خلاصه

سابقه و هدف: گزارش شده است که ژل رویال باعث کاهش سنتز ملانین و مهار بیان پروتئین‌ها و ژن‌های مرتبط با ملانوژنز می‌شود. در این مطالعه، فعالیت ضد ملانوژنیک و رنگ‌دهی 10-هیدروکسی{3}}دکانوئیک اسید (10-HDA) از ژل رویال Apis mellifera را ارزیابی می‌کنیم.

برخی از مطالعات نشان داده اند کهسیستانچممکن است به جلوگیری از پیری پوست کمک کندکاهش استرس اکسیداتیووالتهاب، که هر دو می توانند به آن کمک کنندچین و چروک, نقاط تاریکو سایر علائم پیری با این حال، مشخص نیست که آیاسیستانچمی توانروشن کردن پوستیاکاهش رنگدانه. به طور خلاصه، در حالی که سیستانچ ممکن است اثرات مفیدی بر روی پوست داشته باشد، مشخص نیست که آیا می توان از آن به عنوان یک ماده قابل اعتماد استفاده کرد یا خیر.سفید شدن پوستعامل. همیشه بهتر است برای مشاوره در مورد راه های ایمن و موثر برای مراقبت از پوست خود با یک متخصص پوست مشورت کنید.

برای سفید کردن روی Cistanche Tubulosa کلیک کنید

برای اطلاعات بیشتر:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

مواد و روش ها:در این مطالعه، ما فعالیت سفیدکننده HDA را در مقایسه با تغییرات در فعالیت تیروزیناز داخل سلولی، محتوای ملانین و سطوح پروتئین مرتبط با تولید ملانین در سلول‌های ملانوم B16F1 پس از درمان با {{4} ارزیابی می‌کنیم. }}HDA. علاوه بر این، اثر سفید کننده پوست با استفاده از یک محصول کرم حاوی 0.5 درصد، 1 درصد و 2 درصد 10-HDA بر روی پوست موش (C57BL/6 J) به مدت 3 هفته برای مشاهده اثر DL مورد ارزیابی قرار گرفت. *-ارزش های.

نتایج:نتایج نشان داد که 10-HDA بیان پروتئین MITF (IC{1}}.86 میلی‌مولار) را در سلول‌های ملانوما B16F1 مهار می‌کند. تجزیه و تحلیل وسترن بلات نشان داد که 10-HDA فعالیت تیروزیناز و بیان پروتئین مربوط به تیروزیناز 1 (TRP-1)، TRP-2 و فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا (MITF) را مهار می‌کند. در سلول های ملانوما B16F1. علاوه بر این، 10-HDA اعمال شده بر روی پوست موش، میانگین شاخص سفیدی پوست (مقدار L) به طور قابل توجهی افزایش یافته است.

نتیجه گیری:داده‌های اعتبارسنجی پتانسیل 10-HDA را برای استفاده در سرکوب رنگدانه‌های پوست نشان داد. 10-HDA به عنوان یک کاندید برای مهار ملانوژنز پیشنهاد شده است، بنابراین می تواند به عنوان یک محصول آرایشی مراقبت از پوست توسعه یابد.

کلید واژه ها:ژل رویال، 10-هیدروکسی-2-دکانوئیک اسید، ملانوژنز، سفیدکننده پوست، مهارکننده ملانوژنز

زمینه

ژل رویال (RJ) یک ترشح زنبور کارگر جوان (Apis mellifera) است که توسط غدد هیپوفارنکس و فک پایین تولید می شود، ملکه زنبور عسل در حال رشد به طور انحصاری در طول زندگی خود با آن تغذیه می شد [1]. RJ به دلیل مقادیر فراوان پروتئین، اسیدهای آمینه آزاد، لیپیدها، ویتامین ها و قندها، ارزش غذایی بالایی را فراهم می کند [2، 3]. پروتئین های فعال زیستی RJ پروتئین های اصلی ژل رویال (MRJPs)، آپیسیمین و رویالیزینگ هستند که در چندین مطالعه اثرات تنظیم کننده ایمنی و ضد باکتریایی را نشان داده اند [4-6]. 10-هیدروکسی-2- دکانوئیک اسید (10-HDA) اسید چرب اصلی در RJ بود که دارای چندین اثر مفید برای سلامتی برای انسان است که فعالیت‌های ضد توموری، ضد باکتریایی و سیستم ایمنی را نشان داده است [7] -9]. 10-HDA فقط در RJ یافت می‌شود، بنابراین به عنوان نشانگر کیفیت محصولات ژل رویال استفاده شده است [10، 11]. چندین فعالیت دارویی RJ قبلاً توسط آزمایش های حیوانی تأیید شده است، و فعالیت های دارویی از جمله ضد اکسیداسیون [12، 13]، ضد التهاب [14]، ضد تومور [15، 16]، ضد آژنزیس [17]، اثرات ضد باکتری [18-20]، گشادکننده عروق [21، 22]، فشار خون بالا [21، 22]، ضد کلسترول خون [23]، محافظت از نفرو [24] و اثرات سفیدکننده پوست [25]. بر اساس ارزش غذایی و فواید آن برای سلامت انسان، محصولات تجاری RJ بیشتر و بیشتر در بازار موجود است.

رنگ پوست حیوانات و انسان با محتوای رنگدانه ملانین در پوست مرتبط است. نقش ملانین محافظت از پوست در برابر آسیب اشعه ماوراء بنفش است، اما تجمع بیش از حد ملانین باعث اختلالات جدی پوستی مانند تغییر رنگ و رنگدانه و تسریع پیری پوست می شود [26]. ملانین در ملانوسیت های واقع در درونی ترین لایه اپیدرم از طریق مکانیسم های ملانوژنز سنتز شد [27]. ملانوژنز یک مسیر بیوسنتزی پیچیده است که توسط تیروزیناز، پروتئین های 1 و 2 مربوط به تیروزیناز (TRP{5}} و TRP-2)، و فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا (MITF) کنترل می شود [28، 29]. تیروزیناز یک آنزیم محدود کننده سرعت برای کنترل سنتز ملانین است. اولین مرحله تولید ملانین، هیدروکسیلاسیون L-تیروزین به L{12}}،4-دی هیدروکسی فنیل آلانین (L-DOPA) و تبدیل L-DOPA به دوپاکینون است [30]. TRP{17}} تولید 5،6- دی هیدروکسی ایندول کربوکسیلیک اسید تبدیل شده از دوپاکروم، و محصول TRP-2، 5،6- دی هیدروکسی ایندول کربوکسیلیک اسید را به عنوان یک بستر برای TRP{24}} به ایندول{25}}،6-کینون کربوکسیلیک اسید تبدیل می‌شود که در نهایت منجر به سنتز ملانین می‌شود [31، 32]. مهار سنتز ملانین از طریق اختلال در ملانوژنز، راه اصلی برای پیشگیری یا بهبود اختلالات هیپرپیگمانته، مانند ملاسما و لکه‌های پیری است. بنابراین، جستجوی یک ترکیب بالقوه، ایمن و مؤثر برای کاهش آن عوامل در ملانوژنز در صنعت پزشکی و آرایشی قابل توجه است [25، 33، 34].

