اثر حفاظتی ایزوکوئیریتیژنین بر آسیب حاد کلیه ناشی از سیس پلاتین از طریق مهار FPR2 در ماکروفاژها

برای اطلاعات بیشتر لطفاً تماس بگیرید: ali.ma@wecistanche.com

Tan Rui-Zhi و همکاران

برای درمان بیماری کلیوی روی سیستانچ کلیک کنید

خلاصه

آسیب حاد کلیه (AKI) یک عارضه جدی در بیماران بدحال است. شواهد انباشته نشان داد که ماکروفاژها نقش مهمی در پیش‌التهابی دارندآسیب حاد کلیهو isoliquiritigenin (ISL) می تواند التهاب ماکروفاژیک را مهار کند، اما نقش آن درآسیب حاد کلیهو مکانیسم اصلی ناشناخته است. مطالعه حاضر با هدف بررسی اثر محافظت مجدد ISL بر AKI و نقش گیرنده‌های فرمیل پپتیدی 2 (FPR2) در این فرآیند انجام شد. در این مطالعه، مدل AKI القا شده با سیس پلاتین و مدل التهابی ماکروفاژ ناشی از لیپوپلی ساکارید برای انجام آزمایش‌های in vivo و in vitro استفاده شد. نتایج نشان داد که ISL به شدت تسکین یافته استآسیب کلیهو التهاب کلیه را در داخل بدن مهار می کند و پاسخ التهابی ماکروفاژیک را در شرایط آزمایشگاهی سرکوب می کند. نکته مهم، مشخص شد که FPR2 در مقایسه با گروه کنترل در ماکروفاژهای ناشی از AKI و LPS به طور قابل توجهی تنظیم مثبت شد، در حالی که به شدت توسط ISL سرکوب شد. جالب توجه است، بیان بیش از حد FPR2 با ترانسفکشن pcDNA3.{4}}FPR2 به طور موثر اثر ضد التهابی ISL در ماکروفاژها را معکوس کرد، که نشان می‌دهد FPR2 ممکن است هدف بالقوه ISL برای جلوگیری از التهاب و بهبود باشد.آسیب کلیهازآسیب حاد کلیه. روی هم رفته، این یافته‌ها نشان داد که ISL ناشی از سیس پلاتین را بهبود می‌بخشدآسیب کلیهبا مهار FPR2 التهاب ماکروفاژیک را درگیر می کند، که ممکن است یک گزینه درمانی بالقوه برای AKI فراهم کند.

1. مقدمه

حادکلیهآسیب (AKI) یک نوع شدید شایع استکلیهبیماری با مرگ و میر بالا. 1 با کاهش سریع عملکرد کلیه که در عرض 7 روز یا کمتر رخ می دهد مشخص می شود. انتشارات اخیر گزارش داده اند که بروز AKI به 5 درصد از بیماران بستری و 30 درصد از بیماران شدید است.AKIسالانه باعث مرگ 2 میلیون نفر در سراسر جهان می شود که به یک مشکل بهداشت جهانی تبدیل شده است. اگرچه این تعریف معمولی و یکنواخت است، AKI می تواند به دلایل مختلفی از جمله مصرف داروی نفروتوکسیک، آسیب ایسکمی-پرفیوژن مجدد (آسیب خونرسانی مجدد ایسکمی، IRI)، سپسیس، جراحی قلب و عروق، فشار خون بالا و دیابت ایجاد شود. سن، دیابت و نارسایی قلبی خطر ابتلا به AKI را افزایش می‌دهند که معمولاً منجر به بیماری مزمن کلیه غیرقابل برگشت (CKD) و بیماری کلیوی مرحله نهایی (ESRD) در برخی از بیماران می‌شود. در التهاب ایمنی کلیه در AKI.5 در میان آنها، نشان داده شده است که ماکروفاژها نقش مهمی در ترویج التهاب کلیه دارند. بهبود رویکردهای درمانی فعلی برای مدیریت AKI.

Isoliquiritigenin (ISL) یک فلاونوئید با ساختار چالکون است که ریشه در داروهای گیاهی سنتی چینی دارد.8 در سال های اخیر به دلیل آنتی اکسیدان، ضد التهاب، تجمع پلاکتی، ضد باکتری، توجه گسترده دانشمندان را به خود جلب کرده است. خواص ضد ویروسی، ضد تومور، محافظت از کبد، محافظت عصبی، محافظت از قلب و سم زدایی.9 نشان داده شده است که ISL از تکثیر سلولی جلوگیری می کند، ROS را کاهش می دهد و باعث آپوپتوز، نکروز و مرگ سلول های سرطانی به درجات مختلف می شود. گزارش‌ها حاکی از آن است که isoliquiritigenin می‌تواند تولید IL{7}} و TNF-a ناشی از بخش لیپیدی A LPS در ماکروفاژهای RAW264.7 را مهار کرده و تشکیل کمپلکس LPS-TLR4/MD{13}} را کاهش دهد. علاوه بر این، ISL می‌تواند آپوپتوز سلول HepG2 را از طریق مسیرهای سیگنالینگ MAPK، STAT3 و NF-kB با واسطه ROS القا کند. آپوپتوز سلولی PC{22}. شایان ذکر است که ISL اغلب به عنوان یک مکمل غذایی برای زنان استفاده می شود. مطالعات اخیر نشان داده است که ISL اثر ضد التهابی قابل توجهی بر AKI دارد، اما مکانیسم اثر خاص هنوز نامشخص است.

