اثرات مفید عصاره سیستانچ توبولوزا بر بهبود نفوذپذیری روده پایین اکیناکوزید (ECH) و اکتئوزید (ACT).

تماس: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 ایمیل:audrey.hu@wecistanche.com

تاداتوشی تانیوآ، نوریاکی ناگایب و یوشینوری فوناکامیب

* دانشکده علوم دارویی، دانشگاه توکوشیما بونری، دانشکده داروسازی توکوشیما و b، دانشگاه کینکی، اوزاکا، ژاپن

خلاصه

اهدافهدف از این مطالعه پرداختن به اثرات مفیدسیستانچتوبولوزااستخراج کردندر بهبود نفوذپذیری روده پایین اکیناکوزید (ECH) و اکتئوزید (ACT).مواد و روش هاجذب ECH و ACT در عصاره C. tubulosa با استفاده از تک لایه های سلولی Caco{0}} روده انسان با ترکیبات دست نخورده مشخص شد. جذب وابسته به ناقل گلوکز ECH و ACT با روش پرفیوژن روده ای در محل تایید شد.یافته های کلیدینفوذپذیری ظاهری (Papp) بین ECH دست نخورده و ACT دست نخورده تفاوت معنی داری نداشت. در حضور فلوریدزین، Papp از ECH و ACT در دوز بالا به 20 درصد از درمان مربوطه کاهش یافت، اما توسط فلورتین و وراپامیل تغییر نکرد. عصاره C. tubulosa در دوزهای پایین و بالا، Papp ECH و ACT را (هر دو تا سه برابر) افزایش داد، که منجر به مشارکت زیاد آنها در جذب مستقل از ناقل گلوکز وابسته به سدیم شد. در غلظت کم، سطوح ECH و ACT همزمان در خون پورتال به طور قابل توجهی توسط فلوریدزین سرکوب شد.نتیجهرژیم غذایی و دارویی سی.توبولوزااستخراج کردنافزایش جذب روده ای ECH و ACT ممکن است به مدیریت بهتر سلامت انسان کمک کند، اگرچه دخالت حمل و نقل حساس به فلوریدزین باید کاهش یابد.

کلید واژه هااکتئوزید؛ تک لایه سلولی کاکو-2.سیستانچتوبولوزااستخراج کردن; اکیناکوزید؛ ناقل گلوکز حساس به فلوریدزین

عصاره cistanche tubolosa

مقدمه

ریشه هایسیستانچتوبولوزابه طور سنتی برای دارو و غذا استفاده می شود. عصاره C. tubulosa دارای اثرات دارویی در بیماری های مختلف مغزی، عملکردهای ضد پیری، متابولیسم چربی و رشد مو است. [1-4] اخیرا، ایریدوئیدها، مونوترپنوئیدها، گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید و لیگنان ها از C. tubulosa جدا شده اند. . [5،6] گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید، دسته ای از ترکیبات پلی فنلی، مواد شیمیایی اصلی درسیستانچگونه ها، [7] اگرچه مقدار آنها در بین گونه های مختلف متفاوت است. اکیناکوزید (ECH؛ شکل 1) یکی از گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید اصلی در هربا سیستانچیس است. این ماده توسط آنزیم‌های با منشأ باکتریایی در روده بزرگ به اکتئوزید (ACT) هیدرولیز می‌شود.[8،9] ECH و ACT دارای فعالیت مفید محافظت از کبد[10] و ضد التهاب[11] در حیوانات جوندگان هستند. به طور شگفت انگیزی، ECH بسیار محلول در آب، نتایج رفتاری و عصبی شیمیایی را در مدل موش بیماری پارکینسون بهبود می بخشد و فعال شدن کاسپاز-3 و کاسپاز-8 را در نورون های گرانول مخچه مهار می کند.[9] به خوبی شناخته شده است که سد خونی مغزی ورود و توزیع بیگانه‌بیوتیک‌ها را از خون به مغز محدود می‌کند. وو و همکاران [12] همچنین نشان داد که ACT محلول در آب به سرعت در بافت‌های مغز موش‌ها توزیع می‌شود. بنابراین، ECH و ACT ممکن است توسط سیستم(های) خاصی به مغز، روده و کبد منتقل شوند.

شکل 1 ساختارهای شیمیایی اکیناکوزید و اکتئوزید.

