جداسازی آماده سازی و خالص سازی چهار ترکیب از Cistanches Deserticola YC Ma توسط کروماتوگرافی جریان مخالف با سرعت بالا

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

خلاصه:

به دنبال یک مرحله غنی‌سازی بر روی یک ستون سیلیکاژل، چهارگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدیبا موفقیت ایزوله شدندCistanches deserticolaو با کروماتوگرافی با جریان متضاد با سرعت بالا (HSCCC) با یک سیستم حلال دو فازی متشکل از اتیل استات-n-بوتانول-اتانول-آب (4{14}}:6:6:50، v/v خالص شد. /v/v). در مجموع 30.9 میلی گرم آکتئوزید، 13.0 میلی گرم ایزواکتئوزید، 12.5 میلی گرم سیرنگالید A 3'- -L-rhamnopyranoside، و 7.2 میلی گرم 2'-استیلاکتئوزید با خلوص بالاتر از 95 درصد، همانطور که توسط HPLC-ELSD تعیین شد، تعیین شد. به دست آمده در جداسازی یک مرحله ای از 297 میلی گرمعصاره سیستانچ دسرتیکولا، به ترتیب. ساختار آنها توسط HR-MS، 1H-NMR، و 13C-NMR شناسایی شد.

واژگان کلیدی: کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا.Cistanches deserticola YC Ma;گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی؛ اکتئوزید؛ ایزواکتئوزید؛ syringalide A 3'- -L-rhamnopyranoside; 2'-استیلاکتئوزید.

مقدمه

Cistanches deserticolaYC Ma، گونه ای ازسیستانچکه متعلق به خانواده Orobanchacea است، یک طب سنتی چینی شناخته شده برای درمان کمبود کلیه، ناباروری زنان، لوکوره مرضی، نوراپراکسی و یبوست پیری است [1]. این گیاه انگلی است که به طور گسترده در شمال غربی چین پراکنده است. تاکنون چندین ترکیب از جمله گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی (PhGs)، ایریدوئیدها و لیگنان ها از این گونه جدا شده است [2]. گزارش شده است که برخی از PhG ها دارای فعالیت های آنتی اکسیدانی، محافظ کبدی و محافظت کننده عصبی هستند [3-6]. با این حال، روش جداسازی و خالص سازی PhG ها دشوار و زمان بر است. علاوه بر این، روش‌های کروماتوگرافی چندگانه کلاسیک نه تنها از تعداد زیادی حلال آلی استفاده می‌کنند، بلکه بازیابی نمونه کمتری را نیز به همراه دارند. کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا (HSCCC)، یک تکنیک کروماتوگرافی پارتیشن مایع- مایع بدون پشتیبانی، بازیابی نمونه عالی را در مقایسه با برخی روش‌های مرسوم ارائه می‌کند و به طور گسترده برای جداسازی و خالص‌سازی محصولات طبیعی مختلف استفاده شده است [7-9] . اگرچه چندین PhG از آن خالص شده استسیستانچجنس و دیگران توسط HSCCC [10-14]، هیچ مقاله ای تخلیص اکتئوزید، ایزواکتئوزید، سیرنگالید A 3'- -L-rhamnopyranoside و 2'-acetylacteoside را در یک سیستم دوفازی گزارش نکرده است.

در این مقاله، ما یک روش ساده برای جداسازی و خالص‌سازی چهار PhG از C. deserticola را گزارش می‌کنیم. در نهایت، 30.9 میلی‌گرم اکتئوزید، 13.0 میلی‌گرم ایزواکتئوزید، 12.5 میلی‌گرم سیرنگالید A 3'- -L-rhamnopyranoside و 7.2 میلی‌گرم 2'-استیلاکتئوزید در یک مرحله به‌دست آمد. جداسازی از 297 میلی گرم کسر با خلوص به ترتیب 99 درصد، 95 درصد، 99 درصد و 98 درصد. ساختار آنها بر اساس داده های طیفی 1H- و 13C-NMR و طیف های HR-MS مشخص شد. ساختار چهار PhG شناسایی شده در این تحقیق در شکل 1 نشان داده شده است.