نشان داده شده است که ژل رویال می تواند سنتز ملانین را کاهش دهد [22]، اما ترکیب فعال اصلی یا مکانیسم زیربنایی این فعالیت های RJ ناشناخته باقی مانده است. در مطالعه قبلی، متوجه شدیم که 10-HDA می‌تواند فعالیت تیروزیناز را مهار کند (داده‌های منتشر نشده). در این مطالعه، اثر مهاری تیروزیناز توسط 10-HDA بیشتر مورد ارزیابی قرار گرفت. بیوسنتز ملانین در مدل‌های آزمایشگاهی با استفاده از کشت سلولی ملانوما B16F10 و مدل حیوانی موش با کاربرد پوست هر دو برای بررسی اثر مهارکننده ملانوژنز 10-HDA انجام شد.

مواد و روش ها

تهیه 10-HDA از ژل رویال

ژل رویال توسط شرکت Fu-Chang Beekeeping در Hualien تایوان تهیه شده است. لاروهای 3-روزانه به فنجان های سلول ملکه روی قاب ها منتقل شدند و هر قاب حاوی 30 فنجان ملکه بود. قاب ها به کندوهای زنبور عسل منتقل شدند و RJ 72 ساعت پس از انتقال لارو جمع آوری شد. هر کندو تقریباً 25،{5}} زنبور عسل دارد [35]. نمونه‌های RJ جمع‌آوری‌شده تا تجزیه و تحلیل بیشتر در 2-0 درجه نگهداری شدند. ژل رویال (40 گرم) با متانول (400 میلی لیتر × 4 × 30 دقیقه) رفلاکس شد و مایع رویی از طریق سانتریفیوژ در 4500 xg به مدت 30 دقیقه برداشت شد. مایع رویی تحت فشار کاهش یافته برای به دست آوردن عصاره خام (10.76 گرم) به نام RJM غلیظ شد. RJM معلق در متانول با کروماتوگرافی ستونی سیلیکاژل (SiO2 CC) خالص شد و سپس با شیب کلروفرم و متانول (300:1 تا 1:1) شسته شد تا ده بخش آنالیز شده توسط TLC بدست آید. فراکسیون های 4 و 5 لکه های قابل توجهی را نشان دادند و بنابراین آنها تحت تصفیه و تجزیه و تحلیل بیشتر قرار گرفتند. فراکسیون های 4 و 5 به طور مکرر توسط SiO2 CC (شود با کلروفرم/متانول، 300:1 تا 1:1) خالص شدند و بیشتر با استون متبلور شدند تا {30}هیدروکسی{31}}دکانوئیک اسید ({32}) بدست آید. } HDA). ساختار شیمیایی محصول خالص شده توسط آنالیز طیف جرمی NMR و GC تایید شد. تجزیه و تحلیل کمی HDA توسط کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC) با سیستم پمپاژ Waters 1525 مجهز به آشکارساز Water 2489، یک ستون RP{38}} GP250 (4.6 میلی متر) و یک Waters تعیین شد. نمونه گیری خودکار 717plus. فاز متحرک محلول متانول (60:40 v/v با آب فوق خالص و دیونیزه) بود که با اسید فسفریک تا pH 2.5 تنظیم شد، از طریق یک غشاء (0.45 میکرومتر) فیلتر شد و به مدت 5 دقیقه گاز زدایی شد. سرعت جریان فاز متحرک به 1.0 میلی لیتر در دقیقه تنظیم شد و تشخیص در 225 نانومتر انجام شد. محتوای 10HDA در نمونه خالص نهایی 90 درصد است که برای تجزیه و تحلیل بیشتر استفاده می شود.

کشت سلولی و 10-درمان‌های HDA

سلول‌های ملانوما B16F10 (شماره BCRC: 60031) در محیط Eagle اصلاح‌شده Dulbecco (DMEM) همراه با 10 درصد (v/v) سرم جنین گاو در دمای 37 درجه در انکوباتور مرطوب شده با CO{6}}کنترل شده (5 درصد) کشت داده شدند. . سلول ها با تراکم سلولی مناسب در یک 24-چاه یا یک صفحه چاه 6- کاشته شدند. پس از 1 روز انکوباسیون، سلول ها با غلظت های مختلف 10-HDA تیمار شدند. این محیط در گروه کنترل به جای 10-HDA استفاده شد. پس از آن، سلول ها برداشت و برای سنجش های مختلف مورد استفاده قرار گرفتند.

اندازه گیری زنده ماندن سلول

بقای سلولی با استفاده از روش {{0}}(4،{2}}دی متیل تیازول{3}} yl)-2،5 -دی فنیل تترازولیوم بروماید (MTT) اندازه گیری شد. روش گزارش شده توسط Carmichael و همکاران. [36]. سلول‌های ملانوم B16F1 در DMEM حاوی 10 درصد FBS و 1 درصد ال-گلوتامین (4 میلی‌مولار) در انکوباتور CO2 5 درصد در دمای 37 درجه کشت داده شدند. سلول های کشت شده (1 × 104 سلول در چاه) در یک 96-صفحه چاه، 10-HDA (محلول در دی متیل سولفوکسید (DMSO)) رقیق شده توسط محیط در غلظت های 1، 0.5، 0.1 کاشته شدند. mM و اسید کوجیک 1 میلی مولار به چاهک ها اضافه شد. از رسانه به عنوان خالی استفاده شد. پس از {26} ساعت انکوباسیون در دمای 37 درجه زیر 5 درصد CO2، محیط از هر چاهک خارج شد، سپس چاهک ها با PBS (1 مولار سالین بافر فسفات) دو بار شستشو شدند. 200 میکرولیتر محلول MTT (2 میلی گرم در میلی لیتر) به هر چاهک اضافه شد. واکنش با افزودن 100 میکرولیتر DMSO پس از {35} ساعت انکوباسیون پایان یافت. جذب هر چاهک در طول موج 540 نانومتر با استفاده از دستگاه سنجش ایمنی (BIO-TEK، Winooski، VT) اندازه گیری شد [20-23]. زنده ماندن سلول با معادله زیر تعیین شد: زنده ماندن سلولی (درصد)=[(AB)/C] × 100 درصد، الف: حجم جذب نمونه، ب: حجم جذب خالی، ج: حجم جذب کنترل.

