بررسی جداسازی و قابلیت ایمنی عصاره آبی پلی ساکارید از سیستانچ توبولوزا

برای اطلاعات بیشتر:ali.ma@wecistanche.com

Ailadan·Maimaitiaili1،LI Yang1،YAO Jun1،YUAN Jie2

(1. دانشکده داروسازی، دانشگاه پزشکی سین کیانگ، ارومچی 830011، چین؛ 2. کلاژ هوبو، دانشگاه پزشکی سین کیانگ، سین کیانگ کلامایی 834000، چین)

چکیده هدف:برای جداسازی عصاره آب ازپلی ساکاریدهای Cistanche tubulosaو برای بررسی صلاحیت ایمنی آنها در شرایط آزمایشگاهی. روش‌ها: رزین جذب ماکرو متخلخل AB{{{3{3{42}}}}} برای رنگ‌زدایی پلی‌ساکارید C. tubulosa استفاده شد. فرآیند رنگ‌زدایی با آزمون متعامد با نرخ ماندگاری و نرخ رنگ‌زدایی پلی‌ساکارید به‌عنوان نمره جامع و با استفاده از نرخ جذب، زمان رنگ‌زدایی، غلظت نمونه به‌عنوان عوامل بهینه‌سازی شد. تست های تایید انجام شد. ستون تبادل یونی DEAE{1}M برای جداسازی عصاره آبی پلی ساکارید C. tubulosa بی رنگ شده استفاده شد. از روش CCK{2}} برای شناسایی اثرات غلظت‌های مختلف پلی‌ساکارید (6.{4}} ug/mL) قبل و بعد از جداسازی بر روی نرخ تکثیر RAW264.7 ماکروفاژ موش استفاده شد. روش گریس و روش الایزا برای تشخیص اثرات غلظت کم، متوسط ​​و زیاد پلی ساکارید (12.5،25،50 ug/mL) بر آزادسازی NO، IL-6 و TNF- اتخاذ شد. در سلول های RAW264.7 القا شده با LPS. نتایج: در فرآیند رنگ‌زدایی بهینه رزین جذب ماکرو متخلخل AB، سرعت جریان جذب 1.2 BV/h، زمان رنگ‌زدایی 9 ساعت و غلظت نمونه 25 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر بود. نمرات جامع 3 بار آزمون‌های راستی‌آزمایی به ترتیب 63.43٪، 63.29٪ و 63.34٪ با میانگین 63.35٪ (RSD＝0.11٪، n＝3) بود. یک پلی ساکارید خنثی (CTZ) و 5 پلی ساکارید اسید (CT1، CT2، CT3، CT4، CT5) از پلی ساکارید C. cistanche جدا شد، محتویات آن 299.2،168 بود. 11.2 میلی گرم در گرم. در مقایسه با گروه کنترل، 6.{52}} میکروگرم در میلی لیتر CTZ (به جز 6.25 میکروگرم در میلی لیتر)، CT2، CT4، CT5 و 6.25 میکروگرم در میلی لیتر CTC (پلی ساکارید قبل از جداسازی) می تواند به طور قابل توجهی نرخ تکثیر را افزایش دهد. از سلول‌های RAW264.7 (P＜{{80}}.05)، در حالی که 6.25-100 ug/mL CT1، CT3 و 50 ug/mL CTC می‌تواند نرخ تکثیر RAW264 را کاهش دهد. 7 سلول (P＜0.05). در مقایسه با گروه LPS، آزادسازی NO به طور قابل توجهی در گروه‌های غلظت کم، متوسط ​​و بالا CTC، CT2، CT3 و CT5، CTZ در گروه غلظت کم کاهش یافت (05/0P~)، در حالی که در گروه‌های غلظت بالا CT1 افزایش معنی‌داری داشت. و CT4 (P＜0.05）). انتشار IL{82}} (به استثنای گروه غلظت بالا CT1 و گروه غلظت کم CT5) و TNF- (به جز گروه غلظت متوسط ​​CT1) در گروه های غلظت کم، متوسط ​​و بالا به طور قابل توجهی کاهش یافت (05/0 تا P ）. نتیجه‌گیری: فناوری رنگ‌زدایی بهینه رزین جذب ماکرو متخلخل در مطالعه پایدار و امکان‌پذیر است. یک پلی ساکارید خنثی و 5 پلی ساکارید اسیدی را می توان از عصاره آب پلی ساکاریدهای C. tubulosa جدا کرد که در میان آنها پلی ساکارید CT2 دارای توانایی ضد التهابی قوی تری است.

