سرووارهای سالمونلا انتریکا در غیاب ژن‌های TtrA و PduA پاسخ ایمنی سلولی را در طول عفونت جوجه افزایش می‌دهند.

گونه های سالمونلا یکی از مهم‌ترین عوامل بیماری‌زای مواد غذایی است که باعث زیان‌های اقتصادی به صنعت طیور می‌شود و پیامدهایی برای سلامت عمومی نیز به همراه دارد. هم توانایی بقای پاتوژن در محیط روده در هنگام التهاب و هم ارتباط آنها با سیستم ایمنی میزبان، نقش کلیدی در طول عفونت در طیور ایفا می کند. هدف از این مطالعه تعیین کمیت حضور ماکروفاژها و جمعیت سلول‌های CD4+ /CD8+ با استفاده از روش ایمونوهیستوشیمی، در دودمان تجاری جوجه‌های آلوده تجربی به سویه‌های نوع وحشی و جهش یافته سالمونلا بود. انتریتیدیس و سالمونلا تیفی موریوم فاقد ژن‌های ttrA و pduA هستند. سالمونلا انتریتیدیس ∆ttrA∆pduA درصد بیشتری از ناحیه رنگ‌آمیزی را نسبت به نوع وحشی ایجاد کرد، به استثنای مرغ‌های سبک تخم‌گذار. سالمونلا تیفی موریوم سویه نوع وحشی و عفونت سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA منجر به الگوی مشابهی می‌شود که در dpi 1 و 14، لوزه‌های سکوم و ایلئوم پرندگان در مقایسه با 3 و 7 dpi، ناحیه رنگ‌آمیزی واضح‌تری را نشان دادند. در تمام دودمان‌های مورد مطالعه، نفوذ برجسته ماکروفاژها در مقایسه با سلول‌های CD{10}} و CD{11}} مشاهده شد. به طور کلی، حیوانات آلوده به سویه جهش یافته یک منطقه رنگ آمیزی مثبت بالاتر از نوع وحشی نشان دادند. حذف در هر دو ژن ttrA و pduA منجر به نفوذ شدیدتر ماکروفاژها و سلول‌های CD{13}} و CD{14}} در پرندگان میزبان شد که نشان‌دهنده عدم تضعیف پاتوژن، حتی در سویه‌های مختلف سالمونلا است.

فواید سیستانچ برای مردان - تقویت سیستم ایمنی

سالمونلا انتریکا یک پاتوژن غذایی است که باعث تلفات دام و همچنین تأثیر مستقیم بر سلامت عمومی می شود. سالمونلا انتریکا subsp. سرووار انتریکا انتریتیدیس (سالمونلا انتریتیدیس) و تیفی موریوم (سالمونلا تیفی موریوم) برای دهه‌ها عمدتاً با عفونت‌های غذایی مرتبط بوده‌اند. بین سال‌های 1995 و 2010، سالمونلا انتریتیدیس در 2/34 درصد از کل نمونه‌ها برای سالمونلا spp1 مثبت شناسایی شد. علاوه بر این، وینتر و همکاران 2 یک مطالعه اساسی را منتشر کردند که نقش ژن کدکننده تتراتیونات را بررسی می‌کرد و سروتیپ سالمونلا تیفی موریوم را انتخاب کرد اما از موش‌ها به عنوان مدل تجربی استفاده کرد. با در نظر گرفتن این موضوع، تعمیق دانش ما در مورد تعامل میزبان – پاتوژن می تواند به بهبود اندازه گیری کنترل و ریشه کنی کمک کند. عوامل متعددی در پاتوژنز سالمونلوز نقش دارند، مانند توانایی پاتوژن برای تکثیر در یک محیط مخاطی ملتهب، بسته به جذب مواد مغذی و تنفس بی هوازی. با این حال، در دسترس بودن مواد مغذی بقای باکتری ها را در یک محیط رقابتی که توسط میکروارگانیسم های دیگر پرجمعیت است تضمین نمی کند. بنابراین، توانایی سالمونلا انتریکا برای متابولیزه کردن تتراتیونات با استفاده از تتراتیونات ردوکتاز برای تولید 1،2-پروپاندیول به عنوان منبع انرژی، مزیت تناسب اندام را به همراه دارد. این آنزیم از TtrA، TtrB و TtrC تشکیل شده است. اولین زیرواحد ذکر شده به ابرخانواده مولیبدوپترین (MPT) تعلق دارد و دارای یک دامنه محدود کننده FeS است که در کاهش تتراتیونات به تیوسولفات (S2O{11}-)2-4 نقش دارد. Te 1،2-پروپاندیول توسط ریزمحفظه‌های باکتریایی (MCP) استفاده می‌شود. این ساختار از هفت پروتئین مختلف تشکیل شده است که در میان آنها PduA جزء اصلی ساختار MCP است. اولاً، 1،{18}}پروپاندیول به پروپیالدئید تبدیل می‌شود که به نوبه خود با فعالیت پروپاندیول دهیدراتاز به پروپانول و پروپیونات کاهش می‌یابد. این فرآیند توسط فسفوریلاسیون ATP تولید می کند، یک گرادیان الکترونی ({19}}پروپانول) برای بازسازی NAD، و یک واسطه (پروپیونیل-CoA) که می تواند به عنوان منبع کربن و انرژی در سراسر متیل سیترات از طریق، وابسته به ویتامین B12 سنتز شده استفاده شود. به صورت درون زا 6. در طول عفونت مرغ، توانایی سرووارهای سالمونلا انتریکا برای تهاجم و زنده ماندن در سلول‌های اپیتلیال روده و ماکروفاژها با فرار از پاسخ ایمنی همراه است. در این زمینه، عفونت یک مرحله حیاتی است که به تعامل بین سلول های باکتریایی و میزبان و توانایی باکتری برای غلبه بر موانع اپیتلیوم روده برای تضمین کلونیزاسیون و تکثیر آن بستگی دارد. با این وجود، پاسخ‌های التهابی و ایمنی را فعال می‌کند که منجر به اندوسیتوز و فاگوسیتوز توسط سلول‌های اپیتلیال و آنتی‌ژن ارائه‌دهنده (APCs) می‌شود. فعالیت ضد میکروبی این سلول ها باعث ایجاد یک پاسخ ذاتی از طریق ماکروفاژها می شود و مجموعه پاسخ ایمنی تطبیقی ​​متکی بر CD{26}} و CD8+ فعال سازی9 است. برای روشن کردن تعاملات میزبان و پاتوژن در پشت عفونت روده ای توسط سالمونلا در جوجه ها، ما جمعیت سلول های سیستم ایمنی را در طول کلونیزاسیون روده و عفونت سیستمیک در پرندگان از دودمان تجاری که توسط سویه های جهش یافته نوع وحشی سالمونلا انتریتیدیس و سالمونلا تیفی موریوم به چالش کشیده شده اند ارزیابی می کنیم. ، حامل حذف در ژن های مربوط به متابولیسم تتراتیونات (ttrA) و 1،2-پروپاندیول (PDU).

