ترکیبات درمانی متعددی از منابع طبیعی فراوان آلی جدا شده است.

لطفا تماس بگیریدoscar.xiao@wecistanche.comبرای اطلاعات بیشتر

ترکیبات درمانی متعددی از منابع طبیعی فراوان آلی جدا شده اند که ممکن است منابع اقتصادی و پایداری از ترکیبات با فعالیت های بیولوژیکی ایمن و کارآمد را ارائه دهند. در صنعت آرایشی و بهداشتی، ترکیبات طبیعی با فعالیت های ضد پیری مشتاقانه جستجو می شود. بنابراین، ما عصاره‌های مختلفی از برگ‌های Rubusfraxinifolius تهیه کردیم و از روش‌های مهار آنزیمی برای جداسازی ترکیباتی با اثرات محافظتی در برابر پیری پوست استفاده کردیم. دو تری ترپنوئید از Rubus fraxinifolius Poir جدا شد. برگها. ساختارها با تجزیه و تحلیل طیف سنجی (LC-ESI-MS، 1D/2D NMR) و مقایسه با داده های گزارش شده مشخص شدند. ترکیب 1 و 2 به عنوان 2،3-O-اتیلن گلیکول،{10}}هیدروکسیورها{11}}en-23،28-اسید دیوئیک و 2،{15} تعیین شدند. }O-propanediol،19-hydroxyurs-12-en{19}}oic acid. عصاره متانولی و جدایه ها از نظر اثرات بازدارندگی بر الاستاز و تیروزیناز مورد بررسی قرار گرفتند. ترکیبات 1 و 2 الاستاز را با ICso 122.199 ug/mL و 98.22 ug/mL مهار کردند و همچنین تیروزیناز را با ICso 207.79 ug/mL و 221.51 ug/mL مهار کردند. اتصال مولکولی ثابت کرد که هر دو ترکیب به آنزیم ها میل دارند.

لطفا برای دانستن بیشتر اینجا را کلیک کنید

اگرچه دستیابی به آن چالش برانگیز است، اما مواد طبیعی ضد پیری که برای انسان بی خطر هستند، می توانند از نظر اقتصادی و پایدار از منابع طبیعی فراوان استخراج شوند. حدود 700 گونه از روبوس (Rosaceae) در سراسر جهان پراکنده شده است، حتی اگر گونه های کمی در مناطق استوایی یافت شود. این جنس حاوی مواد مغذی (قند، ویتامین ها و غیره)، متابولیت های ثانویه (تری ترپنوئیدها، فلاونوئیدها، پلی فنل ها و غیره) و دارای فعالیت های ضد پیری بسیاری (آنتی اکسیدان، مورچه الاستاز، مورچه تیروزیناز، ضد کلاژناز، ضد اشعه ماوراء بنفش، ضد التهاب، التیام زخم و غیره)1. علاوه بر این، گونه های روبوس حاوی تری ترپن های متنوع با فعالیت های بیولوژیکی مختلف نیز گزارش شده است.

در اندونزی، R. fraxinifolius Poir. (Rosaceae) در جاوا، بورنئو و غیره توزیع می شود و به عنوان شهرنشین معروف است.سیستانچ چیستعلاوه بر این، برخی از کشاورزان محلی این گیاهان را برداشت می کنند و میوه توت معمولاً به صورت تازه یا منجمد مصرف می شود. مطالعه قبلی ما نشان داد که عصاره ساقه R. frascinifolius فعالیتی برای مهار الاستاز، تیروزیناز و به عنوان یک آنتی اکسیدان دارد. برخی تحقیقات دیگر نیز نشان داد که برگ و میوه R. fraxinifolius دارای فعالیت آنتی اکسیدانی قوی است؟

