قسمت 1|تنوع ژنتیکی آنژیوپویتین پلاسما-2 را در ایجاد زیر فنوتیپ های آسیب حاد کلیه دخیل می کند

Pavan K. Bhatraju1,2*, Max Cohen1, Ryan J. Nagao3,4, Eric D. Morrell1, Susanna Kosamo1, Xin-Ya Chai1, Robin Nance5, Victoria Dmyterko1, Joseph Delaney5, Jason D. Christie6, Kathleen D. Liu7, Carmen Mikacenic1، Sina A. Gharib1، W. Conrad Liles8، Ying Zheng3،4، David C. Christiani9،10، Jonathan Himmelfarb2 و Mark M. Wurfel1،2

خلاصه

زمینه:ما قبلا دو مورد را شناسایی کردیمحادکلیهصدمهفنوتیپ‌های فرعی (AKI) (AKI-SP1 و AKI-SP2) با خطرات متفاوت پیامدهای بالینی ضعیف و پاسخ به درمان وازوپرسور. بیومارکرهای پلاسمایی اختلال عملکرد اندوتلیال (گیرنده فاکتور نکروز تومور-1، آنژیوپویتین-1 و 2) زیر فنوتیپ های AKI را متمایز کردند.

با این حال، ناشناخته است که آیا این نشانگرهای زیستی صرفاً نشانگر هستند یا واسطه‌های علّی در توسعه زیر فنوتیپ‌های AKI.

مواد و روش ها:ما برای ارتباط بین پلی مورفیسم های تک نوکلئوتیدی در داخل آزمایش شدآنژیوپویتین-1، آنژیوپویتین-2،وگیرنده فاکتور نکروز تومور 1Aژن ها و AKI-SP2 در 421 بیمار بدحال از تبار اروپایی. پلی‌مورفیسم‌های تک نوکلئوتیدی با عملکرد برتر (FDR < 0.05)="" برای="" بیان="" بیومارکر="" سیس="" و="" اینکه="" آیا="" خطر="" ژنتیکی="" برای="" aki-sp2="" از="" طریق="" نشانگرهای="" زیستی="" در="" گردش="" واسطه="" می‌شود،="" مورد="" آزمایش="" قرار="" گرفتند.="" ما="" همچنین="" مطالعات="" آزمایشگاهی="" را="" با="" استفاده="" از="" سلول‌های="" اندوتلیال="" میکروواسکولار="" کلیه="" انسان="" تکمیل="" کردیم.="" در="" نهایت،="" ما="" کلیرانس="" کلیوی="" بیومارکرهای="" پلاسما="" را="" با="" استفاده="" از="" 20="" مجموعه="" ادرار="" زمان‌بندی‌شده="" مختلف="" محاسبه="">

نتایج:یک نوع ژنتیکی، rs2920656C > T، نزدیکANGPT2با کاهش خطر ابتلا به AKI-SP2 همراه بود (نسبت شانس، 0.45؛ 95 درصد فاصله اطمینان (CI)، 0.31–0.66؛ FDR تنظیم شده=0.003 ) و کاهش آنژیوپویتین پلاسما-2 (p = 0.002). تجزیه و تحلیل استنتاج علّی نشان داد که برای هر آلل مینور (T) خطر ابتلا به AKI-SP2 16 درصد کاهش می یابد. آنژیوپویتین پلاسما 41.5 درصد از خطر مربوط به rs2920656 را برای AKI-SP2 واسطه کرد. سلول‌های اندوتلیال میکروواسکولار کلیه انسانی حامل آلل T rs2920656 سطوح پایین‌تری از آنژیوپویتین تولید می‌کنند، اگرچه این از نظر آماری معنی‌دار نبود (p = 0.07). در نهایت، تجزیه و تحلیل ها نشان داد که آنژیوپویتین-2 در افراد بدحال به حداقل کاهش می یابد.

نتیجه:تجزیه و تحلیل میانجی ژنتیکی شواهد حمایتی را ارائه می‌کند که نشان می‌دهد آنژیوپویتین{0}} نقشی علی در خطر ابتلا به AKI-SP2 ایفا می‌کند.

