عمل پرومیتوتیک Oenothera Biennis بر فیبروبلاست های پوستی انسان کهنسال قسمت 2

3. بحث

در این مطالعه، ما اثر یک عصاره سلولی آبدوست Oenothera biennis (ObHEx) را بر پیری سلولی بررسی کردیم، زیرا در مدل‌های in vitro و ex vivo، خواص ضد پیری پوست را نشان داد [18]. ما از یک مدل پیری مشابه از NHDF استفاده کردیم که تحت SIPS برای درمان با H2O2 قرار گرفت [21،22].

گلیکوزید سیستانچ همچنین می تواند فعالیت SOD را در بافت های قلب و کبد افزایش دهد و به طور قابل توجهی محتوای لیپوفوسین و MDA را در هر بافت کاهش دهد و به طور موثر رادیکال های مختلف اکسیژن فعال (OH-، H2O2 و غیره) را از بین ببرد و از آسیب DNA ناشی از آن محافظت کند. توسط رادیکال های OH گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید سیستانچ توانایی مهار قوی رادیکال های آزاد، توانایی کاهش بالاتری نسبت به ویتامین C، بهبود فعالیت SOD در سوسپانسیون اسپرم، کاهش محتوای MDA و اثر محافظتی خاصی بر عملکرد غشای اسپرم دارند. پلی ساکاریدهای سیستانچ می توانند فعالیت SOD و GSH-Px را در گلبول های قرمز و بافت ریه موش های آزمایشگاهی مسن ناشی از D-گالاکتوز افزایش دهند و همچنین محتوای MDA و کلاژن را در ریه و پلاسما کاهش دهند و محتوای الاستین را افزایش دهند. اثر پاک کنندگی خوب بر روی DPPH، طولانی شدن زمان هیپوکسی در موش های پیر، بهبود فعالیت SOD در سرم، و به تاخیر انداختن انحطاط فیزیولوژیکی ریه در موش های آزمایشگاهی پیر. و این پتانسیل را دارد که دارویی برای پیشگیری و درمان بیماری های پیری پوست باشد. در عین حال، اکیناکوزید موجود در سیستانچ توانایی قابل توجهی در از بین بردن رادیکال های آزاد DPPH و توانایی حذف گونه های فعال اکسیژن و جلوگیری از رادیکال های آزاد دارد.

باعث تخریب کلاژن می شود و همچنین اثر ترمیم خوبی بر آسیب آنیون رادیکال آزاد تیمین دارد.

روی Where Can I Buy Cistanche کلیک کنید

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

برای درک مکانیسم اثر ObHEx بر روی فیبروبلاست‌های پوستی انسان پیر، با افشای مسیرهای بیولوژیکی تغییر یافته توسط عصاره، ما یک رویکرد پروتئومی فوق‌عمیق طیف‌سنجی جرمی مستقل از داده را انجام دادیم. این به ما امکان داد تا کامل‌ترین آنالیز پروتئوم سلول‌های پیر را به دست آوریم و برای اولین بار، کمیت‌سازی همزمان نشانگرهای پیری متعدد را به دست آوریم.

اول از همه، برای ارزیابی القای پیری توسط تیمار H2O2 روی سلول‌های NHFD، ما نشانگرهای پیری شناخته شده را تعیین کردیم. داده های پروتئومیکس ما القای پیری توسط استرس اکسیداتیو را تایید کرد: در واقع، ما سطوح تغییر یافته نشانگرهای پیری شناخته شده مربوط به افزایش محتوای لیزوزومی (GLB1 و FUCA1)، آسیب DNA (ATR، ATM، MACROH2A1، و MACRO2A2) و چرخه سلولی فاز G2 را مشاهده کردیم. دستگیری (CDK1NA و MKI67). علاوه بر این، تجزیه و تحلیل غنی‌سازی مسیر پروتئین‌های تحت درمان با H2O2 در مقابل سلول‌های کنترل به میتوز اشاره می‌کند که منعکس‌کننده توقف تکثیر پیر است.