سیستانچ می تواند ضد پیری باشد

الاستاز یک آنزیم پروتئاز سرین است که نقش مهمی در چروک شدن یا افتادگی پوست از طریق تخریب فیبر الاستیک پوست (الاستین) دارد و باعث از بین رفتن خاصیت ارتجاعی پوست می شود. یکی از آنها الاستاز مشتق از فیبروبلاست پوست است. بنابراین، به عنوان تعدیل کننده تخریب فیبر الاستین که باعث پیری پوست می شود، مهارکننده های الاستاز به عنوان عواملی برای آماده سازی آرایشی توجه را به خود جلب کرده اند. ملانوژنز توسط تیروزیناز انجام می شود و بیوسنتز ملانین را از طریق یک واکنش دو مرحله ای تنظیم می کند. در مرحله اولیه، L-تیروزین به L{4}}،4-دی هیدروکسی فنیل آلانین (L-DOPA) هیدروکسیله می شود. در مرحله دوم، L-DOPA به O-quinone مربوطه اکسید می شود. بنابراین، ترکیبات طبیعی با فعالیت بازدارنده تیروزیناز معمولاً در لوازم آرایشی استفاده می‌شوند که از هیپرپیگمانتاسیون با ملانین جلوگیری می‌کنند و از این رو به سفید شدن پوست کمک می‌کنند.ضد پیری سیستانچمهارکننده‌های آنزیم الاستاز و تیروزیناز را می‌توان به عنوان عوامل سفیدکننده، ضد پیری یا ضد چین و چروک برای درمان اختلالات پوستی ایجاد کرد.

این مطالعه تری ترپنوئیدهای اورسان را از برگ های R.fraxinifolius جدا کرد و ساختار آنها را در آنالیزهای طیف سنجی با استفاده از طیف سنجی جرمی یونیزاسیون الکترواسپری (ESI-MS) و 'H NMR, |3CNMR, و NMR 2D (DEPT, HSQC, HMQC, و HMBC) مشخص کرد. پس از آن، ما سنجش فعالیت های مهاری الاستاز و تیروزیناز عصاره های خام، فراکسیون ها و ترکیبات جدا شده را انجام دادیم.

در این تحقیق فعالیت دو ترکیب منتخب از طریق روش سیلیکو نیز مشاهده شد. یک رویکرد اتصال مولکولی با DockThorl516 انجام شد. ماکرومولکول‌های مورد استفاده در این تحقیق از بانک داده‌های پروتئینی (RCSB PDB,2000) با هویت‌های 2y9x و 3hgp برای تیروزیناز و الاستاز به‌ترتیب‌lyl718 به‌دست آمدند. با PyMOL1920 مشاهده شدند.

نتایج و بحث

The ethyl acetate and methanolic extracts of R. fraxinifolius leaves showed potential as elastase inhibitors with percent inhibitory>40 درصد در 100 ug/mL، در حالی که عصاره n-هگزانی هیچ فعالیتی نداشت (شکل 1). برخی از روبوس نیز فعالیت مهاری الاستاز را نشان دادند، مانند R. Sanctus (درصد مهار 14). robustus و غیره.221. از این رو، ما عصاره‌های فعال را با استفاده از کروماتوگرافی مایع خلاء/VLC تکه تکه کردیم و از هر یک از آن‌ها کلکسیون جمع‌آوری کردیم. فراکسیون های عصاره اتیل استات فعالیت مهاری الاستاز ضعیفی را نشان دادند.<20% in="" 100="" ug/ml),but="" some="" methanol="" fractions="" showed="" potential="" activity="" in="" these="" assays.="" we="" choose="" metha-nol="" fraction="" 8(m8)for="" further="" isolation="" because="" it="" hadthe="" largest="" yield(57%)="" and="" also="" have="" elastase="" inhibitory="" activity(44.82%).m8="" was="" further="" partitioned="" and="" purified="" over="" silica="" gel="" and="" through="" a="" sephadex="" column,="" and="" two="" amorphous="" powders="" were="">

جدایه‌ها با استفاده از کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LCMS)، H و 13CNMR، DEPT، انسجام کوانتومی منفرد هترونهسته‌ای (HSQC)، همبستگی کوانتومی چندگانه هترونهسته‌ای (HMQC) و همبستگی پیوند چندگانه هترونهسته‌ای (HHMBC) شناسایی و مشخص شدند. جدول 1 داده های طیفی NMR ترکیبات را نشان می دهد.

