فرمول میسلی کوئرستین از سمیت نفروتوکسی سیس پلاتین جلوگیری می کند

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

آلفردو جی. کازانووا، مارتا پریتو، کلارا ای کولینو، و همکاران.

فلاونوئید آنتی اکسیدانکورستینبرای پیشگیری نشان داده شده استسمیت کلیویدر مدل های حیوانی و در یک مطالعه بالینی و بنابراین یک کاندیدای پیشگیری کننده بسیار امیدوارکننده در حال توسعه است.کوئرستینحلالیت بسیار کم است که کاربرد بالینی را با مشکل مواجه می کند. هدف از این کار بررسی فراهمی زیستی و اثر محافظتی نفروفرمولاسیون مایسلی Pluronic F{0}}در محصور شده در موش‌ها بود.کورستین(P-کورستین) با بهبود حلالیت در آب. تجویز داخل صفاقی P-کورستینمنجر به افزایش غلظت پلاسمایی و فراهمی زیستی می شودکورستیندر مقایسه با تجویز هممولار طبیعیکورستین. علاوه بر این، P-کورستینخواص کلی محافظت از نفرو را حفظ می کند و حتی در مقایسه با طبیعی، برخی از پارامترهای عملکرد کلیوی را اندکی بهبود می بخشد.کورستین. به طور خاص، P-کورستینافزایش کراتینین پلاسما (از 3.4±0.5 به 1.2±0.3 میلی گرم در دسی لیتر) و اوره (از 43.8±.9.9 به 184.1±184.1 پلاسما را کاهش داد. 50.1 mg/dL) و کاهش کلیرانس کراتینین (از {{2{22}}}}}.02±0.08.0.58±0.19 میلی لیتر در دقیقه) ناشی از داروی شیمی درمانی نفروتوکسیک سیس پلاتین، و شواهد بافت شناسی آسیب لوله ای را بهبود بخشید. این فرمول جدید با خواص جنبشی و بیودارویی افزایش یافته امکان کاوش بیشتر را فراهم می کندکورستینبه عنوان یک کاندید محافظت از نفر در دوزهای پایین تر و از طریق روش های تجویزی که جهت استفاده بالینی آن است.

کلید واژه ها:سیس پلاتین؛سمیت کلیوی; فلاونوئید؛کورستین; محافظت از نفرو؛ فراهمی زیستی؛کلیه;میسل انحلال پذیری؛ فرمولاسیون

پیشگیری ازسمیت کلیوی

برای بیماری کلیوی روی Cistanche para que sirve کلیک کنید

1. مقدمه

داروسمیت کلیوییک نگرانی جدی پزشکی و اقتصادی است [1،2]، به طوری که 25 درصد از 100 داروی پرمصرف در بخش های مراقبت های ویژه، نفروتوکسیک هستند [3]، وسمیت کلیویهمچنین یکی از دلایل مهم کاهش نامزد در طول فرآیند کشف دارو است. سیس پلاتین یک عامل ضد تومور مبتنی بر پلاتین است که اغلب در درمان انواع نئوپلاسم های بدخیم جامد استفاده می شود [5،6]. نزدیک به 30 درصد از بیماران شواهدی از این موضوع را نشان می دهندسمیت کلیویدر طی ده روز اول پس از تجویز سیس پلاتین، که محدودیت مهمی برای دوز و اثربخشی درمانی آن ایجاد می کند [5-8]. سیس پلاتین حادسمیت کلیویباعث ایجاد یک توبولوپاتی ناشی از تجمع 5- برابری در سلول های اپیتلیال لوله پروگزیمال، با توجه به غلظت پلاسمایی آن [9-1l]، و به میزان کمتر در توبول دیستال می شود [12،13] ].

توبولوپاتی سیس پلاتین دارای اختلالات الکترولیتی (عمدتا هیپومنیزیمی و هیپوکالمی) وحادکلیهصدمه(AKI).AKI یک سندرم شایع است که با کاهش ناگهانی میزان فیلتراسیون گلومرولی (GFR)، آزوتمی شدید، و اغلب، الیگوری یا آنوری مشخص می شود [7،14]. علاوه بر این، اختلال عملکرد اندوتلیال که مقاومت عروق کلیوی را افزایش می‌دهد و خودتنظیمی را مختل می‌کند نیز به AKI ناشی از سیس پلاتین کمک می‌کند. به طور معمول، AKI یک وضعیت برگشت پذیر است، که با این وجود تأثیر مرتبطی بر پیامدهای بیمار دارد، از جمله افزایش مرگ و میر در بیمارستان (بیش از 50 درصد موارد در میان بیماران بدحال)، بستری طولانی مدت، هزینه های اضافی مراقبت های بهداشتی، و در میانه. و سناریوهای بلندمدت، افزایش خطر توسعهبیماری مزمن کلیویو مرگ و میر عمومی و قلبی عروقی [7،14]. در سطوح درون سلولی و مولکولی، سمیت سلولی لوله سیس پلاتین توسط آسیب میتوکندری انجام می شود، که تنفس را محدود می کند، استرس اکسیداتیو ایجاد می کند و باعث مرگ سلولی آپوپتوز و نکروز و یک پاسخ التهابی مضر می شود [13،15،16]. استرس اکسیداتیو به عنوان یک مکانیسم مرکزی سمیت سلولی سیس پلاتین شناخته شده استسمیت کلیوی[12،13،{2}}]، ناشی از افزایش تولید گونه‌های فعال اکسیژن و یک سد آنزیمی آنتی‌اکسیدان درون‌زا ضعیف شده [5،7،18].