cistanche tubulosa - بهبود سیستم ایمنی

نتایج

آزمایش 1 - چالش سالمونلا انتریتیدیس.

نتایج کمی‌سازی حضور سلول‌های پاسخ ایمنی در لوزه‌های سکوم، سکوم، ایلئوم و کبد از جوجه‌های گوشتی، مرغ‌های تخمگذار سبک و مرغ‌های تخمگذار نیمه سنگین در جداول 1، 2 و 3 نشان داده شده است. 4+ و انفیلتراسیون سلولی ماکروفاژ از جوجه‌های گوشتی چالش‌شده با سالمونلا انتریتیدیس ∆ttrA∆pduA (SEΔttrAΔpduA) نسبت به جوجه‌های گوشتی که با سویه وحشی سالمونلا انتریتیدیس (wt-SE) یا پرندگان غیرآلوده به چالش کشیده‌اند، در تمام بافت‌های ارزیابی‌شده. یک استثنا برای انفیلتراسیون سلولی CD{9}} با dpi 3 در لوزه های سکوم، ایلئوم و کبد، و برای ارتشاح ماکروفاژها در 3 و 14 dpi در کبد از جوجه های گوشتی به چالش کشیده SEΔttrAΔpduA یافت شد. علاوه بر این، تعداد سلول‌های CD{13}} نفوذ شده به مقدار بیشتری از پرندگانی که با SEΔttrAΔpduA در 1 و 7 dpi در سکوم و کبد، dpi 3 در لوزه‌های سکوم، و 14 dpi در ایلئوم به چالش کشیده شده بودند، مشاهده شد. در مقابل، پرندگانی که دارای چالش wt-SE بودند، نفوذ بالایی از سلول‌های CD{20}} در لوزه‌های ایلئوم و سکوم را به ترتیب در dpi 1 و 7 داشتند (تب. 1؛ شکل تکمیلی S1). جدول 2 و شکل تکمیلی S2 CD{27}} و CD8+ و نفوذ ماکروفاژهای موجود در بافت های مرغ های تخمگذار نیمه سنگین را نشان می دهد. به طور کلی، تنوع زیادی بین نواحی نفوذ سلولی در مورد سویه چالش و بافت های مورد مطالعه وجود داشت. پرندگانی که با SEΔttrAΔpduA به چالش کشیده شدند، نواحی بالاتری را نشان دادند که توسط سلول‌های CD{30}} (در ایلئوم با dpi 1 و 14 و کبد با dpi 7)، و ماکروفاژها (در ایلئوم با dpi 7، و کبد در 3، 7 و 14 dpi) پوشیده شده بودند. dpi)، نسبت به همان بافت پرندگان با چالش wt-SE. از سوی دیگر، سلول‌های CD{40} در مقادیر بیشتری در لوزه‌های سکوم (در dpi 1 و 7) و سکوم (در dpi 3) پرندگانی که با سویه wt-SE به چالش کشیده شده‌اند، یافت شد. سالمونلا انتریتیدیس ∆ttrA∆pduA که در جوجه‌های گوشتی و نیمه‌سنگین تخم‌گذار متفاوت مشاهده شد، نسبت به نوع وحشی، باعث ایجاد نواحی سلولی پاسخ ایمنی کمتری نسبت به نوع وحشی، در چالش مرغ‌های تخم‌گذار سبک شد. پرندگان Wt-SE چالش شده مناطق نفوذ CD{47} بزرگتری را در لوزه های سکوم (در dpi 1 و 3)، سکوم (در 3، 7، و 14 dpi)، ایلئوم (در 1 و 7 dpi) و کبد (در dpi) نشان دادند. 14 نقطه در اینچ). به طور مشابه، چالش‌ها با SEΔttrAΔpduA منجر به کاهش نواحی نفوذ هر دو CD{56}} در لوزه‌های سکوم (در 1dpi) و ایلئوم (در 7 و 14 dpi) و ماکروفاژها در لوزه‌های سکوم و سکوم (در 3dpi) شده است. در مقایسه با پرندگان wt-SE به چالش کشیده شده است. هیچ تغییر قابل توجهی در ناحیه سلول‌های سیستم ایمنی CD{63}} و سلول‌های ماکروفاژ در کبد از پرندگان SEΔttrAΔpduA و wt-SE مشاهده نشد. نتایج دقیق چالش با مرغ های تخمگذار سبک در جدول 3 نشان داده شده است (به شکل تکمیلی S3 مراجعه کنید).

