رابطه بین Bcl-3، Gal-3، TGF- 1 سرم و فیبروز بینابینی کلیه در موش‌های صحرایی مبتلا به بیماری مزمن کلیه

خلاصه:

هدف: بررسی رابطه بین Bcl{1}}، Gal{2}}، TGF- 1 سرم ناشی از آدنین و کلیهفیبروز بینابینی در موشهای صحرایی مبتلا به بیماری مزمن کلیوی. روش‌ها: بیست موش صحرایی نر با درجه SPF به طور تصادفی به گروه کنترل (n=10) و گروه مدل (گروه CKD، n=10) تقسیم شدند و به گروه مدل با گاواژ آدنین داده شد و گروه کنترل حجم مساوی سالین با گاواژ داده شد و موش ها به ترتیب در هفته سوم و ششم اعدام شدند و خون برای تشخیص نیتروژن اوره، کراتینین و Bcl{5}}، Gal{6}} و کلیه باقی ماند. تغییرات پاتولوژیک با رنگ‌آمیزی HE، شدت فیبروز بینابینی با رنگ‌آمیزی ماسون، و بیان پروتئین -SMA در بافت‌های کلیه با رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی مشاهده شد. در مقایسه با گروه کنترل، سطح اوره خوننیتروژن,کراتینین, Bcl{{0}}، Gal-3 و TGF- 1 به طور قابل توجهی در گروه CKD در تمام نقاط زمانی بالاتر بودند (P＜0.0 5). سطح نسبی فیبرهای کلاژن بینابینی در گروه CKD به طور قابل توجهی بیشتر از گروه کنترل بود (05/0.0 < 0). آنالیز همبستگی همبستگی مثبتی را بین سطوح Bcl-3، Gal{8}}، TGF- 1 خون و ناحیه نسبی فیبروز بینابینی کلیوی نشان داد (rs=0.776, P <0.001 ؛ rs=0.58، P <0.001؛ rs=0.52، P=0.001).

نتیجه‌گیری سطوح سرمی Bcl-3، Gal{1}} و TGF- 1 در موش‌های با مدل CKD ناشی از آدنین به‌طور معنی‌داری افزایش یافت و ارتباط نزدیکی با شدت بیماری داشت.فیبروز کلیه، که انتظار می رود یک نشانگر زیستی جدید برای ارزیابی باشدفیبروز کلیه.

کلید واژه ها:بیماری مزمن کلیوی; فیبروز بینابینی؛ Bcl-3; گال-3; TGF{2}}

برای دریافت اطلاعات بیشتر درباره نحوه درمان سیستانچ اینجا را کلیک کنیدبیماری مزمن کلیوی

بیماری مزمن کلیوی(CKD) یک مشکل عمومی جهانی است و شیوع آن هر سال در حال افزایش است [1].بیماری مزمن کلیوی(CKD) یک مشکل عمومی جهانی است و شیوع آن سال به سال در حال افزایش است [1]. در مقابل، فیبریلاسیون کلیه آسیب شناسی اصلی پیشرفت CKD به مرحله نهایی است. CKD یک تغییر پاتولوژیک اصلی و مسیر رایج برای همه انواع CKD برای پیشرفت به مرحله نهایی است. شدت فیبروز کلیه ارتباط نزدیکی با انتخاب درمان و پیش آگهی بیماران دارد. بنابراین، ارزیابی دقیق درجه فیبروز کلیه بسیار مهم است [2]. بنابراین ارزیابی دقیق درجه فیبروز کلیه از اهمیت بالایی برخوردار است [2]. بیوپسی کلیه استاندارد طلایی برای تشخیص فیبروز کلیه است و می تواند به طور دقیق و بصری تغییرات پاتولوژیک کلیه را درک کرده و میزان فیبروز کلیه را تعیین کند. با این حال، تهاجمی است و محدودیت هایی در اجرا دارد. سونوگرافی B، CT، MRI و سایر روش های غیر تهاجمی را می توان تا حدی برای تعیین فیبروز کلیه مورد استفاده قرار داد. با این حال، این آزمایشات فقط می توانند به طور غیرمستقیم فیبروز کلیه را از طریق تغییرات آناتومیک در کلیه منعکس کنند. با این حال، این آزمایشات فقط می توانند به طور غیرمستقیم فیبروز کلیه را از طریق تغییرات آناتومیک در کلیه منعکس کنند و تشخیص و قضاوت در مورد شدت آن در مراحل اولیه دشوار است [3]. با این حال، این آزمایش‌ها فقط می‌توانند به‌طور غیرمستقیم فیبروز کلیوی را از طریق تغییرات آناتومیکی در کلیه منعکس کنند و تشخیص زودهنگام و تعیین شدت آن را دشوار می‌سازند [3]. در مقابل، نشانگرهای زیستی می توانند فرآیندهای بیولوژیکی و پاتولوژیک یک بیماری را ارزیابی یا به صورت کمی اندازه گیری کنند. بیومارکرها می توانند فرآیندهای بیولوژیکی و پاتولوژیک یک بیماری را ارزیابی یا کمی کنند و همچنین به عنوان اهداف درمانی برای بیماری عمل کنند [4]. بیومارکرها می توانند فرآیندهای بیولوژیکی و پاتولوژیک یک بیماری را ارزیابی یا کمی کنند و همچنین به عنوان اهداف درمانی برای بیماری عمل کنند [4]. چندین بیومارکر برای تشخیص فیبروز کلیه شناسایی شده است. با این حال، هیچ نشانگر پذیرفته شده جهانی برای تعیین فیبروز کلیه وجود ندارد. بنابراین، بررسی و غربالگری برای نشانگرهای زیستی ارزشمند مهم است.