نتایج و بحث

تجزیه و تحلیل HPLC از عصاره خام

بخش غنی شده از عصاره N-بوتانوئیک از C. deserticola توسط HPLC-UV مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. ستون مورد استفاده Accurasil C18 (250 میلی‌متر × 4.6 میلی‌متر، شناسه 5 میکرومتر) (ابزار علمی Thermo-Fisher، شهر، ایالت، ایالات متحده آمریکا)، فاز متحرک متانول-آب (30:70، حجم / حجم) بود. سرعت جریان 1 میلی لیتر در دقیقه بود. طول موج آشکارساز روی 254 نانومتر تنظیم شد. کروماتوگرام HPLC در شکل 2 نشان داده شده است. پیک های 1 تا 4 مربوط به آکتئوزید (1)، ایزواکتئوزید (2)، سیرنگالید A 3'- -L-rhamnopyranoside (3) و 2'-acetylakteoside (4) است. به ترتیب.

انتخاب سیستم حلال دو فازی

جداسازی موفقیت آمیز توسط HSCCC تا حد زیادی به انتخاب یک سیستم حلال دو فازی مناسب بستگی دارد، سیستم حلال دو فازی با توجه به مقادیر ضریب تقسیم (K) هر جزء هدف انتخاب شد و محدوده بهینه K باید از {{ 2}}.5 تا 2.

در آزمایش، مقادیر K برای اجزای هدف چندین سیستم حلال دو فازی در جدول 1 نشان داده شده است (اگرچه برای پیک 4 کمی بالاتر، نتایج قابل قبول نشان داده شد). در میان آنها، اتیل استات-n-بوتانول-اتانول-آب (40:6:6:50، v/v/v/v) ضرایب تقسیم مناسبی را برای ترکیبات هدف داد. در نهایت، سیستم حلال متشکل از اتیل استات-n-بوتانول- اتانول-آب (40:6:6:50، v/v/v/v) برای جداسازی و خالص سازی چهار ترکیب از C. deserticola، همانطور که در نشان داده شده است، استفاده شد. شکل 3. همانطور که در شکل 2 نشان داده شده است، تجزیه و تحلیل HPLC هر بخش HSCCC نشان داد که چهار PhG خالص (آکتئوزید، 99 درصد؛ ایزواکتئوزید، 95 درصد؛ سیرنگالید A 3'{20}}L-rhamnopyranoside 99 درصد و 2'- استیلاکتئوزید 98 درصد) را می توان از کسر خام به دست آورد.

تجربی

دستگاه

تجهیزات HSCCC به کار گرفته شده در مطالعه حاضر، یک سیستم کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا TBE-300B (شرکت شانگهای تاوتو بیوتک، شانگهای، چین) با سه ستون جداسازی کویل چندلایه آماده سازی به صورت سری (قطر لوله) بود.=2.6 میلی متر، حجم کل=300 میلی لیتر) و یک حلقه نمونه 20 میلی لیتری. شعاع چرخش یا فاصله بین محور نگهدارنده و مرکزمحور سانتریفیوژ (محور سانتریفیوژ (R) 5 سانتی متر بود و مقدار آن از 0.5 در ترمینال داخلی تا 0}.8 در ترمینال خارجی ({5}} r/R، جایی که r فاصله سیم پیچ تا شفت نگهدارنده است). یک دستگاه HX 1{14}}5 با گردش دمای ثابت (شرکت ابزار آزمایشگاهی Beijing Changliu، پکن، چین) برای کنترل دما در آزمایش استفاده شد. سیستم HSCCC مجهز به یک پمپ جریان ثابت فشار متوسط ​​مدل TBP-5002، یک آشکارساز UV مدل TBP{11}} که در 254 نانومتر کار می‌کند و یک ایستگاه کاری مدل V4.0 (شرکت ابزار بیوشیمی Jinda، شانگهای، چین).

