عصاره مروارید محلول با مخالفت با اندوتلین باعث روشن شدن موثر پوست می شود

مخاطب:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

جینگ وانگ MD1|Zhixiong Chen MSc2|Yaojia Lu BSc2|لیهوا ژانگ BSc3|Jiahuan Mo BSc2|Fumin Cao BSc2|Min Xie BSc3|Xinzhong Shen BSc3|آنکوان یانگ لیسانس 3

خلاصه

زمینه:بروز اختلالات رنگدانه پوست در سطح جهان رو به افزایش است. این نیاز به محصولات ایمن تر و موثرتر روشن کننده پوست و رفع کک و مک موضعی دارد. در این مطالعه ما این فرضیه را مطرح کردیم کهعصاره مروارید محلول(SPE) ممکن است دارای ترکیبات آنتاگونیست اندوتلین با پوست خوب باشدسفید کردناثرات

اهداف: (الف) تعیین اثر و مکانیسمSPEروی سلول‌های ملانوم B16 تحت درمان با ET-1-. (ب) برای بررسی اثرات سیتوتوکسیک SPE بر سلول های ملانوما B16.

مواد و روش ها:سنجش CCK{0}} برای تعیین اینکه چگونه SPE و ET-1 بر میزان تکثیر سلول‌های ملانوما تأثیر می‌گذارند، انجام شد، آزمون لیز NaOH برای تعیین کمیت محتوای ملانین انجام شد در حالی که فعالیت تیروزیناز توسط اکسیداسیون DOPA تعیین شد. تست. سطح بیان mRNA و پروتئین TYR و TRP{3}} به ترتیب با استفاده از روش qRT-PCR و روش وسترن بلات تعیین شد.

نتایج:ما آن را پیدا کردیمSPEدر غلظت‌های 0.1 و 1 ug/mL تأثیری بر تکثیر سلول‌ها ندارد و 10 نانومول در لیتر ET{4}} تکثیر سلول‌های ملانوم B16 را ترویج می‌کند. به طور قابل‌توجهی، سلول‌های ملانوم B16 تیمار شده با 10 نانومول در لیتر ET{8}} در مقایسه با سلول‌های تیمار نشده، سنتز ملانین، فعالیت تیروزیناز، سطح بیان mRNA ژن TYR و TRP{9} به‌طور قابل‌توجهی بالاتر از خود نشان دادند. قابل توجه، اثرات درمان 10 نانومول در لیتر ET{11}} با SPE به روشی وابسته به دوز لغو شد.

نتیجه گیری:SPE اندوتلین را مهار می کند و در نتیجه روشن کردن آن به طور ایمن و موثر باعث روشن شدن پوست با مخالفت با اندوتلین می شود. علاوه بر این، SPE ایمن و موثر است.

کلید واژه ها:سلول های ملانوما B16، اندوتلین-1، عصاره مروارید محلول،سفید کردن

گیاه سیستانچیک ماده سفید کننده پوست است.

1|مقدمه

در سال های اخیر پوست های جدیدتر و موثرترسفید کردنلوازم آرایشی برای استفاده خارجی به بازار عرضه شده است. این امر به توسعه اقتصادی و نیازهای تغییر سبک زندگی در بین مردم از همه نسل ها نسبت داده می شود. پوستی که در حال حاضر استفاده می شودسفید کردنعوامل شامل هیدروکینون، کوجیک اسید، فسفولیپاز D1، جفت و ویتامین A هستند. اختلالات رنگدانه پوست عمدتاً با تولید ملانین مرتبط است. از طریق فرآیندی که با تبدیل تیروزین به دوپا کاتالیز شده توسط تیروزیناز آغاز می شود، سنتز می شود. دوپا یک سری واکنش های بیوشیمیایی پیچیده را آغاز می کند که منجر به سنتز ملانین می شود. مکانیسم سفیدکننده دی هیدرو مارچوبه ایک اسید، هیدروکینون 1 و اسید کوجیک شامل مهار فعالیت تیروزیناز است که آنزیم محدود کننده سرعت در سنتز ملانین است. در این صورت، این عوامل تولید ملانین را کاهش می دهند و در نتیجه باعث سفید شدن پوست می شوند. در مقابل، فسفولیپاز D1، جفت و رتینوئیک اسید با کاهش میزان سنتز تیروزیناز عمل می کنند. علاوه بر این، آنها سمی هستند و مدت زمان بیشتری طول می کشد تا باعث سفید شدن پوست شوند.