Bcllymphoma3 (Bcl-3)، Bcl-3 در موش‌ها، و Bcl-3 در موش‌ها به‌عنوان مهم‌ترین نشانگرهای زیستی برای تشخیص فیبروز کلیه شناسایی شده‌اند. Bcl-3 (Bcl-3) و Galectin-3 (Gal-3) نشانگرهای کلیوی بالقوه در سال‌های اخیر هستند. سال، اما ارزش آنها با این حال، ارزش آن نیاز به بررسی بیشتر دارد. در این مطالعه، ما با هدف ایجاد یک مدل CKD ناشی از آدنین موش صحرایی و بررسی ارزش Galectin 3. در این مطالعه، ما یک مدل موش CKD ناشی از آدنین ایجاد کردیم و Bcl{10}} سرم، Gal اندازه‌گیری کردیم. -3، فاکتور تراریخته 1، و سایر نشانگرهای زیستی در موش صحرایی. هدف از این مطالعه ایجاد مدلی از بیماری مزمن کلیه ناشی از آدنین موش صحرایی و اندازه‌گیری سطوح سرمی Bcl{13}}، Gal{14}}، فاکتور رشد تبدیل کننده- 1 (TGF{16) بود. }}) و TGF- 1.

(TGF- 1) رابطه آنها را با فیبروز بینابینی کلیوی ارزیابی و تجزیه و تحلیل می کند تا بررسی شود که آیا آنها می توانند مبنایی برای تعیین فیبروز کلیه باشند یا خیر. سطوح TGF- 1، Gal-3 و TGF- 1 برای تعیین اینکه آیا آنها می‌توانند نشانگرهای زیستی جدیدی برای فیبروز کلیه باشند، تجزیه و تحلیل شدند.

1 مواد و روش ها

1.1 حیوانات آزمایشی

بیست موش نر SD با درجه SPF، وزن بدن (200±10) گرم، 8 هفته سن، از مرکز حیوانات تجربی دانشگاه پزشکی جنوب غربی [SCXK (Chuan) 2018-17] خریداری شدند. موش ها در اتاق حیوانات مرکز تحقیقات پزشکی یکپارچه بیمارستان وابسته به طب سنتی چینی دانشگاه پزشکی جنوب غربی [SYXK (چوان) 2018-065] نگهداری و جمع آوری شدند. این آزمایش از اصل "3R" مراقبت انسانی پیروی کرد. کمیته اخلاق حیوانات آزمایشگاهی دانشگاه پزشکی جنوب غربی این مطالعه را تایید کرد (swmu20220018).

1.2 ابزار و معرف های اصلی

آدنین (سیگما، ایالات متحده آمریکا)؛ گال-3 کیت الایزا (شرکت صنعت رایگان آنزیم جیانگ سو، آموزشی ویبولیتین، چین)، کیت رت TGF{1}} (شرکت صنعت بدون آنزیم جیانگ سو.

Ltd., China), rat Bcl-3 کیت ELISA (شرکت صنعت بدون آنزیم Jiangsu, Ltd., China); محلول رنگ آمیزی ماسون (Hefei Bomei Biotechnology Co., Ltd., China)؛ آنتی بادی SMA (شرکت مهندسی زیستی ووهان دکتری، آموزشی ویبولیتین، چین)؛ سانتریفیوژ انجماد با سرعت بالا (Eppendorf Co. Ltd.

آموزشی ویبولیتین، آلمان)؛ آنالایزر بیوشیمیایی خودکار (زیمنس، آلمان)؛ میکروسکوپ پارافین (ترمو، ایالات متحده آمریکا)؛ میکروسکوپ نوری (نیکون، ژاپن)؛ ابزار استانداردسازی آنزیمی (Rayto، RT-6100).