با مقایسه پروتئوم سلول‌های SIPS NHDF تیمار شده با ObHEx در مقابل سلول‌های درمان‌نشده، دریافتیم که تیمار با عصاره قادر است تا حدی سطوح پروتئین‌ها و کمپلکس‌هایی را که نقش مهمی در چندین مرحله میتوز بازی می‌کنند بازیابی کند. انکوباسیون ObHEx سطوح CDK1 را افزایش داد، یک پروتئین میتوزی کلیدی که با تشکیل کمپلکس با سیکلین B باعث ورود به میتوز می شود [34]. علاوه بر این، هر پنج زیرواحد کمپلکس کندنسین I تنظیم مثبت شدند. این مجموعه از دو زیرواحد نگهداری ساختاری کروموزوم (SMC) SMC2 و SMC4 و سه زیرواحد غیر SMC NCAPD2، NCAPH و NCAPG تشکیل شده است. در پرومتافاز، عملکرد کمپلکس کندنسین I این است که تراکم نوع کروموزوم‌ها را با وارد کردن ابرکویل‌های مثبت به DNA به روشی وابسته به ATP ارتقا دهد [35]. علاوه بر این، عصاره KNTC1، NUF2 و TRIP13 را افزایش داد، که سه پروتئین مرتبط با کینتوکور هستند، یک مجموعه بزرگ که در طول پرومتافاز، کروماتین سانترومریک را به میکروتوبول‌ها از قطب‌های دوک مخالف متصل می‌کند تا به جدایی کروماتیدهای خواهر کمک کند. 36،37]. ترمیم جزئی سطوح پروتئین های MCM نیز شناسایی شده است. این پروتئین ها در هسته کمپلکس هلیکاز همانندسازی قرار دارند که DNA دو رشته ای را باز می کند تا تک رشته ها را به عنوان الگوهایی برای DNA پلیمراز فراهم کند. کمپلکس MCM در طول فاز S به یک هلیکاز فعال تبدیل می‌شود، اما در طول تلوفاز از قبل بر روی کروماتین بارگذاری می‌شود [38،39]. این عصاره سطوح IQGAP3، PBK و DHFR را نیز افزایش داد. اولی، IQGAP3، تنظیم کننده مهم پیشرفت میتوزی است زیرا فعالیت cdk7 را که برای فعال سازی Cdc2 ضروری است، ترویج می کند [40،41]. PBK یک کیناز فعال فقط در میتوز است. هنگامی که فسفریله می شود، با p53 تعامل می کند، آن را بی ثبات می کند و مسیر آسیب DNA را کاهش می دهد [42]. و DHFR یک آنزیم کلیدی در بیوسنتز DNA است که سطوح آن به طور قابل توجهی در فیبروبلاست های انسان پیر ضعیف می شود [43].

سنجش‌های متعامد زیستی همچنین توانایی ObHEx را برای بازگرداندن جزئی علائم پیری، یعنی فعالیت لیزوزومی و توقف چرخه سلولی نشان داد. در واقع، برای بررسی اینکه آیا بازیابی بیان پروتئین میتوزی توسط ObHEx به فعال شدن مجدد چرخه سلولی ترجمه می‌شود، آزمایش‌های FACS (مرتب‌سازی سلول فعال شده با فلورسانس) را روی سلول‌های SIPS NHDF که با عصاره درمان شده بودند یا نه انجام دادیم. آنها نشان دادند که ObHEx قادر است کسر سلول های مسدود شده در فاز G2 را کاهش دهد و ورود مجدد آنها به چرخه سلولی سلول های پیر را ارتقا دهد.

4. مواد و روش ها

4.1. کشت سلولی

فیبروبلاست های پوستی طبیعی انسان (NHDF؛ Promocell) در محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM؛ Gibco) با 10 درصد سرم جنین گاو (FBS؛ Gibco) و 500 U/ml پنی سیلین-استرپتومایسین (Gibco) در 95 درصد کشت داده شدند. 5 درصد CO2 و اتمسفر مرطوب در دمای 37 ◦C.

4.2. القای پیری زودرس ناشی از استرس (SIPS)

در مجموع 10 1200 000 سلول NHDF در هر یک از ظروف کشت سلولی 60 میلی متری، یک روز قبل از انکوباسیون آنها با 100 میکرومولار H2O2 در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 2 ساعت کاشته شدند [21،22]. پس از آن، H2O2 با فسفات بافر سالین (PBS؛ Gibco) برای خاتمه درمان شسته شد و سلول ها در یک محیط طبیعی به مدت 4 روز رشد کردند. برای سلول‌های غیر پیر، که به عنوان شاهد استفاده می‌شوند، 2240 000 سلول‌های NHDF در هر یک از ظروف کشت سلولی 60 میلی‌متری کاشته شدند. آزمایش در 5 تکرار بیولوژیکی انجام شد.

4.3. آماده سازی Oenothera Biennis Hydrophilic Extract (ObHEx).

عصاره در آزمایشگاه های Arterra Bioscience SpA [18] تهیه شد. کشت های سلولی از برگ های گیاهان Oenothera biennis (تهیه شده توسط GEEL Floricultura ss) با القای تکثیر سلول های مریستماتیک روی صفحات جامد آگار تا پینه های به دست آمده به دست آمد. سلول ها به محیط رشد مایع (Gamborg B5، مکمل با 2،4 دی کلرو فنوکسی استیک اسید (1 میلی گرم در لیتر)، آدنین (1 میلی گرم در لیتر) و کینتین (01.01 میلی گرم در لیتر 0) منتقل شدند. )) و به صورت کشت های معلق تحت تکان دادن مداری رشد می کنند. هنگامی که کشت های حدود 150 گرم در لیتر به دست آمد، سلول ها جمع آوری و در PBS در pH 7.4 لیز شدند تا عصاره محلول در آب تهیه شود. پس از لیوفیلیزاسیون، پودر به‌دست‌آمده برای آزمایش در آب یا محیط کشت سلولی با غلظت‌های مناسب حل شد.