تحقیقات قبلی از تیم ما نشان داد که مینکل، لکتین نوع C ناشی از ماکروفاژها، یک گیرنده تشخیص الگوی غشایی است که در التهاب کلیه دخالت دارد، 13 که از طریق آن، گیرنده‌های پپتید فرمیل 2 (FPR2) را که رابطه خاصی با مینکل دارد را غربال کردیم. پایگاه داده GEO با این حال، نقش آن در بیماری حاد کلیه تایید نشده است. FPR2 یک ژن کدکننده پروتئین است که به خانواده گیرنده های جفت شده با پروتئین G تعلق دارد و حاوی 351 باقیمانده اسید آمینه است. کموتاکسی سلولی و چسبندگی سلولی که ارتباط تنگاتنگی با بروز و توسعه بیماری های مختلف دارد. همسانی آن با FPR1 و FPR3 به 69 درصد و 83 درصد می رسد. زیر سلول های FPR2 در غشای سلولی قرار دارند و پروتئین های غشایی چند پاسی هستند. آنها عمدتاً در نوتروفیل‌ها، ائوزینوفیل‌ها، مونوسیت‌ها، سلول‌های اپیتلیال، فیبروبلاست‌ها، سلول‌های گلیال، سلول‌های مزانژیال و غیره که در اندام‌های مختلف مانند ریه، طحال و کبد توزیع شده‌اند، بیان می‌شوند. قابل ذکر است، FPR2 به وفور در بینابینی کلیه بیان می شود، 17 که سلول های التهابی در آن قرار دارند. عملکرد اصلی FPR2 ترکیب برخی از رسانه‌های تخصصی تقویت‌کننده تجزیه (SPM) برای واسطه‌گری فعالیت این متابولیت‌ها در سرکوب و از بین بردن التهاب است. با این حال، نقش FPR2 در التهاب AKI و اینکه آیا می توان از آن به عنوان یک هدف برای مداخله دارویی استفاده کرد، هنوز ناشناخته است.

در این مطالعه حاضر، ما از یک مدل AKI موش ناشی از داروی نفروتوکسیک با سیس پلاتین و مدل سلول التهابی القا شده با LPS برای بررسی اثر بهبود ISL بر آسیب و التهاب کلیه در AKI و همچنین نقش کلیدی FPR2 در التهاب کلیه استفاده کردیم. و درمان ISL AKI. این مطالعه جهت‌های جدیدی را برای درک مکانیسم آسیب التهابی و استراتژی‌های درمانی برای AKI ارائه می‌کند.

2. مواد و روشها

2.1. مواد مخدر

Isoliquiritigenin (purity>98 درصد) یک ترکیب ایزوفلاون است که از ریشه شیرین بیان استخراج می شود. فرمول مولکولی آن C15H12O4 است. در این مطالعه، isoliquiritigenin از Chengdu Bio purify Phytochemicals Ltd. (BP0787)، محلول در 10 درصد DMSO (ST038، Beyotime، چین) خریداری شد و موش های القا شده با سیس پلاتین به صورت داخل معده در دوز 7.5 میلی گرم بر کیلوگرم و / کیلوگرم به ترتیب.

2.2. جداسازی BMDM

موش های نر C57BL/6 با سن 6e8 هفته برای جداسازی سلول های BMDM انتخاب شدند. استخوان ساق پای عقب را با احتیاط از استخوان ران جدا کنید و ماهیچه های چسبیده را بردارید. استخوان ها را در PBS با هاون آسیاب کنید تا رنگ استخوان ها از قرمز به سفید تغییر کند. سپس مایع رویی را جمع آوری کرده و از طریق یک صافی 70 فیلتر کنید و سپس با دور 1500 به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید. گلبول‌های قرمز در مایع فیلتر شده با 10 - PBS شکسته شدند و سپس روی یک صافی سلولی 40 میلی‌متری فیلتر شدند. سلول های به دست آمده را در ظرف کشت 10 سانتی متری انکوبه کرده و با 30 درصد مایع رویی L929 به مدت 7 روز القا کنید. سلول های BMDM با 100 نانوگرم در میلی لیتر LPS برای ساخت مدل سلول های التهابی تحریک شدند.

2.3. کاهش و بیان بیش از حد FPR2 در BMDM

FPR2 توسط ترانسفکشن با Zeta LifeAdvanced Transfection Reagent (AD600050, Zeta life, USA) و siRNA FPR2 به BMDM کاهش یافت (توالی های FPR2 siRNA: Sense, 5'-GGAGAUGUGUAUUGUACAUTT-3'5'AAUGUACAUTT{7}}'; CAUCUCCTT{10}}'. Sangon Biotech، چین). به طور مشابه، pcDNA3.{12}}FPR2 پلاسمید (ساخته شده توسط Fenghui Biotech، چین) برای بیان بیش از حد FPR2 در سلول ها به BMDM با ZETA ترانسفکت شد.

