مطالعه اثرات بهبود عصاره گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی از Rouchongrong (Cistanche Deserticola) بر متابولیسم لیپید در کبد ApoE - / - موش‌های دارای رژیم غذایی پرچرب بر اساس تنظیم عبارات ACOX1 - CPT2

چکیده هدف:برای کشفاثرات عصاره فنیل اتانوئید گلیکوزیداز جانبسیستانچه deserticola(PGCD) بر متابولیسم لیپیدها در کبد موش ApoE-/- ناشی از رژیم غذایی پرچرب. روش کار: 70 موش نر ApoE-/- تغذیه شده با رژیم غذایی پرچرب به 5 گروه تقسیم شدند، گروه مدل (MOD) و موش های گروه کنترل مثبت، آتورواستاتین [20 میلی گرم / (کیلوگرم در روز)] + ازتیمیب [20 میلی گرم / (کیلوگرم) تجویز کردند. · د)] (A + E)، PGCD گروه با دوز کم، متوسط ​​و بالا داده شدPGCD[250، 500، 1000 میلی گرم / (kg·d)]؛ 14 موش نر دیگر C57BL/6J با رژیم غذایی آچو به عنوان گروه کنترل عادی (CON) قرار گرفتند. در آخر هفته دوازدهم، محتوای TG و فعالیت‌های ALT و AST در سرم و بافت کبد طبق دستورالعمل‌های عمل شناسایی شد. بافت تازه کبد همگن شده و محتویات اسید چرب سنتاز (FAS)، آسیل با زنجیره بلند - CoA دهیدروژناز (LCAD) و گلوتاتیون پراکسیداز (GSH - Px)،سوپراکسید دیسموتاز (SOD)فعالیت‌ها با روش ELISA مورد آزمایش قرار گرفتند، در همین حال، محتوای مالون دی‌آلدئید (MDA) و پراکسید لیپید (LPO) با استفاده از روش‌های کید شناسایی شد. بیان mRNA آسیل کوآنزیم A اکسیداز 1 (ACOX1) و کارنیتین پالمیتویل ترانسفراز 2 (CPT2) با آزمایش RT-PCR شناسایی شد.

برای اطلاع از 80% اینجا را کلیک کنیدگلیکوزیدهای فنیل تانوئیدیعصاره طبیعی آلی سیستانچ

خدمات حمایتی Wecistanche - بزرگترین صادرکننده سیستانچ در چین:

ایمیل:wallence.suen@wecistanche.com

واتساپ/تلفن:+86 15292862950

خرید برای جزئیات بیشتر مشخصات:

https://www.xjcistanche.com٪2fcistanche-shop

نتایج:برخلاف گروه مدل،سه دوز PGCD همه سطوح TG را کاهش داددر کبد و سرم به صورت وابسته به دوز و کاهش فعالیت ALT و AST در سرم. سه دوز PGCD همگی محتوای FAS را به صورت وابسته به دوز کاهش دادند و محتوای LCAD را در کبد به طور قابل توجهی افزایش دادند.PGCD ترویج شدفعالیت GSH - Px و SOD و محتوای MDA و LPO در کبد را به طور قابل توجهی کاهش داد. آزمایش‌های RT-PCR نشان داد که PGCD سطوح mRNA ACOX1 و CPT2 را در بافت کبد افزایش داد.

نتیجه:PGCD می تواند متابولیسم لیپید و پاسخ استرس اکسیداتیو را بهبود بخشد و با تنظیم بیان mRNA ACOX1 و CPT2، رسوب لیپید را در بافت کبد کاهش دهد.