4.4. درمان عصاره هیدروفیلیک Oenothera Biennis (ObHEx).

سلول های NHDF به مدت 24 ساعت با 0 انکوبه شدند.01 درصد (p/v) ObHEx در یک محیط کامل. پس از آن، سلول ها سه بار با PBS شسته شدند و به مدت 24 ساعت دیگر با 0.01 درصد (p/v) ObHEx در محیط بدون سرم تیمار شدند. سپس آنها با تریپسینیزاسیون جدا شدند، در 500 گرم به مدت 10 دقیقه در دمای 4 درجه سانتیگراد سانتریفیوژ شدند و دو بار با PBS شسته شدند. سلول های کنترل درمان نشده تحت انکوباسیون مشابه بدون ObHEx قرار گرفتند.

4.5. آماده سازی نمونه برای آنالیز پروتئومی

گلوله ها در 6{21}}μL از بافر سنجش رادیو ایمونوپسیتیشن (RIPA) مجدداً معلق شدند و توسط فراصوت لیز شدند. غلظت پروتئین لیزات سلولی با استفاده از کیت سنجش پروتئین DC™ (Biorad؛ #5000112) اندازه‌گیری شد. هضم ستون میکرو اسپین S-TrapTM (Protifi, Huntington, CA, USA) بر روی 50 میکروگرم لیزات سلولی طبق دستورالعمل سازنده انجام شد. به طور خلاصه، نمونه ها با 20 میلی مولار تریس ({5}} کربوکسی اتیل) فسفین (TCEP) کاهش و با 50 میلی مولار تیواستامید (CAA) به مدت 15 دقیقه در دمای اتاق آلکیله شدند. سپس اسید فسفریک آبی به غلظت نهایی 2.5 درصد اضافه شد و سپس یک بافر اتصال S-Trap (90 درصد متانول آبی، 100 میلی مولار TEAB، pH 7.1) اضافه شد. مخلوط ها سپس بر روی ستون های S-Trap بارگذاری شدند. پنج مرحله شستشوی اضافی برای حذف کامل SDS انجام شد. سپس لیزهای سلولی با 2.5 میکروگرم تریپسین (Promega) در دمای 47 درجه سانتیگراد به مدت 1 ساعت هضم شدند. پس از شستشو، پپتیدها در خلاء خشک شدند، مجدداً در 2 درصد ACN، 0.1 درصد FA معلق شدند و با نانودراپ اندازه‌گیری شدند.

4.6. شناسایی و تعیین کمیت پروتئین nanoLC-MS/MS

در مجموع 400 نانوگرم از هر نمونه بر روی یک نانو صفحه (بروکر دالتونیکس، برمن، آلمان) سیستم کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) همراه با timsTOF Pro (Bruker Daltonics، برمن) تزریق شد. ، آلمان) طیف سنج جرمی. جداسازی HPLC (حلال A: {{30}}.1 درصد اسید فرمیک در آب؛ حلال B: 0.1 درصد اسید فرمیک در استونیتریل) با سرعت 250 لیتر در دقیقه با استفاده از ستون امیتر پر شده (C18, 25 سانتی متر × 75 میکرومتر 1.6 میکرومتر) (یون اپتیک، فیتزروی، استرالیا) با استفاده از شستشوی گرادیان (2 تا 13 درصد حلال B در طول 41 دقیقه؛ 13 تا 20 درصد در طول 23 دقیقه؛ 20 درصد تا 30 درصد در طول 5 دقیقه؛ 30 درصد تا 85 درصد برای 5 دقیقه و در نهایت 85 درصد برای 5 دقیقه برای شستشوی ستون). داده های طیف سنجی جرمی با استفاده از روش اکتساب قطعه قطعه سازی سریال تجمع موازی تجزیه و تحلیل مستقل از داده (diaPASEF) به دست آمد. تنظیمات پوشک عبارت بودند از: محدوده جرم از 400 تا 1200 دا، محدوده تحرک از 0.60 تا 1.{33}}/k0، تعداد پنجره تحرک 1، تخمین زمان چرخه 1.79 ثانیه، گام های جرمی در هر چرخه 32.