کلید واژه ها: آسیب حاد کلیه، ژنتیک، اندوتلیوم

برای اطلاعات بیشتر لطفا تماس بگیرید:emily.li@wecistanche.com

Cistanche deserticola از بیماری کلیوی جلوگیری می کند، برای دریافت نمونه اینجا را کلیک کنید

زمینه

حادکلیهصدمه(AKI) 40 تا 60 درصد از بیماران بستری در بخش مراقبت های ویژه (ICU) را تحت تأثیر قرار می دهد و به پیامدهای کوتاه مدت و بلندمدت ضعیف کمک می کند. مطالعات ژنتیکی تا به امروز بر ارتباط بین انواع ژنتیکی و خطر ابتلا به AKI در مقایسه موارد (AKI) با گروه کنترل (بدون AKI) متمرکز شده است. با این حال، این چارچوب ممکن است محدود باشد زیرا مواردی ازحادکلیهصدمهبا رسوب‌کننده‌ها و پروفایل‌های بیولوژیکی مختلف بسیار ناهمگن هستند. ترکیب چنین بیماران AKI برای به حداکثر رساندن حجم نمونه ممکن است منجر به رقیق شدن سیگنال‌های آماری ژنتیکی شود که ممکن است فقط در یک زیرمجموعه مجزا از نظر پاتوفیزیولوژیکی از جمعیت AKI وجود داشته باشد. محدودیت دیگر این است که AKI در جمعیت های بدحال اغلب یک عارضه توهین های جدی مانند سپسیس، جراحی، شوک، ذات الریه و تروما است. استفاده از کنترل ها بدون توسعهحادکلیهصدمهمی تواند مشکل ساز باشد. کنترل‌هایی که دارای یک نوع ژنتیکی پرخطر هستند ممکن است در صورتی که توهین حاد مشابهی را تجربه نکنند، AKI ایجاد نکنند، و بنابراین به عنوان غیر موردی طبقه‌بندی می‌شوند و هرگونه سیگنال ارتباطی بالقوه را تضعیف می‌کنند. استفاده از زیر فنوتیپ های بیولوژیکی متمایز AKI در مطالعات مرتبط ژنتیکی با تمرکز ویژه بر جمعیت AKI و با مقایسه دو زیر فنوتیپ بیولوژیکی متمایز، بر محدودیت های قبلی در فنوتیپ کردن AKI غلبه می کند.

ما اخیراً دو فنوتیپ فرعی AKI (AKI-SP1 و AKI-SP2) را با استفاده از روش تجزیه و تحلیل کلاس نهفته در پانل 29 متغیر بالینی و نشانگر زیستی در دو جمعیت مستقل AKI به شدت بیمار شناسایی کردیم. قابل توجه، AKI-SP2 با پیامدهای بدتر بیمارستانی (مثلاً مرگ و میر، دیالیز جدید، و {8}}عدم بهبودی کلیوی روزانه) در مقایسه با AKI-SP1 همراه بود. ما بعداً این زیر فنوتیپ های AKI را در یک کارآزمایی کنترل تصادفی شده چند مرکزی که قبلاً تکمیل شده بود، وازوپرسین در مقابل تزریق نوراپی نفرین در بیماران مبتلا به شوک سپتیک (VASST) شناسایی کردیم. کارآزمایی VASST بررسی کرد که آیا انتخاب درمان با وازوپرسور باعث بهبود مرگ و میر در افراد مبتلا به شوک سپتیک می شود یا خیر. در حالی که جمعیت AKI در کارآزمایی بالینی هیچ تفاوتی در مرگ و میر از درمان با وازوپرسور نداشتند، AKI-SP1 در مقایسه با AKI-SP2 که تفاوت مرگ و میر نداشت، مزایای مرگ و میر با وازوپرسین داشت. طبق دانش ما، این اولین نمونه از شناسایی زیرگروه های AKI پاسخگو به درمان در بیماران بدحال است.