جدول 1. نمایش تفاوت معنی دار مربوط به توزیع کمی سلول های مختلف پاسخ ایمنی در اندام های جوجه های گوشتی آلوده به سالمونلا انتریتیدیس وحشی و سویه های جهش یافته در روزهای مختلف پس از آلودگی. DPI، روزهای پس از عفونت؛ ∆-SE، Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA. wt-SE، سالمونلا انتریتیدیس وحشی. ns، تفاوت قابل توجهی وجود ندارد. در داخل هر اندام و DPI، * به معنی تفاوت با ANOVA دو طرفه و سپس آزمون مقایسه بونفرونی بین مقادیر سویه‌های وحشی و جهش یافته است (*P کمتر یا مساوی 0).05؛ **P کمتر. از یا مساوی با 0.01؛ ***P کمتر یا مساوی 0.001؛ ****P کمتر یا مساوی 0.0001). سویه‌ای که در جدول (∆-SE یا wt-SE) به‌عنوان معنی‌دار در داخل اندام و DPI ارائه شده است، همان است که ناحیه نفوذ عمده به هر سلول را نشان می‌دهد.

جدول 2. نمایش تفاوت معنی داری مربوط به توزیع کمی سلول های پاسخ ایمنی مختلف در اندام های مرغ تخمگذار نیمه سنگین آلوده به سالمونلا انتریتیدیس وحشی و سویه های جهش یافته در روزهای مختلف پس از آلودگی. DPI، روزهای پس از عفونت؛ ∆-SE، Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA. wt-SE، سالمونلا انتریتیدیس وحشی. ns، تفاوت قابل توجهی وجود ندارد. در داخل هر اندام و DPI، * به معنای تفاوت با ANOVA دو طرفه و سپس آزمون مقایسه بونفرونی بین مقادیر سویه‌های وحشی و جهش یافته است (*P کمتر یا مساوی 0).{{1{12}}}}5. ؛ **P کمتر یا مساوی با 0.01؛ ***P کمتر یا مساوی 0.001؛ ****P کمتر یا مساوی 0.0001). سویه‌ای که در جدول (∆-SE یا wt-SE) به‌عنوان معنی‌دار در داخل اندام و DPI ارائه شده است، همان است که ناحیه نفوذ عمده به هر سلول را نشان می‌دهد.

جدول 3. نمایش تفاوت معنی‌دار مربوط به توزیع کمی سلول‌های پاسخ ایمنی مختلف در اندام‌های مرغ‌های تخمگذار سبک آلوده به سالمونلا انتریتیدیس و سویه‌های وحشی و جهش یافته در روزهای مختلف پس از آلودگی. DPI، روزهای پس از عفونت؛ ∆-SE، Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA. wt-SE، سالمونلا انتریتیدیس وحشی. ns، تفاوت معنی داری وجود ندارد. در داخل هر اندام و DPI، * به معنی تفاوت با ANOVA دو طرفه و سپس آزمون مقایسه بونفرونی بین مقادیر سویه‌های وحشی و جهش‌یافته (*P کمتر یا مساوی 0 است.{{1{12}}}}5). ؛ **P کمتر یا مساوی با 0.01؛ ***P کمتر یا مساوی 0.001؛ ****P کمتر یا مساوی 0.0001). سویه ارائه شده در جدول (∆-SE یا wt-SE) در اندام و DPI قابل توجه است که ناحیه اصلی نفوذ به هر سلول را نشان می دهد.

گیاه سیستانچ سیستم ایمنی را افزایش می دهد

برای مشاهده محصولات Cistanche Enhance Immunity اینجا را کلیک کنید

【بیشتر بخواهید】 ایمیل:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

آزمایش 2 - چالش سالمونلا تیفی موریوم.

نتایج کمی سازی حضور سلول های پاسخ ایمنی در لوزه های سکوم، سکوم، ایلئوم و کبد جوجه های گوشتی، مرغ های تخمگذار نیمه سنگین و مرغ های تخمگذار سبک به ترتیب در جداول 4، 5 و 6 نشان داده شده است. به طور کلی، جوجه‌های گوشتی آلوده به سویه جهش‌یافته، در هر چهار روز نمونه‌برداری، سطح مشخص شده مثبت بالاتری نسبت به سویه‌های نوع وحشی سالمونلا تیفی موریوم (wt-STM) نشان دادند. علاوه بر این، هیچ تغییری در سلول‌های پاسخ ایمنی در گروه‌های کنترل غیر آلوده مشاهده نشد. نواحی سلول CD{6}} در تمام بافت‌های جوجه‌های گوشتی با نفوذهای بزرگ‌تر برای چالش با سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA (STM∆ttrA∆pduA) به اختلاف آماری در dpi 1 رسید. تفاوت معنی داری بین سطح پاسخ ایمنی کمی از پرندگانی که STM∆ttrA∆pduA- و wt-STM به چالش کشیده شده بودند، با نفوذهای بزرگتر در زمانی که چالش با سویه جهش یافته در سکوم و ایلئوم در dpi 1 بود و کبد بود. در 14 نقطه در اینچ (CD{13}} سلول)؛ در سکوم، ایلئوم و کبد در 1 و 14 dpi (ماکروفاژها) (جدول 4؛ شکل تکمیلی S4). نتایج حاصل از پرندگان تخمگذار نیمه سنگین هیچ تفاوت آماری بین چالش‌های سویه جهش یافته و نوع وحشی برای سلول‌های CD{20}} در سکوم، و سلول‌های CD8+ در لوزه‌های سکوم و ایلئوم در تمام ۴ روز نشان نداد. پس از عفونت ارزیابی شد (جدول 5؛ شکل تکمیلی S5). با این حال، هنگامی که یک منطقه غلظت قابل توجهی از سلول های سیستم ایمنی مشاهده شد، مرغ های تخمگذار نیمه سنگین توسط STM∆ttrA∆pduA به چالش کشیده شدند: منطقه اصلی نفوذ ماکروفاژها در تمام بافت های مورد مطالعه (در 1 و 14 dpi). یک منطقه اصلی نفوذ سلول‌های CD{28}} در لوزه‌های سکوم و کبد (در 1، 7، و 14 dpi) (جدول 5؛ شکل تکمیلی S5). جدول 6 و شکل تکمیلی S6 نفوذ CD{36}}، CD8+ و ماکروفاژهای موجود در بافت های مرغ های تخمگذار سبک را نشان می دهد. پرندگانی که با STM∆ttrA∆pduA به چالش کشیده شدند، در مقایسه با سلول‌های پاسخ ایمنی، سطح سلول‌های اصلی سیستم ایمنی CD{38}} و سلول‌های ماکروفاژ را در لوزه‌های سکوم و سکوم (در dpi 14) و ایلئوم (در dpi 1 و 14) نشان دادند. ناحیه ای از بافت های مشابه از پرندگانی که با wt-STM به چالش کشیده شده اند. هیچ تفاوت آماری برای ناحیه نفوذ CD{44}} در لوزه های سکوم، سکوم و ایلئوم پرندگان چالش برانگیز یافت نشد. برخلاف نتایج به‌دست‌آمده در سایر بافت‌ها، کبد پرندگانی که با STM∆ttrA∆pduA به چالش کشیده شده‌اند، دارای ناحیه رنگ‌آمیزی واضح‌تری از سلول‌های پاسخ ایمنی برای سلول‌های CD{46}} و CD{47}} در هر چهار نقطه در اینچ است. و ماکروفاژها در 1 و 14 نقطه در اینچ.