4.7. پردازش داده های MS و تجزیه و تحلیل بیوانفورماتیک

تجزیه و تحلیل داده ها با استفاده از نرم افزار DIA-NN (نسخه 1.8) [44] انجام شد. جستجو در پایگاه داده انسانی UniProtKB/Swiss-Prot Homo sapiens (انتشار فوریه 2021، 20408 ورودی) با استفاده از یک گردش کار بدون کتابخانه انجام شد. برای این منظور، گزینه‌های «هضم FASTA برای جستجوی رایگان/تولید کتابخانه رایگان» و «پیش‌بینی طیف‌های یادگیری عمیق، RTs و IMs» برای تولید یون پیش‌ساز بررسی شدند. حداکثر 2 شکاف از دست رفته تریپسین مجاز بود و حداکثر تغییر متغیر روی 5 تنظیم شد. کاربامیدومتیلاسیون (Cys) به عنوان اصلاح ثابت تنظیم شد، در حالی که برش متیونین N ترمینال پروتئین، اکسیداسیون متیونین و استیلاسیون N ترمینال به عنوان متغیر تنظیم شد. اصلاحات محدوده طول پپتید روی 7-30 اسید آمینه، محدوده بار پیش ساز 2-4، پیش ساز m/z محدوده 300-1800، و قطعه یون m/z محدوده 200-1800 تنظیم شد. برای جستجوی توده اصلی و یون های قطعه، دقت به طور خودکار توسط DIA-NN استنباط شد و حدود 13 ppm برای هر آنالیز تنظیم شد. نرخ کشف کاذب (FDRs) در سطوح پروتئین و پپتید روی 1 درصد تنظیم شد. مسابقه بین دویدن مجاز بود. برای استراتژی کمی‌سازی، از LC قوی (دقت بالا) همانطور که در مستندات نرم‌افزار توصیه می‌شود استفاده شد، در حالی که تنظیمات پیش‌فرض برای سایر پارامترهای الگوریتم حفظ شد.

تجزیه و تحلیل آماری و بیوانفورماتیک با نرم افزار Perseus (نسخه 1.6.15) به صورت رایگان در وب سایت (در 22 ژوئن 2{19}}21) [45] و R/R Studio و RStudio نسخه 2 در دسترس قرار گرفت، انجام شد0 21.09.1 30 (دسترسی در 12 نوامبر 2021). تمام آنالیزهای آماری R با استفاده از بسته آماری R انجام شد. خروجی ماتریس گزارش pg توسط DIA-NN استفاده شد و شدت ها برای تجزیه و تحلیل آماری log2 تبدیل شدند. برای مقایسه آماری، ما چهار گروه را تعیین کردیم که هر کدام شامل 5 تکرار بیولوژیکی است. سپس داده ها را فیلتر کردیم تا فقط پروتئین هایی با حداقل 3 مقدار معتبر در حداقل یک گروه نگهداری شود. سپس، با ایجاد یک توزیع گاوسی از اعداد تصادفی با انحراف معیار 33 درصد نسبت به انحراف استاندارد مقادیر اندازه‌گیری شده و یک انحراف استاندارد 1.8، به پایین شیفت میانگین برای شبیه‌سازی توزیع پایین، داده‌ها برای پر کردن نقاط داده گمشده نسبت داده شدند. مقادیر سیگنال آزمون t Student بین SEN و CTRL FDR < 0.05، S{21}}.1 برای تأیید وجود نشانگرهای خاص پیری انجام شد. سپس، برای بررسی اینکه آیا تفاوت در اندازه اثر بین عدم حضور یا حضور درمان برای سلول‌هایی که پیری القا شده است یا خیر، یکسان است یا خیر، تعامل بین هر دو عامل (یعنی القاء و درمان) با استفاده از ANOVA دو طرفه بررسی شد. در R. سپس، مقادیر p به دست آمده برای تعامل هر دو عامل برای آزمایش چندگانه با استفاده از روش بنجامینی-هوچبرگ [46] برای کنترل نرخ کشف نادرست (FDR) تنظیم شد. در نهایت، آنالیز post hoc Tukey HSD بر روی پروتئین‌هایی انجام شد که مقدار q<0.05 را نشان می‌داد. داده های پروتئومیکس طیف سنجی جرمی از طریق مخزن شریک PRIDE [47] با شناسه مجموعه داده PXD034222 به کنسرسیوم ProteomeXchange سپرده شده است.

4.8. رنگ آمیزی بتا گالاکتوزیداز مرتبط با پیری

فعالیت β-گالاکتوزیداز مرتبط با پیری (SA-ß-gal) با استفاده از کیت رنگ‌آمیزی فناوری سیگنالینگ سلولی (#986{9}}) ارزیابی شد. در مجموع 1250 000 سلول/چاه NHDF یک روز قبل از SIPS در یک 6-صفحه چاه کاشته شدند. در حالی که، به عنوان یک کنترل، 250 000 سلول/چاه است. پس از 4 روز در محیط معمولی، سلول‌ها با 0.01 درصد (p/v) ObHEx به مدت 48 ساعت انکوبه شدند یا نه. پس از آن، آنها با PBS شسته شده و با محلول ثابت به مدت 15 دقیقه تحت درمان قرار گرفتند. پس از دو بار شستشو با PBS، سلول‌ها با محلول رنگ‌آمیزی ß-gal (PH نهایی 6.0) حاوی 5-بروم{17}}کلرو{18}}ایندولیل{19}}D-galacto انکوبه شدند. -پیرانوزید (X-Gal) در دمای 37 درجه سانتیگراد در انکوباتور خشک به مدت 20 ساعت. سلول های مثبت آبی هستند. این رنگ به دلیل برش X-Gal در گالاکتوز و 5-بروم-4-کلرو-3-ایندوکسیل (X) توسط SA-ß-gal است. ایندوکسیل به 5،{32}}دیبروم-4،40 -دی کلرو-نیل اکسید می‌شود که یک رسوب آبی شدید تشکیل می‌دهد. درصد سلول‌های مثبت در کل سلول‌ها با شمارش 100 تا 150 سلول در 5 تصویر به‌طور تصادفی انتخاب‌شده توسط میکروسکوپ برای هر شرایط ارزیابی شد. سلول ها با استفاده از نرم افزار ImageJ شمارش شدند. این آزمایش در سه تکرار انجام شد.