قابل ذکر است که هیچ متغیری از نظر آماری بهتر از سایر متغیرها برای شناسایی AKI-SP2 نبود (جدول 1). در مقابل، یک مدل سه متغیری با استفاده از آنژیوپویتین پلاسما (ANG{5}})، آنژیوپویتین-1 (ANG-1) و گیرنده فاکتور نکروز تومور محلول{8 }} (sTNFR-1)، دارای عملکرد پیش‌بینی بهینه برای تمایز بودحادکلیهصدمهفنوتیپ های فرعی (C-statistic 0.93). ANG پایین-2، sTNFR کمتر-1 و ANG بالاتر-1 با خطر کمتر AKI-SP2 همراه بود. مطالعات بر روی مدل های حیوانی AKI نشان داده است که این بیومارکرهای پلاسما درگیر هستند

پاتوفیزیولوژی و شدت AKI. با این حال، مشخص نیست که آیا این بیومارکرهای پلاسما نقش علّی در توسعه بالینی دارند یا خیرحادکلیهصدمهفنوتیپ های فرعی شناسایی نشانگرهای علّی می‌تواند به اهداف توسعه دارو برای پیشگیری یا درمان توسعه دارو کمک کندحادکلیهصدمهدر بیماران بدحال و می تواند به طبقه بندی خطر بیمار کمک کند.

تجزیه و تحلیل میانجی‌گری ژنتیکی یکی از چندین رویکرد استنتاج علّی است که می‌تواند مکانیسم بالقوه‌ای را شناسایی کند که توسط آن یک متغیر مستقل (به عنوان مثال، نوع ژنتیکی) بر نتیجه (مانند فنوتیپ‌های فرعی AKI) از طریق یک واسطه توضیحی (مثلاً نشانگر زیستی اختلال عملکرد اندوتلیال) تأثیر می‌گذارد. . این رویکرد به طور گسترده در داده‌های بالینی برای درک مکانیسم‌های علت بیماری استفاده شده است. ما فرض کردیم که جایگاه های صفت کمی (QTL) در سیسANGPT1، ANGPT2، و TNFRSF1Aژن ها با تنظیم سطوح در گردش نشانگرهای زیستی مربوطه خود (ANG-1، ANG-2، یا sTNFR-1) بر توسعه زیر فنوتیپ های AKI تأثیر می گذارند.

مواد و روش ها

جمعیت های مورد مطالعه

ما قبلاً شناسایی زیر فنوتیپ‌های AKI را با استفاده از یک گروه آی‌سی‌یو جمع‌آوری‌شده آینده‌نگر گزارش کردیم: شناسایی پلی‌مورفیسم‌های تک نوکلئوتیدی (SNPs) مستعد تغییر در خطر آسیب حاد ریه (iSPAAR). جمعیت iSPAAR یک مطالعه مورد-شاهدی ژنومی در مورد خطر سندرم زجر تنفسی حاد (ARDS) است که شامل بیماران با و بدون ARDS می‌شود. جمعیت iSPAAR شامل آزمودنی‌هایی از کارآزمایی‌های کنترل تصادفی‌سازی شده قبلی و از یک گروه آی‌سی‌یو ثبت‌نام‌شده آینده‌نگر بود. جزئیات طرح مطالعه برای هر جمعیت ثبت نام شده در iSPAAR قبلاً شرح داده شده است. آلبوترول برای درمان آسیب حاد ریه (ALTA)، کارآزمایی درمان مایعات و کاتتر (FACTT)، اسید چرب امگا{3} انترال، اسید گاما لینولنیک، و مکمل آنتی اکسیدانی در آسیب حاد ریه (OMEGA)

و اپیدمیولوژی مولکولی دیسترس حاد تنفسی (MEA) در بیمارستان عمومی ماساچوست. در iSPAAR، ثبت نام مطالعه 48 ساعت پس از پذیرش در ICU انجام شد. در ثبت نام مطالعه DNA و پلاسما برای تعیین ژنوتیپ و تجزیه و تحلیل نشانگرهای زیستی جمع آوری شدحادکلیهصدمهتشخیص AKI به عنوان افزایش کراتینین سرم (SCr) بیشتر یا برابر با 0.3 میلی گرم در دسی لیتر یا 50 درصد از SCr "پایه" تعریف شد. SCr پایه به عنوان کمترین مقدار قبل از ثبت نام در مطالعه تعریف شد. AKI نیز با استفاده از معیارهای خروجی ادرار اصلاح شده (برون ده روزانه به جای هر 6 ساعت) تعریف شد.

