بازیابی سلول‌های ایمنی ذاتی و تغییرات پایدار در ایمنی تطبیقی ​​در خون محیطی اهداکنندگان پلاسما در حال بهبودی هشت ماه پس از عفونت SARS-CoV-2 قسمت 1

خلاصه:

تغییرات مداوم و امضاهای ایمنی منحصر به فرد قبلاً در خون محیطی اهداکنندگان پلاسما (CP) در حال نقاهت تقریباً دو ماه پس از عفونت اولیه SARS-CoV{1}} شناسایی شده است. این مقاله نتایج تجزیه و تحلیل متوالی 47 اهداکننده CP را در یک زمان متوسط ​​هشت ماهه (محدوده 7.5 تا 8.5 ماه) پس از عفونت، همانطور که توسط فلوسیتومتری ارزیابی می‌شود، ارائه می‌کند.

با شیوع اپیدمی جدید پنومونی تاج، افراد بیشتری شروع به توجه به تأثیر پلاسمای نقاهت بر ایمنی کرده اند. پلاسمای بهبودی در حال حاضر یک ابزار موثر برای درمان پنومونی جدید عروق کرونر است. این می تواند ایمنی بیماران را بهبود بخشد، مقاومت بدن را افزایش دهد و به بیماران کمک کند تا در اسرع وقت بهبود یابند.

پلاسمای نقاهت‌آور ماده‌ای است که از پلاسمای بیماران بهبودیافته مبتلا به پنومونی جدید کرونری استخراج می‌شود که حاوی تعداد زیادی آنتی‌بادی و سلول‌های ایمنی است که می‌تواند به سیستم ایمنی کمک کند تا ویروس را شناسایی کرده و به آن حمله کند، بنابراین نقش ضد ویروسی ایفا می‌کند. بنابراین پلاسمای دوران نقاهت می تواند ایمنی را تا حدی بهبود بخشد و مقاومت بدن را افزایش دهد.

در حال حاضر، بسیاری از بیمارستان ها شروع به استفاده از پلاسمای نقاهت برای درمان بیماران مبتلا به پنومونی جدید کرونری کرده اند و به اثرات درمانی خاصی دست یافته اند. مطالعات نشان داده اند که پلاسما درمانی نقاهت می تواند زمان بستری بیماران را تا حد زیادی کوتاه کند، وضعیت را کاهش دهد و میزان مرگ و میر را کاهش دهد. بنابراین، ما باید فعالانه از درمان پلاسمای دوران نقاهت حمایت کرده و در آن مشارکت کنیم تا بیماران بیشتری در اسرع وقت بهبود یابند.

علاوه بر این، در زندگی روزمره نیز باید به تقویت ایمنی خود توجه کنیم تا از بروز بیماری هایی مانند ذات الریه جدید کرونری جلوگیری کنیم. به عنوان مثال، به یک رژیم غذایی متعادل توجه کنید و غذاهای مغذی بیشتری مانند سبزیجات، میوه ها و ماهی مصرف کنید. تقویت ورزش برای تقویت آمادگی جسمانی و ایمنی؛ به بهداشت توجه کنید، دست ها را مرتب بشویید و خطر عفونت را کاهش دهید.

به طور خلاصه، پلاسمای دوران نقاهت تأثیر مثبتی بر ایمنی دارد، که می تواند مقاومت بدن را تا حدی افزایش دهد و به بیماران کمک کند تا در اسرع وقت بهبود یابند. ما باید فعالانه از درمان پلاسمای نقاهت حمایت و مشارکت کنیم و به مراقبت های بهداشتی در زندگی روزمره توجه کنیم تا بدنمان سالم تر و پر نشاط شود! بنابراین به طور خلاصه، ما باید ایمنی خود را تقویت کنیم. سیستانچ می تواند به طور قابل توجهی ایمنی را بهبود بخشد زیرا پلی ساکاریدهای موجود در گوشت می توانند پاسخ ایمنی سیستم ایمنی انسان را تنظیم کنند، توانایی استرس سلول های ایمنی را بهبود بخشند و اثر باکتری کشی سلول های ایمنی را تقویت کنند.