بنابراین یافتن پوست ایمن تر و موثرتر ضروری استسفید کردنعوامل تحقیقات در مورد سفید کردن پوست به تعامل بین سیتوکین ها و ملانوسیت ها به عنوان راهی برای ایجاد عوامل موثر سفید کننده پوست پرداخته است. کراتینوسیت ها وقتی در معرض اشعه ماوراء بنفش قرار می گیرند، سیتوکین هایی مانند اندوتلین (ET) ترشح می کنند. این سیتوکین‌ها بر مهاجرت ملانوسیت‌ها، توسعه دندریتیک و تولید ملانین تأثیر می‌گذارند. 5 به این ترتیب، مخالفت با مکان‌های عمل این سیتوکین‌ها منجر به سفیدتر شدن پوست می‌شود. یانگ و همکاران (2000) دریافتند که رسوراترول غشای ملانوسیت را هدف قرار می دهد. این بدان معناست که تنها از غشای ملانوسیت و غشای ملانوزوم عبور می‌کند تا به مکان‌هایی برسد که تولید ملانین را مهار می‌کند.8 تیروزیناز در ملانوزوم قرار دارد و بنابراین، مهارکننده‌های آن باید از چهار لایه عبور کنند (لایه شاخی، اپیدرم عمیق، غشای ملانوسیت و غشای ملانوزوم) برای جلوگیری از تأثیر آن. 9 رسوراترول فقط از دو لایه (لایه شاخی و اپیدرم عمیق) فراتر می رود تا فعالیت تیروزیناز را مهار کند. 10 این امر دوره سفید شدن را کوتاه می کند.

هارلی (1993) دریافت که مرواریدهای موجود در آب شیرین اسکاتلند، استرالیا و آب دریای سریلانکا از ترکیب شیمیایی مشابه، یعنی کربنات کلسیم، 91.72 درصد، مواد آلی، 5.94 درصد، آب، 2.23 درصد و سایر مواد ساخته شده اند. 7}}.11 درصد 0.11 در جاهای دیگر، ژانگ و همکاران (2018) دریافتند که عصاره مروارید اثرات آنتی اکسیدانی قابل توجهی را در شرایط آزمایشگاهی ایجاد می‌کند. تولید ملانین. 14 این نشان داد که عصاره مروارید ممکن است دارای پوست باشدسفید کردناثرات، اما مکانیسم درگیر مطالعه نشده است. در اینجا، ما آن را فرض کردیمSPEبا اندوتلین مخالفت می کند و سنتز ملانین و فعالیت تیروزیناز سلول های ملانوما B16 را تغییر می دهد. نتایج ما نشان می‌دهد که عصاره‌های مروارید محلول با اندوتلین مخالفت می‌کنند و باعث سفید شدن پوست می‌شوند.

2|مواد و روش ها

2.1|تهیه و آنالیز ترکیبی عصاره مروارید محلول (SPE)

پودر مروارید در اسید لاکتیک حل شد و pH مخلوط با PBS روی 7 تنظیم شد. هیدرولیز آنزیمی با افزودن پروتئاز آغاز شد و عصاره با کاغذ صافی با کیفیت 10 میکرومتر فیلتر شد. مایع رویی به دست آمد و برای تهیه عصاره مروارید محلول لیوفیلیزه شد.

2.2|تجزیه و تحلیل ترکیب پودر لیوفیلیزه

به طور خلاصه، محتوای رطوبت ازSPEبا روش خشک کردن اتمسفر اندازه گیری شد. مقدار مشخصی از نمونه به مدت 3 ساعت در آون خشک کن در دمای 95-105 درجه حرارت داده شد و توزین شد. نمونه ها به طور مکرر خشک شدند تا وزن ثابتی بدست آید. میزان رطوبت به صورت اختلاف جرم قبل و بعد از حرارت دهی تعیین شد. نمونه سوزانده شد و در نتیجه ماده معدنی به نام خاکستر تشکیل شد. برای اندازه گیری کیفیت خاکستر از روش توزین سوزاندن استفاده شد که در آن تفاوت کیفیت قبل و بعد از سوزاندن به عنوان محتوای خاکستر در نظر گرفته شد. روش Kjeldahl برای تعیین محتوای پروتئین SPE استفاده شد. محتوای پپتید همانطور که قبلا توضیح داده شد تخمین زده شد. محتوای پلی ساکاریدها با استفاده از روش آنترانون-سولفوریک اسید تعیین شد.

سیستانچاستخراج کردن

2.3|کشت سلولی

سلول‌های ملانوم B16 موش (که توسط بانک سلول‌های بنیادی، آکادمی علوم چین ارائه شده است) در محیط Eagle اصلاح‌شده Dulbecco (DMEM) حاوی 10 درصد سرم جنین گاو و 1 درصد پنی‌سیلین/استرپتومایسین در انکوباتور (BB150 Thermo) کشت داده شدند. Fisher Scientific) روی 37 درجه و 5 درصد CO2 تنظیم شده است. پس از 3 روز کشت، سلول ها در حالت تقریباً ذوب شده قرار گرفتند و اساساً در سراسر ظرف پخش شدند. سلول ها با بافر فسفات سالین (PBS) شسته و با هضم با 25/0 درصد تریپسین پاساژ شدند. سلول ها با استفاده از صفحه شمارش سلولی شمارش شدند و سوسپانسیون های سلولی در غلظت های مناسب تهیه شدند. سوسپانسیون های سلولی برای آزمایش های بعدی در انکوباتور سلولی کشت داده شدند