جدول 4. نمایش تفاوت معنی دار مربوط به توزیع کمی سلول های مختلف پاسخ ایمنی در اندام های جوجه های گوشتی آلوده به سالمونلا تیفی موریوم وحشی و سویه های جهش یافته در روزهای مختلف پس از آلودگی. DPI، روزهای پس از عفونت؛ ∆-STM، سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA. wt-STM، سالمونلا تیفی موریوم از نوع وحشی. ns، تفاوت قابل توجهی وجود ندارد. در داخل هر اندام و DPI، * به معنی تفاوت با ANOVA دو طرفه و سپس آزمون مقایسه بونفرونی بین مقادیر سویه‌های وحشی و جهش یافته است (*P کمتر یا مساوی 0).05؛ **P کمتر. از یا مساوی با 0.01؛ ***P کمتر یا مساوی 0.001؛ ****P کمتر یا مساوی 0.0001). سویه ارائه شده در جدول (∆-STM یا wt-STM) به عنوان مهم در داخل اندام و DPI است که ناحیه نفوذ عمده به هر سلول را نشان می دهد.

جدول 5. نمایش تفاوت معنی دار مربوط به توزیع کمی سلول های پاسخ ایمنی مختلف در اندام های مرغ تخمگذار نیمه سنگین آلوده به سالمونلا تیفی موریوم وحشی و سویه های جهش یافته در روزهای مختلف پس از آلودگی. DPI، روزهای پس از عفونت؛ ∆-STM، سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA. wt-STM، سالمونلا تیفی موریوم از نوع وحشی. ns، تفاوت قابل توجهی وجود ندارد. در داخل هر اندام و DPI، * به معنای تفاوت با ANOVA دو طرفه و سپس آزمون مقایسه بونفرونی بین مقادیر سویه‌های وحشی و جهش یافته است (*P کمتر یا مساوی 0).{{1{12}}}}5. ؛ **P کمتر یا مساوی با 0.01؛ ***P کمتر یا مساوی 0.001؛ ****P کمتر یا مساوی 0.0001). سویه ارائه شده در جدول (∆-STM یا wt-STM) به عنوان مهم در داخل اندام و DPI است که ناحیه نفوذ عمده به هر سلول را نشان می دهد.

جدول 6. نمایش تفاوت معنی داری مربوط به توزیع کمی سلول های مختلف پاسخ ایمنی در اندام های مرغ های تخمگذار سبک آلوده به سالمونلا تیفی موریوم وحشی و سویه های جهش یافته در روزهای مختلف پس از آلودگی. DPI، روزهای پس از عفونت؛ ∆-STM، سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA. wt-STM، سالمونلا تیفی موریوم از نوع وحشی. ns، تفاوت معنی داری وجود ندارد. در داخل هر اندام و DPI، * به معنی تفاوت با ANOVA دو طرفه و سپس آزمون مقایسه بونفرونی بین مقادیر سویه‌های وحشی و جهش‌یافته (*P کمتر یا مساوی 0 است.{{1{12}}}}5). ؛ **P کمتر یا مساوی با 0.01؛ ***P کمتر یا مساوی 0.001؛ ****P کمتر یا مساوی 0.0001). سویه ارائه شده در جدول (∆-STM یا wt-STM) در اندام و DPI قابل توجه است که ناحیه اصلی نفوذ به هر سلول را نشان می دهد.

بحث

باکتری‌ها، وقتی در معرض شرایط بی‌هوازی قرار می‌گیرند، ممکن است از سوبستراهای متابولیک تتراتیونات و 1،2-پروپاندیول برای منابع انرژی و تنفس استفاده کنند. بنابراین، گونه های سالمونلا. مدت‌هاست مورد بررسی قرار گرفته است که چگونه حذف ژن‌هایی که مسئول این مسیرها هستند، بر بقای آنها در میزبان تأثیر می‌گذارد. تا جایی که ما می دانیم، تنها یک مطالعه که نقش ژن کدکننده تتراتیونات و پروپاندیول را به طور همزمان بررسی می کرد، منتشر شد. گروه تحقیقاتی ما اثرات این حذف‌ها را با ارزیابی عفونت سیستمیک و دفع مدفوع سالمونلا انتریتیدیس و سالمونلا تیفی موریوم در دودمان تجاری جوجه‌ها گزارش کردند. برای افزایش بحث در مورد این موضوع، نتایج حاضر سلول ایمنی نفوذ شده در بافت‌های مختلف دودمان جوجه‌ها را که با سویه‌های نوع وحشی و جهش‌یافته حامل حذف‌هایی در ژن‌های ttrA و pduA به چالش کشیده شده‌اند، برجسته کرد. در طی 2-آزمایش هفته‌ای، نواحی رنگ‌آمیزی مثبت سلول‌های CD4+ و CD8+ و ماکروفاژها عمدتاً از یک الگوی مشابه پیروی می‌کنند، که در آن در 1 و 14 dpi تعداد بیشتری از پاسخ ایمنی را نشان می‌دهند. سلول ها. این را می توان با تماس اولیه سیستم دفاعی میزبان در هنگام حمله پاتوژن توضیح داد. گزارش قبلی نشان داده است که در جوجه‌های آلوده، حتی زمانی که سالمونلا با dpi 12 دفع نمی‌شود، عفونت می‌تواند با استفاده از سواب کلوآکال از 13 dpi12 مثبت شود، و توضیح می‌دهد که چرا مناطق سلول‌های سیستم ایمنی در dpi 3 و 7 پایین‌تر بوده اما دوباره افزایش یافته است. . در نگاه اول، انتظار می‌رود که پاسخ برانگیخته میزبان با حذف هر دو pduA و ttrA کاهش یابد، زیرا این ژن‌ها نقش مهمی در بقای طی عفونت توسط سالمونلا 2،4،13-15 بازی می‌کنند. با این حال، نتایج ما در مقایسه یک جهش یافته دوگانه فاقد هر دو ژن، برعکس را نشان داد، سویه‌های جهش یافته سالمونلا انتریتیدیس و سالمونلا تیفی موریوم سلول‌های پاسخ ایمنی بالاتری را نسبت به انواع وحشی سویه‌ها تحریک کردند.