اندازه گیری محتوای ملانین سلولی

محتوای ملانین درون سلولی سلول های ملانوما B16F10 با استفاده از روش اصلاح شده توصیف شده توسط Bilodeau و همکاران، [37] اندازه گیری شد. در پایان کشت سلول های ملانوما B16F10، سلول ها برداشت و با PBS شسته شدند. سلول های برداشت شده در بافر لیز سرد (20 میلی مولار فسفات سدیم (pH 6.8)، 1 درصد تریتون X{9}}، 1 میلی مولار فنیل متیل سولفونیل فلوراید (PMSF)، 1 میلی مولار اتیلن دی آمین تتراستیک اسید (EDTA) لیز شدند. پس از سانتریفیوژ در 15،{13}}×g به مدت 30 دقیقه، گلوله ها در 1 N NaOH حاوی 20 درصد DMSO به مدت 1 ساعت در 60 درجه حل شدند. محتوای پروتئین در مایع رویی با استفاده از روش برادفورد تعیین شد. جذب در 405 نانومتر اندازه‌گیری شد و محتوای ملانین در برابر استاندارد شناخته شده ملانین مصنوعی محاسبه شد. سطح ملانین ( درصد )=[(AB)/ C] × 100 درصد ; A: حجم جذب نمونه؛ ب: حجم جذب خالی. ج: کنترل حجم جذب

اندازه گیری فعالیت تیروزیناز سلولی

سنجش فعالیت تیروزیناز طبق روشی که قبلاً توسط مارتینز-اسپارزا و همکاران [38] شرح داده شد، با تغییرات جزئی انجام شد. سلول های ملانوما B16F10 در 20 میلی مولار فسفات سدیم (PH 6.8)، 1 درصد تریتون X{8}} و 1 میلی مولار فنیل متان سولفونیل فلوراید یا PMSF لیز شدند و در 14،{11} دور در دقیقه به مدت 15 دقیقه سانتریفیوژ شدند. محتوای پروتئین هر مایع رویی با استفاده از روش برادفورد با آلبومین سرم گاوی (BSA) به عنوان استاندارد پروتئین تعیین شد. فعالیت تیروزیناز در یک مخلوط واکنش (1 میلی لیتر) حاوی 50 میلی مولار بافر فسفات (pH 6.8)، 2 میلی مولار DOPA و 300 میکروگرم پروتئین رویی تعیین شد. پس از انکوباسیون در دمای 37 درجه به مدت 15 دقیقه، جذب در 475 نانومتر با استفاده از میکروپلیت ریدر اندازه گیری شد. فعالیت تیروزیناز ( درصد )=[(AB)/ C] × 100 درصد ; A: حجم جذب نمونه؛ ب: حجم جذب خالی. ج: کنترل حجم جذب

تجزیه و تحلیل وسترن بلات

سلول‌ها 3 بار در PBS سرد شسته و در بافر RIPA (pH 7.4، 5{5}} میلی‌مولار tris، 0.1 درصد SDS، 50 میلی‌مولار NaCl، 1 درصد NP{9}}، 1 میلی‌مولار PMSF، لیز شدند. 10 میکروگرم در میلی لیتر آپروتینین و 10 میکروگرم در میلی لیتر لوپپتین). مقدار کمی از لیز برای تعیین محتوای پروتئین با روش برادفورد با استفاده از آلبومین سرم گاوی به عنوان استاندارد استفاده شد. پروتئین ها (40 میکروگرم) در الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید 10 درصد SDS جدا شدند و روی غشای نیتروسلولوز Hybond-C Extra (Amersham Bioscience، UK) لکه شدند. غشاها با 5 درصد شیر بدون چربی در تریس بافر سالین (TBS) حاوی 10 میلی مولار Tris-HCl، pH 7.5 و 150 میلی مولار NaCl به مدت 30 دقیقه مسدود شدند. MITF، تیروزیناز، دوپاکروم توتومراز 2 (TRP{26}})، TRP{27}} و -اکتین (به عنوان کنترل داخلی) به ترتیب با استفاده از آنتی بادی های پلی کلونال خرگوش شناسایی شدند. غشاها با آنتی بادی ثانویه پلی کلونال بز به خرگوش IgG-H&L (HRP) انکوبه شدند. سپس تمام آنتی‌بادی‌های متصل با استفاده از سوبسترای نورتابی شیمیایی Super Signal® West Pico (ECL) (Thermo Scientific) شناسایی شدند. شدت سیگنال هر باند با یک سیستم چگالی سنج Gel Doc TM / Chemi Doc TM Universal hood II (Bio-Rad) مجهز به یکپارچه ساز و با کنترل داخلی نرمال شد.

تعیین فعالیت رنگدانه زدایی در موش

فعالیت depigmenting از طریق سیستم مدل موش توسط پروتکل اصلاح شده Tai و همکاران مورد سنجش قرار گرفت. [39]. این مطالعه توسط کمیته اخلاق دانشگاه ملی فورموسا (شماره تأیید: 10،401) تأیید شد. موش های ماده سیاه رنگ پنج هفته ای (C57BL/6 J)، با وزن 20 تا 25 گرم، از مرکز ملی آزمایشگاه حیوانات تایپه خریداری شدند. در تمام آزمایش‌ها، حیوانات در اتاقی با تهویه مطبوع با دمای ثابت (2±25 درجه) قرار گرفتند و در چرخه نور: تاریکی 12 ساعت نگهداری شدند. حیوانات به مدت 7 روز قبل از آزمایش سازگار شدند. پس از تراشیدن موهای خود، به حیوانات 1-روز استراحت داده شد. نمونه های ژل حاوی 10-HDA با پراکندگی داروها در وازلین تهیه شد. در مجموع چهل موش به طور مساوی به پنج گروه تقسیم شدند و هر گروه دو بار در روز با 0.1 گرم وازلین (شاهد)، 1 درصد اسید کوجیک در وازلین، 0.5 درصد، 1 درصد، یا 2 درصد 10-HDA در وازلین آغشته شدند. . کاربردها به مدت 3 هفته ادامه یافت و شاخص سفیدی پوست (مقدار L) هر روز در همان ناحیه پوست با یک ترکیب دارویی DermaLab® (Cotex Technology، دانمارک)، که یک ابزار رنگ سنجی است که از رنگ سفید با شدت بالا استفاده می کند اندازه گیری شد. LED به عنوان منبع نور. ابزار رنگ سنجی به کامپیوتر متصل است [40]. ما فقط پارامتر L را در نظر گرفتیم و مقدار L روشنایی نسبی بود که از سیاهی کامل (L=0) تا سفید کامل (L=100) متغیر بود. شاخص اولیه سفیدکننده پوست L-value از روی پوست هر موش قبل از استفاده با مواد آزمایش شده مورد سنجش قرار گرفت.