2.4. آزمایشات روی حیوانات

تمام آزمایشات حیوانی بر اساس دستورالعمل کمیته اخلاق دانشگاه پزشکی جنوب غربی انجام شد. 32 موش نر C57BL/6 از ChengduDaShuo Animal Co., Ltd خریداری شدند که به طور تصادفی به 4 گروه تقسیم شدند: گروه شم، گروه مدل (گروه AKI القا شده با سیسپلاتین)، گروه دوز کم ISL (7.5 میلی گرم بر کیلوگرم، گروه L)، و گروه با دوز بالا (30 mg/kg، گروه H). به گروه مدل در روز اول 20 میلی گرم بر کیلوگرم سیس پلاتین (P4394، سیگما آلدریچ، ایالات متحده آمریکا) تزریق شد، در حالی که به گروه دوز پایین 7.5 میلی گرم بر کیلوگرم ISL و به گروه بالا 30 میلی گرم بر کیلوگرم ISL به مدت 3 روز تزریق شد. . پس از 3 روز، سرم و کلیه از موش های قربانی گرفته شد.

2.5. تست عملکرد کلیه

پس از جمع‌آوری سرم هر گروه از موش‌ها، دستورالعمل‌های کیت‌ها را به شدت دنبال کنید تا سطح کراتینین سرم (C011-2-1، Jiancheng Biotech، چین) و نیتروژن اوره (C013-2-1، Jiancheng Biotech، چین).

2.6. رنگ آمیزی پاتولوژیک

رنگ آمیزی H&E: موم زدایی و آبگیری مجدد بخش، رنگ آمیزی هماتوکسیلین به مدت 5 دقیقه، شستشو با آب RO، جداسازی الکل اسید هیدروکلریک 1 درصد به مدت 2 ثانیه، شستشو با آب شیر، غوطه وری در اتانول 75 درصد به مدت 2 ثانیه، 1 درصد ائوزین محلول در الکل 30 برای شستشو با آب لوله کشی، اتانول 100 درصد دهیدراته به مدت 1 دقیقه، خشک، زایلن شفاف به مدت 10 دقیقه، خشک، مهر و موم شده با محیط مونتاژ بلسان خنثی (36313ES60، یپسن، چین).

رنگ‌آمیزی PAS: برش‌ها در محلول اسید پریودیک در دمای اتاق به مدت 8/5 دقیقه قرار داده شدند و سپس دو بار با آب RO شستشو شدند. سپس این برش ها را به مدت 10 دقیقه در 20 دقیقه در معرف شیف قرار دهید، به مدت 10 دقیقه با آب لوله کشی شسته، به مدت 1e2 دقیقه در هماتوکسیلین رنگ آمیزی شده، آب شده و شفاف در الکل 100 درصد، خشک شده، با محیط مونتاژ بلسان خنثی ببندید.

2.7. ایمونوفلورسانس

بخش های بافت منجمد را در PBS قرار دهید، دو بار بشویید، با فرمالدئید 10 درصد به مدت 10 دقیقه ثابت کنید. بافت برش‌ها با سرم 5 درصد بز به مدت 30 دقیقه مسدود شد و سپس با FPR2 ضد موش اولیه (1:200، sc{8}}، سانتا کروز، ایالات متحده آمریکا) و ضد موش F4/80 انکوبه شد. آنتی‌بادی‌ها (1:200، sc-52664، سانتا کروز، ایالات متحده آمریکا) در4 - C در طول شب. روز بعد، مقاطع را دو بار با PBS شسته، با آنتی بادی ثانویه (1: 200) در دمای اتاق به مدت 1 ساعت انکوبه کرده و هسته را با DAPI رنگ آمیزی کنید. تصاویر توسط سیستم EVOS گرفته شده است.

2.8. الیزا

غلظت IL-1b، IL-6، TNF-a در سرم و مایع رویی سلولی با استفاده از کیت های ELISA (EMC001B، EMC004، EMC102A، Neobioscience، چین) مطابق دستورالعمل کیت آنالیز شد.

2.9. RealTime-PCR

RNA کل با استفاده از کیت استخراج RNA (تیانگن، چین) و طبق دستورالعمل سازنده استخراج شد. پس از رونویسی معکوس RNA استخراج شده در cDNA، اضافه کردن آن به یک سیستم واکنش 10 میلی لیتری برای انجام PCR بلادرنگ توسط سیستم Roche LightCycler 480 و سیستم واکنش به شرح زیر است: Eastep® qPCR MasterMix 2 -، 5 میلی لیتر؛ قالب cDNA، 1 میلی لیتر. پرایمر بالادست (10 میلی مولار)، 0.5 میلی لیتر؛ پرایمر پایین دست (10 میلی مولار)، 0.5 میلی لیتر؛ آب بدون هسته، 3 میلی لیتر. آغازگرهای مورد استفاده در این آزمایش توسط Sangon (شانگهای، چین) سنتز شدند و توالی تمام آغازگرها در جدول 1 آمده است.