فواید سیستانچ توبولوزا-تقویت سیستم ایمنی بدن

کوتاه‌ترین ناحیه رنگ‌آمیزی می‌تواند منجر به تعداد زیاد کلنی‌ها در دستگاه روده شود، که مطالعه قبلی را تأیید می‌کند، که در آن سالمونلا انتریتیدیس ∆ttrA∆pduA و سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA در تعداد بیشتری از سواب‌های کلوآکال نسبت به نوع وحشی آن‌ها به دست آمدند. . سالمونلا بسته به مجموعه مواد مغذی موجود می تواند به عنوان یک باکتری خارج سلولی یا درون سلولی رفتار کند و به عنوان یک سوئیچ بین کلونیزاسیون روده و درونی شدن به سلول های میزبان رخ می دهد. هنگامی که باکتری ها توسط ماکروفاژها بلعیده می شوند و از بین می روند، برخی از قطعات پپتید به سطح سلول ارائه دهنده آنتی ژن منتقل می شوند و توسط مجتمع اصلی سازگاری بافتی (MHC)، کلاس II کدگذاری می شوند. این اتصال پپتید-MHC II لنفوسیت های T CD{3}} را تحریک می کند. با این حال، اگر باکتری تصمیم بگیرد که به سلول میزبان حمله کند و وارد سیتوپلاسم ماکروفاژ شود، اتصال پپتیدی با نوع دیگری از MHC، کلاس I، تولید لنفوسیت T CD8+ را تحریک می‌کند. جالب توجه است که سلول‌های CD4+ و CD8+ الگوی یکسانی از ماکروفاژها را در طول آزمایش نشان می‌دهند، حتی نشان‌دهنده پاسخ‌های ایمنی متفاوتی هستند. از آنجایی که سلول‌های CD{8}} و CD8+ عمدتاً نمایانگر لنفوسیت‌های T هستند که بخشی از پاسخ ایمنی تطبیقی ​​هستند، ماکروفاژها بخشی از پاسخ ایمنی ذاتی هستند. علاوه بر این، ما مشاهده کردیم که جوجه‌های گوشتی مناطق مشخص‌شده مثبت‌تری نسبت به مرغ‌های تخم‌گذار نشان می‌دهند، که توسط مطالعه قبلی تأیید شد که در آن جوجه‌های گوشتی که با سویه‌های جهش‌یافته به چالش کشیده شده بودند، برای مثال، کلونیزاسیون روده‌ای تهاجمی‌تر و عفونت سیستمیک را نشان دادند. یافته‌های ما نشان می‌دهد که رویکرد ایمونوهیستوشیمی اطلاعات جالبی در مورد رفتار سلول‌های پاسخ ایمنی بر روی اندام‌های متعدد از دودمان‌های تجاری مختلف در طول عفونت توسط سرووارهای سالمونلا انتریکا ارائه می‌دهد. علاوه بر این، مطالعه حاضر نشان می‌دهد که حذف هر دو ژن، حتی در سویه‌های مختلف سالمونلا، منجر به باکتری‌هایی می‌شود که سلول‌های پاسخ ایمنی بالاتری را در میزبان ایجاد می‌کنند و نشان می‌دهند که پاتوژن ضعیف نشده است. ما می توانیم در نظر بگیریم که شاید سالمونلا توانست مکانیسم بقای دیگری را پیدا کند که حتی بیماری زاتر می شود. استفاده از اپرون‌های ttr و pdu در هماهنگی با اپرون‌های cob و PRP در مطالعه قبلی برای تنفس بی‌هوازی ضروری نشان داده شده است. به فکر حذف کل این مجموعه، برای رسیدن به سویه های بیماری زا کمتر سالمونلا انتریکا است.

مواد و روش ها

آزمایش‌ها که طبق دستورالعمل‌ها و مقررات مربوطه انجام شد، توسط کمیته اخلاقی استفاده از حیوانات دانشگاه ایالتی سائوپائولو (CEUA/Unesp Process-006621/18؛ در 10 مه 2018) تأیید شد، در پاتولوژی پرندگان انجام شد. آزمایشگاه گروه آسیب شناسی، تریروژنولوژی، و یک سلامت از دانشکده علوم کشاورزی و دامپزشکی، دانشگاه ایالتی سائوپائولو (FCAV/ Unesp)، Jaboticabal، برزیل.