کلید واژه ها:عصاره گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از Cistanche deserticola. ACOX1; CPT2;متابولیسم لیپید;استرس اکسیداتیو; ApoE- / - موش

بیماری کبد چرب غیر الکلی(NAFLD) یکی از شایع ترین بیماری های کبدی در جهان است که شیوع آن نزدیک به 30 درصد در جمعیت عمومی است. بیماری کبد چرب در چین با نرخ سالانه 0.594 درصد در حال رشد است [1]. بروز و توسعه NAFLD ارتباط نزدیکی با دریافت کالری بیش از حد بدن دارد. رژیم غذایی پرچرب منجر به تجمع بیش از حد چربی در کبد و القای NAFLD [2] می شود و گام اولیه در پاتوژنز آن رسوب تری گلیسرول (TG) در سلول های کبدی است [2] 3. تا به امروز، هیچ داروی درمانی خاصی وجود ندارد که پاتوژنز NAFLD را هدف قرار دهد. یافتن داروهای ایمن و موثر با مکانیسم های واضح برای پیشگیری و درمان NAFLD به یک وظیفه مهم برای محققان تبدیل شده است. Cistanche deserticola YC Ma یک گیاه انگلی از سرده Cistanche از خانواده Orobanchaceae است. جزء اصلی آن، گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید، عملکردهای تقویت کننده عملکرد ایمنی بدن، ضد پیری، ضد تشعشع، آنتی اکسیدان و محافظت از کبد و سایر اثرات دارد[{10}}]. این مطالعه قصد دارد یک مطالعه مقدماتی در مورد مکانیسمگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از Cistanche deserticola(PGCD) در بهبود متابولیسم لیپید.

1 مواد آزمایشی

1.1 داروهای آزمایشی

ساقه های گوشتی Cistanche deserticola (رطوبت 8.5%) از شرکت دارویی Hotan Dichen خریداری شد. گلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی (مواد اصلی ورباسکوزید و اکیناسید) مواد مرجع (هر دو با خلوص > 98٪) از Manster، Chengdu، Sichuan Biotechnology Co., Ltd. خریداری شدند. آتورواستاتین: فایزر شانگهای؛ Ezetimibe: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 حیوانات آزمایشی

موش نر C57BL/6J 6 تا 8 هفته و موش ApoE-/-، وزن بدن (2±20) گرم، خریداری شده از Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd.، شماره مجوز: SCXK (Su) 2016-0010 چرخه نور 12 ساعت / 12 ساعت، درجه حرارت (1 ± 22) درجه، رطوبت 50٪ تا 60٪، مصرف رایگان غذا و آب. قبل از آزمایش، موش‌ها به مدت 1 هفته با یک رژیم غذایی استاندارد تغذیه شدند تا سازگار شوند. تمام مراقبت‌ها و آزمایش‌های حیوانی از مقررات کمیته اخلاق حیوانات تجربی دانشگاه پزشکی شاندونگ (شماره اخلاق: W202107080303) پیروی می‌کند.

1.3 مجدد تجربیعوامل

خوراک پرچرب: Harlan Teklad; کیت های TG، ALT، AST: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; کیت های FAS، LCAD: شرکت بیوتکنولوژی شانگهای لانگتون، آموزشی ویبولیتین؛ کیت GSH-Px: Shanghai Jining Biotechnology Co., Ltd.; کیت های SOD، MDA، LPO، BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; کیت تریزول: Invitrogen، Carlsbad، CA. پرایمرهای ACOX1 و CPT2: طراحی شده توسط Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 ابزار آزمایشی Hei - اواپراتور روتاری متخصص VAP: آلمان

هایدولف؛ میکروپلیت خوان چند منظوره Varioskan LUX: ThermoFisher; خشک کن انجمادی خلاء FD8508: ایلشین، کره جنوبی؛ هموژنایزر F6/10: Shanghai Fluoroco; کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا Agilent1260، اسپکتروفتومتر UV Cary 3500: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT - ابزار PCR: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 توده بدن و شاخص کبد

در پایان هفته دوازدهم، موش ها ناشتا و وزن شدند. موش ها با پنتوباربیتال سدیم بیهوش و قربانی شدند. جگرها برای محاسبه شاخص کبد برداشت شدند.