اقدامات پیشگیرانه موثر برای سیس پلاتینسمیت کلیوییک نیاز بالینی برآورده نشده برای بهبود مشخصات دارویی - سم شناسی و به حداکثر رساندن کاربرد آن است. راهبردهای پیشگیرانه موجود، از جمله هیدراتاسیون شدید، تنها حفاظت محدودی را نشان داده اند [6،19]. استراتژی‌های جدید مبتنی بر تجویز همزمان از نفروپروتکتیو در دست توسعه است. کاندیدای محافظت از نفر شامل فرمولاسیون منیزیم|6،9 و مهمتر از همه، انواع آنتی اکسیدان ها است [6،20،21]. فلاونوئیدها خانواده ای از محصولات پلی فنلی محافظ نفر هستند که از سبزیجات، میوه ها، آجیل و شراب به دست می آیند و دارای خواص آنتی اکسیدانی قوی هستند [22].کوئرستینیک فلاونوئید برجسته است که اثرات مفید زیادی دارد [23،24]، از جمله حذف گونه های فعال اکسیژن، سرکوب فعال شدن پلاکت ها، محافظت از اندوتلیال، تعدیل التهاب، مهار آپوپتوز، سرکوب تومور، و محافظت از نفرو. مدیریت مشترککورستیندر کنار درمان با سیس پلاتین در یک مدل تومور حیوانی، محافظت از نفرو بدون تداخل با اثر ضد توموری فراهم می شود |25،26]. در واقع، یک متاآنالیز به روز شناسایی شدکورستینبه عنوان یک نامزد بسیار امیدوارکننده به عنوان یک محافظ عصبی برای توسعه بالینی بیشتر [21]. به طور مداوم، یک مطالعه بالینی اخیر یک اثر محافظتی ازکورستیندر مورد نفروپاتی ناشی از ماده حاجب (CIN) [27].

یک محدودیت قوی برای کاربرد بالقوهکورستین(به طور کلی با فلاونوئیدها مشترک است) انحلال پذیری کم آن در آب ناشی از ساختار شیمیایی و اجزای آن است که جذب آن در روده کوچک و در نتیجه فراهمی زیستی و اثربخشی آن را کاهش می دهد [23،24، 28]. جالب اینجاست که گلوکز لیپوفوبیککورستینکونژوگه ها (گلوکزیدها) نسبت به آگلیکون های لیپوفیل قابل دسترسی زیستی بیشتری هستند، زیرا دومی کمتر در لومن روده حل می شود [24]. در حقیقت،کورستینگلوکوزیدهای پیاز بالاترین میزان جذب را نشان می دهند و چربی رژیم غذایی افزایش می یابدکورستینجذب آگلیکون در روده کوچک [29]. حلالیت در آب بسیار کمکورستیننه تنها استفاده بالینی آن را با راه های تجویز عملی (یعنی خوراکی، داخل عروقی) مختل می کند، بلکه تحقیقات پیش بالینی را نیز محدود می کند. با این وجود، در مدل‌های حیوانی، می‌توان از مسیرهای جایگزین (یعنی داخل صفاقی) با سوسپانسیون‌های دارویی برای اهداف اثبات مفهوم استفاده کرد [25،26].

کوئرستینفرمول‌بندی‌هایی با مواد حامل جدید با قابلیت حل‌پذیری در آب بهبود یافته ساخته شده‌اند که خواص زیست‌پزشکی آن‌ها نیاز به آزمایش دارد. پولوکسامرهای پلورونیک دسته ای از مواد حامل هستند که به دلیل توانایی آنها در تشکیل میسل در محیط های آبی، میزبان و جذب ترکیبات نامحلول در آب را افزایش می دهند [30]. در اینجا، ما فرض کردیم که یک فرمول میسلی ازکورستینمحصور شده با Pluronic F127 که قبلاً توضیح داده شد [31]، خواص محافظت کننده نفرو طبیعی را حفظ می کند.کورستیندر حالی که ویژگی های بیودارویی بهبود یافته را برای جابجایی، فرمولاسیون و تجویز ارائه می دهد.

جلوگیری کردنسمیت کلیوی:کورستین

2. نتایج

یک مطالعه فراهمی زیستی و یک مطالعه محافظت از نفر با فرمول جدید سلول های mi-cellar انجام شد.کورستینمحصور شده با Pluronic F127[31، و فرمول سنتی طبیعی ماکورستین|25،26|(مواد و روش ها را در زیر ببینید). در حالی که این دومی یک سوسپانسیون حاوی یک تانسواکتیو بود، اولی یک محلول نمکی بدون افزودنی اضافی بود. فرمول سنتی ما از طبیعیکورستینفقط برای مقاصد آزمایشی مناسب بود، زمانی که ساکن می ماندند رسوب می کرد و رسیدگی و تزریق آن دشوارتر بود. در مقابل، فرمول مایسل به عنوان یک محلول رفتار کرد و هیچ گونه ناراحتی در استفاده از آن نشان نداد.