برای تعیین ترخیص کالا از گمرک کلیوی بیومارکرهای پلاسما، ما یک گروه آینده نگر را در بخش مراقبت های ویژه پزشکی و جراحی Harborview، بیماری بحرانی ثبت نام کردیم.حادکلیهصدمهکوهورت (سیا). در صورتی که افراد دارای 2 مورد از 4 معیار سندرم پاسخ التهابی سیستمیک بودند و دارای یک عفونت مشکوک بالینی بودند و یک کاتتر ادراری ساکن در محل داشتند، واجد شرایط ثبت نام بودند. یک جمع‌آوری ادرار زمان‌بندی‌شده کامل شد که حداقل ۲ تا ۴ ساعت به طول انجامید و نمونه‌های پلاسمای EDTA در ابتدا و انتهای جمع‌آوری ادرار زمان‌بندی‌شده جمع‌آوری شد. ترخیص با استفاده از فرمول ترخیص محاسبه شد(X) = U(X) * V/ P(X)، جایی کهU(X) نشان دهنده غلظت املاح ادرار استX, V حجم ادرار را در دوره جمع آوری 2 تا 4- ساعت نشان می دهد وP (X) میانگین غلظت پلاسمایی املاح را نشان می دهدX از جمع آوری اولیه و نهایی خون.

استراتژی ژنوتیپ

ژنوتیپ در 421 بیمار از اجداد اروپایی با استفاده از پلت فرم Illumina 660 (Illumina، San Diego، CA) انجام شد. داده های ژنوتیپ شده با استفاده از فیلتر نرخ تماس نمونه > 0.97، فرکانس آلل جزئی (MAF) > 0.01 و نرخ تماس SNP > 0.95 کنترل شد. پس از کنترل کیفیت، 238 SNP ± 50 کیلو باز ازANGPT1، ANGPT2،وTNFRSF1Aپیدا شدند. پس از عدم تعادل پیوندی (LD) هرس یک r²از {0}}.8، 48 SNP حذف شد که منجر به در مجموع 190 SNP مورد استفاده در تست‌های ارتباط شد. Imputation با استفاده از پانل مرجع پروژه 1000 Genomes با استفاده از IMPUTE2 v2.3.0 انجام شد.

ارزیابی پروتئین پلاسما

بیومارکرهای پلاسما و ادرار با استفاده از روش های ایمونواسی الکتروشیمیایی لومینسانس (Meso Scale Discovery (MSD)، Rockville، MD)، همانطور که قبلاً توضیح داده شد، اندازه گیری شد. خون در لوله های استریل تیمار شده با EDTA جمع آوری شد، ادرار در ظروف استریل جمع آوری شد و هر دو بلافاصله سانتریفیوژ شدند. سپس پلاسما و ادرار در 80- درجه منجمد شدند. نمونه‌ها برای مدت‌های مختلف ذخیره شدند، اما در یک دسته و تنها یک بار برای اجرای اندازه‌گیری نشانگرهای زیستی برای این مطالعه ذوب شدند. تمام اندازه‌گیری‌های نشانگر زیستی در آزمایشگاه‌های تحقیقاتی ریوی Harbor-view در دو نسخه انجام شد.

در تحلیل های سیلیکو

برای آزمایش SNP ها برای بیان اثرات QTL، پورتال Genotype-Tissue Expression (GTEx) را بررسی کردیم.