ترکیب 1: به عنوان یک پودر سفید آمورف جدا شد. طیف LCMS-ESI برای این ترکیب یک پیک یون مولکولی را در m/z 543.32 [MH]t نشان می‌دهد، که فرمول مولکولی C32H48O- را با نه معادل غیراشباع نشان می‌دهد. طیف‌های IR حداکثر جذب مربوط به هیدروکسیل (3.343.4 سانتی‌متر در لیتر) را نشان می‌دهد. گروه‌های عملکردی اولفینی (1.684 سانتی‌متر{14}}). علاوه بر این، «طیف‌های H NMR ترکیب I یک سیگنال منفرد را در ۲.۶ نشان داد، یک سیگنال مشخصه برای H-18 از نوع ursane تری ترپن ها با 19-جایگزینی O. تری ترپن نوع 19a-hydroxy-ursane همچنین دارای یک سیگنال پروتون معمولی در ناحیه اطراف ou 2.6 ppm است. این سیگنال بدون محافظ می تواند به طور قابل توجهی با سایر سیگنال های پروتون متیلن معمولی متفاوت باشد، با یک تغییر مشخصه به دلیل یک پروتون الفینی (H12) در فرکانس 5.28 (t,J=6Hz).سیستانچ سودتخصیص تغییر شیمیایی کامل و صریح "H و l3C" توسط طیف های HMQC(13Cx'H) و HMBC(15Cx'H) کمک شد. از پیک متقاطع HMBC، پروتون در ou 2.60 تایید شد که H{11} است. {5}}(شکل 2a). سایر نویسه‌های خاص برای پنج تک‌تک متیل در 1.89،1 یافت شد. J{21}} هرتز)، و سیگنال پروتون الفینی در 5.30 (t، J{24}} هرتز، H-12). طیف 13CNMR کنونی 32 تشدید کربن را نشان می‌دهد و با طیف‌های DEPT و HMQC، دو کربن کربونیل (δC183.70، C{30}} و 8-178.96، C{33}})، یک کربن اولفینی را نشان می‌دهد. at oc 127.23,C-12,an olefinic carbon carbon(oc139.49,C-13),an oxygen-bearing carbon （o{41}}.7, C{43}} ）، ده متیلن آلیفاتیک و شش کربن متیل. دو کربن الفینیک در δ-127.23 (C-12) و 139.49 (C{49}}) مشخصه نوع اورسان-تری ترپنوئید بودند. سیگنال دیگری نشان‌دهنده حضور اتیلن گلیکول (-OCH-CH-O-) در سیگنال‌های δ4.62（d، J{57}}.5 هرتز）، 4.05（d، J=11 بود. 5 هرتز）، 3.52（d، J{{=11.5Hz} و 4.06(d، J{{=11.5Hz) و با δ61.27 (t) و 63.20 (t) پشتیبانی می‌شود. C-2وC-3 بر اساس وجود همبستگی دوربرد در طیف HMBC. از این رو، ترکیب 1 به عنوان 2،{80}}O-اتیلن گلیکول،19-هیدروکسیورها-12-en-23،28-اسید دیوئیک شناسایی شد (شکل 3a).