اگرچه شواهد قوی وجود دارد که نشان می‌دهد مصرف عصاره C. tubulosa برای سلامت انسان مفید است، نفوذپذیری ECH خالص در سراسر تک‌لایه‌های سلولی Caco{{0}} در غلظت آپیکال 1.6 ± 8.4 میکروگرم بر میلی‌لیتر است. برابر یا کمتر از نشانگر حمل و نقل پاراسلولی مانیتول.[13] هنگامی که ECH خالص به صورت خوراکی در موش ها تجویز می شود (دوز، 1{{10}}}0 میلی گرم بر کیلوگرم)، جذب بسیار سریع است (Tmax، 15 دقیقه)، و حداکثر غلظت سرمی بسیار زیاد است. پایین (Cmax، 0.61 ± 0.32 ug/ml).[14] فراهمی زیستی مطلق ECH فقط {28}}.83 درصد است. به طور مشابه، هنگامی که سلول‌های Caco با یک بخش فنلی که تا حدی از فاضلاب کارخانه زیتون خالص شده است، انکوبه می‌شوند، جذب ACT خالص سریع است و حداکثر تجمع پس از 30 دقیقه و بازده کل تجمع 0.1 درصد ایجاد می‌شود. سطوح داخل سلولی 130 pmol/mg پروتئین سلولی.[15] در موش‌ها، حداکثر غلظت (0.03 ± 0.13 میکروگرم در میلی‌لیتر) ACT خالص در 30 دقیقه پس از دوز خوراکی 100 میلی‌گرم بر کیلوگرم به دست آمد، [12] که نشان‌دهنده جذب سریع روده‌ای است. فراهمی زیستی خوراکی ACT و همچنین ECH بسیار کم است (0.04 ± 0.12 درصد) که احتمال اثرات عبور اول را در دستگاه روده و کبد نشان می دهد. در صفرای موش، ترکیبات متیلاسیون و گلوکورونیداسیون ECH متابولیت های اصلی هستند، [16] اگرچه میزان متابولیسم کبدی نامشخص است. ما در ابتدا دریافتیم که ECH و ACT در هموژنه‌های مخاط روده موش صحرایی و اسید معده مصنوعی کاملاً پایدار بودند (داده‌ها نشان داده نشده است). نجار و همکاران [17] نشان داد که ACT فعالیت P-glycoprotein (P-GP)-ATPase را به روشی مشابه وراپامیل (یک بازدارنده P-gp نماینده) مهار می کند، که دلالت بر تعدیل کننده P-gp دارد. با این حال، مشخص نیست که آیا ACT به عنوان یک بستر P-gp در دسترس است یا خیر. جالب توجه است، یافته‌های اخیر فلاونوئید-D-گلوکزیدهای غذایی نشان داد که پروتئین مقاومت چند دارویی (MRP2) ناقل گلوکز وابسته به سدیم (SGLT){45}} واسطه جذب کورستین 4'-O{48}}گلوکز را پوشانده است. [18،19] که مسئول جذب بسیار ضعیف است. با این حال، در مورد حساسیت گلوکزیدهای پلی فنلی به ناقلین جاذب، از جمله ناقل گلوکز، اطلاعات کمی وجود دارد. اطلاعات در مورد ویژگی های جذب کورستین 4'-گلوکزید و ECH به سرعت نفوذپذیر در سد خونی مغزی ما را بر آن داشت تا جذب حساس به ناقل گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید را در عصاره C. tubulosa در رژیم غذایی بررسی کنیم.

در این مطالعه، ما جذب واسطه‌ای گلوکز ECH و ACT دست‌نخورده را با استفاده از تک‌لایه‌های سلولی Caco{1}} روده انسان بررسی کردیم. به طور همزمان، انتقال جذب ECH و ACT همزمان در عصاره C. tubulosa رژیمی با یک مدل آزمایشگاهی و سیستم پرفیوژن روده درجا با نمونه‌گیری خون پورتال مشخص شد، که به راحتی می‌تواند بین میزان جذب و اجتناب از کبدی اول تمایز قائل شود. -قابلیت پاس

مواد و روش ها

مواد

ECH و ACT دست نخورده هدایای سخاوتمندانه ای از شرکت بازرگانی Eishin، با مسئولیت محدود (اوزاکا، ژاپن) بودند. Phloridzin و phloretin از توکیو Kasei Co., Ltd. (توکیو، ژاپن) خریداری شد. وراپامیل و اسید p-کوماریک، که به عنوان استانداردهای داخلی برای سنجش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) استفاده می‌شوند، از سیگما آلدریچ (سنت لوئیس، MO، ایالات متحده آمریکا) به دست آمدند. تمام مواد شیمیایی دیگر مورد استفاده از درجه تحلیلی و در دسترس تجاری بودند.

مواد گیاهی و تهیه عصاره متانولی

C. tubulosa (SCHRENK) R. WIGHT (Orobanchaceae) یک گیاه انگلی چند ساله است که بر روی ریشه گونه های Salvadora یا Calotropis رشد می کند و در کشورهای شمال آفریقا، عربستان و کشورهای آسیایی پراکنده می شود. ساقه های خشک شده C. tubulosa پودر شده و سه بار با متانول تحت رفلاکس به مدت 3 ساعت استخراج شدند. تبخیر حلال تحت فشار کاهش یافته عصاره متانولی را فراهم کرد. عصاره متانولی (گرید تجاری، شماره دسته 20070130;

نام تجاری ثبت، Sabaku Ninnjinn Kanka) هدیه سخاوتمندانه ای از شرکت بازرگانی Eishin، با مسئولیت محدود از طریق Muraoka و Morikawa (دانشگاه Kinki، ژاپن) بود و یک شناسه گیاه شناسی توسط پروفسور جیا Xiaoguang در موسسه چینی سنتی و سین کیانگ انجام شد. داروهای قوم شناسی

تجزیه و تحلیل عصاره گیاهی: کروماتوگرافی

ما محتویات ECH و ACT را در عصاره C. tubulosa (Batch No. 20070130) با آنالیز HPLC که در زیر توضیح داده شده است، تعیین کردیم. داده های به دست آمده در جدول 1 نشان داده شده است.

کشت سلولی

سلول های Caco{0}} خریداری شده از مجموعه فرهنگ نوع آمریکایی (ATCC, Rockville, MD, USA) در پاساژهای 38-53 استفاده شد. آنها در محیط کشت متشکل از محیط Eagle اصلاح شده Dulbecco (DMEM، Nacalai Tesque Co.، کیوتو، ژاپن) همراه با 0.1 میلی مولار اسیدهای آمینه غیر ضروری، 10 درصد سرم جنین گاوی غیرفعال شده با حرارت، رشد کردند. 100 واحد در میلی لیتر پنی سیلین G و 0.1 میلی گرم در میلی لیتر استرپتومایسین سولفات.

مطالعات حمل و نقل

سلول های کاکو{0}} با تراکم 6.4 × 103 سلول در سانتی متر مربع روی فیلترهای پلی کربنات قرار گرفتند. تک لایه ها برای آزمایش های حمل و نقل 21-25 روز پس از بذر استفاده شد. ECH و ACT دست نخورده که معادل محتویات آنها در بودسیستانچتوبولوزا استخراج کردن(4.5 and 13.5 mg/ml) were mixed with DMEM medium containing 0.5% dimethylsulfoxide to maintain the integrity of the cell monolayer over the periods of the experiments. Intact ACT equivalent to ECH content in the extract was also dosed in the incubation medium. The extract was suspended in a DMEM medium and was centrifuged to remove insoluble components. Supernatants were loaded to the apical side. At the indicated times, an aliquot of the incubation medium was withdrawn from the basolateral side and was mixed with acetonitrile containing an internal standard for the assay. In separate experiments, phloridzin (fifinal concentration, 1 mM) and verapamil (fifinal concentration, 0.2 mM) was added to the apical side of the monolayer; however, phloretin (fifinal concentration, 0.3 mM) was treated on both sides of the monolayer. The integrity of monolayers was monitored by transepithelial electrical resistance (TEER) using Millicell-ERS (Millipore, Bedford, MA, USA) before and after transport experiments. TEER values of monolayers used were >300 Ω·cm2.