تجهیزات کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) مورد استفاده، یک سیستم Agilent 1200 بود که شامل یک پمپ باینری G1312A، یک نمونه‌بردار خودکار G1329A، یک آشکارساز طول موج متغیر G1314A (VWD)، یک G1316A ترموستات G1316A، یک محفظه ستونی با ترموستات G1316A، یک محفظه ستونی G1379، یک G11 ایستگاه کاری برای تشخیص خلوص ها از Alltech 3300 ELSD استفاده شد. طیف‌سنج‌های Agilent 6520 Q-TOF و Bruker AVANCE III 500-NMR برای شناسایی ساختاری ترکیبات استفاده شد. طیف 1H و 13C-NMR (به ترتیب در 500 و 125 مگاهرتز) در دمای اتاق (22 درجه / 295.1 کلوین) اندازه گیری شد.

معرف ها و مواد

اتیل استات، n-بوتانول و اتانول گریدهای تحلیلی و متانول درجه HPLC بودند. تمامی حلال ها از شرکت فناوری کنکورد تیانجین (تیانجین، چین) خریداری شده است. آب Milli-Q (18.2 MΩ) (Millipor, Bedford, MA, USA) برای همه محلول‌ها و رقت‌ها استفاده شد. ریزوم C. deserticola از استان مغولستان داخلی، جمهوری خلق چین، در ژوئن 2009 جمع آوری شد. این گیاه توسط پروفسور لیجوان ژانگ شناسایی شد و یک نمونه کوپن (شماره 20091001) در آزمایشگاه ما سپرده شد.

تهیه نمونه خام

ساقه های گوشتی خشک شده در هوای پودری C. deserticola (1 کیلوگرم) دو بار با اتانول آبی (8 لیتر، 60 درصد حجم / حجم) به مدت 2 ساعت در هر بار رفلکس شدند. عصاره تحت فشار کاهش یافته و در دمای 60 درجه تا تبخیر کامل اتانول تبخیر شد. باقیمانده در آب تعلیق شد و به طور متوالی سه بار با کلروفرم، اتیل استات و n-بوتانول استخراج شد و 16/5 گرم عصاره n-بوتانوئیک پس از تبخیر تا خشک شدن تحت فشار کاهش یافته به دست آمد. سپس عصاره n-بوتانوئیک بر روی یک ستون سیلیکاژل (مش 200-300) با استفاده از شستشوی گرادیان پیشرونده (CHCl3-MeOH، 10:1 → 1:1) جدا شد تا هشت بخش به دست آید. فراکشن 6 (297 میلی گرم) برای جداسازی و جداسازی بیشتر HSCCC استفاده شد.

انتخاب سیستم های حلال دو فازی

سیستم های حلال دو فازی با توجه به ضریب تقسیم (K) اجزای هدف در بخش C. deserticola انتخاب شدند. مقادیر K با آنالیز LC به شرح زیر تعیین شد: مقدار مناسب پودر عصاره خام (کسر 6) در فاز پایینی سیستم حلال حل و با HPLC آنالیز شد. مساحت قله ها به صورت A1 ثبت شد. سپس حجم مساوی از فاز بالایی به محلول اضافه شد و کاملاً مخلوط شد تا به تعادل پارتیشن برسد. سپس فاز پایین با HPLC دوباره مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. نواحی اوج دوم به عنوان A2 ثبت شد. مقادیر K بر اساس معادله زیر محاسبه شد: K=(A1 - A2)/A2 [15،16].

تهیه سیستم حلال دو فاز و محلول نمونه

در مطالعه حاضر، سیستم حلال دو فازی متشکل از اتیل استات - n - بوتانول - اتانول - آب (40:6:6:50، v/v/v/v) برای جداسازی HSCCC استفاده شد. هر حلال به یک قیف جداکننده اضافه شد و در دمای اتاق کاملاً متعادل شد. فاز فوقانی و فاز پایینی کمی قبل از استفاده به مدت 30 دقیقه توسط فراصوت جدا شده و گاز زدایی شدند. محلول نمونه با حل کردن 297 میلی گرم کسر 6 در 15 میلی لیتر از فاز پایین اتیل استات-n-بوتانول-اتانول-آب (40:6:6:50، v/v/v/v) تهیه شد.