روی مکمل cistanche deserticola کلیک کنید

جالب توجه است، نتایج ما تنوع قابل توجهی را در ترکیب زیر مجموعه ایمنی مربوطه در بین اهداکنندگان CP نشان می‌دهد. از نظر ایمنی ذاتی، هم مونوسیت‌های غیرکلاسیک و هم گرانولوسیت‌های CD11b در هشت ماه پس از عفونت کووید{3}} کاملاً بهبود یافته بودند. مونوسیت‌های میانی و سلول‌های کشنده طبیعی (NK) قبلاً در ارزیابی دو ماهه بازسازی شده بودند و پایدار بودند. با توجه به ایمنی تطبیقی، قطبش سلول‌های Th1 و Th2 ناهنجار مربوط به COVID{5} در همان سطوح دو ماهه باقی ماند. با این حال، سطوح پایین کل سلول های B حتی پس از هشت ماه عفونت شناسایی شد.

کاهش مداوم CD8 به علاوه Tregs و تغییرات در بخش سلولی NKT نیز قابل توجه بود. اهداکنندگان CP با یک چشم انداز ایمنی منحصر به فرد در هشت ماه پس از عفونت کووید-19 ظاهر می شوند که با بازسازی قابل توجه اجزای ایمنی ذاتی همراه با اثر ماندگار SARS-CoV-2 در سلول ها مشخص می شود. از ایمنی تطبیقی

کلید واژه ها:

SARS-CoV-2؛ کووید-19؛ اهداکنندگان پلاسما دوره نقاهت؛ پروفایل ایمنی؛ بازسازی سیستم ایمنی؛ 8 ماه.

1. معرفی

بیماری کروناویروس 2019 (COVID-19) ناشی از انتقال بالقوه کشنده و بسیار مسری از طریق هوای سندرم حاد تنفسی ویروس کرونا 2 (SARSCoV-2) است. شدت کووید{4}} تا حد زیادی در بین افراد آلوده متفاوت است، از موارد کاملاً بدون علامت [1] تا شرایط خفیف‌تر با تب، سرفه و خستگی و تا موارد جدی‌تر که از ذات‌الریه که منجر به سندرم دیسترس تنفسی حاد می‌شود، متفاوت است. نارسایی مهار نشده چند عضوی که اغلب کشنده هستند [2].

موارد علامت‌دار کووید-19 با یک پاسخ ایمنی بیش‌التهابی سیستمیک مشخص می‌شوند، و اکنون شواهد زیادی وجود دارد که نشان می‌دهد تغییرات در شدت علائم به دنبال عفونت SARS-CoV{3}} مستقیماً با موارد قبلی مرتبط است. وضعیت ایمنی میزبان [3-5]. عوامل مرتبط با پروفایل های ایمنی ناکارآمد تر، و در نتیجه، خطر مرگ و میر بالاتر، از جمله افزایش سن و برخی بیماری های مزمن زمینه ای مانند دیابت نوع 2، کاردیومیوپاتی، چاقی، بیماری انسدادی مزمن ریه و بیماری مزمن کلیوی [6،7] .
تحقیقات گسترده در مورد COVID{0}} اطلاعات مهمی را در مورد آبشارهای ایمنی و تغییرات خاص در زیر مجموعه‌های ایمنی مختلف همراه با عفونت SARS-CoV-2 نشان داده است [3،4،8،9]. با این حال، هنوز اطلاعات محدودی در مورد تغییراتی که ممکن است در طول زمان پس از رفع کامل عفونت در سیستم ایمنی میزبان باقی بماند، وجود دارد.

اخیراً نشان داده شده است که اجزای متمایز حافظه ایمونولوژیک نسبت به SARS-CoV{1}} ممکن است در طول زمان سینتیک متفاوتی داشته باشند [9،10]. به عنوان مثال، به نظر می رسد حافظه ضد SARS-CoV-2 و سلول های T سیتوتوکسیک در مقایسه با ایمنی سلول B با سرعت بیشتری کاهش می یابد، در حالی که هم سطح سلول های B حافظه و هم سطح ایمونوگلوبولین (Ig)G در برابر پروتئین اسپایک SARS-CoV{6} {8}} حداقل شش ماه پس از شروع کووید-19 [10] باقی بماند.

در گروهی متفاوت، برتون و همکاران. نشان داد که سلول‌های CD4 پلاس و CD8 پلاس T حافظه مرکزی کاهش یافتند، اما سلول‌های T اختصاصی آنتی‌ژن شش ماه پس از عفونت باقی ماندند [11]. در مورد سلول های ایمنی ذاتی، به نظر می رسد مشخصات آنها وابسته به سن باشد و تغییرات در مونوسیت ها و نوتروفیل ها تا حدودی مشاهده شد. دو ماه پس از عفونت [12].