2.1. مطالعه قابلیت زیستی

به عنوان روشی برای فراهمی زیستی مقایسه ای، تکاملکورستین(Q) غلظت پلاسما به دنبال یک بولوس داخل صفاقی منفرد طبیعی و P- مورد مطالعه قرار گرفت.کورستین(PQ). شکل 1 میانگین را نشان می دهدکورستینمنحنی های سطح پلاسما پس از تجویز یک دوز ازکورستینیا P-کورستین. حداکثر غلظت دارو (Cmax) مشاهده‌شده در گروه‌های Q و PQ به ترتیب 1.14±1.28 میکروگرم در میلی‌لیتر و 8.90±4.62 میکروگرم بر میلی‌لیتر بود، یعنی افزایش 7 برابری برای P-{9}}.کورستین، نشان می دهد که فرمول مایسل باعث افزایش جذب دارو می شود.

شکل 1. تکامل غلظت پلاسمایی کورستین پس از تجویز داخل صفاقی یک بولوس منفرد P-کورستین equimolar و کورستین طبیعی.

مقادیر به عنوان میانگین ± خطای استاندارد میانگین (SEM) (n{0}} در هر گروه) بیان می شوند. *پ<0.05;><0.01;><0.001 vs.qgroup.="">کورستین(50mg/kg، ip.);PQ:100mg/kg.pP-کورستین(حاوی 50 میلی گرم بر کیلوگرمکورستین).

جدول 1. پارامترهای فارماکوکینتیک پس از تجویز داخل صفاقی P-کوئرستین و کورستین طبیعی (n=5 در هر گروه).

س: کوئرستین(50mg/kg، ip; PQ: P-کورستین(100 mg/kg، ip).AUCo24: ناحیه زیر منحنی جزئی. AUCo: سطح زیر منحنی کل. MRT: میانگین زمان ماند؛ t1/2: نیمه عمر حذف. X: شیب فاز پایانی.

جدول 1 پارامترهای فارماکوکینتیک مستقل از مدل را نشان می دهدکورستیندر موش های صحرایی پس از تجویز یک دوز بولوس طبیعیکورستینیا P-کورستین. زمان به Cmax از 15 دقیقه افزایش یافت (برای طبیعیکورستین) تا 1 ساعت (برای کوئرستین P). این تأخیر ممکن است به دلیل انتشار مداوم آن باشدکورستیناز فرمول مایسل قرار گرفتن در معرض کلی موش ها با فلاونوئید برای P- به طور قابل توجهی بالاتر بود.کورستینهمانطور که توسط ناحیه بزرگتر زیر منحنی (AUC) نشان داده شده است که به 302.5 درصد فراهمی زیستی بالاتر تبدیل می شود. این نتایج نشان می دهد که حلالیت بالاتر فرمول مایسل باعث افزایش جذب آن می شود.

2.2. مطالعه اثربخشی Nephroprotectioe 2.2.1. حالت فیزیولوژیکی

همانطور که با تکامل وزن بدن (شکل 2a) مشهود است، سلامت عمومی پس از درمان با سیس پلاتین در مقایسه با حیوانات کنترل بدتر شد. نه طبیعیکورستیننه P-کورستینبه طور قابل توجهی اثر سیس پلاتین را تغییر داد. با این حال، هر دوکورستیندرمان ها تقریباً به طور کامل از افزایش آن جلوگیری کردندکلیهنسبت وزن بدن القا شده توسط سیس پلاتین (شکل 2b)، پارامتری که با میزان ساییدگی مرتبط است.سمیت کلیوی[32].

شکل 2. تکامل وضعیت سلامت عمومی. (الف) درصد تغییرات وزن بدن در طول آزمایش؛ (ب) نسبت کلیه به وزن بدن در روز 9.

مقادیر به صورت میانگین ± SEM (n=3-5 در هر گروه) بیان می‌شوند. *پ<><0.01;><0.001vs.controlgroup.><0.05;><0.01 vs.="" cp="" group.cp:cisplatin(6.5="" mg/kg,="" i.p.)on="" day="">

CP به علاوه Q:کورستین(50mg/kg، IP) به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز سوم. CP به علاوه PQ:P-کورستین(100 mg/kg، درون صفاقی) به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3.

2.2.2. ارزیابی عملکرد کلیه و بافت کلیه

بر اساس معیارهای بین المللی، AKI با توجه به افزایش غلظت کراتینین پلاسما (Crp)[33-35]، یک نشانگر جایگزین نرخ فیلتراسیون گلومرولی (GFR) تعریف و تشخیص داده می شود. پارامترهای دیگر، مانند غلظت اوره پلاسما، نیز اغلب به عنوان شاخص آزوتمی ارزیابی می شوند [36-38]. افزایش Crp و اوره پلاسما نشانه هایی از کاهش GFR و AKI است. در مطالعه ما، عملکرد کلیوی توسط سیس پلاتین به شدت ناتوان بود و این اثر تا حدی توسط سیس پلاتین بهبود یافت.کورستین. P-کورستینفعالیت کمی جسورتر از طبیعی نشان دادکورستینهمانطور که با آسیب خفیف تر و نمایه بهبود بهبود یافته نشان داده شده است (شکل 3). موش های گروه سیس پلاتین (CP) تحت یک AKI آشکار قرار گرفتند، زیرا آنها افزایش پیشرونده و قابل توجهی در سطح کراتینین و اوره پلاسمایی خود در مقایسه با گروه کنترل تجربه کردند (شکل 3a,b). این پارامترها همچنین در گروه CP به علاوه Q و CP به علاوه PQ افزایش یافتند، اما به میزان قابل توجهی کمتر. تفاوت بین گروه های CP به علاوه Q و CP به علاوه PQ از نظر آماری معنی دار نبود، با این حال، موش های تحت درمان با P-کورستینسطح کراتینین و اوره کمی کمتر از آنهایی که با طبیعی درمان شده بودند نشان دادندکورستین. کلیرانس کراتینین (ClCr) یک روش استاندارد برای اندازه گیری GFR است ]39،40]. در توافق با داده های کروم، سیس پلاتین باعث افت عمیقی شد که تا حدی توسط آن کاهش یافت.کورستین(شکل 3ج). با این حال، در این مورد، تفاوت قابل توجهی بین پی-کوئرستین و کورستین طبیعی مشاهده شد که اولی به طور قابل توجهی در بهبود و تسریع بهبودی مؤثرتر بود. نکته قابل توجه، Clcr و Crpl به شیوه ای معکوس نسبت رفتار می کنند، که فقط در حالت پایدار مشهود است. با این حال، در طول AKI، عملکرد کلیه به طور مداوم و سریع در حال تغییر است، که منجر به جدا شدن جزئی این رابطه می شود.