سویه های باکتریایی و ساختار جهش یافته

سویه‌های باکتریایی مورد استفاده در اینجا در یک محیط انجماد ترکیب شده توسط Lysogeny broth (LB؛ BD DifcoTM, USA) همراه با 30 درصد گلیسرول (Merck, BR-H30402394 228) و نگهداری در یک فریزر ذخیره شدند (-- 80 درجه) در آزمایشگاه پاتولوژی پرندگان از FCAV/UNESP. Salmonella Enteritidis P125109 (شماره دسترسی: AM933172) و Salmonella Typhimurium str. 9819 به مقاومت اسید نالیدیکسیک و اسپکتینومایسین (Nalr Spcr) القا شدند و آنها زمینه ژنتیکی را برای ساخت سویه های جهش یافته با تکنیک Lambda-red20 با تغییرات جزئی، که در Saraiva و همکارانش شرح داده شده است، فراهم کردند. باکتری های جهش یافته ساخته شده در اینجا بر روی متن به عنوان SEΔttrAΔpduA (Salmonella Enteritidis ∆ttrA∆pduA) و STMΔttrAΔpduA (Salmonella Typhimurium ∆ttrA∆due) شناسایی می شوند.

آزمایش in vivo.

آزمایش 1 - سالمونلا انتریتیدیس. سی و شش جوجه یکروزه 1-از هر یک از سه اصل و نسب مختلف (مرغ گوشتی، مرغ تخمگذار نیمه سنگین و مرغ تخمگذار سبک) که در مجموع یکصد و هشت حیوان بودند، از جوجه کشی های تجاری به دست آمدند. در بدو ورود، پایین جعبه‌های کارت حمل‌ونقل برای تأیید وضعیت عاری از سالمونلا در پرندگان مورد بررسی قرار گرفت و حیوانات در داخل قفس‌های فلزی داخل اتاق سازگار شده قرار گرفتند و خوراک و آب بدون آنتی‌بیوتیک دریافت کردند. یک برنامه نوری 24- ساعت در روز اول انتخاب شد تا از مصرف بهینه آب و غذا اطمینان حاصل شود، سپس یک برنامه نوری 12- ساعت در هفته اول اتخاذ شد که در روزهای باقی مانده به 8 ساعت کاهش یافت. تلقیح بر اساس Berchieri Junior و همکاران 22 تهیه شد. برای این کار، کشت‌های منجمد در LB تلقیح شدند و در طول شب در دمای 37 درجه زیر 15{15}} دور در دقیقه انکوبه شدند. در روز بعد، کشت های باکتریایی به محیط های تازه منتقل شدند و به مدت 18 ساعت در شرایط قبلی انکوبه شدند. سپس 0.2 میلی لیتر از کشت های حاوی 108 واحد تشکیل دهنده کلنی در هر میلی لیتر (CFU/mL) به صورت خوراکی با گاواژ فلزی مستقیماً به محصول پرندگان تلقیح شد. نه گروه تشکیل شد (A تا I) و به طور تصادفی بر اساس دودمان ها و سویه های مختلف تقسیم شدند (جدول 7). در یک، سه، هفت و 14-روز پس از آلودگی (dpi)، هر روز سه پرنده در هر گروه، تا صبح، با دررفتگی دهانه رحم کشته شدند تا بخش داخلی لوزه‌های سکوم، سکوم، برداشت شود. و ایلئوم، و بخش دیستال لوب چپ کبد برای تجزیه و تحلیل بیشتر ایمونوهیستوشیمی (IHC). برای این کار، نمونه‌ها در n-هگزان pa (n-Hexano pa، Synth، برزیل) که قبلاً در نیتروژن مایع سرد شده بود، غوطه‌ور شدند. بلافاصله پس از انجماد بافت، به داخل یک کرایوتوب 2 میلی لیتری (کورنینگ، ایالات متحده آمریکا) منتقل شد و در نیتروژن مایع قرار گرفت. پس از نمونه برداری، بافت ها در دمای 80- درجه نگهداری شدند تا فرآیند IHC انجام شود.

آزمایش 2 - سالمونلا تیفی موریوم. این آزمایش با همان مشخصات ذکر شده در آزمایش 1 انجام شد. سی و شش جوجه (1 روزه) بر اساس دودمان و سویه آنها به طور تصادفی به 9 گروه (A تا I) تقسیم شدند (جدول 7).

جدول 7. گروه ها با توجه به دودمان و سویه های مختلف ایجاد شد. SE∆ttrA∆pduA، سالمونلا انتریتیدیس ∆ttrA∆pduA; STM∆ttrA∆pduA، سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA; wt-SE، سالمونلا انتریتیدیس وحشی. wt-STM، سالمونلا تیفی موریوم از نوع وحشی. NC، کنترل منفی.

ایمونوهیستوشیمی.