ترکیب 2: به صورت پودر آمورف سفید به دست آمد. MS-ESI m/z 527.33 [MH]t (محاسبه برای 528.3815). در طیف‌های LCMS-ESI، یک پیک یون مولکولی در m/z 527.33 [MH]t وجود دارد که نشان‌دهنده فرمول مولکولی CH Os است که به 8 درجه غیراشباع نیاز دارد." طیف IR حاوی حداکثر جذب متناظر با هیدروکسیل (2927.8 سانتی‌متر گروه‌های عملکردی {15}} و اولفینی (1686 سانتی‌متر{18}}). علاوه بر این، طیف‌های HNMR برای ترکیب 2 یک واحد در 2.42 را نشان داد که مشخصه H18 یک تری ترپن از نوع اورسان با {{24} است. }} جایگزینی O.عصاره سیستانچ ضد تشعشعسایر طیف‌های مشخصه خاص شامل حضور شش منفرد متیل در og1 بود. -24-28،H-30)،یک دوتایی متیل در 0.91 (d,J{=7Hz)و سیگنال پروتون الفینی در ou 5.37 (d, J=7 هرتز، H{19}}). l3 مربوطه (طیف‌های CNMR و DEPT 33 تشدید کربن را نشان می‌دهند، و طیف‌های HSQC و HMQC وجود یک کربن کربونیل (oc 182.23, C-28)، یک کربن اولفینی （δ{25}}.36، C را نشان می‌دهند. -12)، یک کربن چهارتایی اولفینی （δ-140.24، C{30}})، یک کربن چهارتایی حامل اکسیژن (oc73.68، C-19)، یازده آلیفاتیک متیلن و 7 متیل کربن. این داده ها نشان می دهد که ترکیب 2 دارای اسکلت اورسان-تری ترپنوئید است. سیگنال های دیگر وجود 1،{38}}گروه عاملی پروپاندیول، در og 3.22(d،J{41}} را نشان می دهد. 0.5 هرتز)، 3.42 (d، J=10.5 هرتز)، 1.38 (m)، 1.51 (m) و 4.02 (d، J=11.5 هرتز) و 3.36 (t، J{ {57}}.5Hz).گروه عملکردی آن با C{60}}C3 همبستگی دوربرد دارد. بر اساس این نتایج، ترکیب 2 به عنوان 2،3-O-Propanediol،{{{ 66}}هیدروکسیورها-12-en-28-اسید اوئیک (شکل 2b و 3b). یک ترکیب مشابه 2،3-O-Isopropylidene torments acid، جدا شده از Rubus xanthocarpus است.

در جدول 1، تمام طیف های NMR H و C با اسید عذاب (TA/2a,3a،{3}}تری هیدروکسی{4}}اورسن{5}}اوئیک اسید) مقایسه شدند که یک تری ترپنوئید اورسانی که در چندین گونه روبوس یافت شده است-p اسید تورمنتیک شباهت زیادی با ترکیبات 1 و 2 داشت، به جز اینکه تغییرات شیمیایی مربوط به C-23 و C31-33 متفاوت بود. این قسمت نیز در مورد تأیید شد. آزمایشات DEPT، HMQC و HMBC (شکل 2).

اسید عذاب تری ترپنوئید به طور گسترده در غذاهای گیاهی طبیعی توزیع می شود. دارای فعالیت‌های زیستی مختلفی است: اثرات هیپوگلیسمی، خواص ضد التهابی و ضد آتروژنیک باعث کاهش تکثیر سلول‌های عضله صاف عروق و فعالیت‌های ضد تکثیر در رده‌های سلولی سرطان کلیه، پروستات و ملانوم می‌شود. بنابراین، از آنجا که این ترکیبات دارای اسکلت یکسانی هستند، احتمالاً دارای فعالیت‌های بالقوه مناسب هستند.

شکل 4، فعالیت مهاری الاستاز و تیروزیناز جدایه ها را نشان می دهد. داده‌های به‌دست‌آمده از روش‌های مهار آنزیم آزمایشگاهی به عنوان انحراف استاندارد (SD) بیان شد. ترکیبات 1 و 2 الاستاز را با ICso 122.199 و 98.22 ug/mL مهار کردند و همچنین تیروزیناز را با ICso 2 07.79 و 221.51 ug/mL مهار کردند. برخی از تری ترپنوئیدهای پنتا سیکلیک (اسید اورسولیک و اسید اولئانولیک) فعالیت مهاری الاستاز را گزارش کردند2728. همچنین مقدار مهار الاستاز ترکیب 2 کمتر از ترکیب 1 است. هر دو ترکیب فعالیت بازداری کمتری نسبت به اسید اولئانولیک کنترل مثبت داشتند که دارای مقدار ICso 90.39 ug/mL بود. در توافق، مطالعات قبلی یک ICso برای اسید اولئانولیک 76.5 ug/ml و یک مقدار ICso 31.0 ug/ml برای اسید ursolic28 نشان داد. آنالیزهای جنبشی گزارش‌شده قبلی تری ترپن‌های پنج حلقه‌ای نشان داد که این ترکیبات به طور رقابتی و برگشت‌پذیر نوتروفیل الاستاز را مهار می‌کنند. در همان مطالعه، آزمایش‌های اتصال مولکولی نشان داد که بخش داربست مولکولی 28-COOH و پیوندهای دوگانه در تری ترپن‌های پنج حلقه‌ای برای فعالیت‌های بازدارنده آن‌ها ضروری است.