2.4|تشخیص تکثیر سلولی پس از درمان با SPE و ET-1 با روش CCK-8

سلول های فاز رشد لگاریتمی در {{0}}صفحه چاهک با غلظت 1×104 سلول در میلی لیتر در انکوباتور تنظیم شده در دمای 37 درجه و 5 درصد CO2 به مدت 24 ساعت کشت داده شدند. . سپس غلظت‌های مختلف SPE ({{1{20}}}}، 0.01، 0.1، 1 و 10 ug/mL) به چاهک‌ها اضافه شد و به مدت 24 ساعت باقی ماند. 10 درصد از کیت شمارش سلولی (CCK{17}}) معرف (شرکت مهندسی زیستی Jian Cheng) برای اندازه‌گیری میزان تکثیر سلول‌ها به هر چاه اضافه شد. میزان جذب هر چاهک در طول موج 490 نانومتر با استفاده از میکروپلیت ریدر قرائت شد. هر گروه در سه تکرار مورد آزمایش قرار گرفت. اثر ET{19}} (0.1، 1، 10 و 100 نانومول) بر تکثیر سلولی با همان پروتکل ارزیابی شد. سپس سلول‌ها به سه گروه تقسیم شدند: گروه کنترل (درمانی انجام نشد)، گروه ET{25}} (سلول‌ها با 10 نانومول ET{27}} به مدت 24 ساعت تیمار شدند) وSPEگروه (سلول ها با 1{3}} نانومول ET-1 به مدت 24 ساعت تحت درمان قرار گرفتند و سپس با 0.1، 1 ug/mL SPE به مدت 24 ساعت تحت درمان قرار گرفتند).

سیستانچ توبولوزایک مهار کننده تیروزیناز است

2.5|تست فعالیت تیروزیناز

10 میکرولیتر سلول (با تیمارهای متفاوت) در هر چاهک یک صفحه چاهی با تراکم سلولی 104 × (5-10) در هر میلی لیتر کاشته شد و 100 میکرولیتر از محیط رشد به آن اضافه شد. هر چاه سپس سلول ها در انکوباتور در دمای 37 درجه و 5 درصد CO2 به مدت 24 ساعت از قبل کشت شدند. صفحات با سرعت 2000 چرخش در دقیقه به مدت 2 دقیقه سانتریفیوژ شدند و مایع رویی دور ریخته شد. سلول ها سه بار با PBS شسته شدند و 50 میکرولیتر محلول 1 درصد Triton X{14}} (شرکت مهندسی زیستی Jian Cheng) به هر چاهک اضافه شد. سلول ها بلافاصله در دمای 80- درجه به مدت 30 دقیقه نگهداری شدند و سپس در دمای اتاق ذوب شدند تا به پارگی کامل سلول ها دست یابند. سپس سلول ها در دمای 37 درجه به مدت 5 دقیقه از قبل گرم شده و 10 میکرولیتر محلول 1 درصد L-DOPA به آن اضافه شد. سلول ها به مدت 2 ساعت در دمای 37 درجه باقی ماندند و جذب صفحه در طول موج 490 نانومتر با استفاده از میکروپلیت ریدر اندازه گیری شد.

2.6|تست محتوای ملانین

سلول ها در {{0}}صفحه چاهک با تراکم (5-10) 104 × در هر چاهک کشت شدند. هر چاهک حاوی 2 میلی لیتر محیط رشد بود. سلول ها به مدت 24 ساعت در انکوباتور 37 درجه و 5 درصد CO2 انکوبه شدند. مایع رویی دور ریخته شد و ملانوسیت ها با 25/0 درصد تریپسین به مدت 3 دقیقه تیمار شدند. 2 میلی لیتر محیط DMEM حاوی 10 درصد FBS متعاقباً برای توقف واکنش اضافه شد. ملانوسیت‌ها در یک لوله سانتریفیوژ 15 میلی‌لیتری جمع‌آوری شدند، به مدت 5 دقیقه با سرعت 1000 چرخش در دقیقه سانتریفیوژ شدند و مایع رویی دور انداخته شد. ملانوسیت ها با PBS شسته شده و در لوله های حاوی 500 میکرولیتر محلول اتانول/اتر مخلوط شده به نسبت 1:1 قرار داده شدند و با تکان دادن به خوبی مخلوط شدند. مخلوط به مدت 30 دقیقه در دمای اتاق باقی ماند و سپس با 3000 چرخش در دقیقه به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ شد. مایع رویی دور انداخته شد و 300 میکرولیتر NaOH 1N (حاوی 10 درصد DMSO) به سلول ها اضافه شد. این مخلوط به مدت 40 دقیقه در یک حمام آب در دمای 80 درجه قرار داده شد تا ملانین کاملاً حل شود. 200 میکرولیتر از ملانین محلول سپس به یک صفحه چاهی منتقل شد و جذب در طول موج 405 نانومتر با استفاده از یک میکروپلیت خوان اندازه‌گیری شد.

2.7|تجزیه و تحلیل کمی PCR (qRT-PCR).