شکل 3. تکامل پارامترهای کلیوی.

(الف) غلظت کراتینین پلاسما؛ (ب) غلظت اوره پلاسما؛ (ج) کلیرانس کراتینین؛ (د) پروتئینوری؛ و (e) KIM{0}} دفع ادرار.

مقادیر به صورت میانگین±SEM(n{0}} در هر گروه) بیان می‌شوند. *پ<><><0.001 vs=""><0.05;><0.01vs.cp group.cp:cisplatin(6.5="" mg/kg,i.p.)on="" day="">

CP به علاوه Q:کورستین(50mg/kg، IP) به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، IP) در روز 3؛ CP به اضافه PQ:P-کورستین(100mg/kg،IP.)به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5mg/kg،IP) در روز 3.KIM-1:کلیهصدمهمولکول 1.

پروتئینوری نیز اغلب در زمینه آسیب شناسی کلیه اندازه گیری می شود. بسته به الگوی آسیب اساسی، پروتئینوری ممکن است منشا گلومرولی داشته باشد (یعنی افزایش نفوذپذیری سد فیلتراسیون گلومرولی) یا مانند سیس پلاتین.سمیت کلیوی[13]، ممکن است از بازجذب لوله ای معیوب به دلیل آسیب لوله ایجاد شود. افزایش غیر قابل توجهی در پروتئینوری در گروه CP و CP-Q در روز 7 مشاهده شد (اگرچه در گروه دوم کمتر مشخص شد) که در روز 9 به حالت عادی بازگشت.کلیهصدمهمولکول 1; KIM{1}})[41,42] به طور قابل توجهی توسط سیس پلاتین افزایش یافت، و این افزایش توسط هر دو شکل کاهش یافت.کورستین، اگرچه P-کورستیندوباره کمی موثرتر بود.

مطالعه بافت شناسی بافت کلیه با یافته های بیوشیمیایی مطابقت داشت. نمونه‌های موش‌های تحت درمان با سیس پلاتین، نکروز توبولار عظیمی را در نوار فوقانی بصل النخاع بیرونی، همراه با مقداری محبت قشر مغز نشان دادند.کورستینکاهش آسیب قشر مغز (شکل 4 و 5). موش‌هایی که فقط عامل نفروتوکسیک را دریافت کردند، اتساع و انسداد لوله‌ای (که به‌عنوان ماده هیالین انباشته دیده می‌شود)، و نکروز لوله‌ای همراه با اپیتلی‌زدایی و ریزش سلولی ایجاد کردند. هر دوکورستینتیمارها به طور مشابه آسیب قشر مغز ناشی از سیس پلاتین را کاهش دادند اما تأثیری بر آسیب مدولاری نداشتند (شکل 4 و 5).

شکل 4. تصاویری از نمونه های کلیوی رنگ آمیزی شده با هماتوکسیلین و ائوزین.

فلش های سیاه: نکروز لوله ای و ریزش سلولی. فلش های آبی: اتساع لوله ای؛ فلش سبز: رسوبات داخل لوله ای از مواد هیالین. CP: سیس پلاتین (6.5 mg/kg، IP) در روز 3.

CP به علاوه Q:کورستین(50 میلی گرم/کیلوگرم، داخل صفاقی) برای 9 روز و سیس پلاتین (6.5 میلی گرم/کیلوگرم، داخل صفاقی) در روز سوم؛ CP به علاوه PQ:P-کورستین(100 mg/kg، داخل صفاقی) به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3.

شکل 5. کمی سازی آسیب کلیوی.

مقادیر به صورت میانگین ± SEM (n =5 تصویر× 3 موش در هر گروه) بیان می‌شوند. * پ<><0.001 vs.=""><0.05 vs.cp="">

CP: سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3؛ CP به علاوه Q:کورستین(50mg/kg، IP برای 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، IP) در روز سوم؛ CP به علاوه PQ:P-کورستین(100 mg/kg، IP) برای 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3.AU: واحدهای دلخواه.

3. بحث

نتایج ما نشان می دهد که یک فرمول میسلی ازکورستینبا Pluronic F127 (P-کورستینبا دارا بودن خواص بیودارویی افزایش یافته، فراهمی زیستی این فلاونوئید آنتی اکسیدانی را افزایش داده و خواص کلی محافظت کننده نفرو در مقایسه با طبیعی را حفظ کرده (یا حتی اندکی بهبود بخشیده است).کورستین.