یکی از مشکلاتی که با افزایش سن ایجاد می شود، هایپرپیگمانتاسیون است.گیاه سیستانچاز این رو، جستجوی مداوم برای عوامل روشن کننده پوست یا رنگدانه های جدید وجود دارد. سرکوب تیروزیناز می تواند علیه ملانوژنز عمل کند. همانطور که در شکل 4 نشان داده شده است، عصاره متانولی و ترکیبات I و 2 فعالیت های متوسطی را به عنوان مهار کننده های تیروزیناز نشان دادند.

در این تحقیق، از داکینگ مولکولی نیز برای تجزیه و تحلیل فعالیت های اتصال ترکیبات انتخابی به تیروزیناز و الاستاز به عنوان اهداف آنها استفاده شد. ساختارهای کریستالی مورد استفاده 2Y9X، یک ساختار بلوری از تیروزیناز از Agaricus bisporus با تروپولون بازدارنده بود. و BHGP، یک ساختار کریستالی از الاستاز پانکراس خوک کمپلکس شده با یک مهارکننده پپتیدیل قوی FR130180. هر دو به این دلیل انتخاب شدند که از همان ارگانیسم مورد استفاده برای سنجش آزمایشگاهی این تحقیق به دست آمده بودند. ماکرومولکول ها همچنین به بازدارنده های مربوطه خود متصل می شوند تا حالت فعال ترکیبات آنزیمی به دست آید. کریستال‌ها به‌عنوان مرکز هدف اتصال مولکولی برای محدود کردن احتمالات اتصال ترکیب مورد استفاده قرار گرفتند تا فرآیند امتیازدهی کارآمدتر شود.

از اتصال مولکولی، میل ترکیبی متوسط ​​برای هر دو ترکیب به دست آمد که در شکل‌های 5 و 6 نشان داده شده است. امتیازات پیوندهای پیوندی کمتر 16. بازسازي تروپولون بازدارنده تعيين‌شده با ميانگين ميانگين اتصال -7.41 kcal/mol انجام شد. میانگین پیوند ترکیبات 1 و 2 به تیروزیناز به ترتیب 84/0/84 کیلوکالری در مول و 37/37 کیلوکالری در مول بود (جدول 2). پیش‌بینی شد که هر دو ترکیب میل ترکیبی بهتری نسبت به بازدارنده دارند.

در همین حال، میانگین قرابت‌های اتصال الاستازدراکینگ 84/0 کیلوکالری در مول -7 بود. میانگین پیوند ترکیبات 1 و 2 به الاستاز به ترتیب 58.58 کیلوکالری در مول و 06.0 کیلوکالری در مول -7 بود. اگرچه نتیجه نشان داد که ترکیب 1 میل ترکیبی کمتری نسبت به کریستال دارد، اما کمی متفاوت است.<0.5 kcal/mol)compared="" to="" the="" inhibitor="" used="" hence="" the="" scores="" may="" ovelrlap31.="" these="" scores="" showed="" that="" both="" compounds="" were="" predicted="" to="" have="" affinities="" toward="" the="" enzymes,="" which="" is="" in="" conjunction="" with="" the="" in="" vitro="" assay="">