RNA کل از سلول های سه گروه (شاهد، ET{0}} وSPEگروه) با استفاده از کیت RNAiso Plus (TaKaRa Bio) و رونویسی معکوس به cDNA با استفاده از کیت معرف PrimeScript™ RT (TaKaRa Bio). سنجش qRT-PCR برای تشخیص بیان -اکتین در هر نمونه انجام شد. این کار با استفاده از رنگ سبز SYBR انجام شد. توالی پرایمر 16 مورد استفاده (TaKaRa Bio) در جدول 1 نشان داده شده است. شرایط PCR عبارت بودند از یک دمای دناتوراسیون اولیه در 95 درجه برای 30 ثانیه، 40 سیکل دناتوراسیون، دمای بازپخت در 95 درجه برای 5 ثانیه و 60 درجه برای 34 تنظیم شد. به ترتیب ثانیه این در یک سیستم PCR بلادرنگ StepOne به همراه (Applied Biosystems) انجام شد. نتایج qRT-PCR تجزیه و تحلیل شد و به عنوان بیان mRNA نسبی بر اساس مقادیر CT (چرخه آستانه) که بعداً به تغییرات برابری تبدیل شد، بیان شد.

2.8|تجزیه و تحلیل وسترن بلات

کل پروتئین ها از سلول ها با استفاده از روش رادیویی-ایمونوپسیتیشن (RIPA) (شرکت علم و فناوری سولاربیو، آموزشی ویبولیتین) استخراج شد. غلظت عصاره های پروتئینی با کیت سنجش اسید بیسینکونیک (BCA) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) تعیین شد. سپس پروتئین ها با الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید دودسیل سولفات سدیم (SDS-PAGE) جدا شدند و نوارهای حاصل به صورت الکتروفورزی روی یک غشای پلی وینیلیدین فلوراید (PVDF) منتقل شدند. سپس غشا با پودر شیر بدون چربی 5 درصد مسدود شد و با آنتی بادی های ضد TYR، TRP{3}} و -اکتین (سانتا کروز بیوتکنولوژی) در دمای 4 درجه به مدت 24 ساعت انکوبه شد. سپس غشا با آنتی بادی ثانویه (Goat Anti-Mouse IgG Abmart) به مدت 1 ساعت در دمای اتاق انکوبه شد. باندهای پروتئینی با استفاده از نورتابی شیمیایی افزایش یافته (ECL) (Solarbio Science & Technology Co., Ltd.) شناسایی شدند. تجزیه و تحلیل اسکن نوار با استفاده از یک سیستم تجزیه و تحلیل Image J انجام شد. اکتین به عنوان مرجع داخلی در تجزیه و تحلیل بیان پروتئین استفاده شد. نمونه ها به صورت تکرار مستقل و سه بار برای هر گروه تکرار شدند.

2.9|تحلیل آماری

تجزیه و تحلیل های آماری با استفاده از نرم افزار GraphPad prism8 انجام شد. تفاوت های گروهی با استفاده از آنالیز واریانس یک طرفه (ANOVA) مقایسه شد و نتایج به صورت میانگین ± انحراف معیار P ارائه شد.<.05 was="" considered="" statistically="">

سیستانچ برای فروش: سیستانچ یک سرم سفید کننده است

3|نتایج

3.1|تجزیه و تحلیل ترکیبی SPE

خصوصیات شیمیایی نشان داد کهSPEحاوی رطوبت 6.03 ± 0.16 درصد، محتوای خاکستر 1.55 ± {{{10}}.11 درصد، محتوای پپتید 7.52 ± {{16 }}.{18}}3 درصد، محتوای پروتئین 0.18 ± 54.12 درصد، و محتوای پلی ساکارید 0.005 ± 0.09 درصد. این نتایج نشان می دهد که پروتئین ها بیشترین فراوانی را در ماده آلی SPE داشتند.

3.2|اثر SPE بر تکثیر سلول های ملانوما B16

پس از اینکه سلول های ملانوما B16 با غلظت های مختلف (0، 0.01، 0.1، 1 و 10 میکروگرم در میلی لیتر) SPE به مدت 24 درمان شدند. ساعت، تکثیر سلولی با روش CCK{9}} ارزیابی شد (شکل 1A). ما دریافتیم که تکثیر سلول‌های ملانوما B16 تحت درمان با 0.01 میکروگرم در میلی‌لیتر SPE بیشتر از گروه خالی بود (P<.01). 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" spe="" had="" no="" effect="" on="" the="" proliferation="" of="" the="" cells.="" however,="" 10="" μg/ml="" of="" spe="" significantly="" inhibited="" the="" proliferation="" of="" b16="" melanoma="" cells="" (p=""><.01). thus,="" 0.1="" and="" 1="" μg/ml="" of="">SPEدر آزمایشات بعدی استفاده شد. بر اساس ملاحظات ایمنی، به عنوان یک جزء طبیعی ازسفید کردنلوازم آرایشی، SPE در این دو غلظت برای سلول ها سمی نیست. بنابراین، تا حدی ایمن است.