روش جداسازی HSCCC

HSCCC به شرح زیر انجام شد. ستون سیم پیچ چند لایه ابتدا با فاز ثابت آلی بالایی پر شد. سپس فاز متحرک آبی پایینی با سرعت جریان 1.5 میلی لیتر در دقیقه به انتهای ستون پمپ شد و در همان زمان، دستگاه HSCCC با سرعت چرخش 900 دور در دقیقه کار کرد. پس از برقراری تعادل هیدرودینامیکی، همانطور که توسط یک فاز متحرک شفاف که در خروجی دم شسته می‌شود (حدود دو ساعت بعد)، یک محلول نمونه 15 میلی‌لیتری حاوی 297 میلی‌گرم عصاره خام (کسر 6) از طریق دریچه تزریق تزریق شد. پساب ستون به طور مداوم تحت 254 نانومتر کنترل شد. چهار بخش پیک بر اساس کروماتوگرام جمع آوری و سپس تحت فشار کاهش یافته تبخیر شدند. دمای دستگاه روی 25 درجه تنظیم شد.

تجزیه و تحلیل HPLC و شناسایی کسرهای پیک HSCCC

بخش اوج از HSCCC توسط HPLC-ELSD آنالیز شد. ستون مورد استفاده Accurasil C18 (250 mm × 4.6 mm، ID 5 μm) بود، فاز متحرک متانول-آب (30:70، v/v) بود. سرعت جریان 1 میلی لیتر در دقیقه بود. ELSD تحت شرایط زیر کار می کرد: دمای 45 درجه، گاز 1.6 L/min. شناسایی ساختاری چهار بخش اوج HSCCC توسط طیف‌سنجی HR-ESI-MS، 1H و 13C-NMR انجام شد.

شناسایی ساختاری

کسر I: HR-ESI-MS مشاهده شده در m/z 623.2001 (M-H)-، محاسبه شده برای C29H35O15، 623.1981. 1H-NMR (500 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 of rhamnose), 2.79 (2H, t, J=7}.5Hz, Ar-CH 2-)، 4.37 (1H، d، J=8 Hz، H-1 گلوکز)، 5.18 (1H، d، J=1 Hz، H{34} } رامنوز)، 6.27 (1H، d، J=15.5 هرتز، Ar-CH{41}}CH-)، 7.59 (1H، d، J {= 15}.5 هرتز، Ar -CH{49}}CH-), 6.5-7.1 (6H, H aromatic).13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ ppm: 131.5 (C-1), 117.2 (C{{65} })، 146.2 (C{-3)، 144.7 (C-4)، 116.4 (C-5)، 121.3 (C-6)، 72.4 (C- )، 36.6 (C-)، 127.7 (Caf-1)، 115.3 (Caf{-2)، 146.9 (Caf-3)، 149.8 (Caf{-4)، 116.6 (Caf{{{ 98}}), 123.2 (Caf{101}}), 168.3 (Caf- ), 114.8 (Caf- ), 148.1 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.1 (Glc{116} }), 81.7 (Glc-3), 70.5 (Glc{122}}), 76.3 (Glc-5), 62.4 (Glc-6), 103.1 (Rha{131} }), 72.3 (Rha-2), 72.1 (Rha-3), 73.9 (Rha{140}}), 70.7 (Rha-5), 18.5 (Rha{146} }). در مقایسه با داده های ارائه شده در ادبیات [17]، کسر مربوط به اکتئوزید است.

