اثر تروپی‌سترون بر استرس اکسیداتیو، SIRT1، FOXO3a و کلودین-1 در بافت کلیه موش‌های دیابتی ناشی از STZ

edmund.chen@wecistanche.com

خلاصه

تروپی‌سترون یک آنتاگونیست گیرنده HT3 5- است که اثر محافظتی در برابر DN دارد. هدف از این مطالعه بررسی مکانیسم‌های مولکولی احتمالی مرتبط با اثرات حفاظتی تروپی‌سترون در موش‌های دیابتی ناشی از STZ بود. حیوانات به 5 گروه مساوی تقسیم شدند. کنترل، تروپی‌سترون، دیابت، تروپی‌سترون به‌علاوه دیابت، و گلی‌بن‌کلامید به‌علاوه دیابت (n=7). برای القای دیابت نوع 1، یک تزریق STZ (55 میلی گرم بر کیلوگرم، داخل صفاقی) به حیوانات انجام شد. موش‌های دیابتی با تروپی‌سترون (3 میلی‌گرم/کیلوگرم) و گلی بن‌کلامید (1 میلی‌گرم/کیلوگرم) به مدت 2 هفته تحت درمان قرار گرفتند. با توجه به تجزیه و تحلیل انجام شده، دیابت منجر بهکلیه اختلال عملکرد (کاهش میزان فیلتراسیون گلومرولی و اوره و کراتینین ادرار و همچنین افزایش اوره و کراتینین پلاسما) و ناهنجاری در سیستم دفاعی آنتی اکسیدانی (کاهش TAC و افزایش MDA)، در مقایسه با گروه کنترل که با تروپی‌سترون از آن جلوگیری شد. رفتار. واکنش زنجیره ای پلیمراز کمی رونویسی معکوس و تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که بیان ژن SIRT1 کاهش یافته در حالی که بیان ژن FOXO3a و NF-kB و همچنین نسبت پروتئین FOXO3a/کل FOXO3a فسفریله شده و سطح پروتئین کلودین افزایش یافته است.کلیهمقایسه موش های دیابتی با گروه کنترل. در اینجا، نتایج این تحقیق نشان داد که درمان با تروپیسترون این تغییرات را معکوس کرد. علاوه بر این، تمام این تغییرات با تغییرات تولید شده توسط گلی بن کلامید به عنوان یک کنترل مثبت مقایسه شد. از این رو، تروپیسترون بهبود یافتآسیب کلیویبه دلیل نفروپاتی دیابتی احتمالاً با سرکوب استرس اکسیداتیو و تغییر سطوح SIRT1، FOXO3a و کلودین-1.

کلید واژه ها:آسیب کلیوی؛ عملکرد کلیه؛ بیماری کلیوی؛ کلیه; بافت های کلیه

CISTANCHE نارسایی کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

مقدمه

نفروپاتی دیابتی (DN) یک بیماری میکروواسکولار است که با پروتئینوری بیش از حد با عوارض 25 تا 40 درصد مشخص می شود (چن و همکاران 2011؛ ​​ریتز و همکاران 2010). تغییرات مورفولوژیکی و عملکردی شامل هیپرتروفی گلومرولی، تجمع بیش از حد ماتریکس خارج سلولی و گلومرولواسکلروز، و در نهایت، از دست دادنعملکرد کلیهدرکلیهبا هیپرگلیسمی و متعاقباً اختلال متابولیسم گلوکز همراه هستند (کانور و همکاران 2008؛ ویکرام و همکاران 2014). بنابراین، توجه ویژه ای به مدیریت یا درمان مؤثری که ممکن است برای مبارزه با بیماری در مراحل اولیه ضروری باشد، داده شده است. شواهد انباشته نشان می دهد که تولید گونه های اکسیژن فعال (ROS) به عنوان یک مسئله مستقیم هیپرگلیسمی و متعاقباً، تولید سایتوکاین های التهابی مکانیسم های اصلی در ایجاد عوارض دیابت هستند (بکمن و ایمز 1998؛ جیاکو و براونلی 2010؛ جیمز و همکاران. ؛ کیریتوشی و همکاران 2003). بدیهی است که عدم تعادل بین ظرفیت دفاعی پرواکسیدانی و آنتی اکسیدانی منجر به تجمع رادیکال های آزاد می شود که ممکن است به ماکرومولکول های سلولی از جمله DNA و همچنین اصلاح پروتئین و پراکسیداسیون لیپیدی آسیب برساند (Peluso and Raguzzini 2016).

سیرتوئین‌های پستانداران خانواده‌ای از داستیلازهای وابسته به NAD به علاوه هفت عضو هستند (SIRT{1}}). در میان آنها، SIRT1، اولین عضو خانواده، به طور گسترده مورد مطالعه قرار گرفته است (دونگ و همکاران 2014). مطالعات اخیر نشان داده است که SIRT1 نقش مهمی در تنظیم مرگ/طول عمر سلولی و همچنین پاسخ استرس حاد و مزمن در پستانداران با کاهش آسیب DNA، التهاب و آپوپتوز دارد (Hasegawa et al. 2013; Yun et al. 2012). ). چندین مطالعه به سطوح بالاتر کاهش فعالیت SIRT1 ناشی از ROS در افراد دیابتی اشاره کرده اند.کلیه ها،هم در داخل بدن و هم در شرایط آزمایشگاهی (Akhtar and Siragy 2019; Du et al. 2016; Kumar et al. 2014; Papadimitriou et al. 2015; Park et al. 2016; Shi and Huang 2018).