کشت سلولی

سلول‌های اندوتلیال میکروواسکولار کلیه انسان (HKME Cs) پس از وقفه‌های داوطلبانه بارداری بین 0 تا 135 روز پس از لقاح از کلیه‌های جنین خالص شدند. رضایت آگاهانه برای استفاده از بافت های جنینی از بیماران گرفته شد. سپس به‌طور تصادفی 9 HKMEC اهداکننده مختلف را انتخاب کردیم، نیم میلیون سلول را در فلاسک‌های T25 که با 0.2 درصد ژلاتین پوشانده شده بود و در محیط پایه EBM حاوی 1 درصد آنتی‌بیوتیک-ضد قارچ (فناوری‌های حیات)، 10 درصد FBS نگهداری می‌شد، ذوب و آبکاری کردیم. 100 ug/mL ECGS، 50 ug/mL هپارین و 20ng/mL VEGF (R&D)، به مدت 48 ساعت تا زمان تلاقی. در 48 ساعت، ما DNA ژنومی را از HKMECs خالص کردیم و رویی سلول جمع آوری شد. ما با موفقیت سلول‌های 8 اهداکننده را ژنوتیپ کردیم.

تحلیل آماری

متغیرهای جمعیت شناختی بیمار به عنوان میانگین به علاوه /-انحراف استاندارد یا به عنوان میانه و چارک گزارش می شوند. ابتدا، ما از رگرسیون لجستیک برای آزمایش ارتباط بین 190 SNP و توسعه AKI-SP2 در مقایسه با AKI-SP1 با استفاده از یک مدل ژنتیکی افزایشی استفاده کردیم (حلقه طلایی، MT). مدل ما برای متغیرهای کمکی زیر استفاده شد: سن، جنس، سپسیس، و پنج مؤلفه اصلی. برای محاسبه مولفه های اصلی از روش Eigenstrat v4.2 استفاده شد و پنج مورد برتر به عنوان متغیرهای کمکی گنجانده شدند. نسبت شانس (ORs) با فاصله اطمینان 95 درصد گزارش شده است. برای تجزیه و تحلیل بین گونه‌های ژنتیکی و زیر فنوتیپ‌های AKI، مقایسه‌های چندگانه را با استفاده از آستانه نرخ کشف کاذب بنجامینی-هوکبرگ (FDR) <0.10، که="" تخمین="" می‌زند="" کمتر="" از="" 10="" درصد="" از="" ارتباط‌ها="" با="" مقدار="" fdr="" در="" یا="" کمتر="" از="" آن="" را="" تصحیح="" کردیم.="" این="" سطح="" مثبت="" کاذب="" هستند="" [31].="" در="" یک="" تجزیه="" و="" تحلیل="" حساسیت،="" یک="" ژنوتیپ="" منتسب="" برای="" شناسایی="" snp="" های="" اضافی="" مرتبط="" با="" aki-sp2="" استفاده="">

دوم، ما از تنظیم رگرسیون خطی برای سن، جنس و سپسیس برای تعیین ارتباط بین SNP های با عملکرد برتر و گزارش استفاده کردیم.₂غلظت نشانگرهای زیستی تبدیل شده سوم، ما یک تجزیه و تحلیل استنتاج علّی را برای آزمایش ارتباط بین انواع ژنتیکی و AKI-SP2 و میانجیگری بالقوه ارتباط توسط غلظت نشانگرهای زیستی پلاسما تکمیل کردیم. تحلیل میانجی‌گری با استفاده از اجرای غیرخطی مدل‌سازی معادلات ساختاری اجرا شده در بسته میانجی‌گری برای STATA [32، 33] انجام شد. جزئیات بیشتر از تحلیل استنتاج علی در مکمل آنلاین ارائه شده است. چهارم، ما ارتباط بین انواع ژنتیکی و شدت AKI را که با حداکثر کراتینین سرم اندازه‌گیری می‌شود، از طریق رگرسیون لجستیک تعیین کردیم. جزئیات بیشتر مواد و روش ها در ضمیمه آنلاین ارائه شده است. در تجزیه و تحلیل، ما 190 SNP را ارزیابی کردیم و از یک محافظه کار استفاده کردیممقدار pاز 0.05/190 =2.6 × 10^{− 4}. با توجه به اینکه تقریباً 40 درصد از بیماران ICU به AKI مبتلا می‌شوند و نسبت شاهد (AKI-SP1) به مورد (AKI-SP2) 1.5، حجم نمونه مورد انتظار 421 و MAF حداقل { {16}}.30، ما 81 درصد قدرت برای تشخیص خطر نسبی 1.5 یا بیشتر خواهیم داشت [34]. تجزیه و تحلیل با استفاده از STATA (نسخه 15) و Goldenhelix (نسخه 4.0) تکمیل شد. همه مطالعات توسط بخش موضوعات انسانی در دانشگاه واشنگتن تایید شد. رضایت کتبی آگاهانه از همه افراد ثبت نام شده اخذ شد.

