قسمت 2: اثر Acteoside به عنوان یک محافظ سلولی برای تولید یک سگ شبیه سازی شده

Ji Hye Lee1☯، Ju Lan Chun1☯، Keun Jung Kim1، Eun Young Kim1، Dong-hee Kim1، Bo Myeong Lee1، Kil Woo Han1، Kang-Sun Park1، Kyung-Bon Lee2، Min Kyu Kim1*

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com

لطفا برای قسمت 1 اینجا را کلیک کنید

لطفا برای قسمت 3 اینجا را کلیک کنید

اکتئوزیدکه درسیستانچبسیاری داردسلامتیفواید

تحلیل آماری

داده ها با استفاده از آمار IBM SPSS (SPSS Inc., Chicago, IL USA) با استفاده از آزمون آنالیز واریانس یک طرفه و آزمون تفاوت معنی دار صادقانه توکی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. زمانی که P-value کمتر از 0.05 بود، تفاوت ها از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

نتایج

اثر اکتئوزید بر همگام سازی چرخه سلولی

اثر ازاکتئوزیدهمزمان سازی چرخه سلولی با استفاده از مرتب سازی سلولی فعال شده با فلورسانس (FACS) مورد بررسی قرار گرفت (جدول 1). فیبروبلاست های جنین سگ با غلظت های مختلف تحت درمان قرار گرفتنداکتئوزید(10، 30، 50 میکرومولار) برای مدت‌های مختلف (24، 48، 72 ساعت)، و سلول‌ها به مرحله G0/G1، مرحله S و مرحله G2/M توسط FACS. نتایج FACS با نتایج سلول‌های همگام شده با گرسنگی سرم و مهار تماس مقایسه شد. گرسنگی سرم منجر به بالاترین نرخ همگام سازی چرخه سلولی (88.2 درصد) در مرحله G0/G1 در مقایسه با مهار تماس (84.6 درصد) شد.اکتئوزیددرمان (80.8-84.5 درصد).اکتئوزیددرمان برای 24 ساعت همگام سازی چرخه سلولی G0/G1 با کمترین بازده (80.8، 81.1 و 82.0 درصد) القا شده است.اکتئوزیددر القای همگام سازی چرخه سلولی G{0}}/G1 در غلظت 30 میکرومولار و مدت زمان درمان 48 ساعت (84.5 درصد) بیشترین تأثیر را داشت. با این حال، تفاوت معنی داری بین غلظت و مدت زمان وجود نداشتاکتئوزیددرمان در القای همگام سازی چرخه سلولی G1/G0. به طور کلی،اکتئوزیدتیمار در مقایسه با گرسنگی سرم و مهار تماس از نظر همگام سازی چرخه سلولی G{{0}}/G1 تفاوت معنی داری نشان نداد. همچنین هیچ تفاوتی در هماهنگ سازی چرخه سلولی در مرحله S در بین سه گروه وجود نداشت. علاوه بر این، نسبت سلول های دستگیر شده در مرحله G2/M مشابه سلول های دستگیر شده در مرحله G0/G1 بود.

جدول 1. اثر مهار تماس، گرسنگی سرم واکتئوزیددرمان هماهنگ سازی چرخه سلولی در فیبروبلاست های جنین سگ

شکل 1. سطوح ROS در فیبروبلاست های جنین سگ. همگام سازی چرخه سلولی با (A) مهار تماس، (B) گرسنگی سرم، و (C) درمان اکتئوزید 30 میکرومولار برای 48 ساعت. هیستوگرام سطوح ROS را در فیبروبلاست های جنین سگ نشان می دهد.

اثر اکتئوزید بر ROS و آپوپتوز

اثر ازاکتئوزیدروی ROS توسط FACS با استفاده از کربوکسی-H2DCFDA، یک شاخص استرس اکسیداتیو که در سلول‌ها فعال می‌شود، زمانی که استرازها گروه‌های استات را بین سلول‌ها حذف می‌کنند، تعیین شد (شکل 1). ROS در سطوح پایین‌تری در سلول‌های تحت درمان با اکتئوزید نسبت به سلول‌هایی که با گرسنگی سرم یا مهار تماس هماهنگ شده بودند، شناسایی شد. سطح ROS در گروه درمان اکتئوزید (42.8 درصد) به طور قابل توجهی کمتر از گروه مهار تماس و گرسنگی سرم (به ترتیب 54.3 و 99.5 درصد) بود (جدول 2).