مواد و روش ها

رویه های تجربی عمومی با استفاده از دستگاه JEOL JNM-ECZ500R/S1، طیف های H و NMR در 500 مگاهرتز ثبت شدند. طیف مادون قرمز (IR) با FTIR، IRPrestige{4}}، Shimadzu اندازه گیری شد. سایر تجزیه و تحلیل‌ها با استفاده از دستگاه Waters UPLC-MIS XEVO G2-XS QTof، یک دستگاه خوان VersaMax Microplate و یک BioTek ELX800 Microplate Reader، ورق‌های آلومینیومی پوشش‌داده شده با لور TLC-Silica ژل 60 GF254 (Merck, Darmstadt, Germany) انجام شد. کروماتوگرافی ستونی (CC) با استفاده از ژل سیلیکا 60 (Merck, Darmstadt, Germany) با مش 70-230 برای کروماتوگرافی باز و 230-400 مش برای کروماتوگرافی خلاء انجام شد. مواد گیاهی. برگ‌های R. fraxinifolius از یک منطقه مزرعه در کوه پانگرانگو، جاوه غربی در ارتفاع 4343 فوتی، در دسامبر 2018 جمع‌آوری شد. این نمونه توسط گیاه‌شناس (دکتر جونی ستیجو) در مرکز تحقیقات زیست‌شناسی، موسسه اندونزی شناسایی شد. Sciences، اندونزی، با شماره نمونه 033/IPH.1.01/If.07. مجموعه مواد گیاهی از کشاورز مجوز دریافت کرده بود و با مقررات و دستورالعمل های سازمانی مطابقت داشت.

استخراج و جداسازی. برگ های پودری خشک شده در هوا (2300 گرم) با استفاده از دستگاه سوکسله با حلال گرادیان (n-هگزان، EtOAc و MeOH) برای تهیه عصاره های مربوطه استخراج شد، سپس با یک اواپراتور چرخشی تبخیر شد. و فر وکیوم عصاره متانولی (291 گرم) و عصاره اتیل استات (65 گرم) بر روی سیلیکاژل جذب شدند و کروماتوگرافی مایع خلاء / VLC، شستشو با گرادیان گام به گام EtOAc: MeOH (از 1:0 تا 0:1) انجام شد. برای هر عصاره کسری تولید کنید (Eal-Hall و M{10}}میل و). فراکسیون‌های مشابهی که واکنش‌های مثبتی با معرف‌های سولفوریک وانیلین در TLC داشتند، ترکیب شدند. بازده کسر: Eal{11}} (2.27 گرم); Ea4-6(8.47 گرم); Ea7-8(12.9 گرم); و M1-3 (4.89 گرم);M4-5 (5.1g);M6-7 (6.02g);M8(166.42g);M9(10.53g);M{{38 }} (2.9 گرم). همه فراکسیونها برای فعالیت مهارکننده الاستاز، Fr. M8 بیشترین بازده را داشت و فعالیت قوی داشت. Fr. M8 به طور متوالی توسط CC بر روی ژل سیلیکا (شوینده CH2Cl2/MeOH با گرادیان مرحله‌ای) و با استفاده از ستون Sephadex LH{45}} خالص‌سازی شد (شوش‌شده با CHCl3-MeOH 100:10، v/v. دو بخش ماهیت جامد نشان داده و با کلروفرم و متانول متبلور شدند تا دو ایزوله ترکیب 1 (18 میلی گرم) و: 2 (31 میلی گرم) به دست آمد و خلوص همه جدایه ها با TLC دو بعدی و مشاهده لکه با استفاده از سولفوریک 5 درصد ارزیابی شد. اسید در متانول و سپس حرارت دادن صفحات در دمای 110 درجه به مدت 5 دقیقه.

کریستال‌ها با استفاده از کروماتوگرافی مایع-طیف‌سنجی جرمی (LCMS)، افزایش اعوجاج LH و '3C توسط انتقال قطبش (DEPT)NMR، انسجام کوانتومی منفرد هترونهسته‌ای (HSQC)، همبستگی کوانتومی چندگانه هترونهسته‌ای (HMQC)، و heteronuclear چندگانه شناسایی و مشخص شدند. همبستگی اوراق قرضه (HMBC).