تحلیل آماری

تمام نتایج در این مطالعه با استفاده از روش مدل خطی عمومی موجود در بسته نرم افزاری سیستم تجزیه و تحلیل آماری نسخه 9.1 (موسسه سیستم تجزیه و تحلیل آماری، 2002) تجزیه و تحلیل شد. از آزمون چند دامنه ای دانکن [41] برای تشخیص تفاوت بین میانگین تیمارها استفاده شد. هر آزمایش در سه تکرار انجام شد.

نتایج

اثر 10-HDA بر زنده ماندن سلول های ملانوما B16F1

دوز بهینه از سنجش بقای سلولی توسط MTT در سلول های ملانوما B16F1 در شکل 1 نشان داده شده است. به وضوح نشان داد که 10-HDA برای سلول های ملانوم B16F1 در غلظت های 0.1، سیتوتوکسیک نبود. {8}}.5 و 1 میلی‌مولار و اسید کوجیک در غلظت 1 میلی‌مولار برای سلول‌های ملانوما سیتوتوکسیک نبود. زنده ماندن سلولی به طور قابل توجهی کاهش یافت (20 درصد کاهش) در سلول های ملانوما در معرض 1.5 میلی مولار 10-HDA (P <0).05) (داده ها نشان داده نشده است) و 5 mM کوجیک اسید. بنابراین، غلظت‌های 0.1، 0.5، 1 میلی‌مولار 10-HDA و 1 میلی‌مولار اسید کوجیک در آزمایش‌های بعدی اعمال شد.

مهار فعالیت تیروزیناز و سنتز ملانین در سلول های ملانوما B16F10 توسط 10-HDA

کوجیک اسید یک عامل ضد ملانوژنز موثر و شناخته شده است و به عنوان یک کنترل مثبت در این مطالعه استفاده شد. 10-HDA به طور قابل توجهی (p < 0.05) سنتز ملانین و فعالیت تیروزیناز را در مقایسه با کنترل سلول‌های ملانوم B16F1 درمان‌نشده سرکوب کرد. در دوز 1 میلی مولار، 10- HDA باعث کاهش 28 ± 2.4 درصدی در فعالیت تیروزیناز سلولی شد (P < 0.01) و 40.4 ± 3. کاهش {32}} درصدی در سنتز ملانین سلولی (001/0 > P)، در حالی که اسید کوجیک (1 میلی‌مولار) نیز به طور قابل‌توجهی فعالیت تیروزیناز و سنتز ملانین را به میزان 7/3 ± 4/14 درصد (05/0 > P) و 5/1 ± 3/19 درصد کاهش داد (P < 0.001)، به ترتیب (شکل 2 و 3).

سرکوب بیان پروتئین تیروزیناز، TRP-1 و TRP-2 در سلول های ملانوما B16F10 توسط 10-HDA

برای بررسی اینکه آیا 10-HDA می‌تواند بر بیان پروتئین ملانوژنیک تأثیر بگذارد، آنالیز وسترن بلات با استفاده از لیز سلول‌های ملانوم B16F10 تحت درمان با 10-HDA انجام شد (شکل 4). بیان 10-HDA به طور چشمگیری بیان تیروزیناز، TRP-1 و TRP-2 را در سلول‌های ملانوم B16F1 در مقایسه با سلول‌های درمان‌نشده مهار کرد (شکل 4b-d). اکتین، یک پروتئین خانه داری که به عنوان کنترل داخلی استفاده می شد، تغییری نشان نداد. 10-HDA سطح بیان پروتئین آنزیم های ملانوژنی مشابه اسید کوجیک را مهار می کند.

اثر مهاری 10-HDA بر سطح پروتئین مربوط به عوامل ملانوژنیک در سلول‌های B16F10

در طول فرآیند ملانوژنز در سلول‌های پستانداران، MITF نقش تنظیم‌کننده اصلی را در سنتز مسیر TRPs، از جمله TYR، TRP{{0}}، و TRP-2 ایفا می‌کند [25، 26]. تأثیر 10-HDA بر بیان MITF با استفاده از وسترن بلات ارزیابی شد. سلول های ملانوما B16F1{{1{17}}}} در معرض غلظت های مختلف 10- HDA (0.1، 0.5 و 1 میلی مولار) قرار گرفتند که منجر به کاهش بیان MITF توسط 10-HAD ( شکل 4e). مقدار IC50 برای 10-سرکوب HDA بیان MITF 0.{18}} میلی‌مولار برآورد شد. نتایج حاضر نشان می‌دهد که سطح پروتئین MITF توسط 10-HDA کاهش می‌یابد. اثر هیپوپیگمانتاسیون 10-HDA ممکن است نتیجه بیان ژن MITF با تنظیم پایین باشد، که سپس بیان پروتئین و ژن تیروزیناز، TRP-1، و TRP{23}} را سرکوب می‌کند.

ارزیابی فعالیت depigmenting 10-HDA in vivo از طریق موش

برای حدس زدن دوز انسانی، ما از موش به عنوان یک مدل حیوانی برای بررسی فعالیت رنگ‌دهی {0}}HDA استفاده کردیم. پس از اصلاح، موش ها با اسید کوجیک 1 درصد در وازلین، 0.5 درصد، 1 درصد یا 2 درصد 10-HDA در وازلین تحت درمان قرار گرفتند و شاخص روشن شدن پوست اندازه گیری و ثبت شد. برای این مطالعه in vivo، ما از اسید کوجیک به عنوان یک کنترل مثبت استفاده کردیم. اسید کوجیک به طور گسترده ای به عنوان یک عامل درمان رفع رنگدانه پوست در سراسر جهان استفاده می شود. پس از هفته اول درمان، میزان سفیدی پوست در موش‌های تحت درمان با 10- HDA نسبت به گروه شاهد افزایش معنی‌داری داشت و این افزایش تا پایان آزمایش ادامه داشت. فعالیت رنگدانه زدایی 0.5، 1 و 2 درصد 10-HDA با اسید کوجیک 1 درصد قابل مقایسه بود. نتایج ما نشان داد که 10-HDA توانست به میزان قابل توجهی سفید شدن پوست را در پوست موش با غلظت 0.5 درصد افزایش دهد (شکل 5). بنابراین، 10-به نظر می‌رسد که HDA کاندیدای خوبی به عنوان یک عامل سفیدکننده پوست برای درمان هیپرپیگمانتاسیون پوست باشد.