4.9. تجزیه و تحلیل مرتب سازی سلولی فعال شده با فلورسانس

در مجموع {{0}} سلول/چاه NHDF یک روز قبل از SIPS در 6-صفحه چاه کاشته شدند. در حالی که، به عنوان یک کنترل، 50 000 سلول/چاه است. پس از 4 روز در محیط معمولی، سلول‌های شاهد و پیر به مدت 72 ساعت با 01/0 درصد (p/v) ObHEx تیمار شدند. سپس سلول ها در حضور 5 میکروگرم بر میلی لیتر Hoechst 33342 به مدت 30 دقیقه در دمای 37 درجه سانتی گراد انکوبه شدند. پس از تریپسینیزاسیون و سانتریفیوژ در 500 گرم به مدت 2 دقیقه، مجدداً در 200 میکرولیتر PBS معلق شدند. در نهایت فلورسانس سلولی توسط دستگاه آنالایزر سلولی BD LSRFortessa اندازه گیری شد. داده ها با استفاده از نرم افزار FlowJo v10.8.1 تجزیه و تحلیل شد. این آزمایش در سه تکرار انجام شد.

5. نتیجه گیری ها

پروفایل پروتئوم جهانی مرتبط با پیری عمیق که در اینجا به دست آمده است، صدها پروتئین را ارائه می دهد که توسط SIPS تنظیم نشده اند که می توانند توسط جامعه علمی برای درک بیشتر پیری و ارزیابی اثرات تعدیل کننده های بالقوه جدید مورد بهره برداری قرار گیرند. علاوه بر این، کار ما مکانیسم اثر پرومیتوز ObHEx را بر روی فیبروبلاست‌های پوستی انسان پیر نشان می‌دهد: از طریق افزایش بیان پروتئین میتوزی، آن را ترمیم تکثیر سلول‌های پیر می‌کند. بنابراین، بر اساس این نتایج، ObHEx را به عنوان یک ادجوانت قدرتمند در برابر پیری مرتبط با پیری پوست پیشنهاد می‌کنیم.

مشارکت نویسنده:مفهوم سازی، SC، MCM و ICG. روش، SC، KR، IM، CC (Cerina Chhuon) و ICG. نرم افزار، KR; بررسی، SC، IM، CC (Cerina Chhuon)، KT، SF، ADL، IP و CC (Corinne Cordier). منابع، MCM و ICG. نوشتن - آماده سازی پیش نویس اصلی، SC و ICG. نوشتن-بررسی و ویرایش، SC، MCM، و ICG همه نویسندگان نسخه منتشر شده نسخه خطی را خوانده و با آن موافقت کرده اند.

بیانیه در دسترس بودن داده ها:داده های پروتئومیکس طیف سنجی جرمی از طریق مخزن شریک PRIDE [47] با شناسه مجموعه داده PXD034222 به کنسرسیوم ProteomeXchange سپرده شده است (جزئیات حساب بازبینی کننده: نام کاربری: reviewer_pxd034222@ebi.ac.uk؛ 9 رمز عبور:Pjv0: .

قدردانی: این مطالعه توسط Programma Operativo Complementare Ricerca e Innovazione 2014-2020، Asse I "Capitale Umano"، Azione I.1 "Dottorati Innovativi con caratterizzazione Industriale" پشتیبانی شد. ما از سایر اعضای پلتفرم Proteomics Necker Vincent Jung و Joanna Lipecka برای حمایت علمی ارزشمند و پیشنهادات مفیدشان تشکر می کنیم.

