روش های تشخیص PD-L1 برون رحمی در گردش

تماس:joanna.jia@wecistanche.com/ واتساپ: 008618081934791

هنوز فقدان روش های پذیرفته شده و جریان اصلی برای تشخیص PD-L1 اکسورومال در گردش وجود دارد. روش های تشخیص exosome سنتی مانند آزمون ایمونوسوربنت مرتبط با آنزیم (ELISA) و تجزیه و تحلیل جریان می تواند برای تشخیص PD-L1 در exosomes در گردش استفاده می شود، و ELISA در حال حاضر رایج ترین روش استفاده می شود. روش الیزا می تواند به طور کمی محتوای PD-L1 را در اکسوزوم های در گردش تشخیص دهد و کار آن آسان است. از فلوسیتومتری می توان برای تشخیص کمی PD-L1 اکسورومال در گردش در نمونه های بزرگ استفاده کرد، اما نیاز به تجهیزات تشخیص بالا دارد. با تحقیقات عمیق بر روی اکسوزوم ها، روش های تشخیص پروتئین های اکسوزومی و اسیدهای هسته ای نیز غنی سازی و توسعه می یابند و برخی روش های جدید در زمینه تشخیص PD-L1 در اکسوزوم های در گردش (شکل) وارد شده اند.

تشخیصگردشاکسورومالPD-L1

1. PCR دیجیتال

با توجه به مقدار کمی اسید هسته ای موجود در اکسوزوم ها، تشخیص دقیق اعداد کپی ژن آن ها برای روش های تشخیص معمولی دشوار است. فناوری دیجیتال PCR یک روش تشخیص اسید هسته ای با حساسیت بسیار بالا و کمی سازی مطلق است. حساسیت آن می تواند به سطح یک مولکول تک اسید هسته ای برسد، بنابراین مزایایی در تشخیص محتوای اسید هسته ای اکسوزوم ها دارد. محققان از فناوری دیجیتال PCR برای تجزیه و تحلیل دقیق شماره کپی MRNA PD-L1 در اکسوزوم های پلاسمایی بیماران مبتلا به ملانوم و سرطان ریه سلول های غیر کوچک استفاده کردند و رابطه بین شماره کپی PD-L1 mRNA خارج از پلاسما و همبستگی ضد PD1 بین اثرات درمانی را آشکار کردند. معرفی تکنولوژی PCR دیجیتال به طور معنی داری توانایی تشخیص mRNA PD-L1 برون رحمی را بهبود بخشیده است که برای تحقیق PD-L1 برون رحمی اهمیت زیادی دارد. با این حال، ممکن است ناهماهنگی هایی بین محتوای mRNA PD-L1 اکسورومال و بیان پروتئین PD-L1 وجود داشته باشد. بنابراین، تشخیص mRNA PD-L1 اکسورومال به تنهایی ممکن است نقص های خاصی داشته باشد که نیاز به تحقیق و استیضاح بیشتری دارد.

سیستانچه بیابانی ضد سرطان از عصاره سیستانچه بهره می برد

2. الیزا

الیزا یک روش سنتی تجزیه و تحلیل ایمونولوژیک است، که اغلب برای تشخیص پروتئین های مولکولی کوچک در محیط پلاسما یا کشت استفاده می شود. حساسیت بالایی دارد و می تواند به طور کمی مورد تجزیه و تحلیل قرار گیرد. الیزا همچنین می تواند برای تشخیص پروتئین برون رحمی PD-L1 مورد استفاده قرار گیرد و می تواند به تشخیص کمی دسته های بزرگ نمونه ها دست یابد. کیت تشخیص پروتئین PD-L1 بر اساس اصل روش ELISA نیز در تشخیص کمی پروتئین PD-L1 اکسورومال پلاسما به کار گرفته شده است. چن و همکارانش یک سیستم تشخیص پروتئین PD-L1 برون رحمی بر اساس اصل الایزا ساختند که برای تشخیص پروتئین Exosomal PD-L1 مشتق شده از محیط کشت سلولی یا پلاسما مورد استفاده قرار گرفت. محدوده تشخیص خطی 0.2-12.0 ng/mL بود. الایزا روش خوبی برای تشخیص پروتئین Exosomal PD-L1 است که تشخیص کمی آن آسان است و قابلیت تکرار پذیری خوبی دارد. با این حال به دلیل وجود پروتئین آزاد PD-L1 در پلاسما، با دقت آن تداخل خواهد کرد. بنابراین این روش گردش خون را تشخیص می دهد. حساسیت و ویژگی پروتئین برون رحمی PD-L1 هنوز هم نیاز به کاوش بیشتر دارد.