پرفیوژن روده ای درجا

موش های صحرایی نر ویستار (23{{2{23}}}}-250 گرم) از SLC ژاپن (Hamamatsu، ژاپن) به دست آمدند. حیوانات قبل از استفاده به مدت 1 هفته در اتاقی با تهویه مطبوع تحت چرخه نور/تاریکی 12 ساعته قرار گرفتند. موش‌ها با غذای استاندارد آزمایشگاهی (شرکت مخمر شرقی، توکیو، ژاپن) با آب به طور آزاد تغذیه شدند و یک شب قبل از آزمایش ناشتا بودند. مطالعه پرفیوژن چرخشی در محل طبق روش اصلاح شده توصیف شده توسط Mihara و همکاران انجام شد. [20] به طور خلاصه، موش ها با محلول 25 درصد یورتان (1 میلی گرم بر کیلوگرم) بیهوش شدند تا از کاهش فشار خون جلوگیری شود. یک برش شکمی در خط وسط ایجاد شد و روده کوچک در معرض دید قرار گرفت. مجرای صفراوی برای جلوگیری از ترشح صفرا به داخل پرفیوژن بسته شد. کل روده کوچک به عنوان یک بخش (از دوازدهه تا ایلئوم) با نرمال سالین در دمای 37 درجه به مدت 10 دقیقه شستشو داده شد تا زمانی که شستشو شفاف به نظر برسد. لوله های شیشه ای متصل به لوله سیلیکونی سپس به دو انتهای روده کوچک کانوله شده و با نخ بخیه محکم شدند. سپس روده کوچک در شکم جایگزین شد و کانول ها به یک پمپ پریستالتیک متصل شدند. ورید پورتال با لوله پلی اتیلن (PE10) کانوله شد. عصاره C. tubulosa موجود در بازار در بافر بی کربنات Krebs-Henseleit (pH 7.4) معلق شد تا غلظت نهایی 4.5 mg/ml بدست آید و به مدت 10 دقیقه در 8000 دور در دقیقه سانتریفیوژ شد تا اجزای نامحلول حذف شوند. مایع رویی در غیاب یا حضور فلوریدزین (1 میلی مولار) در یک مخزن جمع آوری شد که در طول دوره آزمایش در دمای 0.5 ± 37 درجه نگهداری شد. در زمان های مشخص شده، خون از طریق کانول ورید پورتال گرفته شد. پس از سانتریفیوژ کردن نمونه های خون، پلاسمای به دست آمده با استونیتریل حاوی استاندارد داخلی پروتئین زدایی شد و در دور 3000 سانتریفیوژ شد. مواد رویی تبخیر شدند و باقیمانده با یک فاز متحرک متشکل از استونیتریل و 0.5 درصد اسید استیک حل شد. محلول مخلوط بر روی یک ستون HPLC بارگذاری شد. موش‌ها مطابق با رویه‌های اخلاقی به دنبال دستورالعمل‌های مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی صادر شده توسط دولت ژاپن و دانشگاه کینکی مورد استفاده قرار گرفتند.

تجزیه و تحلیل HPLC

تجزیه و تحلیل HPLC بر روی یک سیستم مجهز به شیمادزو SPD{{0}}A، آشکارساز UV، پمپ Shimadzu LC-10 و یکپارچه کننده کرونوتوپی Shimadzu C-R4A (کیوتو، ژاپن) انجام شد. ECH و ACT با استفاده از ستون Inertsil ODS (5 میکرومتر، 4.6 × 15{13}} میلی‌متر، GL Sciences Inc.، اوزاکا، ژاپن) از هم جدا شدند. فاز متحرک استونیتریل و اسید استیک 0.5 درصد با نسبت 15:85 (v/v) با سرعت جریان 1.0 میلی لیتر در دقیقه استفاده شد. تشخیص در 334 نانومتر انجام شد.

تجزیه و تحلیل جنبشی

ضرایب نفوذپذیری ظاهری (Papp) از شیب بخش خطی مسیر زمانی انتقال ترکیب در سراسر تک‌لایه‌های سلولی Caco{0}} به شرح زیر برآورد شد:

پاپ{{0}} （dQ/dt）/ A1C0)

که در آن dQ/dt میزان نفوذپذیری است، C{0}} غلظت اولیه املاح در محفظه دهنده، و A مساحت سطح غشا (4.7 سانتی متر مربع) است.

در مطالعه پرفیوژن روده در محل موش صحرایی، منطقه زیر منحنی غلظت-زمان پلاسما (AUC{2}}-90) در ورید پورتال از زمان صفر تا آخرین اندازه‌گیری شده، طبق قانون ذوزنقه‌ای خطی محاسبه شد.

خواص فیزیکوشیمیایی

مساحت سطح قطبی و مساحت سطح غیرقطبی ترکیبات با استفاده از برنامه SAS محاسبه شد (نسخه 0.8, Olsson, T.; Sherbukhin, V., Synthesis and Structure Administration, 1997-2001, AstraZeneca, Cary ، NC، ایالات متحده). مقادیر log P و pKa به طور تجربی تعیین شده از ادبیات به دست آمد.

تحلیل آماری

داده‌ها با استفاده از آزمون تحلیل واریانس یک‌طرفه و پس از آن آزمون پس‌هوک توکی مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت. مقادیر احتمال کمتر از 5 درصد معنی دار در نظر گرفته شد.