SIRT1 می تواند با تنظیم چندین پروتئین، مانند فاکتورهای رونویسی فاکتور هسته ای کاپاB (NF-kB) و خانواده FOXO، عمل خود را انجام دهد (برونت و همکاران 2004؛ لانگلی و همکاران 2002؛ موتا و همکاران 2004؛ یونگ و همکاران 2004). اخیراً اعلام شده است که SIRT1 متابولیسم گلوکز را با کمک به FOXOs تنظیم می کند (کوبیاشی و همکاران 2005). FOXO3a زیرگروهی از خانواده فاکتورهای رونویسی FOXO است که نقش مهمی در طول استرس اکسیداتیو دارند (Accili and Arden 2004). تغییرات FOXO3a توسط فسفوریلاسیون و استیلاسیون رخ می دهد که می تواند به طور همزمان در شرایط مختلف ظاهر شود. با توجه به ادبیات، SIRT1 می تواند FOXO3a را استیله کند، بنابراین سطح یوبی کوئیتیناسیون آن را افزایش می دهد و در برابر عوامل استرس زا محافظت می کند (Wang et al. 2017a). اطلاعات کمی در مورد مکانیسم تعاملات بین SIRT1 و FOXO در شرایط هیپرگلیسمی وجود دارد (یون و همکاران 2012). با این حال، پیشنهاد شد که SIRT1 فعالیت FOXO را احتمالاً با جابجایی هسته‌ای آن تعدیل می‌کند (Brunet et al. 2004) و همچنین رونویسی اختصاصی ژن را کنترل می‌کند (Kobayashi et al. 2005). بنابراین، انتقال FOXO3a از سیتوپلاسم به هسته عمدتاً ناشی از فعالیت استیل زدایی SIRT1، به ویژه در وضعیت استرس اکسیداتیو است (Yun et al. 2012).

وانگ و همکاران گزارش داد که درمان با گلوکز بالا بیان پروتئین SIRT1 و FOXO3a را در انسان تعدیل می کندکلیهسلول های اپیتلیال (وانگ و همکاران 2017b). علاوه بر این، FOXO3a به‌عنوان یک تنظیم‌کننده مثبت سیگنال‌دهی NF-kB عمل می‌کند، که در آن می‌توان از آن برای تأثیرگذاری بر استراتژی‌های بقای سلول در شرایط استرس استفاده کرد (Li et al. 2012). Claudin{4}} یک نشانگر اختصاصی سلولهای اپیتلیال جداری (PEC) فرضی است (Huby et al. 2009; Ohse et al. 2009; Rincon-choles et al. 2006) که به طور منفی با بیان SIRT1 در هر دو پروگزیمال مرتبط است. لوله ها و ناحیه گلومرولی نشان داده شد که کاهش SIRT1 در دیابت با تنظیم مثبت پروتئین اتصال محکم کلاودین{12}} در پودوسیت‌هایی که به آلبومینوری کمک می‌کنند، تأیید می‌شود (Gong et al. 2017; Hasegawa et al. 2013). از آنجایی که استرس اکسیداتیو، یک سایتوکین التهابی و واسطه‌های مولکولی آن‌ها موضوعات اصلی در اثر مضر دیابت هستند، عوامل آنتی‌اکسیدانی و ضد التهابی می‌توانند درمان‌های جدیدی را علیه DN ارائه دهند (Elmarakby and Sullivan 2012).

تروپی‌سترون یک آنتاگونیست گیرنده HT3 است که اخیراً در حال ظهور است که به عنوان یک داروی ضد استفراغ در طی شیمی‌درمانی شناسایی شده است (Barzegar-Fallah et al. 2015). چندین گزارش نشان داده‌اند که تروپی‌سترون می‌تواند اثرات ضدآپوپتوتیک، ضد دیابت، ضد سرطان، ضد چربی، محافظت عصبی و محافظت از قلب را ارائه دهد که احتمالاً از طریق مکانیسم‌های آنتی‌اکسیدانی و ضد التهابی انجام می‌شود (امین زاده 2017؛ اسدی و همکاران 2016؛ برزگر-فلاح و همکاران. برزگر فلاح و همکاران 2014؛ قلی زاده قلعه عزیز و همکاران 2019؛ رشیدی و بازی 2020). مطالعاتی وجود دارد که اثر ضد اکسیداتیو تروپی‌سترون را چه در شرایط in vitro و چه in vivo اثبات می‌کند، مانند اثر محافظتی تروپی‌سترون بر اختلالات اکسیداتیو ناشی از هیپرگلیسمی در سلول‌های PC12 (امین زاده 2017)، بهبود آسیب میتوکندری با کاهش نیترژیک. فعالیت سیستم در مغز (حاج میرزائیان و همکاران 2016)، یا کاهش استرس اکسیداتیو در برابر پیری مغز در موش (میرشفا و همکاران 2020).

اخیرا برزگر فلاح و همکاران. نشان داد که تروپیسترون گلوکز خون را بهبود می بخشد و همچنینعملکرد کلیههمانطور که با کاهش نیتروژن اوره سرم خون (BUN)، سطح کراتینین سرم، و دفع آلبومین ادرار مشهود است. علاوه بر این، محتوای مالون دی آلدئید (MDA)، سطح گلوتاتیون (GSH)، سوپراکسید دیسموتاز (SOD) و فعالیت کاتالاز (CAT) در حیوانات دیابتی تحت درمان با تروپیسترون بهبود یافته است (برزگر-فلاح و همکاران 2015). با این حال، هیچ مدرک قوی دیگری در مورد مدولاسیون DN توسط تروپیسترون و مکانیسم مولکولی آن وجود ندارد. بنابراین، این مطالعه با هدف بررسی اولاً: اثرات تروپی‌سترون بر واسطه‌های مولکولی شامل SIRT1، NF-κB، و FOXO3a و همچنین کلودین{5}} که پروتئینی است که در اتصالات اپیتلیال محکم دخیل است و نقش مهمی را ایفا می‌کند، بررسی می‌شود. نقش اصلی درکلیهنفروپاتی دیابتی؛ دوم، مقایسه اثر تروپی‌سترون با داروی استاندارد ضد دیابت به بازار، گلی بن کلامید، به منظور یافتن یک عامل مفیدتر و ایمن‌تر به عنوان یک داروی ضد دیابت استاندارد طلایی.