3.3|اثر ET-1 بر تکثیر سلول های ملانوما B16

سلول‌های ملانوم B16 به مدت 24 ساعت با غلظت‌های مختلف ET{1}} تحت درمان قرار گرفتند و تکثیر سلول‌ها با روش CCK{3}} ارزیابی شد. قابل‌توجه، درمان سلول‌های ملانوم B16 با 0.1، 1، و 10 نانومول در لیتر ET{9}} تکثیر را به روشی وابسته به غلظت، با 10 نانومول در لیتر ET ترویج کرد{12} } تولید بالاترین نرخ تکثیر (P<.001). by="" contrast,="" 100="" nmol/l="" of="" et-1="" decreased="" the="" proliferation="" of="" cells="" (figure="" 1b).="" therefore,="" 10="" nmol/l="" was="" used="" in="" subsequent="">

3.4|SPE فعالیت تیروزیناز را در سلول های ملانوما B16 مهار می کند

برای بررسی بیشتر مکانیسم مهاریSPEدر مورد سنتز ملانین، ما اثر آن را بر روی آنزیم محدود کننده سرعت (تیروزیناز) در فرآیند سنتز ملانین تجزیه و تحلیل کردیم. فعالیت تیروزیناز در سلول ها با روش اکسیداسیون L-dopa شناسایی شد. سلول های ملانوم B16 تیمار شده با 10 نانومول در لیتر ET{4}} فعالیت تیروزیناز درون سلولی به طور قابل توجهی در مقایسه با سلول های درمان نشده نشان دادند (0.01 < p).="" با="" این="" حال،="" فعالیت="" تیروزیناز="" در="" سلول‌هایی="" که="" با="" 0.1="" میکروگرم="" در="" میلی‌لیتر="" و="" 1="" میکروگرم="" در="" میلی‌لیتر="" spe="" تیمار="" شده="" بودند،="" کمتر="" از="" سلول‌های="" تیمار="" نشده="" بود="" (0.05="">< p،="" p=""><0.01). این="" نتایج="" نشان="" می="" دهد="" که="" spe="" فعالیت="" تیروزیناز="" را="" به="" روشی="" وابسته="" به="" غلظت="" مهار="" می="" کند="" (شکل="">

3.5|SPE سنتز ملانین را در سلول های ملانوما B16 مهار می کند

ما بیشتر آزمایش کردیم که آیا اثرات SPE بر تولید ملانین در سلول‌های ملانوم B16 توسط ET{1}} با استفاده از روش لیز NaOH انجام می‌شود یا خیر. نتایج نشان داد که محتوای ملانین در سلول‌های ملانوما B16 پس از درمان با 10 نانومول در لیتر ET نسبت به گروه کنترل به‌طور معنی‌داری افزایش یافت (P<.01). however,="" the="" melanin="" content="" in="" cells="" treated="" with="" the="" 0.1="" μg/ml="" and="" 1="" μg/ml="" of="" spe="" was="" significantly="" lower="" than="" in="" cells="" of="" the="" control="" group.="" moreover,="" the="" inhibitory="" effects="" of="">SPEدر تولید ملانین وابسته به دوز بودند. اثرات SPE بر محتوای ملانین و فعالیت تیروزیناز مشابه بود (شکل 2B). با توجه به اینکه 0.1 ug/mL و 1 ug/mL SPE تکثیر سلول های ملانوما B16 را تغییر ندادند، کاهش محتوای ملانین در این دو غلظت ممکن است از طریق مکانیسم های ناشناخته رخ دهد.

3.6|اثر SPE بر سطوح mRNA TYR و TRP-1

مکانیسمی که توسط آن SPE اثرات ET{0}} را روی سلول‌های ملانوم B16 تغییر می‌دهد، با اندازه‌گیری سطوح mRNA TYR و TRP-1 در سلول‌هایی که درمان‌های متفاوتی دریافت کردند، تعیین شد. سطوح mRNA TYR و TRP{3}} در سلول های ملانوما B16 به طور قابل توجهی بالاتر بود (P<.01 and="" p=""><.001, respectively)="" after="" treatment="" with="" 10="" nmol/l="" et-1="" compared="" to="" cells="" of="" the="" control="" group.="" interestingly,="" spe="" treatment="" effectively="" inhibited="" the="" expression="" of="" tyr="" and="" trp-1="" mrna="" (p=""><.05, p=""><.05 for="" 0.1="" μg/ml,="" and="" p="" <="" .01,="" p="" <="" .01="" for="" 1="" μg/ml,="" respectively).="" altogether,="" these="" results="" show="" that="" treatment="" with="">SPEسطوح بیان mRNA ژن TYR و TRP{0}} را به روشی وابسته به غلظت مهار کرد.