نتایج

انتقال جذبی اکیناکوزید و آکتئوزید از طریق تک لایه سلولی Caco{0}}

در موش‌ها و موش‌های صحرایی، ECH دست نخورده[1{{2{24}}}}،14] و ACT[12،21] به صورت خوراکی در دوزهای 1{00-1{{ تجویز می‌شوند. 39}}00 میلی‌گرم بر کیلوگرم. عصاره C. tubulosa مورد استفاده حاوی تقریباً 3{47}} درصد ECH و 15 درصد ACT در هر دوز بود. از آنجایی که عصاره فشار اسمزی و pH را در محیط جوجه کشی تغییر داد، غلظت های 4.5 و 13.5 میلی گرم بر میلی لیتر بر اساس دوز خوراکی (ترکیبات سالم: 2-2{49}} mg/20 گرم در بدن تعیین شد. وزن) در موش. عصاره در دوزهای کم (4.5 میلی گرم در میلی لیتر) و بالا (13.5 میلی گرم در میلی لیتر) به ترتیب حاوی 2.0 و 6.1 میلی گرم برای ECH و 1.0 و 3.0 میلی گرم برای ACT بود. ما مقادیری از عصاره C. tubulosa را به کار بردیم که بسیار کمتر از دوز خوراکی ECH و ACT گزارش شده در انسان بود (مقدار رژیم غذایی توصیه شده عصاره: 150 میلی گرم حاوی تقریباً 45 میلی گرم برای ECH و 22.5 میلی گرم برای ACT). در دوزهای پایین و بالای ترکیبات دست نخورده، پروفایل های جذب (شکل 2) و پاپ تفاوت معنی داری بین ECH و ACT به عنوان معادل ECH نداشتند (جدول 2). هنگامی که عصاره C. tubulosa با دوز بالای 13.5 میلی گرم در میلی لیتر در محیط قرار گرفت، مقادیر Papp (به ترتیب 0.13 ± 1.27 و 0.34 ± 0.03 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه) ECH و ACT سه برابر بیشتر از مقادیر بود. (به ترتیب 0.09 ± 0.38 و 0.03 ± 0.10 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه) ECH و ACT دست نخورده (جدول 2). عصاره، بر خلاف ترکیبات دست نخورده، به طور قابل توجهی انتقال جذب ECH و ACT را افزایش داد.

شکل 2 انتقال جذبی اکیناکوزید و آکتئوزید از طریق تک لایه های سلولی Caco{1}} در یک سیستم transwell. حمل و نقل آپیکال به قاعده جانبی تحت نظارت قرار گرفت. نمادهای بسته عبارتند از اکیناکوزید (دایره) و آکتئوزید (مربع) ازسیستانچتوبولوزاعصاره در غلظت‌های کم و زیاد 4.5 (a) و 13.5 mg/ml (b) مصرف می‌شود. نمادهای باز عبارتند از اکیناکوزید دست نخورده (دایره) و اکتئوزید دست نخورده (مربع) مربوط به محتوای اکیناکوزید و اکتئوزید درسیستانچتوبولوزااستخراج کردنبه ترتیب دوز شده است. آکتئوزید دست نخورده (مثلث باز) نیز به عنوان دوز معادل اکیناکوزید دست نخورده (دایره باز) در محیط بارگذاری شد. نتایج با انحرافات استاندارد (n=3) ارائه شده است.

اثر مهاری فلوریدزین، فلورتین و وراپامیل

To characterize the intestinal absorption of ECH and ACT, Caco-2 cell monolayers were incubated with representative inhibitors. Apical glucose transporter 1-sensitive phloridzin dramatically reduced the Papp of intact ECH and ACT to 20% of non-treatment at the high dose (Table 2). Basolateral glucose transporter (GLUT) 2-sensitive phloretin did not decrease the transport of intact ECH and ACT (Figure 3). In this study, higher concentrations (>0.3 میلی‌مولار) فلورتین به دلیل سمیت قابل توجه سلولی قابل استفاده نیست. علاوه بر این، P-gp به عنوان یک بازیگر مهم مسئول تعامل بین داروهای گیاهی و بسترهای P-gp مهم بالینی شناخته شده است. وراپامیل انتقال جذبی ترکیبات دست نخورده را افزایش نداد (شکل 3).

انتقال جذبی ECH و ACT در عصاره (دوز کم) به طور قابل توجهی توسط فلوریدزین مهار شد (جدول 2 و شکل 4). عصاره در دوز بالا مهار حساس به فلوریدزین را سرکوب کرد، اگرچه انتقال ECH و ACT دست نخورده به فلوریدزین حساس تر بود (جدول 2).

شکل 3 اثر فلورتین و وراپامیل بر انتقال جذبی اکیناکوزید و اکتئوزید دست نخورده. انتقال آپیکال به قاعده جانبی پس از اعمال اکیناکوزید دست نخورده مربوط به محتوای اکیناکوزید در عصاره 13.5 میلی گرم در میلی لیتر در سمت آپیکال (n=3) بررسی شد. Acteoside (مربع بسته) از نظر دوز معادل اکیناکوزید دست نخورده (دایره بسته) در غیاب مهارکننده ها (n=3) بود. الماس های باز و بسته به ترتیب در حضور 0.2 میلی مولار وراپامیل و 0}.3 میلی مولار فلورتین انتقال می یابند. آزمایش های مهار در دو نسخه انجام شد.

مطالعه پرفیوژن روده در محل

در یک مطالعه درجا، ما آزمایش کردیم که آیا ECH و ACT در عصاره C. tubulosa توسط SGLT1 واقع در سمت آپیکال روده کوچک منتقل می‌شوند یا خیر. هنگامی که عصاره غذایی با دوز پایین (4.5 میلی گرم در میلی لیتر) پرفیوژن شد، ECH و ACT به سرعت در خون پورتال ظاهر شدند (شکل 5). AUC برای ECH 384.1 ± 2702.8 میکرومتر در دقیقه و برای ACT 698.3 ± 197.2 میکرومتر در دقیقه تعیین شد. پس از نرمال شدن AUC با محتوای عصاره C. tubulosa، مقدار جذب شده بین ECH و ACT تفاوت معنی‌داری نداشت. فلوریدزین حساس به SGLT، برخلاف فلورتین، به طور قابل توجهی انتقال جذبی ECH همزمان (AUC، 248.2 ± 649.4 میکرومتر در دقیقه) و ACT (تشخیص داده نشده) را سرکوب کرد.