بحث

سنتز ملانین توسط آبشار آنزیمی پیچیده تیروزیناز، TRP1 و TRP2 کنترل می شود. درجه مهار ژن و پروتئین مربوط به ملانوژنز نقش مهمی در اثر بخشی یک عامل رنگدانه‌دار دارد که معمولاً در درمان هایپرپیگمانتاسیون یا محصولات آرایشی استفاده می‌شود [28]. برای روشن کردن اثر بازدارندگی واقعی 10-HDA بر ملانوژنز، محتوای ملانین و فعالیت تیروزیناز درون سلولی سلول‌های B16F10 در همان محدوده غلظت مورد سنجش قرار گرفت. نتایج در شکل. 2 و 3 نشان دادند که 10-HDA فعالیت مهاری بالاتری را در سنتز ملانین در سلول‌های B16F10 نسبت به اسید کوجیک نشان می‌دهد. داده‌ها نشان داد که 10- HDA ملانوژنز را در سلول‌های ملانوما B16F10 مسدود می‌کند.

ملانوژنز حداقل توسط سه پروتئین تنظیم‌کننده تیروزیناز، TRP1 و TRP2 در ملانوسیت‌های پستانداران تحت سلطه است [29]. بیان TRP-1، TRP-2، و MITF همگی در سلول‌های ملانوما B16F10 که با 10-HDA درمان شدند، مهار شدند. MITF یک فاکتور رونویسی اصلی برای تنظیم بیان آنزیم های ملانوژن مانند تیروزیناز، TRP{8}} و TRP-2 است [42، 43]. طبق داده‌های وسترن بلات (شکل 4)، سلول‌های پستانداران تحت درمان با 10-HDA بیان همه آنزیم‌های محدودکننده سرعت، از جمله تیروزیناز، TRP{15}} و TRP را کاهش می‌دهند. و از تجمع غیرطبیعی ملانین در طول فرآیند ملانوژنز جلوگیری می کند. این داده‌ها نشان می‌دهند که 10- HDA می‌تواند فرآیند ملانوژنز را با مهار بیان MITF مهار کند. در این مطالعه، ما نشان دادیم که 10-HDA با کاهش تولید پروتئین MITF، تیروزیناز و ملانین، ملانوژنز را مهار می‌کند. مسیر مهاری 10-HDA بر بیان MITF با سایر مهارکننده‌های ملانوژنز، مانند اسید کوجیک، آربوتین و اسید اسکوربیک متفاوت بود که بر بیان MITF تأثیری نداشت [44، 45]. این نشان می دهد که 10-HDA دارای پتانسیل بسیار خوبی برای استفاده به عنوان یک عامل سفیدکننده ایمن و طبیعی پوست برای لوازم آرایشی کاربردی است [46].

ملانوم، سرطان پوست از ترانس بدخیم تشکیل شده از ملانوسیت ها به وجود می آید. ملانوم هایی که در پوست، سطوح مخاطی و پوست آکرال به طور مزمن آسیب دیده از نور خورشید به وجود می آیند به دلیل فعال شدن بیش از حد BRAF و NRAS [47]، از دست دادن جایگاه CDKN2A [48]، بیان بیش از حد MITF [49]، کیت بیش فعال سازی [50] ایجاد می شوند. ]، mGluR1 را بیش از حد فعال کنید [51، 52]...و همکاران. در این مطالعه، 10-HDA می‌تواند بیان MITF را در سلول‌های ملانوما B16F10 مهار کند. این نشان داد که 10-HDA پتانسیل تشکیل داروی پوستی یا ضد سرطان در برابر ملانوما را دارد.

RJ برای بسیاری از آماده‌سازی‌های پوستی از جمله طراوت پوست، بازسازی پوست، جوان‌سازی، سوختگی برای التیام یا التیام زخم استفاده شده است [53، 54]. علاوه بر این، گزارش شد که برخی از اسیدهای چرب غیراشباع موجود در RJ می‌توانند سنتز ملانین و فعالیت تیروزیناز را مهار کنند که منجر به کاهش ملانوژنز می‌شود [55]، و ما نشان دادیم که اثر رنگ‌زدایی RJ ممکن است نتیجه حضور {{3 }}HDA. از آنجایی که پوست موش ها شبیه انسان است، بنابراین ما از موش ها به عنوان یک مدل حیوانی in vivo برای بررسی فعالیت رنگدانه کردن 10-HAD استفاده کردیم. همانطور که در شکل 5 نشان داده شده است، شاخص سفیدی پوست رنگ پوست در موش های تحت درمان با 10-HAD در مقایسه با گروه شاهد به طور قابل توجهی افزایش یافت. علاوه بر این، کویا-میاتا و همکاران. فعالیت محرک تولید کلاژن 10-HDA در رده‌های سلولی فیبروبلاست تولیدکننده فاکتور رشد تبدیل‌کننده- 1 (TGF{12}})، که یک عامل مهم برای تولید کلاژن است، ارزیابی شد [55] . بنابراین، 10-به نظر می‌رسد که HDA یک ترکیب طبیعی بسیار امیدوارکننده برای بازسازی پوست و درمان هایپرپیگمانتاسیون است.

نتیجه

10-HDA نه تنها فعالیت تیروزیناز، بلکه بیان آنزیم ملانوژن، از جمله تیروزیناز، TRP-1، و TRP-2 را با سرکوب MITF در سلول های ملانوما B16F10 مهار کرد. در نتیجه، رنگدانه ملانین در سلول های ملانوما B16F10 کاهش یافت. علاوه بر این، مدل حیوانی in vivo فعالیت رنگ‌دهی 10-HDA را در کاربرد موضعی نشان داد. این نتایج نشان می‌دهد که 10-HDA نامزدی دارد که می‌تواند یک مهارکننده ملانوژنز ایمن و طبیعی برای صنعت آرایشی باشد، که در آن جستجوی یک ترکیب طبیعی و مؤثر یکی از اهداف بسیار مهم برای توسعه یک محصول مراقبت از پوست بهتر است. .