ریشه سیستانچه هربا: ضد سرطان

3. روش تجزیه و تحلیل جریان

فلوسیتومتری اغلب برای تایپ و شمارش سلول ها یا دیگر ذرات زیستی معلق در مایع استفاده می شود، بنابراین این روش به تشخیص و شمارش اکسوزوم نیز وارد شده است. تئودوراکیس و همکارانش ابتدا از کروماتوگرافی برای جدا کردن اکسوزوم ها در ابتدا در پلاسمای بیماران مبتلا به سرطان سر و گردن استفاده کردند و سپس از تجزیه و تحلیل جریان برای تشخیص و شمارش اکسوزوم های مثبت PD-L1 استفاده کردند. بیان پروتئین PD-L1 به صورت شدت فلورسانس بیان شد. نتایج نشان می دهد که این روش در تشخیص پروتئین PD-L1 برون رحمی دارای تکرارپذیری خوبی است و تنوع درون فردی آن ۷٪ زمانی است که آزمون های موازی متعدد بر روی یک نمونه بیمار واحد انجام می شود. در عین حال محققان به منظور بررسی صحت روش، از تحلیل فلورسانس کنفوکتال به عنوان روش مرجع برای تشخیص پروتئین برون رحمی PD-L1 استفاده کردند. سه نمونه به صورت موازی مورد آزمایش قرار گرفتند و نتایج با هم مقایسه شدند و مشخص شد که نتایج فلوسیتومری و تحلیل فلورسانس کنفوکتال بسیار سازگار است که نشان می دهد فلوسیتومری روش دقیقی برای تجزیه و تحلیل کمی PD-L1 اکسورومال است. علاوه بر این، LUX و همکارانش نیز با موفقیت بیان پروتئین های Exosomal PD-L1 و c-Met را در سرم بیماران مبتلا به سرطان لوزالمعده با فلوسیتومتری تشخیص دادند، اما عملکرد روش تشخیص نیاز به مطالعه بیشتر دارد. در حال حاضر تحلیلگرهای جریان که به ویژه برای تشخیص اکسوزوم استفاده می شوند نیز راه اندازی شده اند، مانند تحلیلگر نانو جریان فوق حساس Apogee که برای تشخیص پروتئین اکسوزوم مناسب تر از تحلیلگرهای جریان سنتی است.

سود عصاره سیستانچه توبولوسا مکمل: ضد تومور و سرطان

4. سطح پیشرفته رامان تکنولوژی پراکنده

پراکنده سازی رامان با افزایش سطح (SERS) یک تکنیک طیف سنجی اثر انگشت بسیار حساس است که به طور گسترده ای در زمینه های زیست پزشکی مورد استفاده قرار گرفته است. در حال حاضر محققان از فناوری SERS برای تشخیص پروتئین Exosomal PD-L1 استفاده کرده اند. محققان ابتدا از مهره های مغناطیسی اصلاح شده با TiO2 برای exosomes غیر خاص adsorb در پلاسما استفاده کردند، و سپس از پروب های SERS مرتبط با آنتی بادی های PD-L1 برای اصلاح نانوذرات طلا استفاده کردند، و سپس نمونه های برون زا را با نانوذرات طلا جوجه کشی کردند. این ساختار یک ساختار پیچیده نانوذرات مهره-اکسوزوم-طلای مغناطیسی را تشکیل می دهد، و در نهایت از یک میدان مغناطیسی برای غنی سازی و جدا کردن مجموعه استفاده می کند، و سپس بر روی یک طیف سنج لیزری کنفوکل رامان برای تشخیص قرار می گیرد، تا به تشخیص اکسوزوم های مثبت PD-L1 پی رود. تشخيص محتواي بدن . این روش حساسیت تشخیص بالایی دارد، و کمترین حد تشخیص آن می تواند به ۱ پلاسمای اکسوزوم/میکروL PD-L1+ برسد. علاوه بر این، محققان از این روش برای تشخیص گروهی از نمونه ها با غلظت های مختلف استفاده کردند. نتایج نشان داد که شدت SERS ارتباط خطی با لگاریتم غلظت نمونه های اکسوزوم دارد که نشان می دهد روش تشخیص پایداری خوبی دارد و می تواند به طور مستقیم در پلاسما مورد استفاده قرار گیرد. تشخیص exosomes بدون گام انزوا exosome اضافی. در حال حاضر مطالعات کمی در مورد کاربرد مستقیم فناوری SERS برای تشخیص پروتئین Exosomal PD-L1 وجود دارد، اما تحقیقات در مورد کاربرد فناوری SERS برای تشخیص سایر اکسوزوم ها انجام شده است که مرجع مهمی برای تشخیص ارزش پروتئینی Exosomal PD-L1 نیز دارد.