منابع

1. دی میکو، آر. کریژانوفسکی، وی. بیکر، دی. d'Adda di Fagagna، F. پیری سلولی در پیری: از مکانیسم‌ها تا فرصت‌های درمانی. نات کشیش مول. سلول بیول. 2021، 22، 75-95. [CrossRef] [PubMed]

2. گونزالس-گوالدا، ای. بیکر، AG; فروک، ال. Muñoz-Espín، D. راهنمای ارزیابی پیری سلولی در شرایط آزمایشگاهی و in Vivo. FEBS J. 2021، 288، 56-80. [CrossRef] [PubMed]

3. سیکورا، ای. بیلاک- ˙Zmijewska، A.; موزینیاک، جی. پیری سلولی چیست و چه چیزی نیست. Postepy Biochem. 2018، 64، 110-118. [CrossRef] [PubMed]

4. چوی، ای.-ج. کیل، IS; چو، ای.-جی. وزیکول های خارج سلولی مشتق شده از فیبروبلاست های پیر، اثر پوستی بر تمایز کراتینوسیت ها را کاهش می دهند. بین المللی جی. مول. علمی 2020، 21، 1022. [CrossRef] [PubMed]

5. کرتولیکا، ع. پارینلو، اس. لاکت، اس. دسپرز، پی. Campisi، J. فیبروبلاست‌های پیر، رشد سلول‌های اپیتلیال و تومورزایی را تقویت می‌کنند: پیوندی بین سرطان و پیری. Proc. Natl. آکادمی علمی ایالات متحده آمریکا 2001، 98، 12072-12077. [CrossRef]

6. Wlaschek، M. میتی، پی. مکرانتونکی، ای. Scharffetter-Kochanek، K. بافت همبند و پیری فیبروبلاست در پیری پوست. ج. سرمایه گذاری درماتول. 2021، 141، 985-992. [CrossRef]

7. پائز-ریبس، م. گونزالس-گوالدا، ای. Doherty، GJ; Muñoz-Espín، D. هدف قرار دادن سلول های پیر در پزشکی ترجمه. EMBO مول. پزشکی 2019, 11, e10234. [CrossRef]

8. سوتو گامز، ا. دماریا، M. مداخلات درمانی برای پیری: مورد پیری سلولی. Drug Discov. امروز 2017، 22، 786–795. [CrossRef]

9. Latorre, E. بیرار، VC; شیرین، AN; جینز، JCC; هوپر، ا. داو، منابع انسانی؛ ملزر، دی. کاکس، LS; فراگر، RGA; Ostler، EL; و همکاران مدولاسیون مولکول کوچک بیان عامل اتصال با نجات از پیری سلولی مرتبط است. BMC Cell Biol. 2017، 18، 31. [CrossRef]

10. منیر، ر. سمار، ن. فرمان، م. احمد، NS یک بررسی به روز شده در مورد فعالیت های دارویی و ترکیبات فیتوشیمیایی گل مغربی (جنس Oenothera). پیمان آسیایی جی تروپ. بیومد. 2017، 7، 1046-1054. [CrossRef]

11. تیموشوک، م. بیلاوسکا، ک. Skrzydlewska، E. گل پامچال (Oenothera biennis) فعالیت بیولوژیکی وابسته به ترکیب شیمیایی. آنتی اکسیدان ها 2018، 7، 108. [CrossRef]

12. لی، سی. کیم، سی‌چ. هوانگ، BS; چوی، ک.-م. یانگ، آی.-جی. کیم، جی.-ای. چوی، YH; پارک، سی. جونگ، جی.-دبلیو. اثرات محافظتی Oenothera Biennis در برابر استرس اکسیداتیو ناشی از پراکسید هیدروژن و مرگ سلولی در کراتینوسیت های پوست. Life 2020, 10, 255. [CrossRef]

13. گرانیکا، س. Czerwi ´nska، ME; پیووارسکی، جی پی؛ ضیاء، م. بوسه، ترکیب شیمیایی AK، فعالیت آنتی اکسیدانی و ضد التهابی عصاره های تهیه شده از قسمت های هوایی Oenothera Biennis L. و Oenothera Paradoxa Hudziok پس از کشت بذر به دست آمده است. جی. آگریک. مواد شیمیایی مواد غذایی 2013، 61، 801-810. [CrossRef]

14. فکر، آر. بودا، وی. الکسا، ای. اورام، س. پاول، IZ; مونتین، دی. کوکان، آی. واتز، سی. میندا، دی. Dehelean، CA; و همکاران غربالگری فیتوشیمیایی و بیولوژیکی Oenothera Biennis L. عصاره هیدروالکلی. Biomolecules 2020, 10, 818. [CrossRef]

15. Schäfer, L. Kragballe، K. مکمل با روغن گل مغربی در درماتیت آتوپیک: اثر بر اسیدهای چرب در نوتروفیل ها و اپیدرم. لیپیدها 1991، 26، 557-560. [CrossRef]

16. باربولوا، ا. آپون، اف. Colucci، G. کشت سلولی گیاهی به عنوان منبع مواد فعال آرایشی. لوازم آرایشی 2014، 1، 94-104. [CrossRef]

17. سزار، LK; Cech، NB Synergy و Antagonism در عصاره های محصول طبیعی: وقتی 1 به علاوه 1 برابر نیست 2. Nat. تولید Rep. 2019, 36, 869–888. [CrossRef]

18. سکاچی، اس. دی لوسیا، ا. تیتو، ا. تورتورا، ا. فالانگا، دی. آرسیلو، اس. آسانیو، جی. دی سیکو، سی. مونتی، ام سی؛ Apone، F. عصاره کشت سلولی Oenothera Biennis که دارای فعالیت ضد پیری پوست است، خواص مکانیکی سلول را بهبود می بخشد. متابولیت‌ها 2021، 11، 527. [CrossRef]