بخش بافت. نمونه های جمع آوری شده از 80- درجه به کرایواستات (Leica CM1860، Leica Biosystems Nussloch GmbH، آلمان) در 22- درجه منتقل شدند که به صورت جداگانه در ترکیب OCT (Tissue-Tek®، Sakura Finetek Europe BV، هلند) در هر 30 دقیقه قبل مسدود شدند. به بخش 6 میکرومتر با استفاده از تیغه های یکبار مصرف کم مشخصات (Leica 819، Leica Biosystems Nussloch GmbH، آلمان). قابل ذکر است که برش ها در دمای 22- درجه انجام می شد، به جز برش های کبدی که در دمای 15- درجه انجام می شد. اسلایدهایی حاوی سه تکرار از برش دادن هر اندام به ازای هر پاسخ سلول ایمنی مشخص شده، با نازک شدن بین هر تکرار تهیه شد. با استفاده از یک قلم مو، برش های بخش بافت روی اسلایدهای بافت شناسی که از قبل با پلی-ال-لیزین (Sigma-Aldrich، انگلستان، Cat no. P4832) و سیلان (Sigma-Aldrich، USA. Cat No. 440574) تیمار شده بودند، قرار داده شد. لام ها در دمای 20- درجه پس از آن تا رنگ آمیزی IHC نگهداری شدند. رنگ آمیزی سلول های ایمنی ابتدا اسلایدها در 200 میلی لیتر استون سرد (Acetone PA-ACS, Synth, Brazil) غوطه ور شدند و در دمای 20- درجه به مدت 10 دقیقه انکوبه شدند. پس از آن، لام ها به مدت 5 دقیقه به محفظه رطوبت (EasyPath®، برزیل) در دمای اتاق منتقل شدند تا نمونه ها خشک شوند. اسلایدها پس از آن با PBS شسته شدند و یک گودال به مدت 5 دقیقه برای جلوگیری از کم آبی بافت باقی ماند. 10 بافت در 200 میلی لیتر H2O2 4 درصد در هر 10 دقیقه در مکانی تاریک غوطه ور شدند و دوباره با PBS شسته شدند. ناحیه اطراف مقاطع بافت با کاغذ جاذب خشک شد و نمونه توسط قلم آبگریز دور زد (Dako Pen, Dako Denmark A/S, Denmark). مرحله شستشوی خروج از گودال مانند قبل تکرار شد. کیت بدون بیوتین موش و خرگوش Specific HRP/DAB IHC Detection—Micropolymer (Abcam©، USA) برای رنگ آمیزی سلول های ایمنی، با انتخاب روش Avidin-Biotin Streptavidin Peroxidase Complex (ABC) استفاده شد. برای این کار، حوضچه برداشته شد و قطرات غیر اختصاصی معرف مسدود کننده رنگ پس زمینه به بافت ها اضافه شد. اسلایدها در داخل محفظه رطوبت به مدت 30 دقیقه در یک مکان تاریک نگهداری شدند، مرحله شستشو تکرار شد و 200 میکرولیتر آنتی بادی اولیه (سی دی ضد مرغ موش{32}}UNLB; سی دی ضد مرغ موش{34} } UNLB؛ موش ضد مرغ مونوسیت/ماکروفاژ-UNLB، Southern Biotech، USA) رقیق شده به نسبت 1:200 (v/v) در معرف رقیق کننده آنتی بادی (رقیق کننده آنتی بادی، Abcam©، USA) پس از آن اضافه شد. اسلایدها در دمای 4 درجه به مدت 18 ساعت انکوبه شدند. در روز بعد، لام ها مانند قبل شسته شدند. ده قطرات از آنتی بادی ثانویه (Reveal Complement، Abcam©، USA) پس از حذف PBS اضافی اضافه شد و محفظه رطوبت به مدت 30 دقیقه در یک محیط تاریک قرار گرفت. پس از آن، قطره 3،3'-دیامینوبنزیدین (DAB Chromogen 50×, Abcam©, USA) در 1 میلی لیتر بستر (DAB Substrate, Abcam©, USA) رقیق شد که حجم آن برای سه اسلاید کافی است و به آن اضافه شد. بخش های بافت یک دقیقه بعد، لام ها در 200 میلی لیتر dH2O به مدت 5 دقیقه غوطه ور شدند. پس از آن، آنها را به یک مکعب پلاستیکی حاوی هماتوکسیلین هریس (Êxodo Científca، برزیل) منتقل کردند و به مدت 1 دقیقه رها کردند. پس از آن، اسلایدها به مدت 10 دقیقه در زیر آب جاری با فشار کم شسته شدند. اسلایدها به سری الکل زایلن (70% الکل، 90% الکل، 100% الکل، زایلن I و زایلن II) ارسال شدند. در پایان، ورقه های پوششی پس از افزودن یک قطره از محیط نصب بدون آب (Entellan®، Merck، برزیل) روی لام ها قرار گرفتند. تصاویر از مقاطع بافت به طور تصادفی، انتخاب پنج میدان دید تصادفی، با استفاده از میکروسکوپ نوری (عدسی 400×) (Coleman®، مدل N{58}}) با آداپتور دوربین دیجیتال، برای تجزیه و تحلیل آماری بیشتر گرفته شد (شکل 1). ).

تحلیل داده ها.

cistanche tubulosa - بهبود سیستم ایمنی

درصد سلول‌های CD{{0}} و CD8+ و ماکروفاژها با استفاده از Image-Pro Plus v.4.5.0.29 (MediaCybernetics، ایالات متحده آمریکا) محاسبه شد. آنها به عنوان مقادیر درصد توسط نشانگر سلول ایمنی سطح مثبت / مساحت کل کمی شدند. تجزیه و تحلیل آماری و گرافیک با استفاده از نرم افزار GraphPad Prism v.8.{11}}.1 برای macOS (GraphPad Sofware, La Jolla California, USA) انجام شد و داده ها به تجزیه و تحلیل واریانس (ANOVA) و سپس مقایسه های چندگانه Bonferroni ارسال شدند. با در نظر گرفتن سطح معنی داری کمتر از 5% (P کمتر یا مساوی 0.05).

شکل 1. بخش سکوم جوجه های گوشتی آلوده به سالمونلا تیفی موریوم ∆ttrA∆pduA که واکنش های ایمنی را در ماکروفاژها نشان می دهد، 7 روز پس از آلودگی (400×؛ آویدین-بیوتین استرپتاویدین پراکسیداز، ضد رنگ آمیزی شده با هماتوکسیلین).

منابع

1. Freitas Neto، OC، Penha Filho، RC & Barrow، PA منابع سالمونلوز غیر تیفوئیدی انسانی: بررسی. براز جی پولت. علمی 12 (1)، 1-11. https://doi.org/10.1590/S1516-635X2010000100001 (2010).

2. Winter, SE et al. التهاب روده یک گیرنده الکترون تنفسی برای سالمونلا فراهم می کند. طبیعت 467، 426-429. https://doi.org/ 10.1038/nature09415 (2010).

3. Hinsley، AP & Berks، BC ویژگی مسیرهای تنفسی درگیر در کاهش ترکیبات گوگرد توسط سالمونلا انتریکا. میکروبیولوژی (ریدینگ) 148، 3631-3638. https://doi.org/10.1099/00221287-148-11-3631 (2002).

4. Tiennimitr, P. et al. التهاب روده به سالمونلا اجازه می دهد تا از اتانول آمین برای رقابت با میکروبیوتا استفاده کند. Proc. Natl. آکادمی علمی USA 108, 17480–17485. https://doi.org/10.1073/pnas.1107857108 (2011).