برای درک تأثیراکتئوزیددر مورد بقا و مرگ سلولی، آپوپتوز در سلول ها پس از القای همگام سازی چرخه سلولی بررسی شد. میزان بقای سلول های تیمار شده با آکتئوزید (1.2 ± 94.8 درصد) به طور قابل توجهی بیشتر از هر دو گروه مهار تماس و گرسنگی سرم (87.3 ± 0.5 درصد) بود (شکل 2D). میزان آپوپتوز در گروه گرسنگی سرم

(5.3 ± 52.1 درصد) به طور قابل توجهی بیشتر از گروه های مهار تماس و تیمار اکتئوزید بود (شکل 2E). آپوپتوز مشاهده شده در گروه مهار تماس 10.6 درصد بود که به طور قابل توجهی بیشتر از گروه درمان با آکتئوزید (4.2 درصد) بود (شکل 2E). علاوه بر این، نکروز کمتری در سلول‌های تیمار شده با اکتئوزید در مقایسه با گروه مهار تماس یافت شد (شکل 2F).

سیستانچdeserticola acteoside می تواند افزایش یابدمصونیتو کاهش دهدآپوپتوز

تأثیر اکتئوزید بر رشد آزمایشگاهی جنین‌های انتقال هسته‌ای سگ

برای بررسی اثر اکتئوزید در رشد جنین SCNT، سلول‌های اهداکننده هسته‌ای پس از همگام‌سازی چرخه سلولی به اووسیت‌های دارای هسته سگ منتقل شدند.اکتئوزید. همانطور که در جدول 3 نشان داده شده است، هیچ تفاوت قابل توجهی در رشد اولیه جنین با هسته ای وجود نداشت

جدول 2. کمی سازی ROS

شکل 2. میزان بقای سلولی، آپوپتوز، و نکروز فیبروبلاست های جنین سگ. سلول های آپوپتوز در (A) مهار تماس، (B) گرسنگی سرم و (C) 30 میکرومولاراکتئوزیددرمان برای گروه 48 ساعت توسط FACS تعیین شد. تجزیه و تحلیل کمی نتایج FACS از (D) بقای سلول، (E) آپوپتوز، و (F) نکروز. این آزمایش چهار بار به طور مستقل تکرار شد. (پ<>

سلول های دهنده با روش های مختلف هماهنگ سازی چرخه سلولی یا مهار تماسی یا درمان اکتئوزیدی. با این حال، فقط جنین های سگ SCNT با استفاده از سلول های اهداکننده هسته ای هماهنگ شده در مرحله G0/G1 با اکتئوزید توسعه یافته فراتر از مرحله جنین سلولی 10- مهندسی شده اند.

تولید یک سگ شبیه سازی شده با استفاده از سلول های کشت شده بااکتئوزید

پنجاه و هفت جنین سگ شبیه سازی شده تولید شده با استفاده از سلول های اهدایی مهار شده از طریق عمل جراحی به مجرای تخمدان 6 گیرنده منتقل شدند. هیچ یک از 6 دریافت کننده فرزندی تولید نکردند

جدول 3. توسعه آزمایشگاهی جنین های انتقال هسته ای سگ.

جدول 4. تولید یک سگ شبیه سازی شده توسط SCNT.

یا حتی باردار شد سی و هشت جنین سگ شبیه سازی شده تولید شده از سلول های اهدایی تیمار شده با آکتئوزید نیز با جراحی به مجرای تخمدان 3 گیرنده منتقل شدند. بارداری در یکی از سه مادر جایگزین تایید شد که در نهایت با سزارین توله سگ سالمی با وزن 354 گرم به دنیا آورد (جدول 4 و شکل 3). برای تعیین منشاء ژنوم، تقویت ریزماهواره با ژن های سگ شبیه سازی شده انجام شد. ریزماهواره ها توالی های کوتاه پشت سر هم مکرر هستند که در صفحه نمایش ژنوم برای ردیابی وراثت و تجزیه و تحلیل پیوند در خانواده ها استفاده می شوند. هفت نشانگر ریزماهواره برای شناسایی منشا ژنوم در سگ شبیه سازی شده استفاده شد (جدول 5). سگ کلون شده و سلول های دهنده مورد استفاده برای شبیه سازی سگ دارای نشانگرهای ریزماهواره یکسانی بودند، در حالی که اهداکننده تخمک و جایگزین تنها آلل های جزئی داشتند (جدول 5). در آزمایش نسب مادری، سگ کلون شده و تخمک گیرنده دارای توالی های DNA میتوکندری (mtDNA) یکسانی بودند که نشان می داد mtDNA سگ شبیه سازی شده از اهداکننده تخمک مشتق شده است (جدول 6).

اکتئوزیددر سیستانچ

بحث

همگام سازی چرخه سلولی دهنده عامل مهمی برای بهبود کارایی SCNT است [43]. نرخ رشد جنین SCNT و کارایی شبیه سازی تولیدات حیوانی

شکل 3. یک سگ کلون شده: (الف) سونوگرافی از جنین در وزیکول جنین در 32 روز پس از انتقال جنین. (ب) بیگل شبیه سازی شده در 2 ماهگی.

اکتئوزیدکه درسیستانچمی تواند ضد پیری باشد