اختصارات

10-HDA: 10-هیدروکسی-2-دکانوئیک اسید. BSA: آلبومین سرم گاوی. DMEM: مدیوم Eagle اصلاح شده Dulbecco. DMSO: دی متیل سولفوکسید. EDTA: اتیلن دی آمین تترا استیک اسید. L-DOPA: L{4}}،4- دی هیدروکسی فنیل آلانین. MITF: فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا. MRJP: پروتئین های اصلی ژل رویال. MTT: 3-(4،5-دی متیل تیازول{10}}ایل){11}}،{12}} دی فنیل تترازولیوم بروماید. PBS: فسفات بافر سالین. PMSF: فنیل متان سولفونیل فلوراید یا فنیل متیل سولفونیل فلوراید. TLC: کروماتوگرافی لایه نازک. TRP{14}}: پروتئین مربوط به تیروزیناز 1. TRP{17}}: پروتئین مربوط به تیروزیناز 2

قدردانی

از خانم لی یو لی زنبورداری فو چانگ برای تهیه ژل رویال تشکر می کنیم

منابع مالی

این کار توسط کمک مالی وزارت علوم و فناوری، تایوان، ROC (MOST102–2622-B-150-002-CC2 & MOST 103–2313-B-150 -001 -MY2 به سی سی پنگ).

در دسترس بودن داده ها و مواد

تمامی داده های تولید یا تجزیه و تحلیل شده در این مطالعه در این مقاله منتشر شده و فایل های اطلاعات تکمیلی آن گنجانده شده است.

مشارکت نویسندگان

ح‌ک‌چ آزمایش‌ها را تصور و طراحی کرد. HZS و IPL آزمایش ها را انجام دادند. CCP و PCK داده ها را تجزیه و تحلیل کردند. CCP، PCK، و JCL به معرف‌ها/مواد/ابزارهای آنالیز کمک کردند. CCP و IPL مقاله را نوشتند و تجدید نظر کردند. همه نویسندگان نسخه نهایی نسخه خطی را تایید کردند.

اطلاعات نویسندگان

CCP، دکتر بیوتکنولوژی، دانشیار گروه بیوتکنولوژی، دانشگاه ملی فورموسا. HZS، کارشناسی ارشد بیوتکنولوژی، فارغ التحصیل از گروه بیوتکنولوژی، دانشگاه ملی فورموسا. IPL، دکتر در بیوتکنولوژی، مدیر گروه تحقیق و توسعه، شرکت چالش زیستی، آموزشی ویبولیتین PCK، دکتر در شیمی، دانشیار گروه بیوتکنولوژی، دانشگاه ملی فورموسا. JCL، مدیر کل هانی بی تاون Co., Ltd.

تایید اخلاق

تمام آزمایش‌های حیوانی توسط کمیته اخلاق دانشگاه ملی فورموسا (شماره تأیید: 10401) تأیید شد و با دستورالعمل‌های مراقبت و استفاده از حیوانات آزمایشگاهی مطابقت داشت.

رضایت برای انتشار

در این بخش قابل اجرا نیست. این مقاله یک مطالعه بالینی شامل شرکت کنندگان انسانی نیست و این دستنوشته حاوی هیچ گونه داده بالینی فردی نیست.

منافع رقابتی

نویسندگان اعلام می کنند که هیچ منافع رقابتی ندارند

یادداشت ناشر

Springer Nature در مورد ادعاهای قضایی در نقشه های منتشر شده و وابستگی های سازمانی بی طرف باقی می ماند.

مشخصات نویسنده

1 گروه بیوتکنولوژی، دانشگاه ملی فورموسا، هووی، یونلین، تایوان. 2 گروه تحقیق و توسعه، شرکت چالش زیستی محصولات، آموزشی ویبولیتین، Douliou، Yunlin، تایوان. 3 Honey Bee Town Co., Ltd., No.77-2 Huaxi, 970 Hualien City, Taiwan.

دریافت: 9 مارس 2017 پذیرش: 21 جولای 2017

انتشار آنلاین: 9 مرداد 1396

منابع

1. Chen C, Chen S. تغییرات در اجزای پروتئینی و پایداری نگهداری ژل رویال در شرایط مختلف. مواد شیمیایی مواد غذایی 1995؛ 54: 195-200.

2. Takenaka T. ترکیب شیمیایی ژل رویال. علم زنبور عسل 1982؛ 3:69-74.

3. Schmitzova J, Klaudiny J, Albert S, Schroder W, Schreckengost W, Hanes J, Judova J, Simuth J. خانواده ای از پروتئین های اصلی ژله رویال زنبور عسل Apis Mellifera L. Cell Mol Life Sci. 1998؛ 54:1020-30.

4. Okamoto I، Taniguchi Y، Kunikita T، Kohno K، Iwaki K، Ikeda M. پروتئین اصلی ژل رویال 3 پاسخ های ایمنی را در شرایط in vitro و in vivo تعدیل می کند. زندگی علمی. 2003؛ 1: 2029-45.

5. Fujiwara S، Imai J، Fujiwara M، Yaeshima T، Kawashima T، Kobayashi K. یک پروتئین ضد باکتری قوی در ژل رویال. جی بیول شیمی. 1990؛ 265: 11333-7.

6. Bilikova J، Hanes J، Nordhoff E، Saenger W، Klaudiny J، Simuth J. Apisimin، یک پپتید جدید غنی از سرین والین از ژل رویال زنبور عسل (Apis Mellifera L.): تصفیه و خصوصیات مولکولی. FEBS Lett. 2002؛ 528: 125-9.

7. Townsend GF، Brown WH، Felauer EE، Hazlett B. مطالعات بر روی فعالیت ضد توموری در شرایط آزمایشگاهی اسیدهای چرب. IV. استرهای اسیدها با 10- هیدروکسی-2-دکانوئیک اسیدهای موجود در ژل رویال در برابر لوسمی قابل پیوند موش مرتبط هستند. Can J Biochem Physiol. 1961؛ 39: 1765-70.

8. Blum MS، Novak AF، Taber S. 10-Hydroxy-2Δ-decanoic acid، آنتی بیوتیک موجود در ژل رویال. علمی 1959؛ 130:452-3.

9. Vucevic D, Melliou E, Vasilijic S, Gasic S, Ivanovski P, Chinou I, Colic M. اسیدهای چرب جدا شده از ژل رویال پاسخ ایمنی با واسطه سلول های دندریتیک را در شرایط آزمایشگاهی تعدیل می کنند. INT Immunopharmacol. 2007؛ 7:1211-20.