سیستانچ بیماری کلیوی/کلیوی را بهبود می بخشد

مواد و روش هااین مطالعه بر اساس اصول مراقبت از حیوانات آزمایشگاهی در دانشگاه علوم پزشکی ارومیه انجام شد. تأییدیه اخلاقی از دستورالعمل اتحادیه اروپا 2010/63/EU برای آزمایش‌های حیوانی بر اساس دستورالعمل‌های کمیته اخلاق پزشکی، وزارت بهداشت، ایران (IR.UMSU.REC.1397.291) به دست آمد. 35 موش صحرایی نر نژاد ویستار (270-230 گرم وزن، 3 تا 4 ماهگی) به 5 گروه (هفت موش در هر گروه) تقسیم شدند. 2. گروه تروپی‌سترون: موش‌ها به مدت 2 هفته تروپی‌سترون را به صورت داخل صفاقی دریافت کردند. 3. گروه دیابت: دیابت با تزریق استرپتوزوتوسین (STZ) در موش صحرایی القا شد. 4. گروه دیابت تروپی‌سترون به اضافه: موش‌ها 3 میلی‌گرم بر کیلوگرم تروپی‌سترون (قلی زاده قلعه عزیز و همکاران 2019) را به مدت 2 هفته پس از القای دیابت به صورت داخل صفاقی دریافت کردند. 5. گروه دیابت گلی بن کلامید به اضافه: موش ها 1 میلی گرم بر کیلوگرم گلی بن کلامید (قلی زاده قلعه عزیز و همکاران 2019) به مدت 2 هفته پس از القای دیابت به صورت داخل صفاقی دریافت کردند.

القای دیابتاسترپتوزوتوسین (mg/kg 50) به صورت داخل صفاقی در یک دوز برای القای دیابت در موش‌ها تزریق شد. بر اساس این روش، دیابت نوع I 72 ساعت پس از تزریق در موش‌ها ایجاد شد. دیابت با ایجاد یک آسیب جزئی با استفاده از لانست در دم موش‌های روزه‌دار تشخیص و تایید شد و سپس یک قطره خون روی نوار گلوکومتر گذاشته شد. سپس با گلوکومتر (Boehringer Mannheim Indianapolis, IN) اندازه گیری شد و سطح گلوکز خون بالای 300 میلی گرم در دسی لیتر به عنوان شاخص القای دیابت در نظر گرفته شد. پس از 2 هفته و 24 ساعت قبل از بیهوشی، موش ها یکی یکی در قفس های متابولیک قرار داده شدند و ادرار جمع آوری شد. سپس نمونه‌های ادرار بلافاصله با سطح شفاف نمونه‌ها در دمای 20- درجه برای آنالیز اوره و کراتینین سانتریفیوژ شدند. سپس موش‌ها با تزریق داخل صفاقی کتامین (60 میلی‌گرم بر کیلوگرم) و زایلازین (4 میلی‌گرم بر کیلوگرم) مخلوط شدند و وزن شدند. سپس حفره شکمی باز شد. خون توسط یک سرنگ باریک از قلب گرفته شد و با اتیلن دی آمین تترا استیک اسید (EDTA) مخلوط شد و در 4000 × گرم به مدت 20 دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس، پلاسمای تولید شده در دمای 80- درجه برای اندازه گیری بعدی اوره، کراتینین و ظرفیت آنتی اکسیدانی کل (TAC) ذخیره شد. هر دوکلیه هاحيوانات برداشته شدند، با سرم فيزيولوژيك سرد شسته و وزن شدند. چپکلیهبافت ها توسط Ultra Turrax (T10B، IKA، و آلمان) در یک محلول حاوی RNAase برای آزمایش سطوح بیان SIRT1، NF-kB، و FOXO3a با استفاده از روش Real-time-PCR همگن شدند. درستکلیهبرای اندازه‌گیری MDA و آنالیز وسترن بلات (FOXO3a کل و فسفریله و کلودین-1) در 80- درجه منجمد شد.

قند خون ناشتادر پایان پروتکل، پس از ناشتایی یک شبه (14 تا 18 ساعت)، نمونه خون از نوک دم گرفته شد و سپس با استفاده از گلوکومتر دیجیتال (Elegance، CT-X10، Frankenberg، آلمان)، سطح گلوکز اندازه‌گیری شد.اوره و کراتینین ادرار و پلاسمابرای این منظور، سطوح اوره و کراتینین ادرار و پلاسما توسط کیت های اقتصادی مخصوص اندازه گیری اوره و کراتینین (بیوتکنیکال؛ Varginha، Minas Gerais، برزیل) اندازه گیری می شود.میزان فیلتراسیون گلومرولینرخ فیلتراسیون گلومرولی (GFR) بهترین شاخص کلی استعملکردهای کلیه، که با محاسبه ترخیص کالا از گمرک کراتینین (GFR=[UCr × V]/SCr) و با استفاده از غلظت کراتینین پلاسما و ادرار و سرعت یا حجم جریان ادرار ارزیابی شد.