کوئرستینبه عنوان یک نامزد امیدوارکننده برای محافظت در برابر آسیب کلیوی ناشی از تعدادی دارو و سموم، از جمله سیس پلاتین [25،26]، متوترکسات [43.44]، سیپروفلوکساسین [45]، NaF [46]، HgCl [47l، و کادمیوم فرض شده است. [48]. اگرچه این مطالعات اثربخشی پیش بالینی را نشان دادند،کورستینبه دلیل موانع فرمولاسیون و فراهمی زیستی کم، در سناریوهای بالینی مشابه آزمایش نشده است، به جز یک مطالعه بالینی که در آنکورستینتا حدودی از CIN محافظت می کند [27]. هر دو محدودیت پیامدهای حلالیت بسیار ضعیف در آب (فقط 0.01 میلی گرم در میلی لیتر، در 25 درجه [49])کورستینو پایداری کم آن (که تحت تأثیر دما، pH، هیدروکسیلاسیون، فعالیت آنزیمی و یون های فلزی است) [28،29،50]. به صورت خوراکی تجویز می شودکورستیندر طول ترانزیت معده به دلیل pH بسیار پایین معده (یعنی 1.5) با تخریب گسترده مواجه می شود[50]. در روده کوچک، از نظر شیمیایی با pH بالاتر (7.5) محافظت می شود، باقی مانده استکورستینفقط به حداقل جذب می شود. بنابراین، به منظور افزایش فراهمی زیستی و اثربخشی بیولوژیکی آن، فرمول‌های جدیدی از کوئرستین با هدف بهبود حلالیت در آب و همچنین محافظت از بخش‌های فعال آن در برابر تخریب، از جمله لیپوزوم‌ها، نانوذرات، نانوامولسیون‌ها و میسل‌ها توسعه یافته است [28].

فرمول مایسل ما با Pluronic F127 افزایش می یابدکورستینحلالیت ده برابری دارد و در مطالعات آزمایشگاهی، رفتار انحلال بهتری را در مایعات شبیه سازی شده معده و روده نشان داده است، زیرا باعث کاهش قابل توجه اندازه ذرات و پراکندگی همگن تر می شود.کورستیندر ماتریس پلیمری I3l. این فرمول به میزان قابل توجهی افزایش یافته استکورستینبه جریان خون، منجر به فراهمی زیستی 3- برابری می‌شود که، به طرز عجیبی، تنها به یک اثر محافظت کننده از نفرو کمی بالاتر ترجمه می‌شود. در توافق، هنگامی که از دوز بالاتر (یعنی 100 میلی گرم بر کیلوگرم) طبیعی استفاده می کردیم، اثر محافظت کننده نفر اضافی مشاهده نکردیم.کورستیندر آزمایشات قبلی (مشاهدات منتشر نشده ما) [25،26]. در آن مطالعات، تفسیر ما این بود که احتمالاً دوزهای بالاتر ipکورستین(i.e., >50 میلی گرم بر کیلوگرم) به دلیل کاهش حلالیت به افزایش فراهمی زیستی منجر نشد که منجر به افزایش قابل توجهی جذب خالص نشد. این با رسوبات زرد غیرجذب همزمان شدکورستیندر حفره صفاقی در هنگام قربانی یافت می شود. علاوه بر این، نتایج کنونی ما نشان می‌دهد که حتی غلظت‌های بالاتر پلاسمایی کورستین (مانند آنهایی که با P-کوئرستین به دست می‌آیند) تنها به یک اثر کمی بالاتر تبدیل می‌شوند. زیراکورستینتوزیع به شکل ساده شده توسط یک مدل مرتبه اول دو محفظه [51] توضیح داده شده است، دسترسی به سلول های هدف از بخش اصلی (یعنی جریان خون) به نظر محدودیت نیست. بنابراین، دلیل اینکه چرا حداکثر اثر محافظتی نفرو تقریباً با غلظت‌های کمتر پلاسمایی حاصل از کورستین طبیعی به دست می‌آید، مبهم باقی می‌ماند.

این پیامدهای عملی برای توسعه بیشتر داردکورستینبه عنوان یک نفرو محافظ پیشگیرانه. اول، این نتایج این امکان را برای مطالعه باز می کند که آیا رژیم های دوز پایین تر به طور مشابه موثر هستند، به عنوان بیش از حد فراهمی زیستی P-کورستینرا می توان بدون از دست دادن هیچ اثر درمانی قربانی کرد، اما مشخصات امنیتی را به حداکثر می رساند. دوم، اکنون فرصت برای تجویز خوراکی باز است، که با این وجود نیاز به آزمایش برای فرمولاسیون جدید دارد. جذب از حفره صفاقی از موانعی که از طریق دهان با آن مواجه می شوند جلوگیری می کند. فرض بر این است که حلالیت بالاتر در لومن روده ممکن است منجر به افزایش و تنظیم شود.کورستینفراهمی زیستی در پنجره درمانی سوم، مسیر داخل وریدی اکنون ممکن است یک جایگزین واقعی با حداقل سمیت باشد، که از موانع جذب جلوگیری می کند. تاکنون، فرمولاسیون تجربی تزریقی ازکورستیناز دی متیل سولفوکسید (DMSO) به عنوان حلال استفاده کرد [51].