همچنین اخیراً تغییرات پایدار خاص و علائم ایمنی منحصر به فرد در خون محیطی (PB) اهداکنندگان پلاسمای دوران نقاهت (CP) تقریباً دو ماه پس از عفونت اولیه SARS-CoV{1}} گزارش کرده‌ایم. این امضاهای ایمنی هم با توانایی بیماران برای ایجاد یک پاسخ هومورال محافظ، یعنی تولید آنتی‌بادی‌های IgG و/یا IgA ضد SARS-CoV{4} کافی و قابل تشخیص، بلکه با شدت علائم تجربه شده مرتبط است. ، با اهداکنندگان CP که قبلاً در بیمارستان بستری شده بودند نسبت به اهداکنندگان CP که علائم خفیف تری را تجربه کردند از ایمنی کمتری برخوردار بودند [13].
با پیروی از همین رویکرد و برای بررسی آثار بلندمدت بر روی نمایه ایمنی اهداکنندگان CP بهبودیافته COVID، در اینجا نتایج تجزیه و تحلیل متوالی 47 اهداکننده CP را در یک زمان متوسط ​​هشت ماهه ارائه می‌کنیم (محدوده 7.5– 8.5 ماه) پس از عفونت.

2. مواد و روشها

2.1. انتخاب شرکت کنندگان

گزارش حاضر شامل آزمایش متوالی اهداکنندگان CP است که در یک مطالعه فاز 2 شرکت کردند (NCT04408209) و نمونه‌های PB جفتی را برای تجزیه و تحلیل مشخصات ایمنی آنها در دو و هشت ماهگی، پس از آلودگی به SARS-CoV ارائه کردند{4}}. همه شرکت‌کنندگان به SARS-CoV-2 آلوده شده بودند و پس از سواب‌های مثبت نازوفارنکس و/یا اوروفارنکس با RT-qPCR، همانطور که قبلاً توضیح داده شد، تشخیص داده شدند [14].

قبل از اهدای سی پی، دو آزمایش PCR منفی با فاصله حداقل هفت روزه داشتند. دومین آزمایش منفی 1 تا 7 روز قبل از پلاسمافرزیس انجام شد. آن‌ها همچنین آنتی‌بادی‌های IgG ضد SARS-CoV{4}} را علیه پروتئین دامنه 1 (S1) SARS-CoV-2 هنگامی که با یک آنزیم حساس تجاری در دسترس و تأیید شده توسط سازمان غذا و دارو مورد بررسی قرار می‌دهند، ایجاد کردند. سنجش ایمونوسوربنت مرتبط (Euroimmun Medizinische Labordiagnostika AG، Lubeck، آلمان)، که قبلاً به تفصیل شرح داده شد [14].

معیارهای ورود همچنین شامل حداقل 14 روز پس از بهبودی کامل از عفونت SARS-CoV-2 (بدون علامت، رفع کامل اختلال عملکرد ارگان ناشی از SARS-CoV-2)، اهداکنندگان مرد بدون سابقه انتقال خون بود. و زنان بدون سابقه انتقال خون یا حاملگی، شمارش کامل خون طبیعی، تست های سرولوژیکی منفی برای ویروس هپاتیت B (HBV)، ویروس هپاتیت C (HCV)، ویروس نقص ایمنی انسانی (HIV)، آزمایشگاه تحقیقاتی بیماری های مقاربتی (VDRL)، ویروس لنفوتروپیک سلول T انسانی (HTLV){5}} و منفی برای HIV، HBV، HCV با آزمایش تکثیر اسید نوکلئیک و اهداکنندگان کلیه معیارهای کلی اهدای خون از نظر سن، وضعیت عمومی، سطح هموگلوبین و حیاتی را برآورده کردند. نشانه ها

10 فرد سالم با سن مشابه (متوسط ​​47 سال، دامنه 45 تا 73 سال) و جنسیت (6 مرد/4 زن) نیز مورد بررسی قرار گرفتند و به عنوان شاهد عادی مورد استفاده قرار گرفتند. این افراد هیچ مشکل سلامتی شناخته شده ای نداشتند و در زمان خونگیری، آزمایش PCR برای SARS-CoV{6}} از سواب های نازوفارنکس منفی بود.

همه شرکت کنندگان از این مطالعه مطلع شدند و طبق اعلامیه هلسینکی و کمیته اخلاق محلی رضایت نامه آگاهانه امضا شده را ارائه کردند.

تمام مراحل مطالعه توسط اعلامیه هلسینکی (هجدهمین مجمع انجمن پزشکی جهانی)، اصلاحات بعدی آن، دستورالعمل‌های مقررات یونان، و همچنین دستورالعمل‌های عملکرد بالینی خوب (GCP) تعریف شده توسط کنفرانس بین‌المللی هماهنگی انجام شد. این پروتکل توسط کمیته اخلاق بیمارستان عمومی "الکساندرا"، آتن، یونان تایید شد (مرجع شماره 245/16 آوریل 2020).