2.3.2 تشخیص نشانگر سرم

سرم را بردارید و فعالیت های آسپارتات آمینوترانسفراز (AST) و آلانین آمینوترانسفراز (ALT) سرم را به ترتیب مطابق با عملکرد کیت شناسایی کنید. BCA محتوای پروتئین در سرم را تعیین می کند و محتوای TG را تشخیص می دهد.

2.3.3 تشخیص عوامل مرتبط با متابولیسم لیپید در بافت کبد

در شرایط 4 درجه، مقدار مناسبی از جگر تازه را وزن کرده و در PBS همگن کنید، سانتریفیوژ (شعاع سانتریفیوژ 7.5 سانتی‌متر، 3 000 r/min) را به مدت 1 دقیقه سانتریفیوژ کرده، مایع رویی را گرفته و محتوای پروتئین را اندازه‌گیری کنید. بافت کبد توسط BCA. محتوای TG در بافت، روش الایزا برای تشخیص محتوای اسید چرب سنتاز (FAS) و آسیل کوآ دهیدروژناز زنجیره بلند (LCAD) در بافت کبد.

2.3.4 تشخیص عوامل اکسیداتیو مربوط به بافت کبد

در شرایط 4 درجه، مقدار مناسبی از جگر تازه را وزن کرده و در PBS همگن کنید، هموژن (شعاع سانتریفیوژ 7.5 سانتی متر، 3 000 r/min) را به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ کرده، مایع رویی را گرفته و محتوای پروتئین را اندازه گیری کنید. بافت کبد با BCA واکنش‌ها را دنبال کنید دستورالعمل‌های جعبه فعالیت‌های سوپراکسید دیسموتاز (SOD) و گلوتاتیون پراکسیداز (GSH-Px) را شناسایی می‌کنند و به طور همزمان سطوح مالون دی‌آلدئید (MDA) و پراکسید لیپید (LPO) را شناسایی می‌کنند.

2. 3. 5 تشخیص RT-PCR

بیان mRNA ACOX1/CPT2 در بافت کبد: مقدار مناسبی از بافت کبد تازه مصرف کنید، از کیت Trizol برای استخراج mRNA کل بافت کبد استفاده کنید، از ترانس کریپتاز معکوس MuLV برای سنتز cDNA استفاده کنید، و از cDNA به عنوان یک الگو برای انجام کمی فلورسانس در زمان واقعی استفاده کنید. تشخیص PCR (Qpcr). شرایط واکنش عبارت بودند از: پیش دناتوراسیون در دمای 95 درجه به مدت 2 دقیقه. دناتوراسیون در 95 درجه برای 10 ثانیه، بازپخت: 60 درجه برای 30 ثانیه، گسترش در 72 درجه برای 35 ثانیه، 34 سیکل، و در نهایت گسترش در 72 درجه به مدت 5 دقیقه، و تعیین کمیت در زمان واقعی توسط یک آنالایزر خودکار. بیان mRNA ACOX1 و CPT2. نرم افزار Rotor-gene Q. برای تجزیه و تحلیل داده ها از 1.7 (Qiagen) و برای شمارش سطوح نسبی mRNA و GAPDH از روش 2-△△Ct استفاده شد. هر گروه از آزمایش ها به صورت موازی > 3 بار انجام شد. توالی پرایمر به شرح زیر است: GAPDH، بالادست: 5' - GCCACCC AGAAGACTGTG - 3'، پایین دست: 5' - ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1، بالادست: 5' -CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' پایین دست: 5' -TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2، بالادست: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' پایین دست: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 روش های آماری

برای تجزیه و تحلیل داده ها از نرم افزار آماری SPSS 20 استفاده شد. داده های اندازه گیری به صورت (x ± s) بیان شد. برای مقایسه بین گروه ها از تحلیل واریانس یک طرفه استفاده شد. P <0.05 یک تفاوت آماری معنی دار در نظر گرفته شد.