سنجش مهار الاستاز سنجش مهار الاستاز همانطور که قبلاً با برخی تغییرات توضیح داده شد انجام شد32. به طور خلاصه، در پلیت‌های میکروتیتر چاهک Nunc، مقدار 20-μL از 0.8-واحد/mL PPE در بافر پایه درجه تریزما (pH 8).0 ） با نمونه‌های 20- میکرولیتر مخلوط شدند و سپس مخلوط‌ها در بافر پایه درجه تریزما تا 180 میکرولیتر رقیق شدند. عصاره های آزمایشی با آنزیم به مدت 15 دقیقه از قبل انکوبه شدند و مقدار 20- میکرولیتر از سوبسترا N-succinyl-Ala-Ala-Ala-p-nitroanilide (A3PVN; 2.9mM) اضافه شد و برای 15 دقیقه دیگر انکوبه شد. کنترل مثبت و چاه های خالی به ترتیب حاوی اسید اولئانولیک و آب بودند. آزمایش در سه تکرار انجام شد، و نرخ مهار با توجه به جذب تعیین شد. در 401 نانومتر با استفاده از میکروپلیت خوان VersaMax. درصد بازداری با استفاده از رابطه زیر محاسبه شد:

که در آن Eb جذب واکنش آنزیم، Eb جذب بلانک آنزیم، T جذب نمونه آزمایش و Tb جذب نمونه آزمایش است. همچنین مقادیر از نمودار خطی درصد مهار الاستاز در برابر غلظت (5{12}},75,100,125,150 ug/mL) تعیین شد. سنجش مهار تیروزیناز مهار تیروزیناز با استفاده از روش تشکیل DOPA-کروم همانطور که قبلا با تغییرات جزئی توضیح داده شد تعیین شد. به طور خلاصه، در 96-صفحات چاهی، مقدار 20 میکرولیتر DMSO (شاهد) یا ترکیبات آزمایشی در غلظت‌های مختلف با مقادیر 40 میکرولیتری از 30 واحد بر میلی‌لیتر قارچ تیروزیناز (سیگما آلدریچ) و 100- میکرولیتر مخلوط شد. 0.{13}}بافر فسفات M (pH 6.8). آنها به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق پیش انکوبه شدند. واکنش‌ها با مقادیر 10mML-DOPA در هر چاهک و انکوبه در دمای 37 درجه به مدت 20 دقیقه آغاز شد. سپس فعالیت تیروزیناز با اندازه گیری جذب در طول موج 475 نانومتر تعیین شد. اسید کوجیک به عنوان کنترل مثبت استفاده شد. آزمایش ها در سه تکرار انجام شد. درصد مهار تیروزیناز با استفاده از رابطه زیر محاسبه شد:

که در آن E جذب واکنش آنزیمی، Eb جذب بلانک آنزیم، T جذب نمونه آزمایش، و Tb جذب نمونه آزمایشی است. همچنین مقادیر از نمودار خطی درصد مهار الاستاز در برابر غلظت (250،125،62.5،31.25،15.6 ug/mL) تعیین شد.

اتصال مولکولی در این تحقیق فعالیت فارماکولوژیک در سیلیکو با داکینگ مولکولی با استفاده از پزشک پیش‌بینی شد. اتصال مولکولی هدفمند با استفاده از یک لیگاند متبلور شده به عنوان مرکز سایت فعال انجام شد. ساختار 2Y9X برای اتصال مولکولی تیروزیناز با تروپولون، یک مهارکننده تیروزیناز قارچ، به عنوان کریستال آن استفاده شد. مرکز محل اتصال مولکولی به ترتیب در ابعاد X، Y و Z در -10.032;-28.769 و-43.467 تعریف شده است. زنجیر A برای استفاده جدا شد و اتم هولمیوم با استفاده از UCSF Chimera از ساختار خارج شد.

ساختار 3HGP، یک الاستاز خوک نیز در این تحقیق مورد استفاده قرار گرفت. FR130180، به عنوان کریستال به عنوان مرکز محل اتصال مولکولی استفاده شد. مختصات برای ابعاد X،Y،Z به ترتیب 12.453،9.237 و 1.199 بود. میل اتصال از ده بهترین منطبق کننده هر محاسبه اتصال مولکولی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

این مقاله از Scientifc Reports|استخراج شده است (2021) 11:20452|https://doi.org/10.1038/s41598-021-99970-x