2.10. وسترن بلات

بافر لیز RIPA برای استخراج پروتئین از بافت کلیه و سلول های BMDM استفاده شد. پس از حل کردن پروتئین در 10 درصد SDS-PAGEgel و انتقال به غشای PVDF، غشاء را در 5 درصد BSA به مدت 1 ساعت مسدود کرده و با TBST 3 بار شستشو داده و سپس غشاء را با آنتی‌بادی‌های اولیه در دمای 4 - درجه سانتیگراد یک شبه انکوبه کنید (تهیه شده). با 5 درصد BSA، 1: 1000). سپس، غشاها با آنتی بادی ثانویه (Peroxidase-conjugated Goat anti-Mouse IgG (ZB{11}}, 1:3000), Goat anti-Rabbit IgG (ZB-2301, 1:3000)) انکوبه شدند. در دمای اتاق به مدت 1 ساعت این تصاویر توسط یک سیستم تصویربرداری ژل (BIORAD، ایالات متحده آمریکا) گرفته شده است. شدت خاکستری باندها توسط نرم افزار Image J محاسبه شد.

2.11. تحلیل آماری

نتایج به صورت میانگین ± انحراف معیار نشان داده شد. تجزیه و تحلیل داده ها با آزمون ANOVA یک طرفه و سپس مقایسه چندگانه با آزمون LSD با استفاده از نرم افزار SPSS 21 انجام شد.{3}}. P < 0.05="" از="" نظر="" آماری="" معنی="" دار="" در="" نظر="" گرفته="" شد.="" هر="" گروه="" آزمایش="" 3="" بار="" تکرار="" می="">

3. نتایج

3.1. Isoliquiritigenin آسیب کلیه ناشی از سیس پلاتین را بهبود بخشید و التهاب کلیه را مهار کرد

برای بررسی اثرات محافظتی و ضد التهابی ایزولیکوئیریتیژنین در AKI، ما سطوح سرمی Cre و BUN هر گروه و همچنین بیان و ترشح سیتوکین التهابی را با روش Real-time PCR و ELISA شناسایی کردیم. علاوه بر این، آسیب شناسی کلیه با رنگ آمیزی H&E و PAS اندازه گیری شد. نتایج نشان داد که در مقایسه با گروه نرمال، سطوح سرمی Cre و BUN در مدل AKI افزایش یافته است، در حالی که درمان با mg/kg 7.5 یا mg/kg 30 ISL به طور معنی‌داری سطوح Cre و BUN سرم را کاهش داد. دوز mg/kg 30 بهترین اثر درمانی را دارد (شکل 1A و B). قابل توجه است که 30 میلی گرم بر کیلوگرم ISL می تواند آسیب توبولار کلیوی را با توجه به درصد نکروز لوله ای ارزیابی شده بهبود بخشد (شکل 1C). نتایج ELISA و PCR نشان داد که ترشح IL{10}b، IL-6 و TNF-a پس از مداخله ISL (7.5 mg/kg و 30 mg/kg) و بیان mRNA کاهش یافته است. IL{16}}b، IL{17}}، و TNF-a نیز با تجویز 30 میلی گرم بر کیلوگرم ISL (شکل 1DeI) به طور قابل ملاحظه ای کاهش یافت. از سوی دیگر، نتایج رنگ‌آمیزی H&E و PAS نشان داد که کلیه در گروه AKI آسیب شدید توبولار کلیوی، ریزش اپیتلیوم کلیه، سلول‌های مزانژیال و هیپرپلازی بینابینی مزانژیال و انفیلتراسیون سلول‌های التهابی، به طور شگفت‌آوری، 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم ISL نشان می‌دهد. می تواند به طور موثر آسیب کلیه را در AKI معکوس کند (شکل 1J). همه نتایج نشان داد که تجویز mg/kg 7.5 و mg/kg 30 ISL هم می‌تواند آسیب کلیوی ناشی از سیس پلاتین را بهبود بخشد و هم التهاب کلیه را مهار کند که در این میان mg/kg 30 ISL بهترین اثر را دارد.