نتایج

ویژگی های جمعیت از 425 بیمار از گروه اعتبار سنجی در کار قبلی ما، 421 بیمار دارای داده های ژنوتیپ در دسترس بودند. دموگرافیک و مشخصات بالینی پایه در جدول 1 توضیح داده شده است. همه افراد از اجداد اروپایی بودند. در مجموع 267 (63 درصد) به عنوان AKI-SP1 و 154 (37 درصد) به عنوان AKI-SP2 طبقه بندی شدند. افراد مبتلا به AKI-SP2 شدت بیماری بالاتری داشتند (میانگین نمرات فیزیولوژی حاد و ارزیابی سلامت مزمن (APACHE) III، 26 ± 111 در مقابل 24 ± 74)، احتمال ابتلا به سپسیس (84 درصد در مقابل 66 درصد) بیشتر بود. در مقایسه با AKI-SP1 احتمال بیشتری داشت که با وازوپرسورها درمان شوند (79 درصد در مقابل 42 درصد).

تنوع ژنتیکی نزدیک به ANGPT2، rs2920656، با AKI-SP2 مرتبط است

از 190 SNP ±50 کیلوباز ژن، 72 مورد در نزدیکی ANGPT1، 100 در نزدیکی ANGPT2، و 18 مورد در نزدیکی ژن TNFRSF1A قرار داشتند. ما یک SNP را شناسایی کردیم که FDR کمتر از 0.05 داشت که با AKI-SP2 در مقایسه با AKI-SP1 مرتبط بود (جدول 2 و شکل 1). هیچ ارتباط قابل توجهی با SNP ها در ANGPT1 یا TNFRSF1A یا نزدیک به آن مشاهده نشد (جدول S2 و S3). SNP که قوی‌ترین ارتباط را با خطر AKI-SP2 نشان می‌دهد rs2920656 بود (OR، 0.45؛ 95 درصد فاصله اطمینان (CI)، 0.31-0.66؛ p <1.4 ×="" 10-5؛="" fdr="0.003)." این="" snp="" اینترونیک="" ≈="" 30="" کیلوبایت="" پایین="" دست="" به="" موقعیت="" 3'="" angp="" t2="" است="" و="" تقریباً="" 3="" درصد="" از="" واریانس="" را="" توضیح="" می="">