مالون دی آلدئید و ظرفیت آنتی اکسیدانی کلMDA به عنوان محصول نهایی پراکسیداسیون لیپیدی از طریق واکنش با اسید تیوباربیتوریک (سیگما آلدریچ، ایالات متحده آمریکا) درکلیهنمونه ها مطابق پروتکل سازنده (Esterbauer and Cheeseman 1990). به طور خلاصه، 0.3-0.4 گرم ازبافت کلیهدر KCl سرد یخی (15{4}} میلی مولار) همگن شد و سپس در 3000 × گرم به مدت 10 دقیقه سانتریفیوژ شد. سپس 5/0 میلی‌لیتر از مایع رویی با 3 میلی‌لیتر اسید فسفریک (1 درصد حجمی) ترکیب شد و پس از اختلاط گردابی، 2 میلی‌لیتر TBA 7/6 گرم در لیتر به نمونه‌ها متصل شد. نمونه ها به مدت 45 دقیقه در دمای 100 درجه حرارت داده شدند. پس از خنک شدن روی یخ، n-بوتانول (3 میلی لیتر) ترکیب شد و محصولات بیشتر در 3000 × گرم به مدت 10 دقیقه دیگر سانتریفیوژ شدند. سپس جذب محصولات در طول موج 532 نانومتر از طریق اسپکتروفتومتری در نظر گرفته شد. سطح جذب با منحنی استاندارد مقایسه شد. TAC توسط یک کیت وضعیت آنتی اکسیدانی تام Randox اندازه گیری شد، که در آن ABTS 2,2'-azino-bis (3-اتیل بنزوتیازولین-6-} سولفونات) با پراکسیداز و H2O2 انکوبه می شود که منجر به تولید کاتیون رادیکال ABTS می شود. . این یک رنگ سبز آبی پایدار است که با استفاده از یک تحلیلگر خودکار 600- نانومتری ارزیابی می‌شود (Amini et al. 2020).

سیستانچ درد کلیه/کلیه را بهبود می بخشد

طراحی پرایمر و PCR بلادرنگRNA ابتدا توسط کیت مربوطه (GENALL) استخراج شد و RNA متراکم از نظر کیفی (الکتروفورز) و کمی (نانو قطره) ارزیابی شد تا از استخراج و کاربرد RNA در تکنیک‌های مولکولی بعدی اطمینان حاصل شود. سپس cDNA مربوطه از تمامی نمونه های RNA استخراج شده سنتز شد. پرایمرهای ژن های هدف و ژن گلیسرآلدئید دهیدروژناز (GAPDH) به عنوان یک ژن خانه دار در سایت NCBI با استفاده از نرم افزار Generunner (جدول تکمیلی) مورد بررسی قرار گرفت. سپس بیان ژن با استفاده از پرایمرهای سنتز شده توسط کیت PCR و سپس تجزیه و تحلیل آماری داده ها مورد تجزیه و تحلیل قرار گرفت.

وسترن بلاتاز روش وسترن بلات برای تعیین سطح پروتئین FOXO3a (کل و فسفریله) و کلودین-1 درکلیهبرای ساخت ژل الکتروفورز از دو ژل تفکیک کننده و انباشته استفاده می شود. پس از تهیه ژل حل کننده و ریختن آن در قالب، پس از یک ساعت و پس از انباشته شدن ژل روی هم به آن اضافه شد. نمونه ها در چاه های ساخته شده توسط یک شانه مخصوص بارگذاری شدند. سپس توسط SDS-PAGE از هم جدا شدند. در عرض یک ساعت، تمام نمونه های بارگذاری شده به غشای PVDF منتقل شدند. سپس نمونه ها با بافر شیر بدون چربی 5 درصد شامل 0.1 درصد توئین 20 مسدود شدند و سپس با آنتی بادی های اولیه به مدت یک شب در دمای 4 درجه در انکوباتور شیکر انکوبه شدند. سپس غشاها با آنتی بادی ثانویه کونژوگه با پراکسیداز ترب کوهی انکوبه شدند. در نهایت، بتا اکتین به عنوان یک استاندارد داخلی برای تجزیه و تحلیل وسترن بلات استفاده شد. در پایان، اثرات نمونه های بلات شده بسته به سطح پروتئین هدف، بر روی فیلم رادیوگرافی در اتاق تاریک مورد ارزیابی قرار گرفت. برای تعیین کمیت پروتئین های هدف، نتایج اسکن فیلم توسط یک چگالی سنج نسبت به سطح اکتین محاسبه شد. آنتی بادی های مورد استفاده در سنجش وسترن بلات در جدول تکمیلی (شماره کاتالوگ و شرکت ها) نشان داده شده است.

تحلیل آمارینتایج به صورت میانگین ± SEM ارائه شد. تجزیه و تحلیل آماری با استفاده از SPSS 16 انجام شد.{1}}. مقایسه بین گروه ها با آزمون ANOVA و پس از آن آزمون تعقیبی توکی برآورد شد. تفاوت‌ها از نظر آماری معنی‌دار در 05/0p < 0="" در="" نظر="" گرفته="">