5. Staib، L. & Fuchs، TM تنظیم فوکوز و 1،{2}}استفاده از پروپاندیول توسط سالمونلا انتریکا سرووار تیفی موریوم. جلو. میکروبیول. 6, 1116. https://doi.org/10.3389/fmicb.2015.01116 (2015). 6. Horswill, AR & Escalante-Semerena, JC Propionate catabolism in Salmonella Typhimurium LT2: دو واحد رونویسی شده متفاوت از منبع prp در 8.5 سانتی زوم تشکیل شده است. یک اپرون را تشکیل می دهند. J. باکتریول. 179، 928-940. https://doi.org/10.1128/jb.179.3.{23}}.1997 (1997).

7. Soria, MC, Soria, MA, Bueno, DJ & Terzolo, HR مقایسه 3 روش کشت و سنجش PCR برای تشخیص Salmonella Gallinarum و Salmonella Pullorum در خوراک طیور. مرغ. علمی 92، 1505-1515. https://doi.org/10.3382/ps.{7}} (2013).

8. Van Immerseel, F. et al. دینامیک انفیلتراسیون سلول های ایمنی در لامینا پروپریا سکوم جوجه ها پس از عفونت نوزادی با سویه سالمونلا انتریتیدیس. توسعه دهنده Comp. ایمونول. 26، 355-364. https://doi.org/10.1016/s0145-305x(01)00084-2 (2002).

9. Montassier، HJ Fisiopatologia do sistema immune. در Doenças das Aves (ویرایش‌های AndreattiFilho، RL و همکاران) 467-489 (FACTA، 2020).

10. Price-Carter, M., Tingey, J., Bobik, TA & Roth, JR تتراتیونات گیرنده الکترون جایگزین از رشد بی هوازی وابسته به B12-سالمونلا انتریکا سرووار Typhimurium بر روی اتانول آمین یا 1،{4} پشتیبانی می کند. }پروپاندیول. J. باکتریول. 183، 2463-2475. https://doi.org/10.1128/JB.183.8.{12}}.2001 (2001).

11. سارایوا، ام و همکاران. رمزگشایی نقش ژن‌های ttrA و pduA برای سرووارهای سالمونلا انتریکا در مدل عفونت مرغ. پاتول پرندگان https://doi.org/10.1080/03079457.2021.1909703 (2021).

12. Beal, RK, Wigley, P., Powers, C., Barrow, PA & Smith, AL پاسخ های ایمنی سلولی و هومورال متقاطع واکنشی به سرووارهای سالمونلا انتریکا Typhimurium و Enteritidis با محافظت در برابر چالش مجدد هترولوگ همراه است. دامپزشک ایمونول. ایمونوپاتول. 114، 84-93. https://doi.org/10.1016/j.vetimm.2006.07.011 (2006).

13. Winter, SE & Bäumler, AJ شاهکاری خیره کننده: برای رقابت با میکروبیوتای روده، سالمونلا میزبان خود را برای ایجاد یک گیرنده الکترون تنفسی هدایت می کند. میکروب های روده 2، 58-60. https://doi.org/10.4161/gmic.2.1.14911 (2011).

14. ریورا چاوز، FI و همکاران. سالمونلا از تاکسی های انرژی برای بهره مندی از التهاب روده استفاده می کند. PLoS Pathog. 9, e1003267. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1003267 (2013).

15. خان، CM Te تعاملات پویا بین سالمونلا و میکروبیوتا، در طاقچه چالش برانگیز دستگاه گوارش. بین المللی Sch. Res. نه. 2014، 1-23. https://doi.org/10.1155/2014/846049 (2014).

16. Yoo, W., Kim, D., Yoon, H. & Ryu, S. Enzyme IIANtr تهاجم سالمونلا را از طریق کاتابولیسم 1,2-پروپاندیول و پروپیونات تنظیم می کند. علمی شماره 7، 44827. https://doi.org/10.1038/srep44827 (2017).

17. Salyers, AA & Whitt, DD دفاع میزبان در برابر پاتوژن های باکتریایی: دفاع از بافت و خون. در پاتوژنز باکتریایی: یک رویکرد مولکولی (ویرایش سالیرز، AA و ویت، DD) 16-29 (ASM Press، 1994).

18. Góes, V. et al. از دست دادن ژن مرحله جانبی سالمونلا هایدلبرگ نیازهای تنفسی در مدل عفونت مرغ پاتگ میکروب. 171, 105725. https://doi.org/10.1016/j.micpath.2022.105725 (2022).

19. Barrow, PA, Hassan, JO & Berchieri, A. Jr. کاهش دفع مدفوعی سویه F98 سالمونلا تیفی موریوم در جوجه های واکسینه شده با حیات و کشته شدن ارگانیسم های S. Typhimurium. اپیدمیول. آلوده کردن 104، 413-426. https://doi.org/10.1017/s{7}} (1990).

20. Datsenko, KA & Wanner, BL غیر فعال سازی یک مرحله ای ژن های کروموزومی در Escherichia coli K-12 با استفاده از محصولات PCR. Proc. Natl. آکادمی علمی USA 97, 6640–6645. https://doi.org/10.1073/pnas.1201632977 (2000).

21. Zancan، FB، Berchieri Junior، A.، Fernandes، SA & Gama، NMSQ Salmonella spp. بررسی در جعبه حمل و نقل پرندگان یک روزه براز J. Microbiol. 31، 230-232. https://doi.org/10.1590/S{7}} (2000).

22. Berchieri, A. Jr., Murphy, CK, Marston, K. & Barrow, PA مشاهدات در مورد تداوم و انتقال عمودی سرووارهای سالمونلا انتریکا Pullorum و Gallinarum در جوجه ها: اثر پس زمینه ژنتیکی باکتریایی و میزبان. پاتول پرندگان 30، 221-231. https://doi.org/10.1080/03079450120054631 (2001).