کویر زندگی سیستانچه وضعیت رو به رشد

5. روش HOLMES-ExoPD-L1

روش HOLMES-ExoPD-L1 یک روش تشخیص جدید پروتئین برون رحمی PD-L1 است. در این روش یک آپتامر جدید MJ5C که پروتئین PD-L1 را هدف قرار می دهد طراحی شد که می تواند پروتئین PD-L1 را به طور کارآمد بر روی غشای اکسوزوم متصل کند و با گلیکوزیلاسیون پروتئین PD-L1 تداخل ندارد. در این روش، آپتامر MJ5C با برچسب فلورسنت و اکسوزوم ها برای اولین بار در یک مویرگی نازک به هم انکوبه شدند تا به یکدیگر متصل شوند و لیزر مادون قرمز به مویرگی نازک متمرکز شد تا گرادیان دمایی در مقیاس میکرون تشکیل شود. نرخ ترموفورسیس آپتامر آزاد MJ5C و مجتمع های آپتامر خارج رحمی MJ5C به طور قابل توجهی متفاوت بود، و تهی شدن ترموفورتیک آپتامر آزاد سریع تر از مجتمع اکسوزوم آپتامر بود. جدا کردن . بنابراین، تحت عمل نور تحریک، محتوای پروتئین Exosomal PD-L1 را می توان با تشخیص شدت فلورسانس aptamers با برچسب فلورسنت تعیین کرد. روش دارای حساسیت بالا و حد تشخیص 17.6 pg/mL است. علاوه بر این، مزایای حجم نمونه کمتر و زمان تشخیص کوتاه را نیز دارد. این یک روش بسیار اصلی برای تشخیص پروتئین برون رحمی PD-L1 است، که برای توسعه جدید PD-L1 روش تشخیص پروتئین Exosomal دارای ارزش روشنگر بسیار مهم است.

ضد تومور: مکمل سیستانچه

PD-L1 اکسوزومی چشم انداز کاربرد گسترده ای در زمینه ایمونوتراپی تومور بدخیم دارد و به یکی از نقاط مهم در زمینه تحقیقات اکسوزوم تبدیل شده است. در مقایسه با تشخیص بیان PD-L1 بافت، تشخیص PD-L1 اکسورومال در گردش آسان تر است برای به دست آوردن نمونه ها و انجام تشخیص بی درنگ، در حالی که اجتناب از مشکل هتروژنی بافت ناشی از نمونه برداری پاتولوژیک؛ PD-L1 اکسورومال نیز منجر به ایمنی تومور می شود. این یک علت مهم فرار است و مربوط به پیشرفت تومورهای بدخیم است، و ممکن است به یک شاخص مهم برای ارزیابی بیماری و پیش بینی پیش آگهی تبدیل شود. علاوه بر این، انتظار می رود سطح PD-L1 اکسوزما نیز برای غربالگری بیماران مناسب برای ایمونوتراپی ضد PD-L1 و پیش بینی پاسخ آنها به درمان مورد استفاده قرار گیرد. با این حال، هنوز فقدان روش های شناخته شده و موثر برای تشخیص exosomes در گردش PD-L1 وجود دارد. لازم است برای ایجاد exosome در گردش ایده آل با جداسازی ساده یا بدون، تقاضای نمونه کمتر، حساسیت بالا، تکرار پذیری خوب، و سیگنال های تشخیص کمتر مستعد است. روشی برای تشخیص PD-L1 در vivo. روش تشخیص در گردش PD-L1 اکسورومال هنوز نیاز به تحقیقات عمیق بیشتری دارد، اما اعتقاد بر این است که با توسعه و کاربرد روش های تشخیص جدید در آینده، PD-L1 اکسورومال در گردش قادر خواهد بود ایمونوتراپی ضد PD1 را بهتر هدایت کند و در تشخیص و درمان تومورهای بدخیم مورد استفاده قرار گیرد. نقش مهم تری داشته باشد.