2.2. آنالیز فلوسیتومتری

نمونه‌های PB در لوله‌های جمع‌آوری خون با پوشش EDTA (BD Vacutainer، BD Biosciences، San Jose، CA، USA؛ #367841) جمع‌آوری شدند و در عرض یک ساعت پس از جمع‌آوری و به دنبال پروتکل Stain-Lyse-no-Wash (BD Biosciences) پردازش شدند. ). به طور خاص، برای هر نمونه PB، 100 میکرولیتر از کل خون ضد انعقاد به یک لوله پلی استایرن FACS 12 × 75 میلی‌متر منتقل شد و با پانل متشکل از آنتی‌بادی‌های ضد انسانی مناسب با فلوروفور کونژوگه در برابر نشانگرهای سطحی CD رنگ‌آمیزی شد. 12}}PerCP، CD{13}}BV510، CD{15}}PE، CD14-BV605، CD{18}}APC، CD{19}}PECF594، CD{21} }APCH7، CD56- APCR700، CD183-BV421، CD{27}}BV650، CD{29}}BB515 و CD11b-BV786 (همه از BD Biosciences)، در دمای اتاق (RT ) به مدت 20 دقیقه محافظت شده از نور. علاوه بر این، 450 میکرولیتر از محلول لیز کننده 1× FACS اضافه شد و سلول ها به مدت 10 دقیقه دیگر در RT محافظت شده از نور انکوبه شدند. همه نمونه‌ها روی یک 3-لیزر BD FACSCelesta (BD Biosciences) آنالیز شدند و 100،{40}} رویداد در هر نمونه به‌دست آمد.

12-پانل رنگی که در اینجا به آن اشاره شد شامل پانل مرجع ما برای تجزیه و تحلیل فنوتیپی اهداکنندگان CP در دو ماه پس از عفونت بود و امکان شناسایی و تجزیه و تحلیل 24 جمعیت متمایز ایمنی، از جمله سلول های B، سلول های CD3 به علاوه T را فراهم می کرد. سلول‌های کشنده طبیعی (NK)، مونوسیت‌ها، گرانولوسیت‌ها و زیرمجموعه‌های آنها به دنبال استراتژی دروازه‌ای که قبلاً توضیح داده شد [13].

برای سازگاری با تحلیل‌های دسته‌ای قبلی‌مان، عملکرد منظم و گسترده‌ای را دنبال کردیم. راه‌اندازی سیتومتر با استفاده از سلول‌های کنترل رنگ‌آمیزی برای پیکربندی ولتاژهای PMT مناسب و با BD CompBeads Set anti-mouse Igκ (BD Biosciences) برای جبران سرریز فلورسانس بین کانالی انجام شد. علاوه بر این، عملکرد روزانه CS&T قبل از هر خرید برای تأیید وضعیت پایدار سیتومتر اعمال شد.

در نهایت، یک مرحله استانداردسازی اضافی روزانه با استفاده از دانه‌های رنگین کمان (Spherotech Inc، Lake Forest، IL، USA) برای بررسی پایداری لیزر از طریق کنترل نوسانات PMT برای تشخیص شدت فلورسنت هدفمند مهره‌ها اعمال شد.

2.3. تحلیل آماری

داده ها با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism 8.0.2 (San Diego, CA, USA) تجزیه و تحلیل شد. نتایج به صورت میانگین ± انحراف استاندارد (SD) بیان می‌شوند. برای تجزیه و تحلیل آماری، از آزمون t Student برای مقایسه گروه شاهد و اهداکنندگان CP هشت ماه پس از عفونت SARSCoV{4}} استفاده شد، در حالی که تغییرات در اهداکنندگان CP در دو و هشت ماه پس از عفونت با استفاده از آزمون t زوجی دانشجو مقایسه شد. p-value < 0.05 از نظر آماری معنی دار در نظر گرفته شد.

3. نتایج

3.1. ویژگی های اهداکنندگان CP

تجزیه و تحلیل حاضر شامل 47 اهداکننده CP با نمونه‌های PB جفتی بود که در میانگین دو و هشت ماه (محدوده 7.5-8.5) ماه پس از عفونت کووید{6}} جمع‌آوری شده بودند. مشخصات بالینی شرکت کنندگان در جدول 1 ارائه شده است.

