروتئین در نمونه ها استفاده کنیم (Cao et al., 2020).

تجزیه و تحلیل کمی و زمان واقعی PCR

QRT-PCR برای تشخیص بیان mRNA استفاده شدالتهابیفاکتورهای TNF-a، IL-1، IL-6، واسطه التهابی COX-2، iNOS و مسیر سیگنالینگ کاسپاز عوامل کلیدی کاسپاز-1،کاسپاز{{6} } و کاسپاز-11. ابزار CFX Connect Real-Time System برای تعیین کمیت فلورسانس PCR در زمان واقعی استفاده شد. پرایمرهای ژن هدف در جدول 1 آمده است. تشخیص qRT-PCR سیستم 25 میکرولیتری Roche را اتخاذ می کند، شرایط 50 درجه، 2 دقیقه، 95 درجه، 10 دقیقه، 95 درجه، 15 ثانیه، 60 درجه، دهه 60، مجموعاً 40 سیکل. GAPDH به عنوان مرجع داخلی، و روشی برای پردازش داده ها بود که از AACT استفاده می کرد (Qianru et al., 2021).

تحلیل آماری

تمامی داده ها با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 5.{1}} و با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA) با آزمون مقایسه چندگانه توکی محاسبه شد. تفاوت بین گروه ها در سطوح P از نظر آماری معنی دار تلقی شد<>

نتایج

تغییر وزن بدن و ضریب کبد در جوجه ها

وزن بدن هر جوجه ثبت شد و ضریب کبد محاسبه شد (ضریب کبد =وزن کبد/وزن بدن]× 100). نتایج نشان داد که سرعت رشد وزن بدن در گروه درمان مورین (20 میلی‌گرم بر کیلوگرم، 80 میلی‌گرم بر کیلوگرم) در مقایسه با گروه AFB1 (شکل 2A) به طور قابل‌توجهی افزایش یافته است، که تأیید می‌کند مورین تأثیر خاصی بر وزن دارد. جوجه ها با این حال، ضریب کبد هر گروه از جوجه ها تغییر معنی داری نداشت (شکل 2B).

مورین به طور قابل توجهی سطح ALTand AST را در سرم کاهش می دهد

ALT و AST شاخص های آسیب کبدی هستند. داده ها نشان داد که AFB1 به طور قابل توجهی سطوح ALT و AST را افزایش می دهد، در حالی که مورین در مقایسه با AFB1 روند کاملاً مخالفی را نشان داد (شکل 3A و B)، که در ابتدا نشان می دهد مورین تأثیر مفیدی بر آسیب کبدی ناشی از AFB در جوجه ها دارد. .

مورین به طور قابل توجهی AFB را کاهش می دهد1-آسیب ناشی از کبد در جوجه ها

برای تأیید بیشتر اثرات مورین بر AFB{0}} باعث آسیب کبدی، بررسی هیستوپاتولوژیک انجام شد. همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، تورم سلول های کبدی، تکه تکه شدن و نفوذ سلول های التهابی در کبد ناشی از درمان AFB1 بود، اما مورین (20،40، 80 میلی گرم بر کیلوگرم) به طور موثر آسیب بافت کبد را کاهش داد، که بیشتر تایید کرد که مورین دارای یک اثر کاهنده بر آسیب کبدی ناشی از AFB1-در جوجه ها.

مورین به طور قابل توجهی سطوح BUN و CRE را در سرم کاهش می دهد

BUN و CRE به عنوان شاخص های مهم آسیب کلیه، ما دریافتیم که AFB1 به طور قابل توجهی سطوح BUN و CRE را در مقایسه با گروه کنترل افزایش داد، در حالی که مورین در مقایسه با AFB1 روند کاملاً مخالفی را نشان داد (شکل 5A و B)، که همچنین در ابتدا نشان می دهد که مورین دارای یک روند است. اثر مفید بر روی AFB{3}} باعث آسیب کلیه در جوجه ها شد.

مورین به طور قابل توجهی AFB1-آسیب کلیه را در جوجه ها کاهش می دهد

برای تأیید بیشتر اثرات مورین بر AFB{0}}که باعث آسیب کلیه می‌شود، بررسی هیستوپاتولوژیک انجام شد. کلیه گروه درمان AFB1 نکروز سلولی کلیه، لایه برداری و واکوئل شدن را نشان داد، در حالی که گروه درمان مورین، با افزایش غلظت مورین (20،40،80 میلی گرم بر کیلوگرم)، به طور موثر آسیب بافت کلیه را کاهش داد (شکل 6). ) که بیشتر تأیید کرد مورین اثر کاهش‌دهنده‌ای بر AFB1- باعث آسیب کلیه در جوجه‌ها می‌شود.