بحث

برخی از ترکیبات گیاهی سوبستراهای P-gp هستند که در کبد، روده، مغز و کلیه ها بسیار بیان می شود. P-gp یک عامل تعیین‌کننده برای فراهمی زیستی in-vivo، وضعیت و توزیع داروهای گیاهی، از جمله مخمر سنت جان، کورکومین، اکیناسه، جینسنگ، جینکو، و زنجبیل است. }گلوکوزید، یک مشتق فلاونوئید، نیز توسط ناقل MRP2 روده ای محدود شد.[24] بنابراین، این مطالعه به منظور بررسی خواص جذب ECH و ACT همزمان در عصاره گیاهی C. tubulosa در رژیم غذایی و دارویی طراحی شد.

تک‌لایه‌های سلولی پلاریزه کاکو{{0}}، و همچنین روده،[25]، انتقال‌دهنده‌های اصلی ترشح داروی روده‌ای مانند P-gp، MRPs و پروتئین مقاوم به سرطان پستان را بیان می‌کنند.[26] فلاونوئیدهای رژیمی کوئرستین [27] و میریستین [28] نشان داده شده است که جریان ناشی از P-gp را هم در رده های سلولی و هم در مدل های حیوانی مهار می کنند. وراپامیل، یک مهارکننده P-gp، نفوذپذیری ACT و ECH را در سراسر تک‌لایه‌های سلولی Caco{9}} تغییر نداد (شکل 3)، که نشان می‌دهد ECH و ACT دست نخورده توسط پمپ جریان P-gp محدود نشده‌اند. مطالعات قبلی ما نشان داد که پروتئین‌های MRP2 در تک‌لایه‌های سلولی Caco بیان نمی‌شوند.[29] جریان ناشی از P-gp و MRP{16}}را می‌توان در انتقال ECH و ACT حذف کرد. برخی از گلیکوزیدهای کورستین با چربی دوستی کم به طور موثرتری نسبت به خود کورستین جذب شدند. توجه ما بر روی عملکرد ترکیبی دو ناقل گلوکز در انتروسیت‌ها متمرکز شده است: SGLT در غشای مرزی و انتقال گلوکز انتشار آسان (GLUT) در غشای قاعده‌ای جانبی. کشت سلولی Caco{19}} را می توان به عنوان مدلی برای مطالعه GLUT2 حساس به فلورتین و SGLT1 و 2 انتقال دهنده حساس به فلوریدزین استفاده کرد. }} تک لایه با سرعت بالا با Papp 1.1×1 ± 36.8{0-6 سانتی‌متر بر ثانیه.[35] دارای Papp بالاتری نسبت به نشانگر انتقال بین سلولی پروپرانولول است (23.4 ± 2.8 × 10-6 سانتی متر بر ثانیه). همانطور که در جدول 2 نشان داده شده است، ECH و ACT دست نخورده دارای Papp بسیار کمتری نسبت به گلوکز و پروپرانولول غیرفعال گزارش شده بودند. ما لگاریتم ضریب تقسیم (اکتانول-آب) را محاسبه کردیم، log P، برای ECH و ACT به ترتیب 2.32- و 0.077 محاسبه شد. اعتقاد بر این است که ترکیبات قطبی یا آبدوست از طریق یک مسیر پاراسلولی (از طریق اتصالات تنگ) منتقل می شوند. به نظر می رسد دو گلیکوزید فنیل اتانوئید مانند مانیتول از طریق یک مسیر پاراسلولی منتقل می شوند. با این حال، فلوریدزین به طور چشمگیری نفوذپذیری جذب ECH و ACT دست نخورده را کاهش داد (جدول 2)، که نشان می دهد SGLT1 آپیکال نقش عمده ای در جذب روده ای ECH و ACT دست نخورده ایفا می کند. در یک دوز معادل، نفوذپذیری آبگریز ACT بالاتر نزدیک به نفوذپذیری ECH بود (شکل 2 و جدول 2). یوشیکاوا و همکاران [36] نشان داده اند که انتقال دهنده های تسهیل کننده (GLUT 1 و 2)، و همچنین SGLT1 حساس به فلوریدزین، به شدت در روده کوچک بیان می شوند. از آنجایی که مقادیر جذب شده ترکیبات بر اساس تعادل جرمی بین جذب و حذف است، مشارکت GLUT2 را ارزیابی کردیم. گلوکز از غشاهای آپیکال انتروسیت ها توسط SGLT1 با میل ترکیبی بالا و ظرفیت کم عبور می کند و از غشای قاعده جانبی از طریق GLUT2 با میل ترکیبی کم و ظرفیت بالا خارج می شود. فلورتین (یک بازدارنده خاص GLUT2) انتقال ECH و ACT دست نخورده را لغو نکرد (شکل 3). فونز و همکاران [37] نشان داد که ACT به شدت با گروه‌های فسفات غشاهای فسفولیپیدی تعامل دارد. از آنجایی که گروه‌های هیدروکسیل در ساختار ACT فراوان هستند، پیوندهای هیدروژنی بین این گروه‌ها و سرهای قطبی گلیسرول یا گروه‌های فسفات فسفولیپیدها محتمل‌ترین برهمکنش هستند. هنگامی که ECH دست نخورده و ACT معادل آن با تک‌لایه‌های Caco به مدت 11 ساعت انکوبه شدند، تجمع سلولی ACT (0.04 ± 0.24 نانومول بر سانتی‌متر مربع) سه برابر بیشتر از ECH بود (0.01 ± 0.07 نانومول در سانتی‌متر مربع). ما فکر می‌کردیم که ECH و ACT حساس به SGLT به آرامی از انتروسیت‌ها به جریان خون منتقل می‌شوند که احتمالاً منجر به کاهش Papp مشاهده شده می‌شود. در مقایسه با ECH بسیار آبدوست، نفوذپذیری کم ACT ممکن است به دلیل ورود به غشای سلولی باشد.