3.2. Isoliquiritigenin بیان FPR2 را در ماکروفاژهای موش AKI کاهش داد

بسیاری از گزارش‌های قبلی نشان داده‌اند که FPR2 نقش حیاتی در پاسخ ایمنی و بیماری‌های مرتبط با التهاب بازی می‌کند. با این حال، اثر بالقوه FPR2 در کلیه AKI تعریف نشده است. در این مطالعه، ما ایمونوفلورسانس را برای هم‌محلی FPR2 و ماکروفاژها (F4/80، سازنده ماکروفاژها) انجام دادیم. نتایج نشان داد که ماکروفاژها (لکه‌های سبز) به شدت در کلیه موش‌های AKI نفوذ کردند، در حالی که FPR2 (لکه‌های قرمز) با F4/80 هم‌جا قرار گرفت، که نشان می‌دهد FPR2 عمدتاً بر روی ماکروفاژها بیان می‌شود و سطح FPR2 به طور معنی‌داری وجود دارد. در کلیه موش های AKI افزایش یافته است (شکل 2A). ما بیشتر بیان mRNA FPR2 و پروتئین‌های مرتبط با التهاب را با PCR بلادرنگ و وسترن بلات در کلیه تشخیص دادیم و نتایج نشان داد که 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم ISL می‌تواند به طور موثر سطح mRNA و پروتئین FPR2 را در کلیه کاهش دهد. کلیه موشهای AKI در مقایسه با mg/kg 7.5 گروه ISL (شکل 2B، G، H). نکته مهم این است که نتایج وسترن بلات نشان داد که 30 میلی‌گرم بر کیلوگرم ISL نیز از فعال‌سازی p{24}} جلوگیری می‌کند و سطح پروتئین TNF-a، IL{27}} و IL{28} را کاهش می‌دهد. }b در کلیه موشهای AKI (شکل 2CeF). همه داده‌های بالا نشان می‌دهند که التهاب کلیوی موش‌های AKI با ISL ممکن است به کاهش بیان FPR2 در ماکروفاژها مرتبط باشد.

3.3. Isoliquiritigenin بیان و ترشح FPR2 و سیتوکین های التهابی را در سلول های BMDM القا شده با LPS سرکوب کرد.

برای شناسایی بیشتر اثرات ISL بر سلول‌های BMDM القا شده با LPS، سطح mRNA FPR2، بیان و ترشح سیتوکین‌های التهابی را در سلول‌های BMDM القا شده با LPS پس از تجویز ISL توسط PCR بلادرنگ و ELISA بررسی کردیم. نتایج نشان داد که ISL سطح mRNA FPR2، IL{5}}b، IL-6، و TNF-a (شکل 3AeD) و همچنین ترشح IL{9}}b را کاهش داد. ، IL{10}} و TNF-a در مایع رویی سلولی در سلول های BMDM القا شده با LPS (شکل 3EeG). نتایج فوق نشان می دهد که درمان ISL با غلظت 40 میلی مولار به شدت التهاب را در سلول های BMDM القا شده با LPS مهار می کند.

3.4. Isoliquiritigenin سطح پروتئین FPR2 و سیتوکین های التهابی را در سلول های BMDM القا شده با LPS کاهش داد.

ما همچنین سطوح پروتئین FPR2 و سیتوکین های التهابی را در سلول های BMDM القا شده با LPS پس از تجویز ISL توسط وسترن بلات شناسایی کردیم. داده ها نشان داد که در مقایسه با گروه کنترل، سطح پروتئین FPR2، p-p65، IL{5}} و TNF-a به طور قابل توجهی در سلول های BMDM القا شده با LPS افزایش یافت و با تجویز 40 میلی مولار ISL به شدت کاهش یافت. شکل 4AeE). این نتایج بیشتر نشان داد که ISL می‌تواند فعال‌سازی NF-kB را سرکوب کند و سطح پروتئین سیتوکین‌های التهابی را در سلول‌های BMDM القا شده با LPS کاهش دهد.

3.5. مهار FPR2 التهاب ناشی از LPS را در سلول های BMDM سرکوب کرد

برای بررسی نقش FPR2 در التهاب ماکروفاژها، از siRNA برای از بین بردن FPR2 در سلول های BMDM استفاده کردیم. نتایج نشان داد که انتقال siRNA می تواند به طور قابل توجهی بیان FPR2 را در ماکروفاژهای القا شده با LPS مهار کند (شکل 5A)، و به طور موثر بیان IL{6}}b و TNF-a را کاهش دهد (شکل 5B و C). علاوه بر این، نتایج وسترن بلات ثابت کرد که پس از ترانسفکشن siRNA، سطح پروتئین FPR2 به طور قابل توجهی مهار شد، صرف نظر از اینکه آیا توسط LPS تحریک شده باشد (شکل 5D و E). قابل ذکر است، از بین بردن FPR2 به طور قابل توجهی سطوح پروتئین سایتوکاین های التهابی را کاهش داد و فعالیت سیگنال دهی NF-kB را مهار کرد (شکل 5FeK)، که نشان می دهد FPR2 نقش مهمی در ارتقاء پاسخ التهابی در ماکروفاژها ایفا می کند. همچنین، ممکن است هدف اصلی ISL برای مهار التهاب ماکروفاژها باشد.

3.6. بیان بیش از حد FPR2 اثر ضد التهابی isoliquiritigenin را در سلول های BMDM القا شده با LPS خنثی کرد.