کلید واژه ها:پلی ساکارید Cistanche tubulosa; رنگ زدایی؛ جداسازی؛ صلاحیت ایمنی

Cistanche tubulosaساقه ای خشک و گوشتی با برگ های فلس استCistanche tubulosa (Schenk) Wightاز خانواده Lidanaceae. مطالعات مدرن نشان داده است که سیستانچ توبولا حاوی گلیکوزیدهای فنتیل الکل، گلیکوزیدهای ایریدوئید، لیگنان ها، پلی ساکاریدها، آلکالوئیدها و سایر مواد فعال بیولوژیکی است که دارای خواص تقویت کننده جنسی، ملین، محافظ کبد و ضد پیری هستند. ضد خستگی تقویت‌کننده ایمنی و اثرات نوتروپیک [1-4] می‌تواند برای درمان بالینی کمبود یانگ کلیه، کمبود اسانس و خون، ناتوانی جنسی و ناباروری، ضعف کمر و زانو، ضعف عضلات و استخوان ها، روده های خشک و یبوست [5].

برای محصولات Cistanche herba کلیک کنید

عصاره آب ازپلی ساکارید سیستانچ توبولوزازرد مایل به قهوه ای است. آزمایش قبلی گروه تحقیقاتی ما نشان داد که علاوه برCistanche tubulosa پلی ساکاریدعصاره آب حاوی اجزای غیر هدف مانند رنگدانه ها و پروتئین های محلول در آب نیز می باشد. این به جداسازی و خالص سازی پلی ساکاریدها کمک می کند. تحقیقات فعالیت های بیولوژیکی مشکلات زیادی را ایجاد کرده است. درمان سنتی رنگ‌زدایی با حلال‌های آلی، ساختار شیمیایی جزء هدف در عصاره خام را از بین می‌برد و فعالیت دارویی فرد را کاهش می‌دهد و مواد مضر را به بدن انسان وارد می‌کند [6]. رزین جذب ماکرو متخلخل یک ماده رایج برای رنگ زدایی پلی ساکاریدها در عصاره های طب چینی است. این یک ماده جذب پلیمری مقرون به صرفه با خواص فیزیکی و شیمیایی پایدار است. می توان آن را با جذب انتخابی و عملکرد الک برای اجزای رنگدانه هدف قرار داد. برای حذف رنگدانه های موجود در عصاره های طب سنتی چینی، علاوه بر این، می توان آن را با ترشی و شستشوی قلیایی احیا کرد، به همین دلیل از آن بسیار استفاده می شود [7]. این مطالعه قصد دارد از رزین جذب ماکرو متخلخل برای رنگ‌زدایی عصاره آبی پلی‌ساکارید Cistanche Tubula استفاده کند و از آزمایش متعامد برای بهینه‌سازی شرایط رنگ‌زدایی استفاده کند. پس از رنگ‌زدایی عصاره، با توجه به ماهیت متفاوت گروه حمل شده توسط پلی‌ساکارید، برنامه‌ریزی شده است تا از روش کروماتوگرافی ستونی تبادل یونی برای جداسازی اجزای پلی ساکارید خنثی و اسیدی در پلی‌ساکارید استفاده شود.Cistanche tubulosa.