ترکیبات پلی فنولی در طول کاربرد بالینی خود در مخلوط های گیاهی مصرف می شوند و به عنوان مکمل های غذایی به صورت تجاری در دسترس هستند. در یک مطالعه آزمایشگاهی، نشان داده شد که جذب اپی کاتچین فنولیک تحت تأثیر ترکیبات مواد غذایی نوشیدنی قرار نمی گیرد.[38] در مقابل، ماتریس‌های محصول Hypericum perforatum L. بر انتقال گلوکوزیدهای کوئرستین (روتین و ایزوکورسیترین) و هیپروزید از طریق سلول‌های کاکو تأثیر می‌گذارند که دلیل آن تفاوت در ترکیب فیتوشیمیایی ماتریکس و ویژگی‌های انتقال است، یعنی انتقال پاراسلولی و واسطه یا فعال حامل. حمل و نقل.[39] در این مطالعه، C. tubulosa انتقال ترانس اپیتلیالی سه برابر بالاتر از ECH و ACT دست نخورده ارائه کرد (شکل 2 و جدول 2). ما حدس می زنیم که اجزای موجود در عصاره C. tubulosa ناقل حساس به فلوریدزین را فعال می کنند و/یا حذف ECH و ACT داخل سلولی را تسریع می کنند. به نظر می رسد عصاره C. tubulosa در دوز بالا تا حد زیادی قدرت حمل و نقل حساس به فلوریدزین را پنهان می کند (جدول 2). کربوهیدرات های رژیم غذایی [40] و پروتئین ها [41] با برخی از پلی فنول ها در دستگاه گوارش تعامل دارند. موریکاوا و همکاران [10] نشان داد که پنج ایریدوئید، کانکانوزیدهای AD، و کانکانول، یک گلیکوزید مونوترپن، کانکانوزید E، دو الیگوگلیکوزید فنیل اتانوئید، کانکانوزیدهای F و G، و یک الیگو قند آسیله، کانکانوز، را می توان از عصاره C. tubulosa که در حال حاضر استفاده می شود، جدا کرد. مواد دیگر، از جمله پروتئین های موجود در عصاره C. tubulosa، نامشخص است. همراه با حدس و گمان فوق، ما طراحی شده ایم تا بررسی کنیم که آیا سایر اجزا با SGLT1 تعامل دارند و از جذب ECH و ACT جلوگیری می کنند.

In-vivo experiments cannot easily distinguish between the extent of absorption and avoidance of first-pass disposition through the liver. The in-situ intestinal perfusion model has an advantage over in-vivo and in-vitro models due to the easy control of experiment parameters exclusion of the impact of other organs and maintenance of an intact intestinal blood supply.[22] The involvement of the phloridzin-sensitive glucose transporter was evaluated in an in-situ intestinal perfusion system. As shown in Figure 5, absorbed amounts of ECH and ACT concomitants in C. tubulosa extract (low dose) were greatly abolished by phloridzin, which agrees with our in-vitro data (Figure 4). Using peptides and 20 drugs passively absorbed, a good correlation is obtained between in-vivo drug absorption and the drug permeability of Caco-2 monolayers.[42] Drugs with a Papp of >1 × 10-6 سانتی متر در ثانیه به طور کامل در انسان جذب می شود، در حالی که داروها و پپتیدها با جذب ضعیف (<1% of="" dose)="" have="" papp="" values="" of=""><1 ×="" 10−7="" cm/s.="" surprisingly,="" the="" papp="" of="" the="" ech="" concomitant="" (high="" dose)="" was="">1 × 10-6 سانتی متر در ثانیه (جدول 2)، فراهمی زیستی خوراکی بالا را در حیوانات و انسان نشان می دهد. کرسپی و همکاران [43] نشان داد که جریان در یک مطالعه پرفیوژن روده در محل تفاوت معنی داری بین فلوریدزین و فلورتین ندارد. آنها [44] همچنین نشان دادند که فراهمی زیستی خوراکی فلوریدزین با حساسیت بالا به SGLT1 در موش‌ها تنها 10 درصد بود. مطالعات آینده نیاز به ارزیابی فراهمی زیستی و اثر عبور اول کبدی ECH همزمان پس از تجویز خوراکی عصاره غذایی در دوز بالا دارد. نتایج درجا نشان می دهد که مصرف عصاره C. tubulosa ممکن است جذب خوراکی پایین ECH و ACT دست نخورده را بهبود بخشد.

شکل 4 اثر مهاری فلوریدزین بر انتقال جذبی اکیناکوزید و اکتئوزید درسیستانچتوبولوزااستخراج کردن. حمل و نقل آپیکال به قاعده جانبی تحت نظارت قرار گرفت. دایره ها و مربع های بسته به ترتیب اکیناکوزید (a) و آکتئوزید (b) در عصاره 4.5 میلی گرم در میلی لیتر بدون فلوریدزین هستند. الماس های بسته درمان با 4.5 میلی گرم در میلی لیتر عصاره شامل 1 میلی مولار فلوریدزین را نشان می دهند. نتایج با انحرافات استاندارد (n=3) ارائه شده است.

شکل 5 دوره های زمانی غلظت اکیناکوزید و آکتئوزید در خون پورتال در جریان پرفیوژن روده موش صحرایی در حال گردش. نمادهای دایره و مربع به ترتیب اکیناکوزید و آکتئوزید هستند.سیستانچتوبولوزااستخراج کردندر غلظت 5/4 میلی گرم بر میلی لیتر در غیاب (نمادهای بسته) یا حضور (نمادهای باز) 1 میلی مولار فلوریدزین در دمای 37 درجه پرفیوژن شد. نتایج با انحرافات استاندارد (n=3-4) ارائه شده است. *P < 0.05="" در="" مقابل="" عصاره="" غذایی="" در="" حضور="">

نتیجه

عصاره رژیمی و دارویی C. tubulosa که جذب روده ای ECH و ACT را افزایش می دهد ممکن است برای مدیریت بهتر سلامت انسان مفید باشد، اگرچه دخالت حمل و نقل حساس به فلوریدزین باید کاهش یابد.