10. ویور ن، قانون JH. ناهمگونی اسیدهای چرب ژل رویال طبیعت. 1960؛ 188:938-9.

11. Antinelli JF, Zeggane S, Davico R, Rognone C, Faucon JP, Lizzani L. Evaluation of (E)-10-hydroxides-enoic acid به عنوان پارامتر تازگی برای ژل رویال. مواد شیمیایی مواد غذایی 2003؛ 80:85-9.

12. Takeshi N، Reiji I. تهیه و خواص عملکردی عصاره آب و عصاره قلیایی ژل رویال. مواد شیمیایی مواد غذایی 2004؛ 84:181-6.

13. Takeshi N، Mizuho S، Rriji I، Hachiro I، Nobutaka S. فعالیت های آنتی اکسیدانی برخی از عسل های تجاری، ژل رویال و بره موم. مواد شیمیایی مواد غذایی 2001؛ 75: 237-40.

14. Martos MV، Navajas YR، López JF. خواص عملکردی عسل، بره موم و ژل رویال J Food Sci. 2008؛ 73: 117-24.

15. Hiroshi I, Masamitsu S, Kazuhiro T, Yoko A, Satoshi M, Hideaki H. محصولات زنبور عسل از رگزایی ناشی از VEGF در سلولهای اندوتلیال ورید ناف انسان جلوگیری می کنند. BMC Complement Altern Med. 2009؛ 9:1-10.

16. Tamura T, Fujii A, Kuboyama N. اثرات ضد توموری ژل رویال (RJ). نیپون یاکوریگاکو زاشی. 1987؛ 89:73-80.

17. پارک اچ ام، چو ام اچ، چو وای، کیم سی. ژل رویال باعث افزایش تولید کلاژن در پوست موش پس از اوارکتومی می شود. جی مد غذا. 2012؛ 15:568-75. doi: 10.1089/jmf. 2011.1888.

18. Izuta H، Shimazawa M، Tsuruma K، Araki Y، Mishima S، Hara H. محصولات زنبور عسل از رگزایی ناشی از VEGF در سلول های اندوتلیال ورید ناف انسان جلوگیری می کنند. BMC Complement Altern Med. 2009؛ 6:489-94.

19. Tseng JM، Huang JR، Huang HC، Tzen JTC، Chou WM، Peng CC. تولید آسان پپتید ضد میکروبی رویالیسین و آنتی بادی آن از طریق یک سیستم بدن روغن مصنوعی. بیوتکنول پروگ. 2011؛ ​​27:153-61.

20. Bílikova K، Huang SC، Lin IP، Šimuth J، Peng CC. ساختار و رابطه فعالیت ضد میکروبی رویالیزینگ، یک پپتید ضد میکروبی از ژل رویال Apis Mellifera. پپتیدها 2015؛ 68: 190-6.

21. Okuda H، Kameda K، Morimoto C، Matsuura Y، Chikaki M، Jiang M. مطالعات بر روی مواد شبه انسولین و مواد بازدارنده نسبت به آنزیم مبدل آنژیوتانسین در ژل رویال. میتسوباکی کاگاکو 1998؛ 19:9-14.

22. Shinoda M, Nakajin S, Oikawa T, Sato K, Kamogawa A, Akiyama Y. مطالعات بیوشیمیایی بر روی فاکتور گشادکننده عروق در ژل رویال. یاکوگاکو زاشی. 1978؛ 98: 139-45. 23. Vittek J. اثر ژل رویال بر لیپیدهای سرم در حیوانات آزمایشگاهی و انسان مبتلا به تصلب شرایین. تجربه. 1995؛ 51: 927-35.

24. ابراهیم ع، الدائم م.ع.، عبدالدائم م.م. اثر محافظتی عسل زنبور عسل و ژل رویال در برابر سمیت سیس پلاتین تحت مزمن در موش صحرایی سیتوتکنولوژی. 2016؛ 68:1039-48.

25. Han SM، Yeo JH، Cho YH، Pak SC. ژل رویال سنتز ملانین را از طریق کاهش بیان تیروزیناز کاهش می دهد. ام جی چین مد. 2011; 39:1253-60.

26. Gilchrest BA، Eller MS. آسیب نوری DNA باعث تحریک ملانوژنز و سایر پاسخ های محافظت کننده از نور می شود. J Investig Dermatol Symp Proc. 1999؛ 4:35-40.

27. D'Mello SAN, Finlay GJ, Baguley BC, Askarian-Amiri ME. مسیرهای سیگنالینگ در ملانوژنز Int J Mol Sci. 2016؛ 17:1144. doi: 10.3390/ijms17071144.

28. Kobayashi T، Vieira WD، Potter B، Sakai C، Imokawa G، Hearing VJ. تعدیل بیان پروتئین ملانوژنیک در حین تغییر از اتحادیه اروپا به پدیدآوری J Cell Sci. 1995؛ 108:2301-9.

29. Kim SS، Kim MJ، Choi YH، Kim BK، Kim KS، Park KJ، Park SM، Lee NH، Hyun G. تنظیم پایین تیروزیناز، TRP-1، TRP-2 و MITF بیان کیک های پرس مرکبات در ملانوم B16 F10 موش. Asian Pac J Trop Biomed. 2013؛ 3: 617-22.

30. Land EJ، Ito S، Wakamatsu K، Riley PA. ثابت‌های سرعت برای دو مرحله اول شیمیایی eumelanogenesis. پیگمنت سل Res. 2003؛ 16:487-93.

31. ین اف ال، وانگ ام سی، لیانگ سی جی، کو اچ اچ، لی سی دبلیو. مهارکننده(های) ملانوژنز از عصاره Phyla nodiflora. Evid Based Complement Alternat Med 2012; شناسه: 867494. doi 10.1155/2012/867494.

32. Tachibana M. MITF: جریانی که برای سلول های رنگدانه جریان دارد. پیگمنت سل Res. 2000؛ 3:230-40.

33. جونگ سو، کیم دی اچ، سون جی اچ، نام کی سی، آن دی یو، جو سی آر. ویژگی عملکردی فسویتین زرده تخم مرغ به عنوان یک مهارکننده ملانوژنز مواد شیمیایی مواد غذایی 2012؛ 135: 993-8.

34. Yeon HK، Youn OJ، Cho CW، Son DW، Park SJ، Rho JH، Sang YC. اثرات مهاری سینامیک اسید بر بیوسنتز ملانین در پوست. بیول فارم بول. 2008؛ 31:946-8.

35. Liu JR، Yang YC، Shi LS، Peng CC. خواص آنتی اکسیدانی ژل رویال با سن لارو و زمان برداشت مرتبط است. J Agri Food Chem. 2007؛ 56: 11447-52.