برای تعیین اینکه ISL از طریق مهار FPR2 در ماکروفاژها التهاب را در AKI سرکوب می‌کند، از پلاسمید بیان بیش از حد FPR2 برای تنظیم کردن بیان FPR2 در سلول‌های BMDM التهابی تحت درمان با ISL استفاده کردیم. همانطور که در شکل 6 نشان داده شده است، سطح پروتئین و mRNA FPR2 در گروه pcDNA3 به طور قابل توجهی افزایش یافت.{7}} گروه ترانسفکت شده FPR2 (شکل 6A, B, G) و بیان بیش از حد FPR2 به طور موثر اثر مهاری 40 را از بین برد. mM ISL روی فعال‌سازی p65 و سطح پروتئین IL{13}}b، IL-6 و TNF-a در سلول‌های BMDM القا شده با LPS (شکل 6CeF). به طور مشابه، تنظیم بالای FPR2 اثر سرکوب‌کننده 40 میلی‌مولار ISL را بر بیان و ترشح سیتوکین‌های التهابی در سلول‌های BMDM القا شده با LPS، مانند IL{22}}b، IL{23}} و TNF-a حذف کرد. (شکل 6HeM)، نشان می دهد که ISL با مهار FPR2، التهاب را در سلول های BMDM القا شده با LPS کاهش می دهد.

4. بحث

آسیب حاد کلیه یکی از بیماری های شایع بالینی است. معمولاً در مدت کوتاهی منجر به اختلال در عملکرد سیستم ایمنی بیماران می شود. در موارد از دست دادن خون تروما، آسیب اندام، شوک، کلیه حساس‌ترین عضو است و مستعد ابتلا به آسیب حاد است. به عنوان یک هدف مداخله بالقوه برای درمان AKI. در سال های اخیر، داروهای چینی پیشرفت چشمگیری در مداخله التهاب داشته اند، از جمله کورکومین، کورستین، نارینژنین و سایر مونومرها. Iso-liquiritigenin یک ترکیب فلاونوئیدی است که دارای فعالیت های بیولوژیکی زیادی مانند اثرات ضد التهابی، ضد رادیکال های آزاد، ضد تومور و سایر اثرات است. مطالعات قبلی نشان داد که ISL آپوپتوز، التهاب و تولید ماتریکس خارج سلولی در آنژیوتانسین را مهار می کند. سلول‌های HK{8}} القا شده توسط II.22 مطالعات وو یانگ پینگ نشان داد که ISL می‌تواند IL{11}} و IL{12}} را با مهار فعالیت NF-kB در مدل پسوریازیس کاهش دهد، که نشان می‌دهد ISL ممکن است کاندیدای درمان پسوریازیس و سایر بیماری‌های التهابی خودایمنی باشد. از سوی دیگر، یک مطالعه اخیر نشان داد که ISL می‌تواند AKI سپتیک را با سرکوب انتقال NF-kB p65 و مهار پاسخ‌های التهابی کاهش دهد.24 در این مطالعه، ما دریافتند که ISL می تواند به طور موثر عملکرد کلیه را در موش های AKI القا شده با سیس پلاتین بهبود بخشد، آسیب کلیه را کاهش دهد و التهاب کلیه را مهار کند. با این حال، مکانیسم دقیق مهار التهاب ISL نامشخص است.

FPR2 متعلق به خانواده گیرنده های کموتاکتیک است و یک گیرنده جفت شده با پروتئین G 7 برابر گذرنده است. مطالعات قبلی نشان داده‌اند که FPR2 در انواع فرآیندهای فیزیولوژیکی و پاتولوژیک، از جمله پاسخ‌های دفاعی، التهاب، بیماری‌های عصبی، تومورها، اختلالات مربوط به متابولیسم گلوکز و لیپید نقش دارد. و پروستاگلاندین E2 در فرآیند التهابی که ممکن است نقش ضد التهابی و پیش التهابی ایفا کند. 27،28 اثرات مختلف FPR2 بر التهاب به محیط و لیگاندهایی بستگی دارد که مسیرهای سیگنالینگ مختلف را فعال می کنند.29 در این مطالعه، ما دریافتیم که FPR2 عمدتاً در ماکروفاژها در بینابینی کلیه بیان می‌شود و در کلیه موش‌های AKI القا شده با سیس پلاتین به شدت بیان می‌شود، که نشان می‌دهد FPR2 در ماکروفاژها ممکن است در پاسخ التهابی ماکروفاژها در کلیه AKI نقش داشته باشد. شواهد فزاینده ای تأیید می کند که تعداد زیادی از ماکروفاژها در طی چند ساعت پس از وقوع AKI به کلیه نفوذ کرده و با پاسخ به التهاب آسیب کلیه را تشدید می کنند. بنابراین، کاهش التهاب ماکروفاژهای نفوذی در کلیه AKI ممکن است یک جهت مهم برای بهبود AKI باشد، و اینکه آیا FPR2 در این فرآیند دخیل است ناشناخته است.