اعلامیه ها تضاد منافع

نویسنده (نویسندگان) اعلام می کنند که هیچ تضاد منافعی برای افشا ندارند.

منابع مالی

این کار تا حدی توسط مرکز تحقیقات فناوری پیشرفته از دانشگاه کینکی پشتیبانی شد.

قدردانی

نویسندگان مایلند از Osamu Muraoka (دانشگاه Kinki، اوزاکا، ژاپن) و Toshio Morikawa (دانشگاه Kinki، اوزاکا، ژاپن) برای عرضهسیستانچتوبولوزااستخراج کردنو اجزای خالص ما از ماساهیرو ایواکی (دانشگاه کینکی) برای حمایت تحصیلی آنها بسیار سپاسگزاریم.

منابع

1. Tanaka J et al. اثرسیستانچتوبولوزا استخراج کردندر مورد بیماری های مختلف مغزی سبک غذایی 21 2008؛ 12: 24-26.
2. Tanaka J et al. عملکردهای ضد پیریسیستانچتوبولوزا استخراج کردن. سبک غذایی 21 2008؛ 12: 27-29.

3. Tanaka J et al. توابع زیبایی و رشد مو ازسیستانچتوبولوزااستخراج کردن. سبک غذایی 21 2008؛ 12: 29-32.
4. Tanaka J et al. اثر متابولیسم چربی ازسیستانچتوبولوزااستخراج کردن. سبک غذایی 21 2008؛ 12: 30-33.
5. یوشیزاوا اف و همکاران. اجزای تشکیل دهندهسیستانچتوبولوزاSchrenk (Hook) f.II. جداسازی و ساختار یک گلیکوزید فنیل اتانوئید جدید و یک گلیکوزید نئولینان جدید Chem Pharm Bull 1990; 38: 1927-1930.
6. یوشیکاوا ام و همکاران. آمینوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئید و الیگوشکرهای اسیله شده با فعالیت شل کننده عروق ازسیستانچتوبولوزا. Bioorg Med Chem 2006; 14: 7468–7475.
7. Tu PF و همکاران. تجزیه و تحلیل گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید گیاه هربا سیستانش توسط RP-HPLC. Yao Xue Xue Bao 1997; 32: 294-300.
8. لی ال و همکاران. تنظیم متابولیک گلیکوزیدهای فنیل اتانوئید از هرباسیستانچدر دستگاه گوارش سگ Yao Xue Xue Bao 2001; 36: 432-435.
9. گنگ ایکس و همکاران. اثرات محافظتی عصبی اکیناکوزید در مدل MPTP موش بیماری پارکینسون. Eur J Pharmacol 2007; 564: 66-74.
10. موریکاوا تی و همکاران. آمینوگلیکوزیدهای فنیل اتانوئیدی اسیله شده با فعالیت محافظتی کبدی از گیاه صحراییسیستانچتوبولوزا. Bioorg Med Chem 2010; 18: 1882-1890.
11. پائولا RD و همکاران. اثرات ورباسکوزید، بیوتکنولوژیک خالص شده توسط کشت سلولی گیاهی سیرینگا ولگاریس، در مدل جوندگان پریودنتیت. جی فارم فارماکول 2011; 63: 707-717.
12. Wu YT و همکاران. تعیین اکتئوزید درسیستانچdeserticola و Boschniakia rossica و فارماکوکینتیک آن در موش های صحرایی با حرکت آزاد با استفاده از LC-MS/MS J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci 2006; 844: 89-95.
13. ماتیاس A و همکاران. مطالعات نفوذپذیری آلکیل آمیدها و کونژوگه های اسید کافئیک از اکیناسه با استفاده از مدل تک لایه سلولی کاکو{1}}. J Clin Pharm Therapeut 2004; 29: 7-13.
14. جیا سی و همکاران. تعیین اکیناکوزید در سرم موش توسط کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا فاز معکوس با تشخیص اشعه ماوراء بنفش و کاربرد آن در فارماکوکینتیک و فراهمی زیستی J Chromatogr 2006; 844: 308-313.
15. Cardinali A et al. ورباسکوزیدهای حاصل از آب آسیاب زیتون: ارزیابی دسترسی زیستی و جذب روده ای آنها با استفاده از سیستم مدل هضم/کاکو{1}} آزمایشگاهی. J Food Sci 2011; 176: H48–H54.
16. جیا سی و همکاران. متابولیسم اکیناکوزید، یک آنتی اکسیدان خوب، در موش: جداسازی و شناسایی متابولیت های صفراوی آن Drug Metab Dispos 2009; 37: 431-438.
17. نجار IA و همکاران. تعدیل فعالیت P-گلیکوپروتئین ATPase توسط برخی از ترکیبات گیاهی. Phytother Res 2009; 24: 454-458.
18. Walgren RA و همکاران. جریان فلاونوئید رژیمی کوئرستین 4'-بتا-گلوکوزید از طریق تک لایه‌های سلولی کاکو{4} روده انسان توسط پروتئین مرتبط با مقاومت چند دارویی آپیکال-2. J Pharmacol Exp Ther 2000a; 294: 830-836.
19. Walgren RA و همکاران. جذب سلولی فلاونوئید رژیم غذایی کورستین 4'-بتا گلوکوزیداز توسط ناقل گلوکز وابسته به سدیم SGLT1. J Pharmacol Exp Ther 2000b; 294: 837-843.
20. Mihara K et al. متابولیسم گذر اول روده ای اپریزون در موش صحرایی. Pharm Res 2001; 18: 1131-1137.
21. Isacchi B et al. فعالیت ضد پردردی ورباسکوزید در دو مدل درد نوروپاتیک جی فارم فارماکول 2011; 63: 594-601.