3.7|اثر SPE بر سطوح پروتئین TYR و TRP-1 در سلول های ملانوما B16

بیان پروتئین TYR و TRP{0}} در سلول های ملانوما B16 توسط وسترن بلات شناسایی شد. ما سطوح پروتئینی بالاتری از TYR و TRP{2}} در سلول‌های ملانوما B16 تحت درمان با 10 نانومول ET{5}} در مقایسه با گروه کنترل پیدا کردیم (P<.05 and="" p=""><.01, respectively).="" this="" indicated="" that="" 10="" nmol/l="" et-1="" promoted="" the="" synthesis="" of="" melanin="" in="" the="" cells.="" this="" indicates="" that="" et-1="" may="" promote="" the="" synthesis="" of="" melanin="" by="" activating="" tyr="" and="" trp-1="" signaling="" pathways.="" in="" contrast,="" cells="" (treated="" with="" 10="" nmol="" et-1="" for="" 24="" hours="" and="" then="" treated="" with="">SPEبه مدت 24 ساعت) سطح پروتئین TYR و TRP{1}} به طور قابل توجهی پایین تر بود (P<.001 and="" p=""><.001, respectively)="" than="" cells="" treated="" with="" 10="" nmol/l="" et-1.="" this="" indicated="" that="" spe="" antagonized="" the="" effect="" of="" et-1="" thereby="" inhibiting="" melanin="" synthesis="" (figure="">

4|بحث

اندوتلین (ET) یک پپتید زیست فعال طبیعی است که توسط سلول های اندوتلیال در بدن انسان سنتز می شود. این شامل سه ایزومر است: ET{{0}}، ET-2 و ET-3 که از طریق سه گیرنده ET سیگنال می‌دهند: ETA، ETB، و ETC.17 ETA و ETB گیرنده های اصلی در سیستم ET انسان بیان می شوند. 18 ET از کراتینوسیت ها هنگامی که در معرض تابش اشعه ماوراء بنفش B (UVB) قرار می گیرد آزاد می شود. هنگامی که ET به گیرنده های ملانوسیت متصل می شود، سنتز DNA را تحریک می کند و فعالیت تیروزیناز را افزایش می دهد. این باعث تکثیر سریع ملانوسیت‌ها و سنتز ملانین می‌شود. 19 ET-l تکثیر ملانوسیت، تشکیل دندریتیک، چسبندگی و مهاجرت را ترویج می‌کند. به طور قابل توجهی تکثیر سلولی را تقویت کرد. تکثیر در 10 نانومول در لیتر ET{15}} بالاترین مقدار بود که با نتایج گزارش شده توسط گنگ و همکاران (2011) مطابقت دارد، که دریافتند ET{17}} تکثیر و سنتز ملانین ملانوسیت‌های پوست آلپاکا را افزایش می‌دهد. ۲۱ ژن TYR و TRP{19}} در تولید ملانین نقش دارند. در واقع، یک مطالعه قبلی نشان داد که اثرات اندوتلین بر فعالیت تیروزیناز توسط گیرنده‌های ETA انجام می‌شود.22 10 نانومول در لیتر درمان ET-1 در سلول‌های ملانوما B16 باعث افزایش فعالیت تیروزیناز و محتوای ملانین شد. . نتایج qRT-PCR نشان داد که سطوح mRNA TYR و TRP{25}} در سلول‌های تیمار شده با 10 نانومول در لیتر ET{27}} بیشتر از گروه کنترل بود. این تایید کرد که ET{28}} تولید ملانین را ترویج می‌کند.

علاوه بر این،SPEمهار اثرات اندوتلین بر سلول های ملانوما B16. در غلظت 10 میکروگرم در میلی‌لیتر، اثرات سمی ایجاد کرد و از این رو از تکثیر سلول‌های ملانوما B16 جلوگیری کرد. با این حال، SPE تکثیر سلول ها را در غلظت های 1/1 0 و 1 میکروگرم در میلی لیتر تغییر نداد. با این حال، در غلظت {{10}}.01 میکروگرم در میلی لیتر، در مقایسه با گروه کنترل، به طور قابل توجهی تکثیر سلولی را افزایش داد. این نتایج نشان می‌دهد که SPE در غلظت‌های کمتر از 1 ug/mL بی‌خطر است. SPE تولید ملانین ET را در غلظت‌های 0.1 و 1 ug/mL به روشی وابسته به دوز مهار کرد. علاوه بر این، درمان با 0.1 و 1 ug/mL SPE منجر به کاهش سطح mRNA TYR و TRP در مقایسه با گروه کنترل شد. علاوه بر این، اثر مهاری SPE وابسته به غلظت بود. تجزیه و تحلیل وسترن بلات اثرات مشابه SPE را در هر دو غلظت (0.1 و 1 ug/mL) بر سطوح پروتئین TYR و TRP نشان داد.

در ملانوسیت‌ها، ET{0}} به گیرنده گیرنده اندوتلین نوع B (EDNRB) متصل می‌شود که منجر به فعال‌سازی فسفولیپاز C (PLC) می‌شود. این امر فسفاتیدیل دی‌فسفات (PIP2) را بیشتر هیدرولیز می‌کند و پروتئین کیناز C (PKC) را فعال می‌کند. نفوذپذیری کانال‌های یونی. 24 تغییر در نفوذپذیری منجر به فعال شدن کانال‌های Ca2 به علاوه وابسته به ولتاژ و فسفولیپاز A (PLA) می‌شود.25 در نهایت، این امر سنتز ملانین را فعال می‌کند. 8}} برای مهار تولید ملانین فقط به طور مقدماتی مورد مطالعه قرار گرفت. به این ترتیب، بیان گیرنده EDNRB و همچنین سایر جنبه های سنتز ملانین مانند PKC، PKA و KIT27 مستحق بررسی بیشتر است.