نتایج تجربی ما نشان داد که درمان با ISL با دوز کم و بالا در موش‌های AKI القا شده با سیس پلاتین، نه تنها می‌تواند ساختار و عملکرد کلیه را بهبود بخشد، بلکه سطح سایتوکاین‌های التهابی را نیز کاهش می‌دهد. علاوه بر این، ISL می تواند به طور موثر سطح پروتئین FPR2 و فعالیت p65 را کاهش دهد. از آنجایی که FPR2 عمدتاً در ماکروفاژها بیان می شود، نشان می دهد که ISL ممکن است با مهار FPR2 در ماکروفاژها التهاب کلیه را بهبود بخشد. به دلیل نقش مهم ماکروفاژهای نفوذ شده در التهاب کلیه، ماکروفاژهای اولیه مشتق از مغز استخوان را برای تشخیص آزمایشگاهی اثر بهبود ISL بر التهاب ماکروفاژها و مکانیسم بالقوه استخراج کردیم. نتایج ما نشان داد که ISL می تواند به طور قابل توجهی التهاب ماکروفاژهای ناشی از LPS را مهار کند و بیان و ترشح فاکتورهای التهابی IL{12}}b، IL{13}} و TNF-a را کاهش دهد. در عین حال، ISL همچنین می تواند سطح پروتئین مولکول های التهابی را در ماکروفاژها کاهش دهد و از بیان mRNA و سطوح پروتئین FPR2 تحریک شده توسط LPS جلوگیری می کند. برای تأیید نقش کلیدی مهار FPR2 در التهاب با ISL، ما از pcDNA3 استفاده کردیم.{18}}FPR2plasmid برای بیان بیش از حد FPR2 و دریافتیم که در ماکروفاژهای التهابی تحت درمان با ISL، بیان بیش از حد FPR2 اثر مهاری ISL بر التهاب را خنثی می‌کند. نشان می دهد که التهاب ماکروفاژهای تحت تنظیم ISL عمدتاً از طریق مهار FPR2 است. قابل ذکر است، ما از مدل AKI ناشی از سیس پلاتین در داخل بدن استفاده کردیم و مدل سلول التهابی القا شده با LPS را در شرایط آزمایشگاهی انتخاب کردیم. اگرچه معرف‌های القایی این دو مدل سازگار نیستند، این دو روش در حال حاضر برای ساخت مدل‌های التهاب در داخل بدن و در شرایط آزمایشگاهی شناخته شده‌اند. با توجه به اینکه این تحقیق بر پاسخ های التهابی تمرکز دارد، استفاده از این دو روش در یک مطالعه امکان پذیر است.

این داده ها ثابت کردند که ISL می تواند به طور موثر بیان عوامل التهابی را در داخل بدن و در شرایط آزمایشگاهی کاهش دهد و ممکن است با مهار بیان FPR2 به دست آید. بنابراین ISL ممکن است به عنوان یک داروی درمانی بالقوه برای AKI عمل کند.

قدردانی

این کار توسط پروژه مشترک دانشگاه پزشکی لوژو - جنوب غربی (2017LZXNYD-P01 و 2018LZXNYD-PT03)، پروژه مشترک بیمارستان پزشکی سنتی دانشگاه پزشکی جنوب غربی - پروژه مشترک بیمارستان پزشکی سنتی (2018XYLH-034)، پروژه ساخت و ساز استان سی‌بر پزشکی (2018#53)، پروژه علم و فناوری لوژو (2020-JYJ-56) و کمک مالی مشترک شهرداری لوژو - دانشگاه پزشکی جنوب غربی برای معرفی استعدادهای سطح بالا (تیم Lan Hui-Yao) ).

منابع

1. Soares DB، Mambrini JVM، Botelho GR، ​​Girundi FF، Botoni FA، Martins MAP. درمان دارویی و سایر عوامل مرتبط با ایجاد آسیب حاد کلیه در بیماران بدحال: یک مطالعه مقطعیPeerJ. 2018؛ 6: e5405. e-pub قبل از چاپ 2018/08/22.

2. Sato Y، Yanagita M. سلول های ایمنی و التهاب در پیشرفت AKI به CKD.ام جی فیزیول رن فیزیول. 2018؛ 315 (6): F1501eF1512. e-pub قبل از چاپ 2018/08/30.

3. Ram P، Mezue K، Pressman G، Rangaswami J. آسیب حاد کلیه پس از ترانس کاتتر جایگزینی دریچه آئورت.کلین کاردیول. 2017;40(12):1357e1362. e-pub قبل از چاپ 2017/12/19.

4. YH H، IJ C، YF L، YJ C، YH L، HW C. لاکتوفرین در آسیب حاد کلیه و فیبروز اولیه کلیوی اثر محافظتی از نو دارد.صنعت داروسازی. 2020;12(5):434.

5. Bonavia A, Singbartl K. مروری بر نقش سلول های ایمنی در آسیب حاد کلیه.نفرول اطفال. 2018؛ 33 (10): 1629e1639. e-pub پیش از چاپ 2017/08/13.

6. Li J، Tang Y، Tang PMK، و همکاران. مسدود کردن فاکتور مهاری مهاجرت ماکروفاژها از آسیب حاد کلیه ناشی از سیس پلاتین در موش محافظت می کند.مول آنجا. 2018؛ 26 (10): 2523e2532. e-pub قبل از چاپ 2018/08/06.