19. فارویک، م. کوهلر، تی. شیلد، جی. منتل، م. مکزکیویتز، یو. پاگانی، وی. بونفیگلی، ا. ریگانو، ال. بوریک، دی. Gauglitz، GG Pentacyclic Triterpenes از Terminalia Arjuna فواید متعددی را برای پوست های مسن و خشک نشان می دهد. Skin Pharmacol. فیزیول. 2014، 27، 71-81. [CrossRef]

20. بونته، اف. دوما، م. Chaudagne، C. Meybeck، A. تأثیر اسید آسیایی، اسید مادکاسیک و آسیاتیکوزید بر سنتز کلاژن I انسانی. Planta Med. 1994، 60، 133-135. [CrossRef]

21. Chowdhary, S. اثرات استرس اکسیداتیو بر القای پیری در فیبروبلاست های انسانی. جی. کارول جنوبی. آکادمی علمی 2018، 16، 2.

22. وانگ، ز. وی، دی. شیائو، اچ. روش‌های القای پیری سلولی با استفاده از استرس اکسیداتیو. روش ها مول. Biol. 2013، 1048، 135-144. [PubMed]

23. هیلدبراند، DG; لله، اس. بورست، ا. هافرکمپ، س. اسمن، اف. Schulze-Osthoff، K. -Fucosidase به عنوان یک نشانگر زیستی مناسب جدید برای پیری سلولی. سیکل سلولی 2013، 12، 1922-1927. [CrossRef] [PubMed]

24. Lee, BY; هان، ج.ا. Im, JS; مورون، آ. جوهنگ، ک. گودوین، EC; کلیجر، WJ; دی مایو، دی. Hwang، ES بتا-گالاکتوزیداز مرتبط با پیری، بتا-گالاکتوزیداز لیزوزومی است. سلول پیری 2006، 5، 187-195. [CrossRef] [PubMed]

25. گورگولیس، وی. آدامز، PD; علیمونتی، ع. بنت، دی سی؛ بیشوف، او. اسقف، سی. کامپیسی، ج. کولادو، ام. اوانجلو، ک. فربیره، جی. و همکاران پیری سلولی: تعریف یک مسیر رو به جلو. Cell 2019, 179, 813-827. [CrossRef]

26. ماتسوکا، اس. بالیف، کارشناسی; اسموگورزوسکا، آ. مک دونالد، ER; Hurov، KE; لو، جی. باکالارسکی، م. ژائو، ز. سولیمینی، ن. لرنتال، ی. و همکاران تجزیه و تحلیل سوبسترای ATM و ATR شبکه های پروتئینی گسترده ای را نشان می دهد که به آسیب DNA پاسخ می دهند. Science 2007, 316, 1160-1166. [CrossRef]

27. ژانگ، آر. چن، دبلیو. آدامز، PD تشریح مولکولی تشکیل کانون های هتروکروماتین مرتبط با پیری. مول. سلول بیول. 2007، 27، 2343-2358. [CrossRef]

28. LaBaer, ​​J. گرت، دکتر. استیونسون، LF; Slingerland, JM; ساندو، سی. چو، اچ اس. فتایی، ع. هارلو، ای. فعالیت‌های عملکردی جدید برای خانواده P21 از مهارکننده‌های CDK. Genes Dev. 1997، 11، 847-862. [CrossRef]

29. شولزن، تی. Gerdes, J. The Ki-67 Protein: From the Known and the Unknown. J. Cell Physiol. 2000، 182، 311-322. [CrossRef]

30. پاسوس، ج.اف. فون Zglinicki، T. روش‌ها برای مرتب‌سازی سلولی سلول‌های جوان و پیر. روش ها مول. Biol. 2007، 371، 33-44.

31. دای، ی. تانگ، اچ. Pang, S. نقش حیاتی فسفولیپیدها در تنظیم پیری و طول عمر. جلو. فیزیول. 2021، 12، 1998. [CrossRef]

32. دشتی، ام. مسیر سیگنال دهی جوجه تیغی با بیماری های مرتبط با سن مرتبط است. J. متاب دیابت. 2014، 5، 2. [CrossRef]

33. وانگ، دی. لو، پی. لیو، ی. چن، ال. ژانگ، آر. سویی، دبلیو. دومیترو، AG; چن، ایکس. ون، اف. اویانگ، H.-W. و همکاران جداسازی سلول‌های پیر زودرس زنده با استفاده از فناوری FUCCI. علمی Rep. 2016, 6, 30705. [CrossRef]

34. کیان، ج. بولنز، ام. هوانگ، جی. دی مونتر، اس. لیزیج، بی. Bollen، M. Cdk1 رویدادهای میتوزی را از طریق هماهنگی یک سوئیچ فسفاتاز مرتبط با کروموزوم سفارش می دهد. نات اشتراک. 2015، 6، 10215. [CrossRef]