مطالعات نشان داده است کهگیاه سیستانچپلی ساکاریدها دارای اثرات تعدیل کننده ایمنی هستند و تعدیل کننده های ایمنی طبیعی هستند که می توانند سیستم کمپلمان و سلول های ایمنی مانند لنفوسیت های T/B، ماکروفاژها، سلول های کشنده طبیعی (NK) را فعال کنند و همچنین می توانند باعث آزاد شدن انواع سیتوکین ها و تولید آنتی بادی ها شوند. و غیره [8-11]. لیپوپلی ساکارید (LPS) می تواند مسیر سیگنال التهابی ماکروفاژها را فعال کند، اکسید نیتریک (NO) و سیتوکین های پیش التهابی مانند اینترلوکین 6 (IL{3}}) و فاکتور نکروز تومور آلفا (TNF-) را القا کند. سنتز و آزادسازی، در نتیجه باعث ایجاد یک سری واکنش های التهابی در بدن می شود [12]. این مطالعه قصد دارد یک مدل التهاب ماکروفاژ موش RAW264.7 القا شده با LPS را ایجاد کند که از اثرات پلی ساکارید Cistanche Tubula بر تکثیر ماکروفاژها، ترشح فاکتور التهابی و تولید NO و ارزیابی اولیه اثر آن بر فعالیت ایمنی بدن شروع می‌شود. هدف آن ارائه یک مبنای نظری برای مطالعه عمیق اساس ماده فعال ضد التهابی استCistanche tubulosaپلی ساکارید و توسعه منابع پلی ساکارید آن

مطالعات اولیه نشان داده است که هنگامی که پلی ساکاریدهای موجود در سیستانچ سیستانچ با آب استخراج می شوند، مواد محلول در آب بیشتری با هم حل می شوند که بر خلوص سیستانچ تأثیر می گذارد.سیستانچ پلی ساکاریدهای سیستانچ. بنابراین، جداسازی و خالص سازی بیشتر آنها می تواند پایه و اساس مطالعه پایه مواد پلی ساکارید و فعالیت بیولوژیکی را ایجاد کند. روش رزین جذب ماکرو متخلخل یک روش رایج رنگ زدایی است [17-19]. از آنجایی که هنوز در مورد ترکیب رنگدانه در آن نامشخص استCistanche tubulosaبنابراین، گروه تحقیقاتی از آزمایش‌های جذب استاتیک برای غربالگری مناسب‌ترین رزین جذب ماکرو متخلخل AB-8 از رزین‌های جذب ماکرو متخلخل با قطبیت‌های مختلف استفاده کردند. پلی ساکارید Cistanche deserticola توانایی نگهداری خوبی دارد. به منظور دستیابی به اثر رنگ‌زدایی بهتر، این تحقیق بر اساس تحقیقات قبلی انجام شده و از آزمایش‌های متعامد برای تعیین فرآیند رنگ‌زدایی (شستشو، سرعت جریان دفع، زمان رنگ‌زدایی و غلظت جرم نمونه) بهینه‌سازی شده است. در نتیجه، روش رنگ‌زدایی بهینه برای پلی‌ساکارید Cistanche tubulosa، نرخ جریان شستشو 1.2 BV/h، زمان رنگ‌زدایی 9 ساعت و غلظت جرم نمونه 25 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر بود. نتایج آزمایش تأیید نشان می دهد که روش رنگ زدایی امکان پذیر است.