توسعه AKI-SP2 (R2). از آنجایی که فقط تعداد کمی از افراد rs2920656 (n=26) هموزیگوت بودند، ما همچنین ارتباط بین rs2920656 و AKI-SP2 را در یک مدل ژنتیکی غالب آزمایش کردیم که مطابقت داشت. نتایج (OR، 0.42؛ 95 درصد فاصله اطمینان (CI)، 0.28-0.64؛ p <1.4 ×="" 10-6).="" ما="" همچنین="" برای="" پیوندهای="" اضافی،="" بالقوه="" قوی‌تر،="" در="" جایگاه="" angpt2="" با="" استفاده="" از="" ژنوتیپ‌های="" منتسب="" آزمایش="" کردیم،="" اما="" هیچ="" ارتباطی="" قوی‌تر="" از="" آنچه="" در="" rs2920656="" مشاهده="" شد="" (جدول="" s4)="" پیدا="" نکردیم.="" در="" یک="" تجزیه="" و="" تحلیل="" حساسیت،="" ما="" آزمایش="" کردیم="" که="" آیا="" شامل="" بیماران="" بدحال="" بدون="" آن="">حادکلیهصدمهبر ارتباط ژنتیکی تأثیر می گذارد. ما بیماران بدون AKI و AKI-SP1 را با هم گروه بندی کردیم و تعیین کردیم که آیا rs2920656 هنوز به شدت با کاهش خطر AKI-SP2 مرتبط است یا خیر. در این تجزیه و تحلیل، 839 بیمار فاقد AKI یا AKI-SP1 و 154 بیمار دارای AKI-SP2 بودند. خطر ابتلای مجدد به AKI-SP2 با داشتن حداقل یک آلل T برای rs2920656 (OR 0.31؛ 95 درصد فاصله اطمینان (CI)، 0.19-0.52. به طور قابل توجهی کاهش یافت. p <0.001) (جدول="" s5).="" در="" تجزیه="" و="" تحلیل="" حساسیت="" دیگری،="" ما="" آزمایش="" کردیم="" که="" آیا="" rs2920656="" با="" کاهش="" خطر="" aki-sp2="" در="" هر="" یک="" از="" چهار="" مطالعه="" مختلف="" که="" در="" ispaar="" گنجانده="" شده="" بودند،="" مرتبط="" است="" یا="" خیر.="" در="" هر="" یک="" از="" سه="" کارآزمایی="" کنترل="" تصادفی="" شده="" (alta،="" factt،="" و="" omega)="" و="" گروه="" آینده="" نگر="" icu="" (mea)،="" برآورد="" نقطه="" ای="" با="" آلل="" جزئی="" rs2920656="" مطابقت="" داشت="" که="" نشان="" دهنده="" کاهش="" خطر="" برای="" ایجاد="" aki-sp2="" بود="" (جدول="" s6).="" ).="" بنابراین،="" rs2920656="" بیشتر="" برای="" تعیین="" ارتباط="" با="" غلظت="" بیومارکر="" پلاسما="" مورد="" تجزیه="" و="" تحلیل="" قرار="">

آلل T rs2920656 با کاهش ANG پلاسما مرتبط است{1}}

سپس ارتباط بین غلظت rs2920656 و ANG پلاسما-2 را تجزیه و تحلیل کردیم. تنظیم برای سن، جنس و سپسیس، هر کپی از آلل T rs2920656 با کاهش غلظت ANG پلاسما log2 مرتبط بود (= − 0.09؛ 95 درصد فاصله اطمینان (CI) {{9} }.15، - 0.04؛ P=0.002). افراد هموزیگوت برای آلل C بالاترین غلظت ANG پلاسما را نشان دادند (40683 pg/ml؛ محدوده بین چارکی (IQR) 19،{19}}،205)، در حالی که افراد هموزیگوت برای آلل T کمترین غلظت را نشان دادند. غلظت‌های ANG{21}} پلاسما (28,308 pg/ml (IQR 14,340-42, 944). علاوه بر این، از 100 SNP آزمایش‌شده در نزدیکی ناحیه ژن ANGP T2، rs29206565 قوی‌ترین ارتباط را با ANG پلاسما داشت. غلظت -2 (شکل 2).

تجزیه و تحلیل میانجی نشان می دهد که ANG-2 در توسعه AKI-SP2 علت است

ما برای شواهدی آزمایش کردیم که ارتباط بین rs2920656 و خطر AKI-SP2 از طریق غلظت ANG{3}} پلاسما انجام می‌شود (شکل 3). اثر کل rs2920656 روی AKI-SP2 کل=− 0.16 در هر آلل (95 درصد فاصله اطمینان (CI) -0.24، - 0 بود. 0.10، p=1.0 × 10− 4)، که نشان می‌دهد برای هر آلل جزئی (الل T) از نوع ژنتیکی، خطر ابتلا به AKI-SP2 16 درصد کاهش می‌یابد. تجزیه و تحلیل واسطه علّی تأثیر غیرمستقیم قابل توجهی را برای rs2920656 بر روی AKI-SP2 شناسایی کرد که از طریق غلظت‌های ANG پلاسما{26}} واسطه شد (غیر مستقیم، - 0.07 در هر آلل؛ 95 درصد فاصله اطمینان (CI) -0}.11، 0.03 - p {34}}.001)، که به این معنی است که نسبت اثر بین rs2920656 و AKI-SP2 که توسط غلظت‌های ANG{39}} واسطه می‌شود 41.5 درصد است.