نتایج

تروپی‌سترون گلوکز خون ناشتا (mg/dl)، وزن کلیه (g) و شاخص کلیه (mg/g) را کاهش داد، در حالی که وزن بدن (g) را در موش‌های دیابتی ناشی از STZ افزایش داد.مشابه مطالعات قبلی در این کار، گروه‌های دیابتی در مقایسه با گروه شاهد هیپرگلیسمی شدید (P <{{0}}.001) را="" نشان="" دادند.="" مصرف="" تروپی‌سترون="" (p="">< 0.01)="" و="" گلی="" بن="" کلامید="" (0.05="">< p)="" به="" مدت="" 2="" هفته="" به="" طور="" قابل‌توجهی="" قند="" خون="" را="" در="" گروه‌های="" دیابتی="" ناشی="" از="" stz="" کاهش="" داد،="" اما="" همچنان="" به="" طور="" معنی‌داری="" بیشتر="" از="" گروه="" کنترل="" بود="" (001/0=""> P ). تفاوت معنی داری در وزن بدن (BW) بین گروه ها در ابتدای این مطالعه وجود نداشت (داده ها نشان داده نشده است). القای دیابت توسط STZ به طور معنی داری (001/0 > P) در نهایت (BW) در موش های صحرایی دیابتی کاهش یافت.کلیهوزن (KW) در ابتدا در بین گروه ها معنی دار نبود. اما در گروه دیابتی افزایش و پس از مداخلات کاهش یافت.کلیهشاخص (KW/BW) در مقایسه با گروه کنترل به طور قابل توجهی افزایش یافت (001/0 > P < {{{0}}})="" در="" دیابت="" دیابتی.="" جالب="" توجه="" است،="" پس="" از="" 2="" هفته="" از="" تجویز="" تروپیسترون="" و="" گلی="" بن="" کلامید،="" kw/bw="" تعدیل="" شد="" (05/0="" p=""><) (جدول="">

Tropisetron تجزیه و تحلیل بیوشیمیایی را در موش های دیابتی ناشی از STZ بهبود بخشیدمانند مطالعات قبلی، سطح اوره در پلاسما و ادرار گروه دیابتی به طور قابل توجهی بالاتر از گروه کنترل بود (P < {{0}}.001)="" .="" در="" گروه="" دیابت="" تروپیسترون="" پلاسما="" (p="">< 0.{{10}}01)="" و="" ادرار="" (p="">< 0.{20}}="" 5)="" سطح="" اوره="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" های="" دیابتی="" کاهش="" یافت.="" با="" این="" حال،="" اوره="" ادرار="" هنوز="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" کمتر="" از="" آن="" در="" گروه="" کنترل="" بود="" (p=""><0.01). تفاوت="" معنی="" داری="" در="" سطح="" اوره="" پلاسما="" بین="" تروپیسترون="" به="" اضافه="" دیابت="" و="" گروه="" کنترل="" وجود="" ندارد.="" سطح="" کراتینین="" پلاسما="" (001/0=""> P) و سطح کراتینین ادرار (05/0 > P) افزایش معنی‌داری را در موش‌های دیابتی نسبت به گروه کنترل نشان داد. تجویز تروپی‌سترون سطح کراتینین ادرار و پلاسما را در مقایسه با گروه دیابتی به طور معنی‌داری کاهش داد (001/0 > P). در حیوانات دیابتی، کلیرانس کراتینین، به عنوان شاخص میزان فیلتراسیون گلومرولی، به طور قابل توجهی کمتر از گروه کنترل بود (05/0 > P). درمان با تروپی سترون به طور قابل توجهی باعث افزایش کلیرانس کراتینین در مقایسه با گروه دیابتی شد (001/0 > P). نتایج مشابهی در گروه تحت درمان با گلی بن کلامید به دست آمد. با این حال، اوره پلاسما در گروه تحت درمان با تروپیسترون در مقایسه با گروه دیابتی گلی بن کلامید بسیار کمتر است (01/0 P <) (جدول="">

تروپی‌سترون محتوای TAC پلاسما را افزایش داد و سطح MDA را در موش‌های دیابتی ناشی از STZ کاهش داد.سطح MDA در گروه‌های کنترل، تروپی‌سترون، دیابت شیرین، تروپی‌سترون به اضافه دیابت و گلی‌بن کلامید به اضافه دیابت 1 ± 65/8 بود. به ترتیب 7.1، 3.6 ± 18.76 و 4.1 ± 16.89 نانومول بر میلی گرم پروتئین. مطالعه ما همراه با سایرین، بالاترین سطح MDA را در گروه دیابت نشان داده است که در مقایسه با گروه کنترل افزایش معنی‌داری را نشان می‌دهد (P < 0.{26}}{28}}="" 1).="" سطح="" mda="" در="" گروه="" تروپی‌سترون="" به‌علاوه="" دیابت="" و="" گلی‌بن‌کلامید="" به‌علاوه="" دیابت="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" دیابت="" (شکل="" 1a)="" کاهش="" معنی‌داری="" را="" نشان="" داد="" (p="">< {{30}}).="" سطوح="" tac="" در="" گروه="" کنترل،="" تروپی‌سترون،="" دیابت،="" تروپی‌سترون="" به="" علاوه="" دیابت="" و="" گلی="" بن="" کلامید="" به="" اضافه="" دیابت="" 0}.65="" ±="" 0="" بود.{{4{42}}}}3،="" {{44}="" 0.06="" ±="" 0.76،="" 0.08="" ±="" 0.26،="" 0.06="" ±="" 0.45="" و="" 0.08="" ±="" 0.57="" نانومول="" در="" میلی="" لیتر="" به="" ترتیب.="" سطوح="" tac="" در="" گروه="" دیابت="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" کنترل="" کاهش="" یافت="" (001/0=""> P)، همانطور که قبلا نشان داده شد. هر دو تجویز تروپیسترون و گلی بن کلامید به طور قابل توجهی (P<0.01) باعث="" افزایش="" سطح="" tac="" پلاسما="" در="" حیوانات="" دیابتی="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" دیابتی="" شدند="" (شکل="">