سیس پلاتین به دلیل تجمع و آسیب به لوله های پروگزیمال و دیستال و القای آپوپتوز و نکروز سلول های اپیتلیال توبول، بسته به غلظت، شناخته شده است [16]. بخش پروگزیمال S3 بیشتر تحت تأثیر قرار می گیرد، اگرچه S1 و S2 نیز به طور فزاینده ای توسط دوزهای بالاتر آسیب می بینند. در توافق با خواص ضد آپوپتوز شناخته شده آن بر روی سلول های توبول [52،53]،کورستینکاهش اپیتل زدایی لوله های قشر مغز. اثر یکسانی که در هر دو فرمول مشاهده می شود، این ایده را تقویت می کندکورستینسینتیک توزیع بهکلیه هادر مطالعه ما اشباع شده اند. علاوه بر این، در داخلکلیه ها, کورستینرفتار متفاوتی را در امتداد نفرون نشان می دهد. در حقیقت،کورستینهیچ تاثیری بر روی بصل النخاع خارجی، جایی که بخش S3 از لوله های پروگزیمال یافت می شود، نداشت.کوئرستینبه نظر می رسد در لوله های S1، S2 یا دیستال، که نزدیک به قشر قرار دارند، تجمع می یابد. زیرا معلوم نیست چگونه (یعنی کدام ناقل ها یا مسیرهای انتشار) و از کجا (یعنی سمت مجرا یا قاعده جانبی)کورستیندسترسی به سلول های لوله ای، تحقیقات بیشتری برای توضیح این اثرات متفاوت ضروری است.

حفظ متوسط ​​بافت قشر مغز ممکن است تنها تا حدودی تأثیر آن را توضیح دهدکورستینبر عملکرد کلیه (یعنی GFR). محافظت اضافی ممکن است از اثرات عروقی ناشی شودکورستین. عملکرد اندوتلیال در تنظیم جریان خون کلیوی (RBF) و GFR با تعدیل تون انقباضی شریان آوران و وابران شرکت می کند [54-57]. سیس پلاتین باعث ایجاد اختلال در عملکرد اندوتلیال می شود و اعتقاد بر این است که این امر به طور قابل توجهی به کاهش GFR، همراه با انقباض عروق آوران کلیوی ناشی از مکانیسم های بازخورد توبولوگلومرولی (فعال شده توسط آسیب لوله ای) و سیتوکین های التهابی کمک می کند [13،58]. در واقع، معکوس کردن اختلال عملکرد اندوتلیال یک اثر به طور گسترده شناخته شده استکورستین(و به طور کلی فلاونوئیدها)[59-61l، که ممکن است دلیل آن را توضیح دهدکورستینهمانطور که قبلاً گزارش شد، RBF (و در نتیجه GFR) را بهبود می بخشد [25]. علاوه بر این، این اثرات اندوتلیال عروقی نیز ممکن است به توضیح اثر کمی بالاتر P- کمک کند.کورستیندر بهبود عملکرد کلیه و بهبود عملکرد کلیه. احتمالاً غیرمنطقی نیست که حدس بزنیم که فراهمی زیستی بالاتر ممکن است تأثیر جسورانه تری بر روی غشای اندوتلیال در تماس مستقیم با خون داشته باشد.

برخی از اثرات مشاهده شده پس از تجویزکورستینممکن است توسط متابولیت های آن اعمال شود.کوئرستیندر مخاط روده و کبد توسط واکنش‌های گلوکورونیداسیون، سولفاتاسیون و متیلاسیون متابولیزه می‌شود [62]، با فراوان‌ترین متابولیت‌ها متابولیت‌های گلوکورونید در جریان خون [63]. به طور مشخص،کورستین-3-bO-glucuronide (Q3GA)، یک متابولیت اصلی پلاسما، نشان داده شده است که اثرات ضد التهابی و عروقی، هم مستقیم و هم پس از متابولیزاسیون به شکل آگلیکون دارد [64]. تحقیقات بیشتری برای درک متابولیت های خاص مسئول محافظت عصبی و تولید و تبدیل متفاوت آنها از محل های مختلف تجویز به اهداف نهایی آنها ضروری است.

در نتیجه، این مطالعه اولیه پتانسیل درمانی P- را نشان می دهد.کورستینبه عنوان یک فرمول بهبود یافته با خواص بیودارویی و فارماکوکینتیکی پیشرفته، مفید برای توسعه بیشتر و استفاده بالینی آینده نگر در پیشگیری ازسمیت کلیوی.

فواید کورستین بر سمیت کلیوی

4. مواد و روش ها

تمام مواد شیمیایی و معرف‌ها از مرک (دارمشتات، آلمان) خریداری شده‌اند، به استثنای مواردی که غیر از آن ذکر شده باشد.

4.1. آماده سازی فرمول مایسل (P-کورستین) و طبیعیکوئرستینفرمولاسیون

کوئرستینهیدرات (حداقل خلوص 95 درصد) از Acros Organics (مادرید، اسپانیا) و کوپلیمر بلوک اکسید پروپیلن اتیلن اکسید پروپیلن کوپلیمر Pluronic F127 (وزن مولکولی متوسط ​​12.6 کیلو دالتون، تعادل آبدوست-لیپوفیل 22) به دست آمد. آلمان). برای فرمول مایسل، از تکنیک رسوب ضد حلال فوق بحرانی برای تولید استفاده شدکورستین/ذرات Pluronic F127 (P-کورستین) همانطور که قبلا توضیح داده شد [31]. Pluronic حاصلکورستینفرمولاسیون دارای ترکیب نسبی 50 درصد / 50 درصد وزنی / وزنی Pluronic F127 / بود.کورستین. برای طبیعیکورستینفرمولاسیون،کورستینهمانطور که قبلاً توضیح داده شد، در 0.16 درصد Tween 20 در سالین معلق شد [25،26].