مورینبه طور قابل توجهی سطح AFB1-HET های القا شده در سرم را کاهش داد

برای بررسی مکانیسم زیربنای محافظت مورین در آسیب بافتی ناشی از AFB{0}}، HET های آزاد شده در سرم توسط پیکو گرین شناسایی شدند. نمونه های خون برای تشخیص سطح HET ها جمع آوری شدسرم نتایج تجربی نشان داد که AFB1 به طور قابل توجهی تولید HET ها را در سرم القا می کند، در حالی که مورین به طور قابل توجهی تولید HET ها را در مقایسه با گروه AFB1 مهار می کند (شکل 7). بنابراین، ما ابتدا تأیید کردیم که مورین AFB را کاهش می‌دهد1-با مهار انتشار HETs باعث آسیب کبد و کلیه می‌شود.

مورین به طور قابل توجهی استرس اکسیداتیو ناشی از AFB را در جوجه ها کاهش می دهد

گزارش شده است که استرس اکسیداتیو یک مکانیسم حیاتی در اثرات سمی AFB1 است، عملکرد مورین بر روی AFB{1}} باعث استرس اکسیداتیو شده است. نتیجه نشان داد که AFB1 به طور قابل توجهی سطح را اضافه کرداکسیداز MDA، در حالی که به طور قابل توجهی سطح آنزیم آنتی اکسیدانی GSH-Px، SOD و CAT را کاهش می دهد. با این حال، در مقایسه با AFB1، مورین به طور موثر عدم تعادل بین اکسیداز و آنزیم های آنتی اکسیدان را کاهش داد (شکل 8).

برای بررسی مکانیسم زیربنای محافظت مورین در آسیب بافتی ناشی از AFB{0}}، HET های آزاد شده در سرم توسط پیکو گرین شناسایی شدند. نمونه های خون برای تشخیص سطح HET ها جمع آوری شد

مورین به طور قابل توجهی سطوح mRNA AFB را مهار کرد

اینالتهابیپاسخ یک مکانیسم مهم در اثرات سمی AFB1 است. اثر مورین بر پاسخ‌های التهابی ناشی از AFB1- مورد بررسی قرار گرفت. از آنالیز qRT-PCR برای تشخیص بیان واسطه‌های التهابی COX{3}} و iNOS و فاکتورهای التهابی TNF- استفاده شد. IL-1 . IL-6. نتایج تجربی نشان داد که AFB1 به طور قابل توجهی سطوح بیان این سیتوکین ها را بهبود می بخشد، در حالی که مورین به طور قابل توجهی بیان این سیتوکین ها را مهار می کند (شکل 9).

مورین به طور قابل توجهی AFB را مهار کرد1-بیان mRNA کاسپاز-1، کاسپاز-3 و کاسپاز را القا کرد-11

همچنین گزارش شده است که مسیر سیگنالینگ کاسپاز در فرآیند استرس اکسیداتیو و پاسخ های التهابی دخیل است. ROS می تواند باعث آسیب به غشای میتوکندری شود که منجر به خروج سیتوکروم c و فعال شدن مسیر سیگنالینگ کاسپاز می شود. بنابراین، ما بیان mRNA عوامل کلیدی مسیر سیگنالینگ کاسپاز را شناسایی کردیم. نتیجه تأیید کرد که AFB1 به طور قابل توجهی بیان mRNA کاسپاز-1، کاسپاز-3 و کاسپاز-11 را افزایش داد، در حالی که مورین به طور قابل توجهی بیان این عوامل را کاهش داد (شکل 10).