تروپی‌سترون باعث افزایش SIRT1 و کاهش بیان ژن‌های FOXO3a و NF-kB شد. بر این اساس، دیابت با کاهش معنی داری (0.65 ± 0.08) در بیان ژن SIRT1 (P < 0)="" همراه="" بود.01="" )="" و="" افزایش="" قابل="" توجهی="" (p="">< 0.001)="" در="" foxo3a="" (1.98="" ±="" 0.08)="" و="" nf-κb="" (1.71)="" ±="" 0.14)="" بیان="" ژن="" در="" مقایسه="" با="" گروه="" کنترل.="" درمان="" با="" تروپی‌سترون="" sirt1="" (0.3="" ±="" 88/0="" .="" 2a-c).="" نتایج="" مشابهی="" در="" حیوانات="" تحت="" درمان="" با="" داروی="" استاندارد،="" گلی="" بن="" کلامید،="" ارائه="">

تروپی‌سترون بیان پروتئین FOXO3a و کلودین-1 را کاهش دادبرای ارزیابی بیان پروتئین FOXO3a (کل و فسفریله) و کلودین- 1 پس از درمان با تروپیسترون و گلی بن کلامید، وسترن بلات درکلیهاز گروه های مختلف تجزیه و تحلیل داده ها افزایش قابل توجهی در نسبت پروتئین FOXO3a/کل FOXO3a فسفریله (4.6 ± 0.17) و کلودین-1 (3.{9}}2 ± 0.16. ) سطح پروتئین در گروه دیابتی در مقایسه با گروه شاهد (P < 0.001).="" تجویز="" تروپیسترون="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" باعث="" کاهش="" نسبت="" پروتئین="" فسفریله="" foxo3a/="" کل="" foxo3a="" (0.31="" ±="" 2.14)="" و="" سطح="" کلودین{19}}="" (2.4="" ±="" 0.12)="">کلیهاز موش های دیابتی (P < {{0}}.01).="" تیمار="" گلی="" بن="" کلامید="" به="" طور="" قابل="" توجهی="" هر="" دو="" نسبت="" پروتئین="" فسفریله="" foxo3a/کل="" foxo3a="" (2.57="" ±="" 0.5)="" (p=""><{15}.001) و="" کلودین{10}}="" (2.2="" ±="" 0.11)="" (0.11="" ±="" 2.2)="" را="" کاهش="" داد="" (p=""><0 سطح="" پروتئین="" در="" موش="" های="" دیابتی="" ناشی="" از="" stz="" (شکل="">

بحث یافته های مطالعه حاضر در بخش های زیر آورده شده است: تزریق یکبار T1DM ناشی از STZ با هیپرگلیسمی شدید، کاهش وزن وکلیهاختلال عملکرد، که با افزایش قابل توجه کراتینین و اوره پلاسما و کاهش قابل توجه کلیرانس کراتینین به عنوان شاخص GFR در مقایسه با گروه کنترل آشکار می شود. STZ تعادل اکسیداتیو را مختل کردکلیهبافتی که با افزایش MDA و کاهش محتوای TAC ثابت شد. تجزیه و تحلیل مولکولی بیشتر نشان داد که دیابت باعث کاهش mRNA SIRT1 و افزایش mRNA NF-kB و همچنین نسبت پروتئین FOXO3a/کل FOXO3a فسفریله و سطح پروتئین کلودین{4}} درکلیهاز موش های نر بهبود قابل توجه اوره، کراتینین، کراتینین

ترخیص کالا از گمرک، و همچنین mRNA ژن SIRT1، mRNA NF-kB، نسبت پروتئین FOXO3a/کل FOXO3a فسفریله، و پروتئین کلودین{4}}، مشابه حیوانات کنترل، در گروه تروپیسترون به علاوه دیابت مشاهده شد. DN که با چندین ویژگی مانند اختلال در مشخص می شودکلیهیکپارچگی ساختاری و عملکردی، افزایش درکلیهاندازه، و همچنین هیپرتروفی گلومرولی و توبولی، یکی از دلایل اصلی مرحله نهایی استبیماری کلیوی(Singh et al. 2018; Yaribeygi et al. 2018). آلبومینوری پیشرونده، کاهش GFR و افزایش فشار خون شریانی بارزترین علائم عملکردی مشاهده شده در بیماران دیابتی هستند (الزهرانی و همکاران 2020). اولین نشانگر DN آلبومینوری است که به دلیل آسیب پیشرونده گلومرولی به عنوان یک ویژگی مرکزی در شروع ایجاد می شود.آسیب کلیه(Elsherbiny et al. 2018). مطابق با یافته‌های ما، مطالعات قبلی تاکید کردند که DN با افزایش کراتینین سرم و اوره همراه است که نشان دهنده اختلال عملکردبافت کلیه(شارما و همکاران 2006؛ تانگ و همکاران 2018).

شواهد انباشته نشان می دهد که تولید رادیکال های آزاد به دلیل هایپرگلیسمی یک رویداد کلیدی در شروع و پیشرفت عوارض میکروواسکولار دیابتی از جمله DN است. تولید بیش از حد ROS با تأثیر بر ماکرومولکول ها، سلول ها و بافت ها به آسیب اکسیداتیو کمک می کند و منجر به توهین غیرقابل برگشت یا اختلالات عملکردی می شود (Kiritoshi et al. 2003).

MDA به عنوان یک نشانگر پراکسیداسیون لیپیدی توسط حمله رادیکال های آزاد به اسیدهای چرب غیراشباع غشایی تحریک می شود که در عوارض دیابت نقش داشته است (Pieme et al. 2017). وضعیت آنتی اکسیدانی کل توسط TAC که یک نشانگر زیستی برای تعیین استرس اکسیداتیو در بسیاری از شرایط پاتولوژیک است، برآورد شد. بنابراین، اختلالات MDA و TAC در بیماران دیابتی منعکس کننده تولید رادیکال های آزاد است که باعث ایجاد وضعیت استرس اکسیداتیو می شود (Peluso and Raguzzini 2016). به طور مداوم، نتایج این مطالعه افزایش MDA و کاهش سطح TAC را در موش‌های دیابتی نشان دادکلیه. با توجه به این واقعیت، کاهش استرس اکسیداتیو باعث بهبود عوارض دیابت از جملهآسیب کلیوی(الزهرانی و همکاران 2020؛ برزگر فلاح و همکاران 2015).