کسر II: HR-ESI-MS مشاهده شده در m/z 623.1987 (M-H)-، محاسبه شده برای C29H35O15، 623.1981. 1H-NMR (5{54}}0 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 1.25 (3H، d، J=6.5 هرتز، CH3 رامنوز)، 2.78 (2H، t، J=7 هرتز، Ar-CH2-)، 4.33 (1H، d، J=8 هرتز، H-1 گلوکز)، 5.17 (1H، d، J {{ 33}} هرتز، H-1 رامنوز)، 6.28 (1H، d، J=15.5 هرتز، Ar-CH=CH-)، 7.56 (1H، d، J=15.5 هرتز، Ar-CH{49}}CH-)، 6.5–7.0 (6H، H معطر). 13C-NMR (125 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 131.5 (C-1)، 117.2 (C-2)، 146.2 (C{-3)، 144.7 (C-4 ), 116.5 (C-5), 121.3 (C-6), 72.4 (C- ), 36.7 (C- ), 127.8 (Caf{-1), 115.2 (Caf{{89) }}), 146.8 (Caf-3), 149.7 (Caf-4), 116.6 (Caf{-5), 123.2 (Caf-6), 169.2 (Caf- ), 115.0 (Caf- ), 147.3 (Caf- ), 104.5 (G-1), 75.5 (Glc-2), 84.2 (Glc-3), 70.1 (Glc{122} ), 75.7 (Glc-5), 64.7 (Glc-6), 102.8 (Rha-1), 72.4 (Rha-2), 72.4 (Rha{137}} ), 74.1 (Rha{140}}), 70.5 (Rha-5), 17.9 (Rha-6). داده های طیفی 1H-NMR و 13C-NMR با ایزوآکتئوزید مطابقت داشتند که در ادبیات گزارش شده است [18].

کسر III: HR-ESI-MS مشاهده شده در m/z 6{{1{129}}8}}7.2032 (M-H)-، محاسبه شده برای C29H35O14، 607.2032. 1H-NMR (500 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H, d, J=6 Hz, CH3 rhamnose), 2.84 (2H, t, J=7}.5Hz, Ar-CH 2-)، 4.37 (1H، d، J=8 Hz، H-1 گلوکز)، 5.19 (1H، d، J=1.5 Hz، H{{ 35}} رامنوز)، 6.27 (1H، d، J=16 هرتز، Ar-CH=CH-)، 7.59 (1H، d، J=16 هرتز، Ar-CH =CH-)، 6.6-7.1 (7H، H معطر). 13C-NMR (125 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 130.8 (C-1)، 116.2 (C-2)، 130.9 (C-3)، 156.8 (C{70}} ), 130.8 (C-5)، 116.2 (C-6)، 72.4 (C- ), 36.4 (C- ), 127.8 (Caf{-1)، 114.8 (Caf{{88) }})، 149.8 (Caf-3)، 146.9 (Caf-4)، 116.6 (Caf{-5)، 123.2 (Caf-6)، 168.3 (Caf- )، 115.4 (Caf- ), 148.0 (Caf- ), 104.3 (G-1), 76.3 (Glc-2), 81.7 (Glc-3), 70.4 (Glc{121} ), 76.1 (Glc-5), 62.5 (Glc-6), 103.0 (Rha-1), 72.3 (Rha-2), 72.2 (Rha{136}} ), 73.9 (Rha-4), 70.7 (Rha-5), 18.4 (Rha-6). طبق ادبیات [18]، کسر III با سیرنگالید A 3'- -L-rhamnopyranoside مطابقت دارد.