بحث

AFB1 سمی ترین مایکوتوکسین است که عامل اصلی آسپرژیلوزیس است. مطالعات زیادی در مورد سمیت AFB1 از جمله سمیت کبدی، سمیت عصبی و سرطان زایی انجام شده است. کبد به‌عنوان ارگان اصلی سم‌زدایی و محل اصلی تبدیل متابولیسم مواد در حیوانات، در برابر آسیب AFB1 بسیار آسیب‌پذیر است که عمدتاً با 4 مکانیسم ایجاد می‌شود: سیستم آنزیمی سیتوکروم P450 (CYP450)، میتوکندری، سیستم ایمنی و رادیکال‌های آزاد. . پس از ورود AFB1 به بدن، از دوازدهه دستگاه گوارش جذب می شود و از طریق ورید باب وارد کبد می شود، جایی که توسط CYP1A2 و CYP3A4 در سیستم آنزیم متابولیسم فاز I CYP450 در سلول های کبدی به AFBO تبدیل می شود (Yang et al. ..2013). فرآیند فوق مهم ترین دلیلی است که AFB1 باعث ایجاد اختلالات بدن و ایجاد اثرات سمی و سرطان زا می شود. AFB1 همچنین می‌تواند با تنظیم افزایش بیان گیرنده‌های مرگ F AS و TNFR1 و کاهش بیان گیرنده‌های ضد آپوپتوز XIAP و Bcl{18}} آپوپتوز کبدی را القا کند (Mughal et al., 2017). در آزمایش‌های قبلی. ما تایید کرده‌ایم که AFB1 می‌تواند باعث آسیب کبدی و کلیوی در جوجه‌ها شود و مکانیسم اولیه آن روشن شد.

مورین نوعی فلاونوئید طبیعی است که ساختار آنتی اکسیدانی طبیعی دارد. کینونی که در اثر اکسیداسیون آن تشکیل می‌شود، دارای فعالیت آنتی‌اکسیدانی قوی است که می‌تواند از اسیدهای چرب غیراشباع روی غشای سلولی در برابر اکسیداسیون محافظت کند (Xie et al, 2003). مطالعات تایید کرده اند که مورین می تواند با مهار استرس اکسیداتیو نقش محافظتی خاصی بر آسیب کبدی ناشی از IFOS در موش ها داشته باشد. التهاب و همچنین آپوپتوز سلولی (Ozdemir et al2020). مورین همچنین می تواند ورم پستان ناشی از LPS را با مهار PI3K/AKT، MAPK، NF-kB کاهش دهد. و مسیرهای سیگنالینگ NLRP3 (جیانگ و همکاران 2020). با این حال، اثرات محافظتی مربوط به مورین روی آسیب ناشی از AFB ناشناخته باقی مانده است. بنابراین، این آزمایش عمدتاً اثرات محافظتی مورین بر AFB{9}}که باعث آسیب کبد و کلیه می‌شود را بررسی کرد و مکانیسم آن را روشن کرد.

بر اساس ارزیابی دقیق‌تر دوز و اثرات مورین، تزریق داخل صفاقی انتخاب شد. علاوه بر این، روش تجویز با مورین با موش‌ها و موش‌ها مطابقت داشت (Jiang et al..2020;

خامچای و همکاران، 2020). ابتدا، سطوح AST، ALT، BUN، و CRE در سرم مورد بررسی قرار گرفت تا تأیید شود که مدل سمیت AFB1 با موفقیت ایجاد شده است. شاخص‌های آسیب کبدی و کلیوی گروه AFB1 به طور قابل‌توجهی افزایش یافت، در حالی که گروه‌های مورین به‌طور قابل‌توجهی بیان این آنزیم‌ها را مهار کردند، که در ابتدا نقش مورین در محافظت در برابر AFB{3}} باعث آسیب کبد و کلیه در جوجه‌ها شد. در همان زمان، ما دریافتیم که اگرچه تفاوت قابل‌توجهی در شاخص کبدی بین گروه‌ها وجود نداشت، اما سرعت رشد وزن در گروه درمان مورین (20 میلی‌گرم بر کیلوگرم، 80 میلی‌گرم بر کیلوگرم) به طور قابل‌توجهی بهبود یافت، که تأثیر مورین بر وزن جوجه ها علاوه بر این، بررسی هیستوپاتولوژیک تایید کرد که مورین به طور موثر AFB را تسکین می‌دهد1- باعث اختلال در سلول‌های کبدی، تورم، انفیلتراسیون سلول‌های التهابی، و نکروز سلولی کلیه، لایه‌برداری و واکوئل‌سازی می‌شود، که بیشتر اثرات محافظتی مورین بر آسیب کبد و کلیه در جوجه‌ها را تایید کرد. . سپس، مکانیسم محافظتی مورین در برابر AFB{7}}که باعث آسیب کبد و کلیه در جوجه‌ها می‌شود را بررسی کردیم.