4.2. حیوانات و اخلاق زیستی

همه رویه ها توسط کمیته اخلاق زیستی دانشگاه سالامانکا و دولت منطقه ای کاستیل و لئون، وزارت کشاورزی و دام (کد: 0000037, 27 ژوئیه 2015) تأیید شد. حیوانات بر اساس دستورالعمل‌های دستورالعمل شورای جامعه اروپا 2010/63/UE و قوانین فعلی اسپانیا برای استفاده و مراقبت از حیوانات آزمایشی (RD53/2013، 01 فوریه 2013) نگهداری شدند. موش‌های نر Wis-tar (200-250 گرم) تحت شرایط محیطی کنترل‌شده در تأسیسات خانه حیوانات دانشگاه سالامانکا، با دسترسی رایگان به آب و غذای استاندارد نگهداری شدند.

4.3. مطالعه فراهمی زیستی

موش‌ها به دو گروه آزمایشی تقسیم شدند: O (n{0}})، که در آن حیوانات یک دوز واحد دریافت کردند.کورستین(50 میلی گرم بر کیلوگرم)؛ و PQ(n=5)، که در آن حیوانات یک دوز هممولار ip از P- را دریافت کردند.کورستین(100 mg/kg (یعنی حاوی 50 mg/kgکورستین). سپس نمونه خون در لوله های پوشش داده شده با اتیلن دی آمین تتراستیک اسید (EDTA) از یک برش کوچک در نوک دم در زمان های زیر گرفته شد:{1}}.25،{3}}. 12 و 24 ساعت پلاسما با سانتریفیوژ و 10 میکرولیتر اسید اسکوربیک 10 میلی مولار (برای جلوگیری از) به دست آمد.کورستینتجزیه) به 100 میکرولیتر پلاسما اضافه شد و تا زمان تجزیه و تحلیل آن در -80 درجه منجمد شد.کوئرستینغلظت با استفاده از روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) فاز معکوس با تشخیص UV تعیین شد. یک ستون C18 با اندازه ذرات Prosper 3 um، با فاز متحرک متشکل از 28 درصد استونیتریل و 72 درصد از محلول آب اسید اورتوفسفریک 2 درصد، با سرعت جریان 1 میلی لیتر در دقیقه استفاده شد. طول موج تشخیص 371 نانومتر بود. قبل از تزریق در دستگاه کروماتوگرافی، نمونه ها تحت یک فرآیند گلوکورونیداسیون برای تعیین کمیت کل قرار گرفتند.کورستین. برای این منظور 1000 واحد گلوکورونیداز از Helix pomatia در بافر استات 0.1 مولار (pH 5) به 100 میکرولیتر پلاسما اضافه شد و این مخلوط در دمای 37 درجه به مدت 1 ساعت انکوبه شد. . سپس، یک فرآیند استخراج با 100 میکرولیتر از مخلوط استونیتریل / استیک 0.5 M80 ~ 20 (سه بار) انجام شد. هنگامی که مایع رویی در یک جریان نیتروژن تبخیر شد، باقیمانده خشک دوباره در فاز متحرک 40 میکرولیتری حل شد و 20 میکرولیتر به سیستم HPLC تزریق شد.

4.4. مطالعه محافظت از نفر

موش‌ها به گروه‌های آزمایشی زیر تقسیم شدند (شکل 6): حیوانات شاهد (n=3) وسیله نقلیه (NaCl0.9 درصد) به مدت 9 روز به صورت داخل صفاقی (IP) دریافت کردند. حیوانات CP(n=5) در روز 3 آزمایش یک دوز نفروتوکسیک سیس پلاتین (6.5 میلی گرم/کیلوگرم، درون صفاقی) دریافت کردند؛ حیوانات CP به علاوه Q(n=5) دوز روزانه دریافت کردند.کورستین(50 mg/kg، درون صفاقی) به مدت 9 روز و یک دوز واحد سیس پلاتین (6.5 mg/kg، درون صفاقی) در روز 3. و حیوانات CP به علاوه PQ (n=5) دوز روزانه P- را دریافت کردندکورستین(100 mg/kg، IP (یعنی حاوی 50 mg/kgکورستین)) به مدت 9 روز و یک دوز سیس پلاتین (6.5 میلی گرم بر کیلوگرم، داخل صفاقی) در روز 3.

شکل 6. طرح مدل سمیت کلیوی.

CP: سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3. CP به علاوه Q:کورستین(50 mg/kg، داخل صفاقی) به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3. CP به علاوه PQ:P-کورستین(100 mg/kg، داخل صفاقی) به مدت 9 روز و سیس پلاتین (6.5 mg/kg، داخل صفاقی) در روز 3.

نمونه‌های خون (150 میکرولیتر) در روزهای 0،3،5،7 و 9 اینچ مویرگ‌های هپارینه‌شده از یک برش کوچک در نوک دم جمع‌آوری شد. پلاسما با سانتریفیوژ (11.{7}} دور در دقیقه به مدت 3 دقیقه) جدا شد و در دمای-80C نگهداری شد. در روزهای 7 و 9، ادرار 24 ساعته در قفس های متابولیک جمع آوری شد، با سانتریفیوژ (2000× گرم به مدت 9 دقیقه) پاکسازی شد و در درجه {15}} نگهداری شد. در پایان آزمایش (روز نهم)، موش‌ها بیهوش شدندکلیه هابرای مطالعات بافت شناسی تشریح، وزن و در 7/3 درصد پارافورمالدئید تثبیت شدند.