تروپی‌سترون، به‌عنوان یک 5-آنتاگونیست HT3 با فعالیت‌های آنتی‌اکسیدانی و ضدالتهابی، اثرات محافظتی در چندین وضعیت پاتولوژیک مانند دیابت نشان می‌دهد (برزگر-فلاح و همکاران 2015؛ رشیدی و بازی 2020). اثر محافظتی نفروپیسترون قبلاً در آزمایشات حیوانی شرح داده شده بود. در این دیدگاه، تروپیسترون DN را به روشی مستقل از گیرنده HT3 با جلوگیری از افزایش گلوکز خون، بهبود بخشید.کلیهسطوح MDA، CAT، SOD، Gpx و TNF- و کاهش دفع سیتوکین ادرار و آلبومینوری (برزگر-فلاح و همکاران 2015).

در راستای این موضوع، در تحقیقات کنونی، شواهدی ارائه شده است که نشان می‌دهد تروپی‌سترون هیپرگلیسمی، کاهش وزن و وضعیت استرس اکسیداتیو را تعدیل می‌کند که با کاهش MDA و افزایش محتوای TAC نشان داده می‌شود و بهبود می‌یابد.کلیهاختلال عملکرد (کاهش قابل توجه اوره و کراتینین پلاسما). گلی بن کلامید طبق مطالعات قبلی به عنوان یک داروی استاندارد استفاده شد (امینی و همکاران 2020). جالب توجه است که تفاوت معنی داری در پارامترهای ذکر شده در گروه های دریافت شده با گلی بن کلامید و تروپیسترون مشاهده نشد.کلیهاز موش های دیابتی با این حال، مکانیسم های دقیق پشت اثر محافظتی تروپیسترون در DN هنوز ناشناخته است. تا جایی که ما می دانیم، این اولین مطالعه ای است که نشان می دهد تروپیسترون بیان ژن SIRT1 را افزایش داده و نسبت پروتئین FOXO3a/کل FOXO3a فسفریله، NF-kB و سطح پروتئین کلودین{4}} را کاهش می دهد.کلیهاز حیوانات دیابتی

SIRT1 یک پروتئین داستیلاز کلاس III است که با فعال کردن چندین پروتئین کلیدی در بقای سلول ها در شرایط استرس زا نقش دارد. این یک عامل ضروری برای تعدیل بیان ژن در پاسخ به تولید ROS مانند فاکتورهای رونویسی NF-kB و foxo است (Brunet et al. 2004; Sengupta et al. 2011). در میان خانواده روباه، FOXO3a نقش مهمی در طول استرس اکسیداتیو با تنظیم مثبت چندین آنتی اکسیدان از جمله SOD و CAT دارد.

(Hasegawa et al. 2008; Kops et al. 2002). به طور خاص، غیرفعال شدن FOXO3a با کاهش استرس اکسیداتیو ناشی از CAT در طول شرایط هیپرگلیسمی همراه بوده است (Wang et al. 2017b). SIRT1 فعال شدن FOXO3a را با استیل زدایی مدیریت می کند و پاسخ سلولی به استرس اکسیداتیو را به طور مستقیم یا غیرمستقیم تعدیل می کند (Hori et al. 2013). اعلام شد که یک ارتباط عملکردی بین تنظیم SIRT1 و FOXO3 سیستم دفاعی آنتی اکسیدانی MnSOD واسطه وجود دارد (Tanaka et al. 2009؛ Zhang et al. 2015). بر این اساس، ژانگ و همکاران. (2015) نشان داد که ایکاریین از آسیب حاد ریه ناشی از ایسکمی روده/مسیر سیگنال دهی SIRT1/FOXO3 با واسطه ایسکمی/پرفیوژن مجدد روده با تنظیم مثبت بیان MnSOD محافظت می کند. گزارش‌های قبلی همچنین نشان داده‌اند که تنظیم مثبت SIRT1 نفروپاتی ناشی از سیس پلاتین را کاهش می‌دهد.کلیهآسیب ایسکمیک/ خونرسانی مجدد، و نفروپاتی دیابتی (Funk and Schnellmann 2013؛ Gu et al. 2016; Kim et al. 2011). به طور قابل‌توجه، کاهش SIRT1 ناشی از دیابت که منجر به تغییرات پاتوفیزیولوژیکی می‌شود، منجر بهکلیهسمیت (وانگ و همکاران 2017b). هاسگاوا و همکاران (2013) نشان داد که کاهش SIRT1 در لوله های پروگزیمال باعث شروع DN و منجر به آلبومینوری می شود. در این راستا، نتایج این تحقیق کاهش یافتکلیهبیان ژن SIRT1 در گروه دیابتی بنابراین فعال شدن SIRT1 باعث ایجاد مقاومت شدکلیهسلول های لوله ای به استرس سلولی (Kume et al. 2013). در مجموع، فعال‌کننده‌های SIRT1 به عنوان کاندیدای جالبی برای درمان دیابت توجه قابل توجهی را به خود جلب کرده‌اند (Song et al. 2018)