7. Ferenbach DA، Sheldrake TA، Dhaliwal K، و همکاران. کاهش ماکروفاژ/مونوسیت توسط کلودرونات، اما نه سم دیفتری، آسیب ایسکمی کلیوی/ریپرفیوژن مجدد را در موش بهبود می بخشد.کلیه های داخلی. 2012؛ 82 (8): 928e933. e-pub قبل از چاپ 2012/06/08.

8. JQ، JC، BM، و همکاران. Isoliquiritigenin با مسدود کردن بیان کانال TRPC5، آترواسکلروز را مهار می کند.درمان های قلبی عروقی. 2020;2020:1926249.

9. YG, XL, HY, LP, X C. Isoliquiritigenin از طریق فعال کردن مسیر KEAP-1/Nrf2 و مهار مسیرهای NF-kB و NLRP3 در پلورزی ناشی از کاراژینان اثرات آنتی اکسیدانی و ضد التهابی اعمال می کند.غذا& عملکرد. 2020;11(3):2522e2534.

10. LS، XY، XY، YW، Q Z. Isoliquiritigenin آپوپتوز سلول های T24 سرطان مثانه انسان را از طریق مکانیسم مستقل از کیناز وابسته به سیکلین القا می کند.نامه های انکولوژی. 2017;14(1):241e249.

11. Wang JR، Luo YH، Piao XJ، و همکاران. مکانیسم‌های زمینه‌ای آپوپتوز ناشی از isoliquiritigenin و توقف چرخه سلولی از طریق مسیرهای MAPK/STAT3/NF-kapaB با واسطه ROS در سلول‌های کارسینومای کبدی انسان.Drug DevRes. 2019; 80 (4): 461e470. e-pub قبل از چاپ 2019/01/31.

12. AH, CS, YY, et al. ارزیابی فعالیت استروژنی گونه های شیرین بیان در مقایسه با رازک مورد استفاده در گیاهان دارویی برای علائم یائسگی.PLoSیکی. 2013;8(7):e67947.

13. LL L، PM T، CJ L، و همکاران. گیرنده تشخیص الگو، Mincle، برای حفظ فنوتیپ ماکروفاژ M1 در التهاب حاد کلیه ضروری است.کلیه های داخلی. 2017;91(3):587e602.

14. Schroder N, Schaffrath A, Welter JA, et al. مهار گیرنده های پپتیدی فرمیل نتیجه را در مدل موش بیماری آلزایمر بهبود می بخشد.Jالتهاب عصبی. 2020؛ 17 (1): 131. e-pub قبل از چاپ 2020/04/26.

15. Neymeyer H، Labels R، Reverte V، و همکاران. فعال شدن سیگنال دهی انکسین A1 در فیبروبلاست های کلیوی اثرات ضد فیبروتیک دارد.Acta Physiol. 2015؛ 215 (3): 144e158. e-pub قبل از چاپ 2015/09/04.

16. FC, MP, R A. آبشارهای سیگنالینگ متمایز که توسط آگونیست های مختلف گیرنده پپتید فرمیل 2 (FPR2) ایجاد می شوند.بین المللی جی مول علمی. 2013;14(4):7193e7230.

17. HW، XP، YG، و همکاران. ترکیب مشتق شده گانودرما-A از طریق گیرنده فرمیل پپتید 2 اثر مهاری دارد.فارماکول جلو. 2020;11:337.

18. Wang Y، Cai J، Tang C، Dong Z. Mitophagy در آسیب حاد کلیه و ترمیم کلیه.سلول ها. 2020؛ 9 (2). e-pub قبل از چاپ 2020/02/07.

19. Sato Y، Takahashi M، Yanagita M. پاتوفیزیولوژی AKI به پیشرفت CKD.سمین نفرول. 2020؛ 40 (2): 206e215. e-pub قبل از چاپ 2020/04/19.

20. Ronco C، Bellomo R، Kellum JA. آسیب حاد کلیه.لانست. 2019;394(10212): 1949e1964. e-pub قبل از چاپ 2019/11/30.

21. PZ، HM J، JW Z، و همکاران. اثر محافظتی ایزولیکوئیریتیژنین در برابر آسیب مغزی در موش های سپتیک از طریق تضعیف NF-kB.که درflآموفارماکولوژی. 2019;27(4): 809e816.

22. DX، WH، ST Y، YS T. Isoliquiritigenin از طریق سرکوب سیتوکین های التهابی و آپوپتوز ناشی از استرس اکسیداتیو از طریق مسیرهای Nrf2 و NF-kB، آسیب کلیه ناشی از فشار خون بالا ناشی از Ang II را کاهش داد.بیوشیمی بیوفیزRes Coمیلی مترun. 2018;506(1):161e168.

23. YW، XC، XG، و همکاران. Isoliquiritigenin با مهار NF-kB و سیتوکین های پیش التهابی از پیشرفت علائم شبه پسوریازیس جلوگیری می کند.جی مولپزشکی(برل). 2016;94(2):195e206.