کراتینین پلاسما و ادرار با استفاده از یک کیت تجاری بر اساس روش Jaffe [65] (کیت سنجش کراتینین QuantiChrom، BioAssay Systems، Hayward، CA، USA) اندازه گیری شد. اوره پلاسما با استفاده از یک کیت تجاری بر اساس روش یونگ [66] (کیت سنجش اوره Quan-tiChrom، BioAssay Systems، Hayward، CA، USA) تعیین شد. کلیرانس کراتینین (Clcr) با استفاده از فرمول محاسبه شد: Clcr=Crur × UF/ Crp). در جایی که Crur مربوط به غلظت کراتینین در ادرار است، UF جریان ادرار است و Crp غلظت کراتینین در پلاسما است. پروتئینوری با روش برادفورد [67] اندازه گیری شد. KIM{5}} با استفاده از موش اندازه‌گیری شدکلیهصدمهمولکول 1 (KIM-1) کیت ELISA (Cusabio، هیوستون. TX، ایالات متحده). پیروی از دستورالعمل های سازنده

برای مطالعات بافت‌شناسی، نمونه‌های کلیوی در پارافین جاسازی و برش‌های بافتی 5 میکرونی با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ‌آمیزی شدند. عکس‌ها در زیر میکروسکوپ Olympus BX51 که به دوربین دیجیتال رنگی Olympus DP70 متصل است (Olympus، مادرید، اسپانیا) گرفته شد. همانطور که قبلاً توضیح داده شد، کمی سازی آسیب به روشی کور انجام شد [68]. به طور خلاصه، پنج عکس تصادفی از ناحیه قشر مغز و پنج عکس از ناحیه مدولاری خارجی (یعنی نواحی آسیب دیده توسط سیس پلاتین) گرفته شد و به طور یکنواخت این نواحی را ترسیم کرد. هر تصویر به 10 بخش یکسان (با استفاده از نرم افزار Microsoft Office PowerPoint 2016) تقسیم شد که به هر یک از آنها امتیاز 0 (بدون آسیب)، 1 (وجود آسیب در کمتر از 1/3 منطقه)، 2 (وجود آسیب) اختصاص داده شد. بین 1/{12}}/3 منطقه)، یا 3 (وجود آسیب در بیش از 2/3 منطقه). آسیب با در نظر گرفتن وجود نکروز لوله‌ای و ریزش سلولی، اتساع لوله‌ای، واکوئل شدن، وجود رسوبات هیالین و از دست دادن مرز برس ارزیابی شد.

4.5. تجزیه و تحلیل آماری

داده ها به صورت میانگین ± خطای استاندارد میانگین (SEM) ارائه می شوند. نقاط پرت با استفاده از آزمون گرابس|69] شناسایی شدند. توزیع نرمال داده ها با استفاده از آزمون Shapiro-Wilk ارزیابی شد. در مطالعه فراهمی زیستی، مقایسه بین دو گروه با استفاده از آزمون t-test یا آزمون U Mann-Whitney انجام شد. مطالعه فارماکوکینتیک با استفاده از تجزیه و تحلیل مستقل از مدل از میانگین سطوح پلاسما انجام شدکورستین. پارامترهای برآورد شده برای ارزیابی فراهمی زیستی نسبیکورستینسطح زیر منحنی جزئی سطوح پلاسما (AUC) 24، سطح زیر منحنی کل سطوح پلاسما (AUC){1}}~، شیب فاز پایانی، نیمه عمر حذف (ti/2) و میانگین زمان اقامت (MRT). تخمین پارامترهای فارماکوکینتیک با ترکیب روش ذوزنقه ای برای تخمین مساحت زیر منحنی جزئی و رگرسیون غیرخطی فاز پایانی منحنی سطح پلاسما انجام شد. برای مطالعه محافظت از نفر، تجزیه و تحلیل واریانس (ANOVA) با آزمون شفه یا آزمون Kruskal-Wallis برای مقایسه بین گروهی انجام شد. تجزیه و تحلیل آماری با نرم افزار IBM SPSS Statistics 20.0 (International Business Machines, Armonk, NY, USA) انجام شد. Microsoft Office Excel و PowerPoint 2016 (Microsoft، Redmond، WA، USA) برای ایجاد آثار هنری و تصاویر استفاده شد.

منابع

1. آودیشو، ال. Mehta، RLThe6R's of Drug-Inducedسمیت کلیوی. BMCNephrol.2017,18,124. [CrossRefl[PubMed]

2. Perazella، MADrug Use وسمیت کلیویدر بخش مراقبت های ویژهکلیهInt.2012,81,1172-1178. [CrossRef] [PubMed]

3. تابر، SS؛ مولر، اختلال عملکرد کلیه مرتبط با دارو. Crit.Care Clin.2006,22,357-374, vi. [CrossRef] هوانگ، JX; بلاسکوویچ، مایکروسافت؛ سنجش‌های مبتنی بر کوپر، MACell و نشانگرهای زیستی برای پیش‌بینیسمیت کلیوی.

توجه داشته باشید:موارد فوق یک لیست مرجع کامل نیست