36. Carmichael J، DeGraff WG، Gazdar AF، Minna JD، Mitchell JB. ارزیابی یک روش رنگ سنجی نیمه خودکار مبتنی بر تترازولیوم: ارزیابی تست حساسیت شیمیایی سرطان Res. 1987؛ 47:936-42.

37. Bilodeau ML، Greulich JD، Hullinger RL، Bertolotto C، Ballotti R، Andrisani O. MP{1}} بیان ژن تیروزیناز و ملانوژنز را در ملانوسیت های تمایز یافته تحریک می کند. پیگمنت سل Res. 2001؛ 14:328-36.

38. مارتینز-اسپارزا ام، خیمنز-سروانتس دی، سولانو اف، لونزانو جی، جی سی سی بی. مکانیسم مهار ملانوژنز توسط فاکتور نکروز تومور آلفا در سلول های ملانوما موش B16/F10. Eur J Biochem. 1998؛ 255:139-46.

39. Ding HY، Chang TS، Shen HC، Tai SK. مهارکننده‌های تیروزیناز موش از Cynanchum Bungei و ارزیابی فعالیت رنگ‌دهی در شرایط آزمایشگاهی و درون تنی. اکسپرس پوست. 2011؛ ​​20:720-4.

40. Takiwaki H، Serup J. اندازه‌گیری پارامترهای رنگ پلاک‌های پسوریازیس با استفاده از طیف‌سنجی بازتابش باند باریک و رنگ‌سنجی tristimulus. Skin Pharmacol. 1994؛ 7:145-50.

41. مونتگومری دی سی. آزمایشات با یک عامل واحد: تجزیه و تحلیل واریانس. در طراحی و تحلیل آزمایشات. Montgomery, DC, Eds., John Wiley and Sons, New York, 1991; 75-77.

42. Park HY، Wu C، Yonemoto L، Murphy-Smith M، Wu H، Stachur CM. MITF بیان پروتئین کیناز Cb ناشی از cAMP را در ملانوسیت های انسانی واسطه می کند. Biochem J. 2006؛ 395:571-8.

43. Goding CR. Mitf از تاج عصبی تا ملانوم: انتقال سیگنال و رونویسی در اصل و نسب ملانوسیت. Genes Dev. 2000؛ 14: 1712-28.

44. Kim DS، Park SH، Kwon SB، Li K، Youn SW، Park KC. (-)-اپی گالوکاتچین-3- گالات و هینوکیتیول سنتز ملانین را از طریق کاهش تولید MITF کاهش می دهند. Arch Pharm Res. 2004؛ 27:334-9.

45. Choi YK، RhoYK، Yoo KH، Lim YY، Li K، Kim BJ. اثرات ویتامین C در مقابل مولتی ویتامین بر ملانوژنز: مطالعه مقایسه ای in vitro و in vivo. کارآموز جی درماتول. 2011؛ ​​49:218-26.

46. ​​Dynek JN، Chan SM، Liu J، Zha J، Fairbrother WJ، Vucic D. فاکتور رونویسی مرتبط با میکروفتالمیا یک تنظیم کننده رونویسی مهم مهارکننده آپوپتوز ملانوم در ملانوم است. سرطان Res. 2008؛ 68: 3124-32.

47. Curtin JA، Fridlyand J، Kageshita T، Patel HN، Busam KJ، Kutzner H، Cho KH، Aiba S، Bröcker EB، LeBoit PE، Pinkel D، Bastian BC. مجموعه‌ای از تغییرات ژنتیکی در ملانوما N Engl J Med. 2005؛ 353 (20): 2135-47.

48. Chan SH، Lim WK، Scott T Michalski ST، Lim JQ، NDB، Met-Domestici M، Young CNC، Vikstrom K، Esplin ED، Fulbright J، Ang MK، Wee J، Sittampalam K، Farid M، Lincoln SE، Itahana K، Abdullah S، BT، Ngeow J. حذف همی‌زیگوت ژرملین لوکوس CDKN2A-CDKN2B در بیمار مبتلا به سندرم Li-Fraumeni. npj پزشکی ژنومیک. 2016; doi:10.1038/ npjgenmed.2016.15

49. Hartman ML، Czyz M. MITF در ملانوما: مکانیسم های پشت بیان و فعالیت آن. Cell Mol Life Sci. 2015؛ 72:1249-60. doi:10.1007/s00018-014- 1791-0.

50. Antonescu CR، Busam KJ، Francone TD، Wong GC، Guo T، Agaram NP، Besmer P، Jungbluth A، Gimbel M، Chen CT، Veach D، Clarkson BD، Paty PB، Weiser MR. جهش L576P KIT در ملانوم مقعدی با بیان پروتئین KIT ارتباط دارد و به مهار کیناز خاص حساس است. Int J سرطان. 2007؛ 121:257-64.

51. عبدالدائم M، Funasaka Y، Komoto M، Nakagawa Y، Yanagita E، و همکاران. فارماکوژنومیک متابوتروپیک گیرنده گلوتامات زیرگروه 1 و تشکیل ملانوم بدخیم in vivo. جی درماتول. 2010؛ 37:635-46.

52. Ohtani Y، Harada T، Funasaka Y، Nakao K، Takahara C، و همکاران. زیرگروه گیرنده گلوتامات متابوتروپیک-1 برای رشد in vivo ملانوم ضروری است. انکوژن. 2008؛ 27:7162-70.

53. Kim J, Kim Y, Yun H, Park H, Kim SY, Lee KG, Han SM, Cho Y. ژل رویال مهاجرت فیبروبلاست های پوستی انسان را افزایش می دهد و سطح کلسترول و اسفنگانین را در یک مدل بهبود زخم در شرایط آزمایشگاهی تغییر می دهد. Nutr Res Pract. 2010؛ 4: 362-8.

54. Fujii A، Kobayashi S، Kuboyama N، Furukawa Y، Kaneko Y، Ishihama S، Yamamoto H، Tamura T. تقویت بهبود زخم توسط ژل رویال (RJ) در موش‌های دیابتی استرپتوزوتوسین. Jpn J Pharmacol. 1990؛ 53:331-7.

55. Koya-Miyata S، Okamoto I، Ushio S، Iwaki K، Ikeda M، Kurimoto M. شناسایی یک عامل محرک تولید کلاژن از عصاره ژل رویال و مکانیسم احتمالی آن. Biosci Biotechnol Biochem. 2004؛ 68:767-73.

برای اطلاعات بیشتر: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501