3.2. پروفایل ایمنی در هشت ماه پس از عفونت SARS-CoV{4}} با ویژگی های بالینی اهداکنندگان CP مرتبط نیست

مطابق با تجزیه و تحلیل قبلی ما در دو ماه پس از عفونت SARS-CoV-2 [13]، در هشت ماهگی، ما تنوع قابل توجهی از ترکیب زیر مجموعه ایمنی مربوطه را در بین اهداکنندگان CP مشاهده کردیم. این تنوع از ویژگی‌های جمعیت‌شناختی و بالینی گروه ما فراتر رفت، زیرا هیچ تفاوت قابل‌توجهی با جنس، سن، تعداد علائم تجربه‌شده یا مقادیر آنتی‌بادی‌های اختصاصی ضد SARS-CoV سرم در برابر ویروس S1 مرتبط نبود. آنتی ژن

شایان ذکر است، هیچ تفاوت معنی‌داری در پروفایل ایمنی اهداکنندگان CP که قبلاً در بیمارستان بستری بودند و کسانی که علائم خفیف‌تری داشتند و معیارهای پذیرش در بخش‌های مراقبت ویژه (ICU) را نداشتند، به دست نیامد (داده‌ها نشان داده نشده است). بنابراین، ما اهداکنندگان CP را در تجزیه و تحلیل بعدی خود از پویایی پروفایل ایمنی در طول زمان بیشتر به دسته‌های بیشتری تقسیم نکردیم (جدول 2).

3.3. بازیابی ایمنی ذاتی در هشت ماه پس از کووید-19

ما بیشتر ارزیابی کردیم تا پویایی پروفایل‌های ایمنی خاص را با مقایسه ترکیبات مربوطه زیر مجموعه‌های ایمنی مختلف در طول زمان ارزیابی کنیم. تجزیه و تحلیل جمعیت های اصلی ایمنی متعلق به بازوهای ایمنی ذاتی و سازگار و زیرجمعیت های آنها در شکل های 1 و 2 ارائه شده است. به طور کلی، نتایج ما نشان می دهد که تا هشت ماه پس از عفونت، اکثر زیر مجموعه های سلول های ایمنی ذاتی بهبود یافته اند. به سطوحی مشابه با سطوح گروه کنترل، برخلاف سلول‌های ایمنی تطبیقی، که در آن‌ها زیرمجموعه‌های لنفوسیتی خاص شواهدی از فعال‌سازی طولانی‌مدت مداوم نشان دادند.

در مورد زیرمجموعه‌های مونوسیت، قبلاً یک {{0}}برابر افزایش مونوسیت‌های میانی و افزایش 2.{2} برابری بخش غیرکلاسیک (به هزینه مونوسیت‌های کلاسیک) در طول دوره گزارش کرده‌ایم. بیماری کووید{4} فعال [11]. تا دو ماه پس از عفونت، سطح مونوسیت‌های متوسط ​​و کلاسیک شواهدی از بهبودی نشان داد و عملاً تا هشت ماه پس از عفونت به طور کامل ترمیم شد. درصد مونوسیت‌های غیرکلاسیک، که در دو ماه پس از عفونت افزایش یافت (میانگین درصد - 1.16 درصد در مقابل 0.27 درصد در گروه کنترل، p=0.01)، نیز تا هشت ماه کاملاً بهبود یافت و به آن رسید. سطوح گروه کنترل

مشاهدات مشابهی برای گرانولوسیت ها ثبت شد. اگرچه درصد کل آنها در هشت ماهگی در مقایسه با گروه شاهد اندکی کاهش یافته بود، در هشت ماه پس از عفونت، شیوع زیر مجموعه‌های CD11b plus و CD11b- به ترتیب کاهش و افزایش معنی‌داری پیدا کرده است که منجر به نسبت CD11b به علاوه /CD11b-گرانولوسیت مشابه می‌شود. نسبت به اهداکنندگان سالم سالم، در مقایسه با گسترش گرانولوسیتی تنظیم نشده در ارزیابی دو ماهه [13].

در مورد سلول های NK، آنالیزهای ما هیچ نوسان قابل توجهی را بین دو تا هشت ماه پس از عفونت نشان نداد. درصد کل سلول‌های NK و زیرمجموعه‌های آن‌ها تقریباً در دو ماه پس از رزولوشن بیماری فعال ترمیم شدند، و همین نمایه نیز در هشت ماهگی مشاهده شد، با درصدهایی که در سطوح تقریباً طبیعی باقی ماندند.

For more information:1950477648nn@gmail.com