کسر IV: HR-ESI-MS مشاهده شده در m/z 665.21{{20}} (M-H)-، محاسبه شده برای C31H37O16، 665.2087. 1H-NMR (500 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 1.09 (3H، d، J=6.5 هرتز، CH3 رامنوز)، 2.00 (3H، s، OAc)، 2.72 (2H، t، J { {25}}.5 هرتز، Ar-CH2-)، 4.55 (1H، d، J=8 Hz، H-1 گلوکز)، 4.90 (1H، d، J { {37}} هرتز، H{38}} رامنوز)، 6.29 (1H، d، J=15.5 هرتز، Ar-CH=CH-)، 7.62 (1H، d، J=15.5 هرتز، Ar-CH{53}}CH-)، 6.5–7.0 (6H، H معطر). 13C-NMR (125 مگاهرتز، CD3OD) δ ppm: 131.9 (C-1)، 117.3 (C{-2)، 146.1 (C-3)، 144.7 (C-4 ), 116.4 (C{-5), 121.4 (C-6), 72.7 (C- ), 36.4 (C- ), 127.7 (Caf-1), 115.4 (Caf{{93) }}), 146.9 (Caf-3), 149.9 (Caf-4), 116.6 (Caf-5), 123.2 (Caf-6), 168.1 (Caf- ), 114.7 (Caf- ), 148.2 (Caf- ), 101.8 (G-1), 75.3 (Glc-2), 80.3 (Glc-3), 70.8 (Glc{126} ), 76.2 (Glc-5), 62.3 (Glc-6), 103.3 (Rha-1), 72.0 (Rha-2), 71.8 (Rha{141}} ), 73.7 (Rha{144}}), 70.8 (Rha{147}}), 18.5 (Rha-6), 171.5 (C=O)، 20.9 (OAC). داده های طیفی 1H-NMR و 13C-NMR با داده های 2'-acetylakteoside مطابقت داشتند [17].

نتیجه گیری

یک روش HSCCC برای جداسازی آماده سازی و خالص سازی اکتئوزید، ایزواکتئوزید، سیرنگالید A 3'- -L-rhamnopyranoside و 2'-acetylakteoside ازCistanches deserticola YC Maتاسیس شد. مطالعه حاضر نشان می‌دهد که HSCCC یک تکنیک بسیار قدرتمند برای جداسازی آماده‌سازی و خالص‌سازی اجزای زیست فعال از مواد گیاهی است. همچنین، ترکیبات را می توان در مقیاس به اندازه کافی بزرگ با خلوص بالا جدا کرد و سپس ممکن است به عنوان مواد مرجع برای مطالعات کروماتوگرافی یا زیست فعالی استفاده شود. این روش یک تکنیک عملی، مقرون به صرفه و کارآمد برای جداسازی آماده سازی سریع محصولات طبیعی پیچیده است.

قدردانی

این کار توسط برنامه برای محققان Changjiang و تیم تحقیقاتی نوآورانه در دانشگاه (PCSIRT)، پروژه طرح همکاری بین‌المللی از وزارت علوم و فناوری چین (2008DFB30070) و برنامه علمی پرچم سمت چپ آلاشان ({{2) پشتیبانی شد. }}).

منابع

1. کمیسیون داروسازی چین. فارماکوپه جمهوری خلق چین؛ انتشارات پزشکی مردم: پکن، چین، 2010; جلد 1، ص. 126.

2. جیانگ، ی. Tu، PF تجزیه و تحلیل ترکیبات شیمیایی در گونه Cistanche. J. کروماتوگر. 2009، 1216، 1970-1979.

3. موریکاوا، تی. پان، ی. نینومیا، ک. ایمورا، ک. ماتسودا، اچ. یوشیکاوا، ام. یوان، دی. Muraoka، O. آمینوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی اسیله شده با فعالیت محافظتی کبدی از گیاه بیابانی Cistanche tubulosa. Bioorg. پزشکی شیمی. 2010، 18، 1882-1890.

4. چن، اچ. جینگ، اف سی؛ Li، CL; Tu، PF; ژانگ، QS؛ Wang، ZH Echinacoside از کاهش سطوح خارج سلولی مخطط انتقال‌دهنده‌های عصبی مونوآمین در موش‌های صحرایی ضایعه هیدروکسی دوپامین جلوگیری می‌کند. J. Ethnopharmacol. 2007، 114، 285-289.

5. مورائوکا، او. نینومیا، ک. موریکاوا، تی. واکایاما، اچ. ماتسودا، اچ. Yoshikawa، M. ترکیبات محافظ کبدی از ساقه Cistanche tubulosa. Yakugaku Zasshi 2007, 127, 49-51.

6. کو، کا. سونگ، SH; پارک، اوه کیم، SH; لی، کی. Kim, YC فعالیت‌های محافظ عصبی در شرایط آزمایشگاهی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از کالیکارپا دیکوتوما. Planta Med. 2005، 71، 778-780.