آلل T rs2920656 با کاهش شدت AKI در 7 روز همراه است

در مرحله بعد، ارتباط rs2920656 را با معیارهای سنتی برای شدت AKI، مانند حداکثر کراتینین سرم و افزایش کراتینین سرم ظرف 7 روز پس از ثبت نام در مطالعه، آزمایش کردیم. در یک مدل ژنتیکی غالب، آلل T rs2920656 با کاهش کراتینین سرم - 0.44 mg/dL (95 درصد فاصله اطمینان (CI) - 0.77--0 مرتبط بود. , − 0.10), p=0.01) پس از تنظیم سن، جنسیت، شاخص توده بدن و وضعیت سپسیس. آلل جزئی rs2920656 نیز با کاهش در افزایش کراتینین سرم بین سطح پایه و روز 7 همراه بود (= - 0.25، 95 درصد فاصله اطمینان (CI)، - 0.46، - 0.03؛ p=0.03)

آلل T rs2920656 با ANG کمتر در کشت سلولی مرتبط است

برای تعیین اهمیت عملکردی rs2920656، آزمایش‌های آزمایشگاهی و آنالیزهای سیلیکونی انجام دادیم. از 8 جنین مختلف انسانکلیهبافت2 نمونه CC، 5 نمونه CT و 1 نمونه TT برای rs2920656 بود. در یک مدل ژنتیکی غالب، غلظت ANG{4}} از نظر عددی در سلول‌های اندوتلیال از اهداکنندگان هموزیگوت برای آلل C و در حامل‌های آلل T کمتر بود، p=0.07 (شکل 4). در پایگاه داده پروژه GTEx، rs2920656 با بیان ژن ANGPT2 مرتبط نبود. با این حال، دو SNP دیگر (rs41311412 و rs2515591) که در LD متوسط ​​(r{12}}.23 و D'=0.86) با rs2920656 هستند با کاهش بیان ژن ANGPT2 همراه بودند (p=4.1 × 10-5) در شریان تیبیال، بافتی که برای سلول‌های اندوتلیال بسیار غنی شده است (جدول S7).

ANG پلاسما{0}} حداقل توسط کلیه ها پاک می شود تا مشخص شود که آیا تفاوت وجود دارد یا خیرکلیهعملکردمی‌تواند بر غلظت ANG{{0}} در پلاسما تأثیر بگذارد، ما کلیرانس کلیوی ANG-2 را در افراد بدحال با و بدون AKI اندازه‌گیری کردیم. در 2{5}} مجموعه نمونه ادرار زمان‌بندی‌شده مختلف با نمونه‌های پلاسمای رزرو شده، میانگین کراتینین سرم 0.{4}} میلی‌گرم در دسی‌لیتر با محدوده بین‌چارکی (IQR) 0.69 تا 1.45 میلی‌گرم در دسی‌لیتر بود. میانه غلظت ANG پلاسما 10261 pg/mL (IQR 6210-19115 pg/mL) بود. در مقابل، غلظت ANG{15}} ادرار 50- برابر با میانگین 206 pg/ml (IQR 11-839 pg/mL) کمتر بود. ترخیص کالا از گمرک کلیه محاسبه شده ANG < 1="" میلی‌لیتر="" در="" دقیقه="" برای="" همه="" جمع‌آوری‌های="" ادرار="" زمان‌بندی‌شده="" بود،="" که="" نشان="" می‌دهد="" غلظت="" ang="" پلاسما="" صرفاً="" به="" عنوان="" تابعی="" از="" بدتر="" شدن="" aki="" افزایش="" نمی‌یابد="" (جدول="">