اجزای شیمیایی اصلی پودر مروارید کربنات کلسیم و پروتئین ها هستند، در حالی که سایر اجزای شیمیایی مانند پورفیرین و تورین کمتر فراوان هستند.28 عصاره آبی پودر مروارید عمدتاً حاوی پروتئین است. کراتین سخت پروتئین اصلی عصاره آب است. با این حال، عصاره آب ممکن است حاوی تعداد کمی از عناصر کمیاب نیز باشد. تحقیقات فارماکولوژیک مدرن نشان می‌دهد که مروارید می‌تواند سرعت متابولیک بدن انسان را افزایش دهد، حیات سلول‌های اپیدرمی را افزایش دهد، پیری سلول‌ها را به تاخیر بیندازد، و تولید ملانین را مهار کند. خصوصیات شیمیایی نشان داد که پروتئین ها فراوان ترین بیومولکول ها در محتوای مواد آلی SPE هستند. بنابراین ما فرض کردیم کهSPEنیز خواهد داشتسفید کردناثرات در سلول های ملانوما B16 نتایج ما این فرضیه را تایید کرد.

اینها هستندسیستانچقرص برایسفید شدن پوست. لطفا روی عکس کلیک کنید و جزئیات را دریافت کنید.

5|نتیجه گیری و چشم انداز

ET{0}} با فعال کردن مسیرهای سیگنالینگ TYR و TRP{2}} تکثیر سلول‌های ملانوما B16 و سنتز ملانین را ترویج می‌کند. SPE در غلظت‌های 0.1 و 1 ug/mL سنتز ملانین را مهار می‌کند و در نتیجه اثرات ET{6}} را بدون هیچ گونه اثرات سیتوتوکسیک بر سلول‌های ملانوم B16 متضاد می‌کند. همینطور،SPEیک آنتاگونیست بالقوه اندوتلین است که می تواند به عنوان یک عامل روشن کننده ایمن و موثر پوست استفاده شود.

منابع

1. Venditti A، Mandrone M، Serrilli M، و همکاران. دی هیدرواسپاراگوسیک اسید: فعالیت های مهاری آنتی اکسیدانی و تیروزیناز و بهبود سنتز. J Agric Food Chem. 2013؛ 61 (28): 6848-6855.

2. Jean-Paul O. خواص محافظت از نور ملانین پوست. بریت جی درماتول. 2002؛ 146 (61): 7-10.

3. Maeda K، Fukuda M. اثربخشی Invitro چندین جزء آرایشی سفید کننده در ملانوسیت های انسانی. J Soc Cosmet Chem. 1991؛ 42 (6): 361-368.

4. Sato K، Morita M، Ichikawa C، Takahashi H، Toriyama M. مکانیسم‌های رنگ‌زدایی رتینوئیک اسید و رتینول تمام ترانس روی سلول‌های ملانوما B16. J Biosci Biotech Bioch. 2014؛ 72 (10): 2589-2597.

5. Ching-Shuang W، Chia-Li Y، Chieh-Shan W، Lan Cheng-Che E، Hsin-Su Y. فرابنفش باند باریک B تکثیر و مهاجرت ملانوسیت های کشت شده را تحریک می کند. J Exp Dermatol. 2004؛ 13(12):{11}}.

6. von Koschembahr AM، Swope VB، Starner RJ، Abdel-Malek ZA. اندوتلین{2}} با فعال کردن مسیرهای سیگنال دهی JNK و p38 از ملانوسیت های انسانی در برابر آسیب DNA ناشی از UV محافظت می کند. J Exp Dermatol. 2015؛ 24 (4): 269-274.

7. Shi XM، Yan ZM، Xie JH، Zhou HF، He HX، Duan MX. تحقیقات اولیه در مورد اثر سفید کنندگی رسوراترول. لوازم آرایشی عطر J Flavor. 2011؛ ​​10 (05): 37-39.

8. یانگ ال سی، وانگ اف، لیو ام، و همکاران. اثرات ضد اندوتلین-1 Cissus assamica. China New Drugs J. 2000;12(07):455-458.

9. Serre C، Busuttil V، Botto JM. تنظیم درونی و بیرونی ملانوژنز و رنگدانه پوست انسان. Int J Cosmet Sci. 2018؛ 40 (4): 328-347.

10. Cabanes J، Chazarra S، Garcia-Carmona F. Kojic اسید، یک عامل سفیدکننده آرایشی پوست، یک مهارکننده کند اتصال دهنده فعالیت کاتکولاز تیروزیناز است. جی فارم فارماکو. 1994؛ 46 (12): 982-985.

11. Kun GF، Stevenson CH. کتاب مروارید. نیویورک: انتشارات دوور; 1993:{2}}.

12. Zhang LH، Shen YQ، Yang AQ، Mo JH، Chen ZX، Wang J. مطالعه بر روی فعالیت آنتی اکسیدانی in vitro پودر لیوفیلیزه عصاره مروارید. J Flav Frag Cosm. 2018؛ 13 (04): 26-29.