علاوه بر این، پژوهش حاضر پاسخ التهابی مشخصی را در بیماران دیابتی نشان دادکلیه هاهمانطور که با افزایش NF-kB مشهود است. این یک عامل تنظیم کننده ضروری است که با پاسخ ایمنی و التهاب مرتبط است (هیدن و گوش 2012). مطابق با یافته‌های این تحقیق، چندین مطالعه گزارش کرده‌اند که فعال‌سازی NF-kB و جابه‌جایی هسته‌ای آن هم در DN تجربی و هم در انسان افزایش می‌یابد (Alzahrani et al. 2020; Kuhad and Chopra 2009). علاوه بر این، افزایش SIRT1 به غیرفعال کردن NF-kB برای نجات سلول‌های پودوسیت از آسیب در بیماران دیابتی کمک می‌کند.کلیه(لیو و همکاران 2014). جالب توجه است که بیان بیش از حد SIRT1 بیان پروتئین را در اتصالات اپیتلیال محکم، یعنی کلودین-1 در موش‌های هیپرگلیسمی کاهش می‌دهد که با سطح پروتئینوری همبستگی دارد. کلودین فعال شده{3}} در پودوسیت ها عملکرد سد گلومرولی را از طریق کاهش بیان سیناپتوپودین یا پودوسین و در نتیجه آلبومینوری بدتر می کند (Hasegawa et al. 2013). این یافته ها در کلیه موش های دیابتی نیز تایید شد.

در اینجا، برای اولین بار نشان داده شد که در شرایط دیابتی، تجویز تروپیسترون منجر به افزایش بیان ژن SIRT1 و همزمان کاهش نسبت پروتئین FOXO3a/کل پروتئین FOXO3a فسفریله، NF-kB و سطح پروتئین کلودین{4}} شد. از این رو، بسیار منطقی است که چنین فعال‌سازی در SIRT1 و کاهش متعاقب آن در نسبت‌های پروتئین فسفریله FOXO3a/کل FOXO3a، NF-κB و کلودین-1 ممکن است تا حدودی مسئول بهبود در دیابتیعملکرد کلیه. محققان گزارش کردند که اثرات محافظتی تروپی‌سترون در DN به نظر می‌رسد 5-مستقل از گیرنده HT3 باشد زیرا گرانیسترون، مسدودکننده انتخابی دیگر گیرنده {{3}HT3، نتوانست از DN محافظت کند. اعلام شد که مکانیسم‌های آنتی اکسیدانی و ضد التهابی تروپی‌سترون ممکن است نقش مهمی در آن داشته باشندبافت کلیهحفاظت در دیابت (برزگر-فلاح و همکاران 2015). اخیراً، آزمایشگاه ما مشاهده کرد که درمان با تروپیسترون با افزایش بیان ژن GLUT2 و همچنین مسیر UCP2/ZnT8 باعث افزایش ترشح انسولین و کاهش سطح گلوکز خون شد (نادری و همکاران 2020). تروپی‌سترون به‌عنوان مسدودکننده گیرنده 5-HT3 باعث افزایش ترشح انسولین از رده سلول‌های بتا تولیدکننده انسولین پانکراس شد که منجر به هیپوگلیسمی شد (Heimes et al. 2009). بنابراین، به نظر می‌رسد تعدیل آزادسازی انسولین و متعاقباً هموستاز گلوکز ممکن است در پاسخ‌های آنتی‌اکسیدانی و ضد التهابی نقش داشته باشد.کلیهحفاظت.

مطابق با یافته های حاضر، تروپیسترون با افزایش بیان ژن SIRT1 در پیری در موش، آسیب اکسیداتیو را معکوس کرد (میرشافا و همکاران 2020). علاوه بر این، کاهش آسیب کبدی، سطوح پروتئین TNF- و IL{3}} در کبد موش‌های دیابتی به دنبال درمان مشترک با تروپی‌سترون مشاهده شد (امینی و همکاران 2020؛ قلی زاده قلعه عزیز و همکاران 2019). همچنین در تحقیق حاضر تروپی‌سترون پاسخ مشابهی به داروی استاندارد گلی بن کلامید نشان داد. بر این اساس، قرار گرفتن در معرض گلی بن کلامید باعث افزایش SIRT1 و کاهش نسبت پروتئین فسفریله FOXO3a/کل FOXO3a، NF-kB و کلودین{12}} در دیابتی ها شد.کلیه هادر مطالعه حاضر. گلی بن کلامید یک داروی شناخته شده است که به طور گسترده در درمان بیماران دیابتی با مهار کانال های K plus حساس به ATP استفاده می شود. از آنجایی که نتایج متناقضی در مورد اثر گلی بن کلامید در DN وجود دارد (اکبر و همکاران 2013؛ المالی و همکاران 2004؛ ناکامورا و همکاران 2000)، احتمالاً به دلیل دوز یا مدت درمان، این رویداد انگیزه ای برای معرفی داروی جدید برای بیماران دیابتی به عنوان یک عامل ایمن و موثر با عوارض جانبی کمتر

به طور کلی، تروپیسترون به طور موثر بهبود می یابدعملکرد کلیهدر DN احتمالاً با تغییر بیان SIRT1، نسبت پروتئین FOXO3a/کل FOXO3a فسفریله، NF-κB و کلودین{4}}. این مطالعه محدودیت هایی در حمایت از این موضوع داشت. به عنوان مثال، مطالعات مورفولوژیکی باید تلاش کنند تا شواهد بیشتری برای تایید تحقیق حاضر ارائه دهند. همچنین، محققان از مهارکننده‌های مولکولی برای تأیید مکانیسم دقیق مسیر سیگنالینگ استفاده نکردند.

نتیجه

در نتیجه، یافته‌های این مطالعه اثر محافظتی نفروپیسترون را در T1DM ناشی از STZ نشان داد. یافته‌های قابل توجه این تحقیق نشان داد که اثر محافظتی نفروپی‌سترون احتمالاً شامل تغییراتی در بیان SIRT1، FOXO3a، NF-κB و کلودین می‌شود. این داده ها می توانند برای تحقیقات بیشتر در این زمینه محرک باشند.