NET ها به عنوان اولین خط دفاعی برای مصونیت ذاتی، یک شمشیر دولبه برای ارگانیسم است. از یک طرف نقش مهمی در دفاع بدن در برابر عوامل بیماری زا دارد. از طرفی باعث آسیب بافتی می شود و در شکل گیری برخی بیماری ها مانند تصلب شرایین و ترومبوز شرکت می کند (Moschonas and Tselepis, 2019). این مطالعه تأیید کرد که NET ها و هیستون ها نقش مهمی در آسیب سلول های اپیتلیال پستان گاو (BMEC) دارند و مهار تشکیل NET های بیش از حد می تواند آسیب های مرتبط با ورم پستان را کاهش دهد (Wei et al.2019a). ما همچنین دریافته‌ایم که AFB1 می‌تواند با القای آزادسازی HETs باعث آسیب کبد و کلیه در جوجه‌ها شود. اینکه آیا اثر محافظتی مورین بر روی AFB1 باعث آسیب در جوجه‌ها می‌شود یا خیر، همچنین هدف مهم آزمایش ما است. HET ها به عنوان پاسخ های ایمنی ذاتی حیاتی مرغ عمل می کنند و بهترین زمان برای تشخیص HET ها در سرم ظرف 24 ساعت است، بنابراین زمان مطالعه انتخاب شد. مشخص شد که مورین به طور قابل توجهی تشکیل HET ها را در سرم کاهش می دهد، و برای اولین بار تأیید شد که مورین AFB را کاهش می دهد1-با مهار انتشار HET باعث آسیب در جوجه ها می شود.

در فرآیند متابولیک طبیعی بدن، ردوکس در تعادل دینامیکی است، اما زمانی که تولید گونه‌های اکسیژن فعال (ROS) در بدن از مقدار آنتی اکسیدان‌ها بیشتر شود، استرس اکسیداتیو رخ می‌دهد. استرس اکسیداتیو در بسیاری از بیماری های کبدی مانند بیماری فیبروپرولیفراتیو کبدی، بیماری کبد الکلی و بیماری کبد چرب غیر الکلی نقش دارد (Cichoz-Lach and Michalak, 2014). MDA محصول نهایی پراکسیداسیون لیپیدی تولید شده توسط ROS است و می تواند به طور مستقل میزان آسیب به سیستم غشایی و میزان حمله رادیکال های آزاد به سلول ها را منعکس کند، بنابراین نشانگر خوبی برای ارزیابی استرس اکسیداتیو در نظر گرفته می شود (وانگ و همکاران ، 2019). SOD یک آنزیم آنتی اکسیدانی اختصاصی است که آنیون سوپر اکسید را در رادیکال های آزاد ROS که به طور غیرمستقیم توانایی بدن در حذف رادیکال های آزاد اکسیژن را مشاهده می کند، از بین می برد و عملکرد بسیار مهمی در مطالعه آسیب کبدی دارد (Zhang et al.. 2018). . GSH-Px یک شاخص مهم برای اندازه گیری وضعیت ردوکس سلول ها است که می تواند با تامین مستقیم H plus و کاهش سمیت رادیکال های اکسیژن را خنثی کند.

آسیب اکسیداتیو به کبد CAT، در بافت های مختلف حیوانات، به ویژه در کبد در غلظت های بالا وجود دارد، که می تواند به طور موثر پراکسید هیدروژن را به دی اکسید کربن و آب تجزیه کند تا از سلول ها در برابر آسیب اکسیداتیو محافظت کند (Alfonso-Prieto et al., 2009). نتایج نشان داد که AFB1 به طور قابل توجهی سطوح آنزیم های آنتی اکسیدانی GSH-Px، SOD و CAT را کاهش می دهد، همچنین سطح آنزیم های آنتی اکسیدانی MDA را افزایش می دهد، در حالی که گروه مورین روند مخالف را نشان می دهد، به طور موثر عدم تعادل بین اکسیداز و آنزیم های آنتی اکسیدانی را کاهش می دهد، که نشان می دهد. مورین می تواند به طور موثری استرس اکسیداتیو ناشی از AFB1- را مهار کند.