13. Yang YL، Chang CH، Huang CC، Liu HW. اثرات ضد التهابی و ضد آپوپتوز ژل عصاره مروارید بر سلول های HaCaT تابش UVB. جی بیومد ماتر. 2015؛ 26 (ضمیمه 1): S{6}}S145.

14. Yang AQ، Wang J، Zhang LH، Mo JH، Chen ZX، Shen YQ. اثر روشنایی عصاره مروارید بر روی ملانوسیت ها در شرایط آزمایشگاهی جی فارما بیوتکنول. 2016؛ 23 (2): 146-149.

15. لو دبلیو، رن جی پی، سانگ جی ام. تعیین محتوای هیدرولیز پروتئین پپتیدزین. J Food Sci. 2005؛ 12 (07): 169-171.

16. Chia-Hua L. Ov-16 [4-(3,4-dihydroxybenzoyloxymethyl)phenyl-O- -D-glucopyranoside] با تنظیم بیان ملانوژنز، سنتز ملانین را مهار می کند. ژن و پروتئین تنظیم شده J Exp Dermatol. 2011؛ ​​20(9):{13}}.

17. Yanagisawa M، Kurihara H، Kimura S، و همکاران. یک انقباض عروق قوی یا پپتید جدید که توسط سلول های اندوتلیال عروقی تولید می شود. جی طبیعت. 1988؛ 332: 411-415.

18. Hou L، Pavan WJ، Shin MK، و همکاران. سیگنالینگ سلولی مستقل و غیرخودکار سلولی از طریق گیرنده اندوتلین B در طول رشد ملانوسیت. J توسعه دهید. 2004؛ 131 (14): 3239-3247.

19. Imokawa G، Yada Y، Miyagishi M. اندوتلین های ترشح شده از کراتینوسیت های انسانی، میتوژن های ذاتی برای ملانوسیت های انسانی هستند. جی بیول شیمی. 1992؛ 267 (34): 24675-24680.

20. Tada A, Suzuki I, Im S, et al. اندوتلین-1 یک عامل رشد پاراکرین است که ملانوژنز ملانوسیت‌های انسانی را تعدیل می‌کند و در پاسخ‌های آنها به اشعه ماوراء بنفش شرکت می‌کند. رشد سلول J متفاوت است. 1998؛ 9 (7): 575-584.

21. گنگ جی جی، ژانگ جی، مو ایکس ال، و همکاران. تأثیر ET-1 بر تکثیر و سنتز ملانین ملانوسیت‌های پوست آلپاکا در شرایط آزمایشگاهی. چینی J Animal Veter Sci. 2011؛ ​​42 (07): 932-938.

22. Monji A، Inoue H، Oshima H، و همکاران. القاء و غیرفعال سازی تیروزیناز در ملانوسیت های طبیعی کشت شده انسانی توسط اندوتلین-1. J Int J Tissue React. 2005؛ 27 (2): 41-49.

23. Takeshi S، Masashi Y، Tomoh M. خصوصیات مولکولی گیرنده های اندوتلین. نکات J. 1992؛ 13 (3): 103-108.

24. جورجیا ک، علی ب، بو دی جی، سریواستاوا آ.ک. نقش تعدیلی سیستم اکسید نیتریک/cGMP در پاسخ‌های سیگنال دهی ناشی از اندوتلین در سلول‌های ماهیچه صاف عروقی. J Curr Cardiol Rev. 2010;6(4):247-254.

25. Sp H، Angela C. سیگنالینگ اندوتلین در میوسیت قلبی و ارتباط پاتوفیزیولوژیکی آن. J Curr Vasc Pharmacol. 2005؛ 3 (4): 343-351.

26. Clouthier DE, Hosoda K, Richardson JA, et al. نقایص تاج عصبی جمجمه و قلب در موش های مبتلا به کمبود گیرنده اندوتلین-A J توسعه دهید. 1998؛ 125 (5): 813-824.

27. Imokawa G, Yada Y, Kimura M, et al. مکانیسم های سیگنال دهی میتوژنز و ملانوژنز ناشی از اندوتلین در ملانوسیت های انسانی Biochem J. 1996; 314 (Pt 1): 305-312.

28. Zhang C، Xie LP، Huang J، و همکاران. یک خانواده پروتئین ماتریکس جدید که در تشکیل چارچوب لایه منشوری صدف مروارید شرکت می کند. Pinctada fucata. Biochem Bioph Res Co. 2006;344(3):735-740.

29. Wu WL، Zhang LP، Yang ZJ، و همکاران. اجزاء و فراساختار با تشکیل گلابی آن. J Mater Rep. 2011; 025(021):79-85.

30. Shao DZ، Wang CK، Wang HJ، و همکاران. چکیده: مقایسه هیدراتاسیون، مقاومت به تیروزیناز و فعال سازی آنتی اکسیدانی در سه نوع پودر مروارید. Int J Cosmet Sci. 2010؛ 32 (5): 396.