1.3 روش های تجربی

1.3.1 گروه‌بندی آزمایشی و آماده‌سازی مدل، 20 موش صحرایی نر SD با درجه SPF به‌طور تصادفی به گروه‌های کنترل (n=10) و مدل (CKD، n=10) پس از 1 هفته تغذیه تطبیقی ​​تقسیم شدند. آدنین در آب مقطر حل شد تا سوسپانسیون 2.5 درصدی به دست آید. 250 mg/(kg-d) سوسپانسیون آدنین به طور منظم از هفته اول تا چهارم به صورت گاواژ به گروه CKD و از 5 تا 5 به گروه شاهد 125 mg/(kg-d) سوسپانسیون آدنین داده شد. هفته ششم؛ به گروه شاهد همان حجم سالین با گاواژ داده شد و هر دو گروه با غذای معمولی تغذیه شدند. همه موش ها با نیمی از نور و نیمی از تاریکی آزادانه تغذیه و آبیاری شدند و دمای اتاق 18 درجه -25 درجه بود.

1.3.2 جمع آوری نمونه

موش ها به ترتیب در پایان هفته سوم و ششم اعدام شدند و خون از آئورت شکمی جمع آوری شد. بافت کلیه در محلول فرمالین خنثی 10 درصد تثبیت و به صورت مقاطع پارافینی ساخته شد و قسمت دیگر بافت کلیه منجمد و در دمای 80 درجه نگهداری شد و قسمت دیگر بافت کلیه منجمد و در دمای 80 درجه در یخچال نگهداری شد.

1.3.3 نشانگرهای نیتروژن اوره خون، کراتینین، Bcl-3، Gal-3 و TGF- 1

عملکرد کلیه موش‌ها با آنالایزر بیوشیمیایی تمام اتوماتیک اندازه‌گیری شد. برای تعیین Bcl{1}}، Gal{2}} و TGF{3}} از روش ایمونواسی مرتبط با آنزیم ELISA استفاده شد. مقادیر Bcl-3، Gal-3 و TGF- 1 توسط ELISA تعیین شد. کلیه کیت ها از شرکت صنعتی جیانگ سو بدون آنزیم خریداری شده است. کلیه کیت ها از شرکت صنعتی بدون آنزیم جیانگ سو خریداری شده اند.

1.3.4 رنگ‌آمیزی HE بافت کلیه بافت‌های ثابت کلیه آب‌گیری، تعبیه شده، برش داده شده و موم‌زدایی شدند.

بافت‌های ثابت کلیه آب‌گیری، تعبیه شده، برش داده شده و به آب موم زدایی شدند

جدول 1 مقایسه عملکرد کلیه بین دو گروه موش صحرایی (&x±s)

2.2 مقایسه سطح سرمی Bcl-3، Gal-3 و TGF- 1 بین دو گروه در مقایسه با گروه کنترل، Bcl-3، Gal-3 خون و سطوح TGF- 1 در گروه CKD بالاتر از گروه کنترل بود. در مقایسه با گروه کنترل، سطوح Bcl-3، Gal{9}} و TGF{{1{{{0}} در گروه CKD در تمام نقاط زمانی به طور قابل توجهی بالاتر بود (P < {{14} }}.{19}}5). سطح TGF در گروه CKD به طور قابل توجهی بالاتر بود (0.05 < P). در گروه CKD، سطوح Bcl{16}}در 6 هفته به طور قابل توجهی بالاتر از 3 هفته در گروه CKD بود (05/0 > P). شکل 1 را ببینید

2.3 رنگ آمیزی HE بافت کلیه در دو گروه هیچ تغییر پاتولوژیک واضحی در بافت کلیه گروه کنترل در هر نقطه زمانی مشاهده نشد، در حالی که بافت کلیه گروه CKD در هر نقطه زمانی مشاهده شد. هیچ تغییر پاتولوژیک واضحی در بافت‌های کلیه گروه کنترل در هر نقطه وجود نداشت، در حالی که در گروه CKD، کلیه سلول‌های اپیتلیال کلیه در گروه CKD نکروز دژنراتیو، اتساع، تکثیر بافت فیبری بینابینی و انفیلتراسیون سلول‌های التهابی را نشان دادند. تغییرات در هفته 6 آشکارتر از هفته 3 بود، به شکل 2 مراجعه کنید

2.4 رنگ آمیزی ماسونی بافت کلیه و فیبریلاسیون بینابینی در دو گروه موش صحرایی بینابینی موشهای گروه کنترل در پایان هفته سوم و ششم هیچ رسوب آشکاری فیبر کلاژن در بینابینی موشهای کنترل در پایان هفته مشاهده نشد. هفته سوم و ششم. افزایش رسوب فیبر کلاژن در بینابینی موش های CKD در پایان هفته ششم نسبت به پایان هفته سوم (مساحت نسبی فیبرهای کلاژن بینابینی در گروه CKD نیز به طور قابل توجهی بیشتر از گروه کنترل بود. . سطح نسبی فیبرهای کلاژن بینابینی در گروه CKD نیز به طور قابل توجهی بیشتر از گروه کنترل بود و در پایان هفته 6 بیشتر از پایان هفته 3 بود (P < {{1{12}}} }.05). (P <0.05). شکل 3 را ببینید.

شکل 3 نتایج رنگ آمیزی ماسون و امتیاز سطح نسبی رشته های کلاژن در بینابینی کلیه