22. کوک تی جی و همکاران. نفوذپذیری روده کلرپیریفوس با استفاده از روش پرفیوژن روده تک گذر در موش صحرایی. سم شناسی 2003; 184: 125-133.23. کومار YS و همکاران. تعامل دارویی گیاهی با واسطه P-گلیکوپروتئین و سیتوکروم P{9}. Drug Metabol Drug Interact 2010; 25: 3-16.
24. Walle UK و همکاران. انتقال جنستئین- 7-گلوکزید توسط سلول های CACO-2 روده انسان: نقش بالقوه برای MRP2. Res Commun Mol Pathol Pharmacol 1999; 103: 45-56.
25. ایتو ک و همکاران. بیان سطح آپیکال/پایه جانبی ناقلین دارو و نقش آن در انتقال وکتوری دارو Pharm Res 2005; 22: 1559-1577.
26. لایتینن ال و همکاران. کشت سلولی Caco{1}} در ارزیابی جذب روده ای: اثرات برخی داروها و ترکیبات طبیعی همزمان در ماتریس های بیولوژیکی. (دانشگاه هلسینکی، فنلاند، 2006) پایان نامه دانشگاهی، صص 1-66.
27. Scambia G و همکاران. کوئرستین اثر آدریامایسین را در رده سلولی سرطان پستان انسانی مقاوم به چند داروی MCF-7 تقویت می‌کند: P-گلیکوپروتئین به عنوان یک هدف احتمالی. Cancer Chemother Pharmacol 1994; 34: 459-464.
28. چوی دی اچ و همکاران. تأثیر میریستین، یک آنتی اکسیدان، بر فارماکوکینتیک لوزارتان و متابولیت فعال آن، EXP-3174، در موش: نقش احتمالی سیتوکروم P{2}}A4، سیتوکروم P450 2C9 و P- مهار گلیکوپروتئین توسط میریستین جی فارم فارماکول 2010; 62: 908-914.
29. تانینو تی و همکاران. پاکلی تاکسل{1}}'- پیش داروی اتیل کربنات می تواند جریان سلولی با واسطه گلیکوپروتئین P را برای افزایش سمیت سلولی دارو دور بزند. Pharm Res 2007; 24: 555-565.
30. هالمن پی سی و همکاران. جذب گلیکوزیدهای کوئرستین و کورستین رژیم غذایی در داوطلبان سالم ایلئوستومی Am J Clin Nutr 1995; 62: 1276-1282.
31. Kellett GL و همکاران. جزء انتشاری جذب گلوکز روده ای با جذب GLUT2 ناشی از گلوکز به غشای تخته قلم مو انجام می شود. Biochem J 2000; 350: 155-162.
32. ماده ک و همکاران. مرتب‌سازی پروتئین‌های غشای پلاسمایی درون‌زا از دو مکان در سلول‌های اپیتلیال روده انسان کشت‌شده (Caco{2}}) انجام می‌شود. سلول 1990; 60: 429-437.
33. محراوی ل و همکاران. حضور و بیان افتراقی mRNA های ناقل هگزوز SGLT1، GLUT1، GLUT2، GLUT3 و GLUT5 در کلون های سلولی Caco در رابطه با رشد سلولی و مصرف گلوکز. Biochem J 1994; 298: 629-633.
34. مزونرو جی و همکاران. بیان وابسته به قند ناقل فروکتوز GLUT 5 در سلول های Cac{3}}. Biochem J 1995; 312: 757-762.
35. Walgren RA و همکاران. انتقال کوئرستین و گلوکزیدهای آن از طریق سلولهای کاکو{1}} اپیتلیال روده انسان. Biochem Pharmacol 1998; 55: 1721-1727.
36. یوشیکاوا تی و همکاران. بیان مقایسه ای ناقلان هگزوز (SGLT1، GLUT1، GLUT2، و GLUT5) در سراسر دستگاه گوارش موش. Histochem Cell Biol 2011; 135: 183-194.
37. Funes L et al. اثرات ورباسکوزید، یک گلیکوزید فنیل پروپانوئید از گیاه لیمو، بر غشاهای مدل فسفولیپیدها. Chem Phys Lipids 2010; 163: 190-199.
38. نیلسون AP و همکاران. تأثیر ترکیب ماتریکس شکلات بر دسترسی زیستی فلاوان{1} کاکائو در شرایط آزمایشگاهی و فراهمی زیستی در انسان. J Agric Food Chem 2009; 57: 9418-9426.
39. گائو اس و همکاران. محتوای بسیار متغیر فنولیک ها در محصولات مخمر سنت جان بر انتقال آنها در مدل سلولی کاکو{1} روده انسان تأثیر می گذارد: منطق دارویی و بیودارویی برای استانداردسازی محصول. J Agric Food Chem 2010; 58: 6650–6659.
40. Schramm DD et al. اثرات مواد غذایی بر جذب و فارماکوکینتیک فلاوانول های کاکائو Life Sci 2003; 73: 857-869.
41. لوران سی و همکاران. اتانول و ماتریکس شراب بدون پلی فنول، تمایز سلول‌های کاکو{1} روده انسان را تحریک می‌کنند. تأثیر ارتباط آنها با عصاره هسته انگور غنی از پروسیانیدین. J Agric Food Chem 2005; 53: 5541–5548.
42. آرتورسون پی و همکاران. ارتباط بین جذب داروی خوراکی در انسان و ضرایب نفوذپذیری ظاهری دارو در سلول‌های اپیتلیال داخلی انسان (Caco{1}}). Biochem Biophys Res Commun 1991; 175: 880-885.

43. کرسپی وی و همکاران. مقایسه میزان جذب روده ای کوئرستین، فلورتین و گلوکزیدهای آنها در موش صحرایی J Nutr 2001a; 131: 2109-2114.

44. کرسپی وی و همکاران. فراهمی زیستی فلورتین و فلوریدزین در موش صحرایی J Nutr 2001b; 131: 3227-3230.