خلوص و نوع پلی ساکاریدهای طبیعی عوامل مهمی هستند که بر فعالیت آن تأثیر می گذارند. بنابراین، تحقیقات مربوطه در مورد روش‌های جداسازی و خالص‌سازی پلی‌ساکاریدها همچنان در کانون کار تحقیقاتی پلی‌ساکاریدهای فعال طبیعی است. روش های متداول مورد استفاده برای جداسازی پلی ساکاریدها شامل رسوب، کروماتوگرافی ژل، کروماتوگرافی تبادل آنیونی، کروماتوگرافی ستون رزین ماکرو متخلخل و اولترافیلتراسیون است [20]. به دلیل ترکیبات مختلف مونوساکاریدها، پلی ساکاریدها دارای خواص بارگیری متفاوتی هستند. آنها را می توان به پلی ساکاریدهای خنثی و پلی ساکاریدهای اسیدی تقسیم کرد. پلی ساکاریدهای خنثی پلیمرهایی هستند که از دو یا چند مونومر مختلف بر پایه قند تشکیل شده اند که حاوی اسیدهای آلی نیستند. پلی ساکاریدهای اسیدی از نظر ترکیب و ساختار پیچیده تر از پلی ساکاریدهای خنثی هستند، به جز اینکه حاوی بیش از دو مونومر بر پایه قند هستند. ، همچنین حاوی اسید اورونیک مونو بادی [21] است. کروماتوگرافی ستونی تبادل آنیونی از تفاوت بار پلی ساکاریدها برای جداسازی پلی ساکاریدهای خنثی از پلی ساکاریدهای اسیدی استفاده می کند [22]. به همین دلیل، این مطالعه از ستون کروماتوگرافی ستون تبادل یونی DEAE{5}M برای جداسازی پلی ساکاریدهای سیستانش توبولا استفاده کرد و در مجموع 1 پلی ساکارید خنثی و 5 پلی ساکارید اسیدی جدا شد. ماکروفاژها سلول‌های دارای قابلیت ایمنی هستند که می‌توانند ایمنی را با بلعیدن و از بین بردن میکروارگانیسم‌های بیماری‌زا تنظیم کنند. مطالعات نشان داده است که هنگامی که بدن انسان توسط آسیب پاتولوژیک یا مکانیکی تحریک می شود، مداخله دارویی می تواند ماکروفاژها را فعال کند تا ظرفیت فاگوسیتی ماکروفاژها ناشی از LPS را افزایش دهد و در نتیجه تولید NO و یک سری سلول های التهابی مانند IL را مهار کند. 9}} و ترشح فاکتور TNF، در نتیجه میزبان را از عوامل بیماری زا محافظت می کند [23]. برای این منظور، این مطالعه اثرات پلی ساکاریدهای مختلف Cistanche tubulosa را بر روی نرخ تکثیر سلول‌های RAW264.7 و همچنین اثرات بر روی ماکروفاژهای القا شده با LPS برای آزادسازی NO، IL{15}} و TNF- را آزمایش کرد. در نتیجه، در محدوده غلظت جرمی 12.5، 25، و 50 ug/mL، نه تنها تکثیر سلول‌های RAW264.7 را تقویت کرد، بلکه به طور قابل‌توجهی از تکثیر سلول‌های RAW264.7 نیز جلوگیری کرد.

راپلی ساکارید Cistanche tubulosaدر سلول های RAW264.7 القا شده توسط LPS برای آزادسازی NO، IL{2}} و TNF- CT2 هستند. مطالعات مربوطه نشان داده است که ترکیب مونوساکارید و وزن مولکولی پلی ساکاریدها بر آن تأثیر می گذارد.تعدیل کننده ایمنیفعالیت. مونوساکاریدهایی مانند گالاکتوز، آرابینوز، مانوز و گلوکز با فعالیت ایمنی پلی ساکاریدها همبستگی مثبت دارند [24]. پلی ساکاریدها با وزن مولکولی بزرگتر ممکن است حاوی ساختار گره های چندگانه بسیار تکرار شونده بالاتری باشند، می توانند گیرنده های سطح غشای پلاسما را به صورت چند جهتی و به طور خاص متصل کنند.تقویت سیستم ایمنیاثر [25]. بنابراین، ترکیب مونوساکارید پلی ساکارید اسیدی CT2 در این مطالعه ممکن است حاوی مونوساکاریدهای خاص یا مونوساکاریدهای متعددی باشد که به طور مثبت با فعالیت ایمنی مرتبط هستند و وزن مولکولی آن ممکن است بزرگتر از پلی ساکاریدهای خنثی و سایر پلی ساکاریدهای اسیدی باشد، اما تحقیقات بیشتری برای تأیید لازم است. . به طور خلاصه، فرآیند رنگ‌زدایی رزین جذب ماکرو متخلخل بهینه در این تحقیق پایدار و امکان‌پذیر است. 1 پلی ساکارید خنثی و 5 پلی ساکارید اسیدی را می توان از عصاره آبی سیستانچ سیستانش جدا کرد که در میان آنها فعالیت ایمونولوژیکی پلی ساکارید اسیدی CT2 Stronger است. این مطالعه می‌تواند پایه‌ای تجربی برای توسعه و استفاده از پلی‌ساکاریدهای Cistanche Tubula ایجاد کند.