7. لی، م. لیو، آر.ام. Sun، AL; وو، اس جی. لیو، NN جداسازی و خالص سازی روتین و آکاسین از گیاه دارویی چینی Herba Cirsii با ترکیب رزین جذب درشت متخلخل و کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. J. کروماتوگر. علمی 2009، 47، 329-332.

8. یین، اچ. ژانگ، اس. لو، XM; لیو، YH جداسازی و خالص سازی آماده سازی دو گلوکوزید بنزوکسازینوئید از Acanthus ilicifolius L. توسط کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. J. کروماتوگر. 2008، 1205، 177-181.

9. پنگ، ق. لی، آر. هو، جی. چن، ال جی. ژائو، ایکس. لو، HD؛ بله، HY; یوان، ی. جداسازی کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا شیب نرخ جریان وی، YQ پنج دیترپنوئید از Triperygium wilfordii و افزایش مقیاس. J. کروماتوگر. 2008، 1200، 129-135.

10. زی، جی. دنگ، ج. تان، اف. Su، J. جداسازی و خالص سازی اکیناکوزید از Penstemon barbatus (Can.) Roth با بازیافت کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. J. کروماتوگر. B2010, 878, 2665–2668.

11. لی، ال. تسائو، آر. یانگ، آر. لیو، سی. یانگ، جی سی. Zhu، H. جداسازی و خالص سازی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید ازCistanche deserticolaتوسط کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. مواد شیمیایی مواد غذایی 2008، 108، 702-710.

12. لی، ال. تسائو، آر. لیو، ZQ; لیو، سی. یانگ، آر. یانگ، جی سی. زو، اچ. دنگ، ZY; زی، من؛ Fu، ZH جداسازی و خالص سازی اکتئوزید و ایزواکتئوزید از Plantago psyllium L. توسط کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. J. کروماتوگر. 2005، 1063، 161-169. Molecules 2012، 17 8284

13. لی، ال. یانگ، FQ; ژانگ، تی. Tu، PF; وو، ال جی. Ito، Y. جداسازی آماده‌سازی و خالص‌سازی اکتئوزید و 2'-استیل اکتئوزید از Cistanches salsa (CA Mey.) G. Beck توسط کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. J. کروماتوگر. 2001، 912، 181-185.

14. لی، ال. یانگ، FQ; ژانگ، تی. Tu، PF; وو، ال جی. چن، FK; Ito، Y. جداسازی آماده سازی و خالص سازی گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از عصاره مدفوع سگ های بیگل با کروماتوگرافی جریان مخالف با سرعت بالا. جی. لیک. کروماتوگر. مرتبط. تکنولوژی 2001، 24، 2187-2195.

15. Gao, SY; فنگ، بی. زو، RN; ما، JK; وانگ، دبلیو. جداسازی مقدماتی سه آنتراکینون از Rumex japonicus توسط کروماتوگرافی ضد جریان با سرعت بالا. Molecules 2011, 16, 1201-1210.

16. او، ف. بای، YH; وانگ، جی. وی، جی. یو، سی. لی، اس. یانگ، WL; هان، CH جداسازی و خالص سازی اوریدونین از کل گیاه ایزودون روبسسنس توسط کروماتوگرافی جریان مخالف با سرعت بالا. Molecules 2011, 16, 7949-7957.

17. کوبایاشی، ح. اوگوچی، اچ. تاکیزاوا، ن. میاسه، تی. اوئنو، آ. عثمانقانی، ک. احمد، م. گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی جدید از قلاب cistanche tubulosa (Schrenk). f. I. شیمی. فارم. گاو نر 1987، 35، 3309-3314.

18. یوشیزاوا، ف. دیاما، ت. تاکیزاوا، ن. عثمانقانی، ک. احمد، م. اجزای تشکیل دهنده cistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. II. جداسازی و ساختارهای یک گلیکوزید فنیل اتانوئید جدید و یک گلیکوزید نئولینان جدید شیمی. فارم. گاو نر 1990، 38، 1927-1930.