35. کنگ، م. کاتز، EE; پان، دی. بیرون، اف. کالیاپان، تی. ژو، سی. موریس، EP; موساچیو، ا. وانینی، ا. گرین، EC Human Condensin I و II باعث تراکم گسترده وابسته به ATP DNA متصل به نوکلئوزوم می شوند. مول. Cell 2020, 79, 99–114.e9. [CrossRef]

36. Kops, GJPL; Gassmann, R. Crowning the Kinetochore: The Fibrous Corona in Cromosome Segregation. Trends Cell Biol. 2020، 30، 653-667. [CrossRef]

37. Ma, HT; Poon، RYC TRIP13 در ایجاد نقطه بازرسی مونتاژ اسپیندل با پر کردن O-MAD2 عمل می کند. Cell Rep. 2018, 22, 1439-1450. [CrossRef]

38. کویپرس، MA; استاسویچ، تی جی؛ ساساکی، تی. ویلسون، کالیفرنیا؛ Hazelwood، KL; مک نالی، جی جی; دیویدسون، مگاوات؛ گیلبرت، DM بارگیری بسیار پایدار پروتئین‌های McM روی کروماتین در سلول‌های زنده برای تخلیه نیاز به تکرار دارد. J. Cell Biol. 2011، 192، 29-41. [CrossRef]

39. منگ، ق. گائو، جی. زو، اچ. او، اچ. لو، ز. هونگ، ام. ژو، اچ. مطالعه پروتئومی سلول‌های فیبروبلاست پوست انسان که به‌صورت سریالی پاساژ شده‌اند، تنظیم پایین پروتئین‌های مجتمع کندنسین کروموزوم را نشان می‌دهد که در پیری همانندسازی نقش دارند. بیوشیمی. بیوفیز. Res. اشتراک. 2018، 505، 1112-1120. [CrossRef]

40. لاروشل، اس. پاندور، ج. فیشر، RP; سالز، هنگ کنگ؛ Suter، B. Cdk7 برای میتوز و برای فعالیت کیناز فعال کننده Cdk در داخل بدن ضروری است. Genes Dev. 1998، 12، 370-381. [CrossRef]

41. لئونه، م. کازورلا-وازکز، اس. فرازی، اف. Wiederstein، JL; گروندل، ام. واینستاک، جی. Vergarajauregui، S. اکشتاین، ام. کروگر، ام. گاوباتز، اس. و همکاران IQGAP3، یک هدف YAP، برای پیشرفت چرخه سلولی مناسب و پایداری ژنوم مورد نیاز است. مول. سرطان Res. 2021، 19، 1712-1726. [CrossRef] [PubMed]

42. ناندی، AK; فورد، تی. فلکشر، دی. نیومن، بی. راپوپورت، AP تضعیف نقطه بازرسی آسیب DNA توسط PBK، یک کیناز میتوتیک جدید، شامل تعامل پروتئین-پروتئین با سرکوبگر تومور P53 است. بیوشیمی. بیوفیز. Res. اشتراک. 2007، 358، 181-188. [CrossRef] [PubMed]

43. خوب، ال. دیمری، GP; کامپیسی، ج. چن، تنظیم KY بیان ژن دی هیدروفولات ردوکتاز و اجزای E2F در فیبروبلاست های دیپلوئید انسانی در طول رشد و پیری. J. Cell Physiol. 1996، 168، 580-588. [CrossRef]

44. دمیچف، وی. مسنر، CB; Vernardis، SI; لیلی، KS; Ralser، M. DIA-NN: شبکه های عصبی و تصحیح تداخل، پوشش پروتئوم عمیق را در توان عملیاتی بالا فعال می کنند. نات Methods 2020، 17، 41-44. [CrossRef]

45. تیانووا، اس. تمو، تی. سینیتسین، پی. کارلسون، ا. هاین، من؛ گایگر، تی. مان، ام. Cox, J. بستر محاسباتی Perseus برای تجزیه و تحلیل جامع داده های (Prote)Omics. نات Methods 2016, 13, 731-740. [CrossRef]

46. ​​بنیامینی، ی. Hochberg, Y. کنترل نرخ کشف نادرست: رویکردی عملی و قدرتمند برای آزمایش چندگانه. JR Stat. Soc. سر. B (Methodol.) 1995, 57, 289-300. [CrossRef]

47. پرز-ریورول، ی. بای، جی. بندلا، سی. گارسیا سیسدوس، دی. هواپاتیرانا، اس. کاماتچیناتان، اس. کندو، دی جی؛ پراکاش، ا. فریکس-زیپر، ای. آیزناخر، ام. و همکاران منابع پایگاه داده پراید در سال 2022: مرکزی برای شواهد پروتئومیکس مبتنی بر طیف سنجی جرمی. Nucleic Acids Res. 2021، 50، D543–D552. [CrossRef]

【برای اطلاعات بیشتر:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】