گزارش شده است که ROS می تواند باعث بیان سایتوکاین های التهابی و فعال شدن فاکتور هسته ای کاپا B(NF-xB) و مسیرهای پروتئین کیناز فعال شده با میتوژن (MAPK) شود (Li et al.2014). پروتئین NF-xB معمولاً همو/هترودایمرهایی را از p65 و p50 تشکیل می‌دهد و در سیتوپلاسم به دلیل تشکیل کمپلکس ترایمر با پروتئین بازدارنده IkB در حالت غیرفعال است (Pantano et al., 2006). پس از تحریک توسط پاتوژن، IkB از تریمر جدا می شود و دایمر NF-kB در معرض توالی های محلی سازی هسته ای (NLS) قرار می گیرد، که به سرعت از سیتوپلاسم وارد هسته می شود و به توالی های خاصی روی DNA هسته متصل می شود و باعث ارتقاء رونویسی ژن‌های مرتبط (Zhang and Ghosh, 2001). TNF- مهم‌ترین سیتوکین پیش‌التهابی است که در فعال‌سازی NF-B نقش دارد و باعث بیان IL{12}}، IL{13}}، COX می‌شود. -2، iNOS، و سایر واسطه‌های التهابی پایین‌دست (راجندران و همکاران 2018). نتایج ما نشان داد که AFB1 به طور قابل توجهی بیان mRNA عوامل التهابی TNF-، IL{18}}، IL{19}}، و واسطه های التهابی COX-2 و iNOS را افزایش داد، اما گروه مورین به طور قابل توجهی بیان را مهار کرد. از این عوامل، نشان می دهد که مورین می تواند به طور موثری پاسخ التهابی ناشی از AFB را در جوجه ها مهار کند.

مطالعات نشان داده اند که استرس اکسیداتیو یکی از عوامل القا کننده آپوپتوز است (چاندرا و همکاران، 2000) و بسیاری از موادی که آپوپتوز را القا می کنند، عموماً اکسیدان یا محرک در متابولیسم اکسیداتیو سلول هستند. فعال شدن NF-kB ممکن است باعث رونویسی ژن‌های فاکتور پرواپوپتوز یا مهار بیان پروتئین‌های ضد آپوپتوز شود. در همین حال، مسیر سیگنالینگ کاسپاز و پاسخ التهابی پشت سر هم هستند. کاسپاز-1 نقش مهمی در ترشح Il دارد و کاسپاز-11 همسانی از کاسپازهای التهابی انسان-4 و کاسپاز-4 کاسپاز{{9} اعضای خانواده است. }} (ون اوپدنبوش و لامکانفی، ۲۰۱۹). ما تأیید کردیم که AFB1 به طور قابل توجهی بیان کاسپاز-1، کاسپاز-3 و کاسپاز-11 را افزایش می‌دهد، در حالی که مورین بیان این عوامل را به‌طور قابل‌توجهی کاهش می‌دهد، و تأیید می‌کند که مورین می‌تواند به طور موثری از فعال‌سازی آن جلوگیری کند. AFB{15}}مسیر سیگنال دهی کاسپاز را در جوجه ها ایجاد کرد.

بر اساس نتایج فوق، تأیید کردیم که مورین می‌تواند به طور موثر آسیب کبدی و کلیوی ناشی از AFB را در جوجه‌ها کاهش دهد، که می‌تواند مبنای تجربی و مرجع نظری را برای کاربرد عملی مورین فراهم کند. در تحقیق بعدی باید حالت تغذیه با مورین مانند آب آشامیدنی انتخاب شود و برای تایید تاثیر مورین در مرغداری به جوجه های بیشتری و جوجه های مسن تر نیاز است.

نتیجه

مورین به عنوان یک ترکیب طبیعی که معمولاً در داروهای گیاهی و مکمل‌های غذایی چینی یافت می‌شود، از نظر ایمنی کاملاً مورد تحقیق و تایید قرار گرفته و نتایج رضایت‌بخشی دریافت کرده است. آزمایش‌های ما بیشتر نشان داد که مورین می‌تواند به طور مؤثری با مهار انتشار HETs، استرس اکسیداتیو، و پاسخ التهابی، آسیب‌های کبدی و کلیوی ناشی از AFB را کاهش دهد. بنابراین، این مطالعه نشان می دهد که مورین به عنوان یک افزودنی خوراک برای محافظت از کبد و کلیه طیور، جلوگیری از مواد مضر در علوفه و بهبود عملکرد طیور دارای پتانسیل است.